Name: generation and purification of human ino80 chromatin remodeling complexes and subcomplexes
Uploaded: 2014-10-23T13:00:00
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Work in the authors&#39; laboratory is supported by a grant from the National Institute of General Medical Sciences (GM41628) and by a grant to the Stowers Institute for Medical Research from the Helen Nelson Medical Research Fund at the Greater Kansas City Community Foundation.

1 세대와 전체 길이 또는 FLAG의 돌연변이 버전 표현 HEK293 안정 세포주의 문화 에피토프를 - 태그 Ino80 또는 기타 INO80 복잡한 서브 유닛 <ol><li> 전체 길이 또는 돌연변이 인간 Ino80 ATPase의 또는의 프레임, N 단자 FLAG 에피토프 태그 포유 동물 발현 벡터 pcDNA5 / FRT로 다른 INO80 서브 유닛을 코딩하는 cDNA 클론. </li><li> 진행하기 전에 DNA 시퀀싱에 의해 삽입 된 cDNA의 서열을 확인한다. </li><li> 형질 감염을 ?...

<ol>
	<li>Clapier, C. R., Cairns, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+chromatin+remodeling+complexes,+Annual+Review+of+Biochemistry.">The biology of chromatin remodeling complexes, Annual Review of Biochemistry.</a> 78, 273-304 (2009).</li><li>Szerlong, H., Hinada, K., Viswanathan, R., Erdjument-Bromage, H., Tempst, P., Cairns, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+HSA+domain+binds+nuclear+actin-related+proteins+to+regulate+chromatin-remodeling+ATPases.">The HSA domain binds nuclear actin-related proteins to regulate chromatin-remodeling ATPases.</a> Nature Struct. Mol. Biol. 15 (5), 469-476 (2008).</li><li>Shen, X., Mizuguchi, G., Hamiche, A., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chromatin+remodelling+complex+involved+in+transcription+and+DNA+processing.">A chromatin remodelling complex involved in transcription and DNA processing.</a> Nature. 406 (6795), 541-544 (2000).</li><li>Shen, X., Ranallo, R., Choi, E., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+actin-related+proteins+in+ATP-dependent+chromatin+remodelling.">Involvement of actin-related proteins in ATP-dependent chromatin remodelling.</a> Mol. Cell. 12, 147-155 (2003).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subunit+organization+of+the+human+INO80+chromatin+remodeling+complex:+an+evolutionarily+conserved+core+complex+catalyzes+ATP-dependent+nucleosome+remodeling.">Subunit organization of the human INO80 chromatin remodeling complex: an evolutionarily conserved core complex catalyzes ATP-dependent nucleosome remodeling.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (13), 11283-11289 (2011).</li><li>Sauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+recombination:+developments+and+applications.">Site-specific recombination: developments and applications.</a> 5 (5), 521-527 (1994).</li><li>Gorman, S., Fox, D. T., Wahl, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinase-mediated+gene+activation+and+site-specific+integration+in+mammalian+cells.">Recombinase-mediated gene activation and site-specific integration in mammalian cells.</a> Science. 251 (4999), 1351-1355 (1991).</li><li>Jin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mammalian+chromatin+remodeling+complex+with+similarities+to+the+yeast+INO80+complex.">A mammalian chromatin remodeling complex with similarities to the yeast INO80 complex.</a> Journal of Biological Chemistry. 280 (50), 41207-41212 (2005).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=YY1+functions+with+INO80+to+activate+transcription.">YY1 functions with INO80 to activate transcription.</a> Nature Structural and Molecular Biology. 14 (9), 872-874 (2007).</li><li>Yao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Modes+of+Regulation+of+the+Uch37+Deubiquitinating+Enzyme+in+the+Proteasome+and+in+the+Ino80+Chromatin-Remodeling+Complex.">Distinct Modes of Regulation of the Uch37 Deubiquitinating Enzyme in the Proteasome and in the Ino80 Chromatin-Remodeling Complex.</a> Mol.Cell. 31 (6), 909-917 (2008).</li><li>Brizzard, B. L., Chubet, R. G., Vizard, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoaffinity+purification+of+FLAG+epitope-tagged+bacterial+alkaline+phosphatase+using+a+novel+monoclonal+antibody+and+peptide+elution,+Biotechniques.">Immunoaffinity purification of FLAG epitope-tagged bacterial alkaline phosphatase using a novel monoclonal antibody and peptide elution, Biotechniques.</a> 16 (4), 730-735 (1994).</li><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> At the Bench: A Laboratory Navigator. 10, 207-245 (2005).</li><li>Dignam, J. D., Lebovitz, R. M., Roeder, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+transcription+initiation+by+RNA+polymerase+II+in+a+soluble+extract+from+isolated+mammalian+cell+nuclei.">Accurate transcription initiation by RNA polymerase II in a soluble extract from isolated mammalian cell nuclei.</a> Nucleic. Acids. Res. 11 (5), 1475-1489 (1983).</li></ol>

