Name: a new clarification method to visualize biliary degeneration during liver metamorphosis in sea lamprey (petromyzon marinus)
Uploaded: 2014-06-06T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey Petromyzon marinus at JoVE.com

والكتاب يعترف مساهمة محطة البيولوجية هاموند خليج، مركز العلوم البحيرات الكبرى، المسح الجيولوجي الامريكية. نشكر أيضا الدكتور الإطار ميليندا في مركز متقدم المجهر في جامعة ولاية ميشيغان لها الدعم التقني في المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. ويدعم هذه الدراسة من المنح المقدمة من هيئة مصايد أسماك البحيرات الكبرى إلى YWCD وWML.

1. إعداد الحل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 1 L 10X 0.1 M العازلة الفوسفات المالحة (PBS، ودرجة الحموضة 7.4): وزن 26.2 فوسفات الصوديوم ز (أحادى)، 115 غ فوسفات الصوديوم (ثنائي القاعدة)، و87.66 غرام كلوريد الصوديوم. تذوب في حوالي 800 مل المقطر H 2 O، وضبط درجة ال?...

<ol>
	<li>Applegate, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+the+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+in+Michigan.">Natural history of the sea lamprey (Petromyzon marinus) in Michigan.</a> US Fish and Wildlife Service Special Science Report on Fishery Service. (55), (1950).</li><li>Hardisty, M. W., Potter, I. C., Hardisty, M. W., Potter, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+general+biology+of+adult+lampreys.">The general biology of adult lampreys.</a> The biology of lampreys. 1, 127-206 (1971).</li><li>Youson, J. H., Potter, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+description+of+the+stages+in+the+metamorphosis+of+the+anadromous+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.">A description of the stages in the metamorphosis of the anadromous sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> Can. J. Zool. 57, 1808-1817 (1979).</li><li>Boomer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholangiocyte+apoptosis+is+an+early+event+during+induced+metamorphosis+in+the+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.">Cholangiocyte apoptosis is an early event during induced metamorphosis in the sea lamprey, Petromyzon marinus L.</a> J. Pediatr. Surg. 45, 114-120 (2010).</li><li>Kasai, M., Suzuki, H., Ohashi, E., Ohi, R., Chiba, T., Okamoto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+and+results+of+operative+management+of+biliary+atresia.">Technique and results of operative management of biliary atresia.</a> World J. Surg. 2, 571-580 (1978).</li><li>Suzuki, T., Hashimoto, T., Kondo, S., Sato, Y., Hussein, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+patients&#8217;+outcome+post-Kasai+operation:+a+19-year+experience+with+modification+of+the+hepatic+portoenterostomy+and+applying+a+novel+steroid+therapy+regimen.">Evaluating patients&#8217; outcome post-Kasai operation: a 19-year experience with modification of the hepatic portoenterostomy and applying a novel steroid therapy regimen.</a> Pediatr. Surg. Int. 26, 825-830 (2010).</li><li>Hartley, J. L., Davenport, M., Kelly, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia.">Biliary atresia.</a> Lancet. 374, 1704-1713 (2009).</li><li>Morecki, R., Glaser, J. H., Cho, S., Balistreri, W. F., Horwitz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia+and+reovirus+type+3+infection.">Biliary atresia and reovirus type 3 infection.</a> New Engl. J. Med. 307, 481-484 (1982).</li><li>Shimadera, S., Iwai, N., Deguchi, E., Kimura, O., Fumino, S., Yokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inv+mouse+as+an+experimental+model+of+biliary+atresia.">The inv mouse as an experimental model of biliary atresia.</a> J. Pediatr. Surg. 42, 1555-1560 (2007).</li><li>Sidon, E. W., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+changes+in+the+liver+of+the+sea+lamprey,+Petromyzon+marinus+L.,+during+metamorphosis:+I.+Atresia+of+the+bile+ducts.">Morphological changes in the liver of the sea lamprey, Petromyzon marinus L., during metamorphosis: I. Atresia of the bile ducts.</a> J. Morphol. 177, 109-124 (1983).</li><li>Yeh, C. -. Y., Chung-Davidson, Y. -. W., Wang, H., Li, K., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+synthesis+and+secretion+of+bile+salts+as+an+adaptation+to+developmental+biliary+atresia+in+the+sea+lamprey.">Intestinal synthesis and secretion of bile salts as an adaptation to developmental biliary atresia in the sea lamprey.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 109, 11419-11424 (2012).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497, 332-337 (2013).</li><li>Alarc&#243;n, V. B., Filosa, M. F., Youson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokeratins+in+the+liver+of+the+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+before+and+after+metamorphosis.">Cytokeratins in the liver of the sea lamprey (Petromyzon marinus) before and after metamorphosis.</a> Cell Tissue Res. 287, 365-374 (1997).</li><li>Youson, J. H., Ogilvie, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+features+of+degeneration+of+the+gallbladder+during+lamprey+biliary+atresia.">Ultrastructural features of degeneration of the gallbladder during lamprey biliary atresia.</a> Tissue and Cell. 22, 477-492 (1990).</li><li>Morii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+of+apoptosis+in+the+cystic+duct+during+metamorphosis+of+a+Japanese+lamprey,+Lethenteron+reissneri.">Onset of apoptosis in the cystic duct during metamorphosis of a Japanese lamprey, Lethenteron reissneri.</a> Anat. Rec. 293, 1155-1166 (2010).</li></ol>

