Name: development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation
Uploaded: 2014-07-09T21:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of an IFN-ÃŽÂ³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation at Jo

저자는 연구 참가자와 그들의 부모를 감사드립니다. 우리는 또한 자신의 ELISPOT 리더, 통계 분석 박사 Lubo 알렉산드로에 액세스 박사 Réjean LAPOINTE (미끼 노트르담, 몬트리올, 캐나다) 감사, 데니스 BLAIS, 산드라 카론, Silvie 루아 및 기술 전문가에 대한 마틴 CATY 것 지원. 르 퐁 디부 작업 라 매그 센터 드 cancérologie 찰스 - Bruneau에 의해, HS 및 PO에 레 projets 드 공들인 크리니크 등 디부 인 evalution 데 기술 (CHU 세인트 - 저스틴)를 부어, 그리고 백혈병과 림프종 사회에 의해에서 교부금에 의해 지원 캐나다. ISF는 라 매그 CHU 세인트 - 저스틴 르 퐁 드 라 공들인 뒤 퀘벡 - 상테 (FRQS)에서 장학금으로 지원되었다. AJG 미생물학, Infectiology &amp; 면역학, Université 드 몬트리올 (가브리엘 - 후작 장학금), FRQS학과에서 장학금을받는 사람, 그리고 건강의 캐나다 연구소 R이 esearch (CIHR). 뉴 멕시코 라 매그 CHU 생트 저스틴, 콜 재단과 FRQS에 의해 지원되었다.

이 연구 프로토콜은 연구가 실시되었다 CHU 세인트 - 저스틴, 몬트리올, 퀘벡, 캐나다의 기관 윤리 심의위원회의 승인을 받았다. 동의가 추구하고 모든 연구 참가자, 부모 또는 법적 보호자로부터 얻은 것입니다. 전체 절차는 1 일에 수행하고 2 (a 층류 후드하에 즉) 멸균 조건 하에서 수행되어야한다. 인간의 혈액을 처리하기위한 표준 안전 절차를 엄격하게 준수해야합니다. <p class="jove_titl...

변형 및 문제 해결 : IFN-γ ELISPOT 분석법은 인간 면역 결핍 바이러스 1 형 (HIV-1) 24, 25, 간염 C 바이러스 (HCV) (26)를 포함하여 미생물 병원체의 종류에 대하여 지시 세포 매개 성 면역 반응을 조사하는 데 사용되어, 27, 및 결핵균 28,29, 그냥 몇 가지 이름을 지정합니다. 여기에서 우리는 소아 UCBT받는 사람을 복구하는 VZV 특정 면역 재구성의 상관 관계를 정의하는 ?...

처음으로 1989 년에 수행 UCBT 점점 아이들 1에서 다양한 종양 및 nonneoplastic 혈액 장애의 치료의 일부로서 사용된다. VZV는 두 개의 서로 다른 질환, 수두 (차 감염 후)과 대상 포진 (활성화 후)를 일으키는 원인이되는 세포 변성 인간 alphaherpesvirus입니다. 차 감염 후, VZV는 후근 신경절의 감각 신경에서 숨겨 호스트의 전 생애에 걸쳐 지속. UCBT 다음 가장 위협하는 감염성 합병증의 하나가 VZV 2-4와 연결되어 있습니다. 우리의 임상 센터에서, VZV 예방의 부재에서 3 년에서 VZV 질환 VZV 질환의 누적 발생률은 postUCBT 46 % 2. 이러한 환자에서 새로이 감염 또는 VZV의 재 활성화는 종종 중추 신경계, 폐, 간 5-7에 내장 보급과 관련이 있습니다. 그 결과, 아 시클로 비르, 팜 시클로 비어 발라 시클로 비르 또는 예방 일반적 UB에 투여함에CT받는 8,9. 그러나,이 치료 전략의 계정에 VZV 특정 T 림프구 또는 VZV 특정 T 세포 반응의 재구성의 반응 속도의 보호 가능성을 고려하지 않습니다. 장기 antiherpetic 예방의 확장 사용과 관련된 잠재적 인 문제는) 환자의 overtreatment를 포함한다; b) 항 바이러스 약제 내성 10, 11의 개발; 및 C) VZV 특정 면역 재구성 (12, 13)의 손상. 기능 VZV 특정 T 림프구의 검출은 이식 후 기간 동안 VZV에 대한 감독 세포 매개 면역 반응을 모니터링, VZV 감염에서 장기 보호의 존재와 개선 된 임상 결과 4,14,15과 관련이 있기 때문에 바이러스의보다 합리적인 사용이 발생할 수 있습니다 VZV부터 혜택을받을 환자를 구별하기 위해 의료인 있도록함으로써 치료는 그의 면역 시스템 VZV 복제 4,13를 제어 할 수있다 것과 예방 치료. IFN-γ ELISPOT 분석 널리 실험 시스템 및 임상 다양한 조건의 모니터링 세포 매개 면역 반응에 사용됩니다. 스팟은 반응 사이트에 가시적이고 안정적​​ 침전물을 생성, 발색 기질의 절단 뒤에 생성된다. 각각의 자리하여 개별 사이토 카인을 생산하는 셀의 공간을 나타냅니다. IFN-γ ELISPOT은 동족 항원 시험 관내 자극에 응답하여 IFN-γ를 생산하는 개별 세포를 생체의 능력을 측정 할 수있을뿐 아니라 관련 세포 집단 (16, 17)의 셀 응답의 주파수의 추정치를 제공한다. 높은 감도 외에, IFN-γ ELISPOT은 항 바이러스 치료의 개시 또는 정지를 안내 겨냥 개인화 임상 프로토콜 컨텍스트에서 가능한 사용을 만드는 수행 간단하다. 절차는 describ 아래에 자세히 설명ES 구체적 VZV 유래 항원 시험 관내 자극 다음 말초 혈액 단핵 세포에 의해 IFN-γ의 생산을 검출하고 측정하기 위해 설계된 ELISPOT 분석.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Leucocep tube</td>
			<td style="width:101px;">VWR</td>
			<td style="width:143px;">89048-936/89048-932</td>
			<td style="width:397px;">12 ml or 50 ml tubes may be used depending on the volume of blood.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:101px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:143px;">17-1440-02</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Benzonase nuclease</td>
			<td style="width:101px;">Novagen</td>
			<td style="width:143px;">70746-3</td>
			<td>Keep at -20 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MultiScreenHTS-IP Filter Plate</td>
			<td style="width:101px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">MSIPS4W10</td>
			<td>Sterile with pore size of 0.45 &#181;m.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse anti-human IFN-&#947; capture antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">551221</td>
			<td>NIB42 clone.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pepmix VZV IE63&#160;</td>
			<td style="width:101px;">JPT Peptide Technologies</td>
			<td style="width:143px;">PM-VZV-IE63</td>
			<td>Dissolve contents of one vial in 40 &#956;L of DMSO. Use within 6 months.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotin-conjugated anti-IFN-&#947; monoclonal antibody</td>
			<td style="width:101px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:143px;">554550</td>
			<td>4SB3 clone.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Streptavidin conjugated with alkaline phosphatase&#160;</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-3554</td>
			<td>Dilute for use on the same day.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">BCIP/NBT</td>
			<td style="width:101px;">Bio-Rad Life Science</td>
			<td style="width:143px;">170-6432</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of an ifn-&#947; elispot assay to assess varicella-zoster virus-specific cell-mediated immunity following umbilical cord blood transplantation