Structural and functional studies of multi-subunit mammalian chromatin remodeling complexes from higher eukaryotes have been hampered by the difficulty of preparing biochemically useful amounts of such complexes containing mutant subunits or lacking certain subunits altogether. There are a number of technical hurdles: First, genetic manipulation in mammalian cells has been technically challenging and time-consuming. Unlike yeast cells, whose genome can be readily edited and targeted using recombineering techniques, the m...

진화 적으로 보존 SNF2 가족 염색질 리모델링 복합체는 염색질 조직 및 DNA 접근성 하나의 주요 레귤레이터이다. 이러한 개조 착체는 항상 어떤 경우에는 다양한 액세서리 단백질과 조립 및 다중 서브 유니트 매크로 분자 어셈블리를 형성하고, 중앙 SNF2 같은 ATPase의 서브 유닛을 포함한다. ATP 의존적 크로 마틴 리모델링 과정의 상세 분자를 연구하기 위해,이 착물의 활동 서브 유닛 및 / 또는 도메인 구조의 주어진 서브 세트의 기여를 이해하는 것이 중요하다. 이러한 분석은 특히 단백질 소단위 또는 도메인 구조 부족 고순도 착체 돌연변이를 생성하는 능력을 요구한다. ATP 의존적 크로 마틴 리모델링 단지의 이전 구조 기능 연구가 널리 (참고 문헌 1-4, 예를 들어, 참조)으로 인해 효모 게놈의 우수한 조작성에 효모 모델 시스템에 초점을 맞추고있다. 보존을 감안할 때orthologous 리모델링 단지 중 서브 유닛의 구성과 기능, 구조와 효모 리모델링 단지의 기능에 대한 연구는 더 높은 진핵 생물에서 그들의 대응에 중요한 통찰력을 제공하고 있습니다. 그럼에도 불구하고, 상당한 종 특이 리모델링 단지 사이에 차이가 이득이나 보존 서브 유닛의 보존 영역 내에서 종 특이 서브 유닛, 이득 또는 보존 서브 유닛의 종 - 특정 도메인의 손실 및 시퀀스 다양성의 손실 결과로 존재한다. 이러한 차이는 원칙적으로 높은 진핵 세포가 새로운 분자 세포 환경에 적응하기위한 필요에 의해 구동 될 수있다. 이뿐만 아니라 메커니즘에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다 또한 ATP 의존적 크로 마틴 리모델링 과정의 기본 메커니즘을 조명하고 있지만, 때문에 따라서, 높은 진핵 리모델링 단지의 서브 유닛은 뉴 클레오 리모델링 과정에 기여하는 방법을 이해하는 것은 가치가있는 크로 마틴 구조에 의해 HIG의 유전자 발현그녀의 진핵 세포가 조절된다. 지금까지 단 생화학 적 정의 염색질 리모델링 건물 및 서브 콤플렉스를 얻기에 어려움으로 인해 일부 멀티 서브 유닛 포유 동물의 크로 마틴 리모델링 복합체의 구조 및 기능 연구를,이 제한되고있다. 우리는 부분적으로 면역 정제 안정적으로 N-말단에 FLAG 에피토프가 야생형 또는 Ino80 5-7의 돌연변이 버전 태그 발현 인간 세포에서 손상 INO80 또는 INO80 서브 콤플렉스를 제조하는데 사용되는 후술하는 절차에 이러한 어려움을 회피했다 (도 1) . 인간 세포에서 그대로 INO80 착물을 얻기 위해 중재하는 FLP 재조합 안정적 INO80 착체 8-10의 서브 유닛을 코딩 FLAG 에피토프 태그 된 cDNA를 발현하는 형질 전환 된 HEK293 세포주를 생성하는 데 사용된다. INO80 소단위의 과발현 다소 독성이있을 수 있기 때문에 분리 및 선택적 CO하에 클론 세포주를 유지하는 데 필요nditions 대규모 세포 배양의 확장에 필요한 많은 통로 중에 안정한 유전자의 발현을 확인한다. 서브 유닛의 서브 세트 만 포함 작은 INO80의 서브 콤플렉스를 얻으려면, 우리는 성공적으로이 방법을 사용했다 (그림 2A, B). 첫째, 우리는 안정적으로 특정 서브 유닛 (5)의 상호 작용에 필요한 도메인이 결여 Ino80 버전의 돌연변이를 발현하는 HEK293 FLP 인 세포주를 생성. 또한, siRNA를 매개 최저는 적절한 FLAG-태그 INO80 서브 유닛 (게시되지 않은 데이터)를 발현하는 세포에서 원하는 서브 유닛을 소모하는 데 사용됩니다. 마지막으로, 인간 INO80 착체를 정화, FLAG 아가 로스 기반 크로마토 11함으로써 효과적으로 정제 INO80 또는 INO80 서브 콤플렉스를 함유하는 최종 분획에 세포질 단백질 오염의 존재를 감소시키는, 핵 추출물에서 INO80 - 함유 분획을 풍부하게하기 위해 사용된다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="890">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:212px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:173px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td style="width:212px;">Cellgro</td>
			<td style="width:147px;">10-013-CV</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glutamax-I (stablized glutamine)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">35050-079</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>SAFC</td>
			<td style="width:147px;">12176C</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FuGENE6 transfection reagent&#160;&#160;</td>
			<td>Promega</td>
			<td style="width:147px;">E2312</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hygromycin B, sterile in PBS</td>
			<td>AG Scientific</td>
			<td style="width:147px;">H-1012-PBS</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pcDNA5/FRT vector</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">V6010-20</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Flp-In HEK293 cells&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">R780-07</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">pOG44 Flp-Recombinase Expression Vector</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">V600520</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EZview&#160; Red ANTI-FLAG&#160; M2 Affinity Gel&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">F2426</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">calf serum</td>
			<td>SAFC</td>
			<td style="width:147px;">12138C</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TARGETplus SMARTsiRNA pool</td>
			<td>Dharmacon / Thermo Scientific</td>
			<td style="width:147px;">various</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5x siRNA resuspension buffer&#160;</td>
			<td>Dharmacon / Thermo Scientific</td>