يتم تعديل هذا البروتوكول من أسلوب جديد يسمى &quot;وضوح&quot; 12، التي crosslinks الأنسجة سليمة مع بولكرلميد لتشكيل هيدروجيل نانوية مسامية، ثم يجرد بعيدا غشاء البلازما من الأنسجة لتحقيق الشفافية البصرية ونفاذية الجزيئات. &quot;وضوح&quot; يسمح التصوير أنسجة سليمة من الإسقاط طو...

الجلكى البحر تتطور من خلال ثلاث مراحل متميزة حياة 1،2. الجلكى البحر اليرقات (L) يقضون معظم الوقت في الجحور كما مغذيات الترشيح القاعية. بعد أن يمر سبع مراحل المتحولة من تغييرات جذرية في التشكل الخارجي، وإعادة التنظيم في الأعضاء الداخلية 3، والأحداث الناتجة (JV) تدخل مرحلة الطفيلية خلالها تتغذى على الدم وسوائل الأنسجة من الأسماك المضيف، وزيادة كتلة الجسم أكثر من 100 مرة . بعد 1،0-1،5 سنوات تتغذى على الأسماك المضيف في المحيط أو البحيرات الكبيرة، البالغين وقف التغذية في أوائل الربيع وتهاجر إلى الأنهار لتفرخ ثم يموت 1،2. أثناء التحول، والكبد الجلكى البحر يفقد المرارة والشجرة الصفراوية بأكمله، وهو النمط الظاهري متحولة التطوري الذي يحاكي المرض الرضع الإنسان رتق القناة الصفراوية. رتق القناة الصفراوية الرضع هو مرض الكبد للأطفال نادرة مع مضاعفات طبية شديدة 4،5،6،7، 8،9،10، ولكن المرضية ومسببات رتق القناة الصفراوية غير معروفة إلى حد كبير 4. المرضى الذين يعانون من رتق القناة الصفراوية يموت في غضون عامين بعد الولادة ما لم يتم تنفيذ التدخل الجراحي (إجراء كاساي) 5. في وقت لاحق، هؤلاء المرضى تتطلب إدارة السريرية واسعة وغالبا ما زرع الكبد 6. لقد تم اقتراح العديد من النظريات من الصفراوي رتق etiopathogenesis، مثل العدوى الفيروسية، والتشوهات الخلقية، وأمراض المناعة الذاتية، وإهانة السامة. ومع ذلك، فإن مساهمة كل منهما في تطوير رتق القناة الصفراوية تظل غير حاسمة 7،8،9،10. على عكس الأطفال الذين يعانون رتق القناة الصفراوية المرضية، الجلكى البحر الخضوع المبرمج تنمويا رتق القناة الصفراوية دون necroinflammation واسعة، والتليف أو التشمع 10. الحيوانات قد تعاني ركود صفراوي عابرة خلال هذه العملية 10، ولكن التكيف مع هذا الشرط التنمويةعبر دي نوفو التوليف وإفراز أملاح الصفراء في الأمعاء بعد رتق القناة الصفراوية التنموية، بالإضافة إلى الآليات المعروفة مثل الحد من التوليف الملح الصفراوية في الكبد 11. هذه العملية التنموية في الجلكى البحر يتيح الفرصة الوحيدة المعروفة لدراسة تطور رتق القناة الصفراوية. وهناك طريقة المطورة حديثا يسمى &quot;وضوح&quot; تمكن التصوير ذات الدقة العالية في الجهاز العصبي لدى الثدييات المعقدة عن طريق تحويل أنسجة سليمة إلى هيدروجيل نانوية مسامية شفافة بصريا 12. باستخدام الكبد الجلكى البحر وبروتوكول تعديل وضوح، والتصوير أنسجة سليمة من انحطاط المرارية يمكن أن تكون موثقة في جميع أنحاء التحول الكبد.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">40% acrylamide&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">161-0140</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2% bis-acrylamide&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TEMED</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ammonium persulfate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A3678-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">boric acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B7901-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">saponin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium dodecyl sulfate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:119px;">L337-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium phosphate (monobasic)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>04269-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sodium phosphate (dibasic)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9012-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16% paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaOH pellets&#160;</td>
			<td>EMD</td>
			<td>SX0590-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml centrifuge tubes</td>
			<td style="width:200px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">dissecting tools&#160;</td>
			<td style="width:200px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new clarification method to visualize biliary degeneration during liver metamorphosis in sea lamprey (petromyzon marinus)