수두 대상 포진 바이러스 (VZV)는 탯줄 혈액 이식 (UCBT) 다음과 같은 병적 상태와 사망률의 중요한 원인이다. 이러한 이유로, antiherpetic 예방은 VZV 감염과 관련된 합병증을 방지하기 위해 소아 UCBT받는 사람에게 체계적으로 투여하지만, 최적의 기간을 정의하는 더 강력한 증거 기반의 합의가되지 않습니다. T 세포 성 면역은 UCBT는 예방이 유지되어야하거나 중단 할 수 있는지 여부에 대해 표시를 제공 할 수있는 다음과 같은 VZV 특정 T 세포 반응의 재구성을 평가, VZV 감염의 관리에 대한 책임이 있기 때문이다. 이를 위해, VZV 특정 감마 인터페론 (IFN-γ), 효소 - 결합 immunospot (ELISPOT) 분석은 조사 된 약독 VZV 백신 시험 관내 자극에 반응하여 T 림프구에 의해 IFN-γ 생산을 특성화하기 위해 개발되었다. 이 분석은 VZV 특정 C의 빠른 재현하고 민감한 측정을 제공합니다엘 임상 환경에서 VZV 특정 면역 재구성을 모니터링하고 VZV 항원에 면역 응답 성을 평가하기위한 적절한 면역을 중재.

위에서 자세히 IFN-γ ELISPOT 프로토콜은 크기 및 VZV 4 향한 세포 매개 성 면역 반응의 품질을 측정하기 위해 개발하고 실험실에서 최적화되었다. VZV 항원의 다양한 소스는 자극 공정에 사용될 수있다. 풍향 :) VZV에서 시판 세제를 불 활성화 추출물 베로 세포 18 감염; IE63 15 ORF4 19을 포함한 특정 VZV 인코딩 된 단백질의 합성 펩티드를 중복 B) 풀; C) 약독 화 수두 대상 포?...

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Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

이러한 단일 세포 수준에서 사이토 카인 생성을 감지하고 T 세포 반응의 양적 및 질적 인 특성을 제공하는 감마 인터페론 (IFN-γ) ELISPOT 등 기능적 분석법 비발 세대 수두 대상 포진 향한 세포 매개 성 면역 반응을 평가하기 위해 사용될 수있다 바이러스 (VZV).

제대혈 이식을 다음과 IFN-γ 평가하기 ELISPOT 분석을 수두 - 대상 포진 바이러스 - 특정 세포 성 면역의 개발

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT):  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

Enzyme-linked Immunospot Assay ELISPOT:  Quantification of Th-1 Cellular Immune Responses Against Microbial Antigens

효소 링크된 Immunospot 분석 (ELISPOT) : 미생물 항원 반대 예뻐 - 1 세포 면역 반응의 부량

Adaptive immunity is an important component to clearance of intracellular pathogens.  The ability to detect and quantify these responses in humans is an ...

연구

면역학 및 감염병학

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

탯줄 혈액에서 세포 독성 T 림프구 확장이 대상 사이토 메갈로 바이러스, 엡스타인 - 바 바이러스, 그리고 아데노 바이러스

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

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임상 신청<em&gt; 잠자는 숲속의 미녀</em유전자 주변과 배꼽 탯줄 혈액에서 T 세포를 수정하는 셀을 제시&gt;과 인공 항원

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Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

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를 사용하여 폐렴 구균 식민지에서 생균제의 효과를 조사<em&gt; 체외</em&gt; 준수의 분석

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

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호중구의 분리 및 분석 치료제에 림프종 세포 감도에서 자신의 역할을 확인하는 방법

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분리는 차별화 및 정량화 인간의 혈액에서 B 세포를 항체가 분비 : ELISPOT을 체액 면역의 기능 판독으로

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

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Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

형광 기반의 뉴 라미니다 아제 억제 분석은 항 바이러스제의 뉴 라미니다 아제 억제제 클래스에 인플루엔자 바이러스의 감수성을 평가하기 위해

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...