			<td style="width:147px;">#B-002000-UB-100</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lipofectamine RNAiMAX&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">13778</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Opti-MEM Reduced Serum Medium&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">51985-091</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Cellgro</td>
			<td style="width:147px;">45000</td>
			<td style="width:173px;">VWR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">TrypLE (trypsin)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td style="width:147px;">12604</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1x FLAG Peptide</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">F3290</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Bio-Spin Chromatography Column</td>
			<td style="width:212px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:147px;">737-5021</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amicon Ultra Centrifugal Filter Device (50k MWCO)</td>
			<td style="width:212px;">Amicon</td>
			<td style="width:147px;">UFC805024&#160;</td>
			<td style="width:173px;">Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeba Desalting Columns&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:147px;">89882</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Anti-FLAG M2 antibody, mouse</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">F3165</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Anti-FLAG M2 antibody, rabbit</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">F7425</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td style="width:212px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">P8340</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">benzonase&#160;</td>
			<td>Novagen</td>
			<td style="width:147px;">70664</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;"></td>
			<td style="width:212px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Equipment</td>
			<td style="width:212px;">Company</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wheaton Dounce Tissue Grinders</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td style="width:147px;">06-435C&#160;</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">JS-4.2 rotor in a J6 centrifuge&#160;</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">339080</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">JA-17 rotor</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">369691</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 ml polycarbonate tubes&#160;</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">355630</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70 ml polycarbonate bottles&#160;</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">355655</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Type 45 Ti rotor</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">339160</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Type 70.1 Ti rotor&#160;</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td style="width:147px;">342184</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Clay Adams Nutator Mixer</td>
			<td style="width:212px;">BD Diagnostics</td>
			<td style="width:147px;">15172-203&#160;</td>
			<td style="width:173px;">VWR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glas-Col Tube/Vial Rotator</td>
			<td style="width:212px;">Glas-Col</td>
			<td style="width:147px;">099A RD4512</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PCR thermal cycler PTC 200</td>
			<td>MJ Research</td>
			<td style="width:147px;">PTC 200</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">roller bottle incubator</td>
			<td style="width:212px;">Bellco biotechnology</td>
			<td style="width:147px;">353348</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Immobilon-FL Transfer Membrane 7 x 8.4</td>
			<td style="width:212px;">Millipore</td>
			<td style="width:147px;">IPFL07810</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">lubricated 1.5ml microcentrifuge tubes&#160;</td>
			<td style="width:212px;">Costar</td>
			<td style="width:147px;">3207</td>
			<td style="width:173px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation and purification of human ino80 chromatin remodeling complexes and subcomplexes