رتق القناة الصفراوية هو مرض نادر من مرحلة الطفولة، مع ما يقدر بنحو 1 في 15،000 تردد في جنوب شرق الولايات المتحدة، ولكن أكثر شيوعا في بلدان شرق آسيا، مع تردد تقارير عن 1 في 5،000 في تايوان. على الرغم من أن يعرف الكثير عن إدارة رتق القناة الصفراوية، المرضية له لا يزال بعيد المنال. الجلكى البحر (Petromyzon مارينوس) يوفر فرصة فريدة لدراسة آلية وتطور الضمور الصفراوية. الجلكى البحر تتطور من خلال ثلاث مراحل حياة متميزة: اليرقات والطفيلية، والكبار. خلال الانتقال من اليرقات الطفيلية إلى الأحداث، الجلكى البحر الخضوع التحول مع إعادة تنظيم وإعادة دراماتيكية في التشكل الخارجي، والأعضاء الداخلية. في الكبد، يتم فقدان نظام الصفراوي بأكمله، بما في ذلك المرارة والشجرة الصفراوية. تم تعديل طريقة تم تطويرها حديثا يسمى &quot;وضوح&quot; لتوضيح الكبد كامل وتقاطع مع الأمعاء المتحولة في الجلكى البحر. الوتصور عملية انحطاط الصفراوي وتمييزها خلال البحر الجلكى التحول باستخدام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. وهذه الطريقة توفر أداة قوية لدراسة رتق القناة الصفراوية في نموذج حيواني فريدة من نوعها.

تحدث العديد من الفعاليات التنموية الهامة في النظام الكبد خلال البحر الجلكى التحول. القناة الصفراوية والمرارة الخضوع لموت الخلايا المبرمج والمنحطة (الشكل 1). الجمع بين أسلوب التوضيح تعديل وتلطيخ مع الكبد علامة الخلية cytokeratin 19 (CK19، موجودة في كل خلايا الكبد وchol...

Watch this Scientific Journal Video about A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey Petromyzon marinus at JoVE.com

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey Petromyzon marinus

وهناك طريقة جديدة لتوضيح تصور الصفراوية الكبد الصفراء خلال التحول في البحر الجلكى ( Petromyzon مارينوس)

الجلكى البحر تفقد المرارة والقنوات الصفراوية خلال التحول، وهي عملية مشابهة لرتق القناة الصفراوية الإنسان. تم تعديل طريقة التثبيت الجديدة والتوضيح (وضوح) لتصور الشجرة الصفراوية بأكملها باستخدام المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهري. وهذه الطريقة توفر أداة قوية لدراسة الضمور الصفراوية.

Biliary atresia is a rare disease of infancy, with an estimated 1 in 15,000 frequency in the southeast United States, but more common in East Asian ...

Research

JoVE Journal

Biology

A New Clarification Method to Visualize Biliary Degeneration During Liver Metamorphosis in Sea Lamprey (Petromyzon marinus)

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing : طريقة بسيطة لالتنميط الجيني دقيقة

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

استخدام الميكروسكوب الفاصل الزمني لتصور نقص الأكسجين الناجم عن تعطل الحركة في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; الأجنة

Caenorhabdits elegans has been used extensively in the study of stress resistance, which is facilitated by the transparency of the adult and embryo stages ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

إإكسبلنتس قسيم أرومي لاختبار الالتزام مصير الخلايا أثناء التطور الجنيني

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Combined Immunofluorescence and DNA FISH on 3D-preserved Interphase Nuclei to Study Changes in 3D Nuclear Organization

الجمع بين المناعي وFISH DNA على الحفاظ على النواة 3D-الطور البيني لدراسة التغيرات في منظمة النووية 3D

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes  on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA  FISH) represents the ...

High Throughput Microinjections of Sea Urchin Zygotes

عالية الإنتاجية إبر دقيقة جدا لقنفذ البحر بيضات ملقحة

Microinjection into cells and embryos is a common technique that is used to study a wide range of biological processes. In this method a small amount of ...

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

A Method for Extracting Pigments from Squid Doryteuthis pealeii

منهج في استخراج أصباغ من الحبار<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

Cephalopods can undergo rapid and adaptive changes in dermal coloration for sensing, communication, defense, and reproduction purposes. These capabilities ...

Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

باستخدام كامل-- جبل المناعية طريقة لدراسة التعصيب من القناة الصفراوية في<em&gt; سونكوس مورينوس</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

Broth Microdilution In Vitro Screening: An Easy and Fast Method to Detect New Antifungal Compounds

Broth Microdilution In Vitro Screening: An Easy and Fast Method to Detect New Antifungal Compounds

ميكروديلوشن مرق في المختبر الفرز: طريقة سهلة وسريعة للكشف عن المركبات المضادة للفطور جديدة

Fungal infections have become an important medical condition in the last decades, but the number of available antifungal drugs is limited. In this ...