INO80 크로 마틴 리모델링 복합체가 ATP에 의존하는 뉴 클레오 리모델링을 촉매에 의해 뉴 클레오 역학과 DNA의 접근성을 조절한다. 인간의 INO80 단지는 Ino80, 촉매 서브 유닛과 단지의 조립을위한 발판으로 두 역할을하는 SNF2 같은 ATPase를 포함하여 14 단백질 서브 유닛으로 구성되어 있습니다. 다른 서브 유닛의 기능과 그들이 INO80 단지의 크로 마틴 리모델링 활동에 기여하는 메커니즘은 가난으로 인해 인간의 세포 또는 이종 발현 시스템에 INO80 서브 어셈블리를 생성하는 도전에 부분적으로 이해 상태로 유지됩니다. 이 조브 프로토콜은 서브 유닛 또는 서브 유닛의 일부를 부족한 사람 INO80 염색질 리모델링 서브 콤플렉스의 정화를 할 수있는 절차를 설명합니다. N-말단에 FLAG 에피토프는 Ino80 cDNA를 안정적으로 인간 배아 신장 (HEK) FLP - 중재 재조합을 사용하여 293 세포주에 도입 태그. INO80 단지의 서브 유닛의 일부는 b에있는 경우에즉 하나는 해당 서브 유닛의 조립에 필요한 플랫폼이없는 대신 Ino80 돌연변이 단백질을 발현, 삭제. 경우 개별 서브 유닛이 고갈 될 안정적 FLAG을 표현 HEK 293 세포주에이 서브 유닛을 대상으로 한 transfects s​​iRNA를가 Ino80 ATPase의 태그가. 핵 추출물을 준비하고, FLAG의 면역은 Ino80 유도체를 포함하는 단백질 분획을 풍부하게하기 위해 수행된다. 정제 INO80의 서브 콤플렉스의 조성물은 이러한 면역 블로, 실버 염색 및 질량 분석 등의 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 이 프로토콜에 따라 생성 및 INO80 INO80 서브 콤플렉스 더욱 정돈 첨부 된 프로토콜에서 설명되는 다양한 생화학 적 분석을 이용하여 분석 될 수있다. 여기에 설명 된 방법은 모든 포유 동물의 멀티 서브 유닛 염색질 리모델링의 구조 및 기능적 특성에 대한 연구 및 수정 단지에 적용 할 수 있습니다.

Figure 1 shows a flow chart summarizing the procedures used to generate, purify, and characterize human INO80 ATP-dependent chromatin remodeling complexes.
As illustrated in Figures 2 and 3, these procedures enable the generation of both wild type INO80 and INO80 subcomplexes that lack various subunits, thereby enabling subsequent biochemical analyses of the contribution of these missing subunits to INO80&#39;s enzymatic activities. Fi...

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Generation and Purification of Human INO80 Chromatin Remodeling Complexes and Subcomplexes

This protocol describes a procedure for generating and purifying wild type and mutant versions of the human INO80 chromatin remodeling complex. Epitope tagged versions of INO80 subunits are stably expressed in HEK293 cells, and complete complexes and complexes lacking specific sets of subunits are purified by immunoaffinity chromatography.

세대와 인간의 INO80 염색질 리모델링 단지 및 서브 콤플렉스의 정화

INO80 chromatin remodeling complexes regulate nucleosome dynamics and DNA accessibility by catalyzing ATP-dependent nucleosome remodeling. Human INO80 ...

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Purification and Visualization of Influenza A Viral Ribonucleoprotein Complexes

인플루엔자 바이러스성 Ribonucleoprotein의 단지의 정화 및 시각화

The influenza A viral genome consists of eight negative-sense, single stranded RNA molecules, individually packed with multiple copies of the influenza A ...

연구

생물학

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

인간 췌장 아일릿 절연 : 2 부 : 인간 아일 레츠의 정화와 문화

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

유기 용매 및 초산없이 쿠매시 G - 250로 젤의 단백질 염색법

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Generation of Human CD40-activated B cells

인간 CD40 - 활성화된 B 세포의 생성

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal (ICC) Network in Mice

Visualization of the Interstitial Cells of Cajal ICC Network in Mice

마우스의 Cajal (ICC) 네트워크의 중간 세포의 시각화

The interstitial cells of Cajal (ICC) are mesenchymal derived "pacemaker cells" of the gastrointestinal (GI) tract that generate spontaneous slow waves ...

Chromatin Isolation by RNA Purification (ChIRP)

Chromatin Isolation by RNA Purification ChIRP

RNA 정제에 의한 염색질 절연 (처프)

Long noncoding RNAs are key regulators of chromatin states for important biological processes such as dosage compensation, imprinting, and developmental ...

Generation, Purification, and Characterization of Cell-invasive DISC1 Protein Species

셀 침습적 DISC1 단백질 종의 생성, 정제 및 특성

Protein aggregation is seen as a general hallmark of chronic, degenerative brain conditions like, for example, in the neurodegenerative diseases ...

Generation of High Quality Chromatin Immunoprecipitation DNA Template for High-throughput Sequencing (ChIP-seq)

Generation of High Quality Chromatin Immunoprecipitation DNA Template for High-throughput Sequencing ChIP-seq

높은 처리량 시퀀싱을위한 고품질 염색질 면역 침전의 DNA 템플릿의 생성 (칩 SEQ)

ChIP-sequencing (ChIP-seq) methods directly  offer whole-genome coverage, where combining chromatin immunoprecipitation  (ChIP) and massively parallel ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

의 효율적인 생산 및 정제 재조합 쥐과 Kindlin-3 생물 물리학 연구 곤충 세포에서

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Biochemical Assays for Analyzing Activities of ATP-dependent Chromatin Remodeling Enzymes

ATP에 의존 염색질 리모델링 효소의 활동을 분석하는 생화학 분석 실험

Members of the SNF2 family of ATPases often function as components of multi-subunit chromatin remodeling complexes that regulate nucleosome dynamics and ...