Name: modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery
Uploaded: 2014-07-31T14:00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery at JoVE.com

Эта работа финансировалась по совершенству кластера немецкого исследовательского фонда «Мюнхен кластера для систем неврологии (Synergy)&quot; и фондом Daimler-Benz в AL

Заявление Этика Проведенные эксперименты в этом видео были проведены в соответствии с национальными руководствами по использованию экспериментальных животных и протоколов были одобрены немецким правительственных комитетов (Regierung фон Oberbayern, Мюнхен, Германия). 10-недельных самцов мышей, C57BL/6J используются в данном исследовании. Животных содержали при контролируемой температуре (22 ± 2 ° C), с свет-темнота периода цикла 12 ч и доступ к гранулированной пищи и воды вволю. Обезболивание и протоколы седации описаны как одобрено местным правительственной комиссии, но могут отличаться от протоколов, используемых в других лабораториях. 1. Подготовка материала и инструменты <ol><li> Подключите тепла одеяло для поддержания рабочей зоне тепло и поддерживать температуру тела мыши во время анестезии (37 ° С). </li><li> Подготовка автоклавного ножницы, щипцы и хлопчатобумажных, dexpanthенольная глазная мазь и шовный материал. Подготовьте шприц с физиологическим раствором (без иглы) для поддержания рабочей зоне обезвоживания. Подготовьте анестезии газа (70% N 2 O + 30% O 2 + ИФ). </li><li> Введите анальгетики внутрибрюшинно: Метамизол 200 мг / кг, Carprofen 4 мг / кг и Buprenorphin 0,1 мг / кг. </li><li> Место мыши в индукции камеры с изофлурана расходом 4% не обезболить его до стихийного движения тела и вибриссы останавливается. </li><li> Перенесите курсор в боковом положении с носом в анестезии маски и сохранять концентрацию ИФ на уровне 4% в течение примерно еще минуту, затем уменьшить и это при approx.1.5% для поддержания соответствующего анестезии. </li><li> Применить декспантенол глазную мазь на обоих глазах. </li></ol> 2. Дистальный МСАО Модель <ol><li> Сделать 1 см разрез кожи между ухом и глазом, используя маленькие ножницы эксплуатацию после aseptical подготовке хирургической Усин сайтег кожи дезинфицирующим средством. </li><li> Отделите кожу и локализовать височной мышцы. </li><li> Выберите в генераторе высокой частоты функцию коагуляции, биполярное режим, выберите 12 Вт и соедините электрокоагуляции щипцов с помощью кабеля. </li><li> Добавить каплю физиологического раствора и использовать пинцет, чтобы отделить временную мышцы от черепа в его верхушечной и спинной части, тем самым, делая мышцы лоскут, полностью не снимая мышцы. </li><li> Определить MCA ниже прозрачного черепа, в ростральной части височной области, спинной в ретро-орбитального синуса (рис. 2а). Если бифуркации MCA не видно (из-за анатомической нормальной вариации) идентифицировать судно наиболее ростральной. </li><li> Добавьте немного солевой раствор на черепе и прореживать кости с дрелью прямо над филиала MCA, пока он не имеет тонкий и прозрачный текстуру (рис. 2б). </li><li> Осторожно снять кость выше артерии с очень тонкими щипцами. </li><li> Выберите биполярного режима ян высокочастотный генератор на 7 W. коагуляции артерии с электрокоагуляции щипцы проксимальных и дистальных до развилки (рис. 2С). Когда бифуркации не видно из-за анатомической варианте, коагуляции правильно определены MCA филиал (см. выше) на двух участках ок. 1мм расстояние. Это не является необходимым для понимания артерию с щипцов для коагуляции, тщательно касаясь артерии пинцетом с обеих сторон сверху достаточно и вызывает меньшее механическое повреждение. </li><li> Подождите 30 секунд и мягко коснуться артерии с затупленных щипцов, чтобы проверить наличие кровотока за счет спонтанного реканализации. В случае реканализации повторить электрокоагуляции один раз. </li><li> Переместить височной мышцы своей позиции, охватывающий заусенцев отверстие. </li><li> Шовный рану и место животного в коробке престарелых при 32 ° С, чтобы оправиться от наркоза и вернуть его в клетку. В общем это занимает 5-10 минут для животного, чтобы оправиться от AnesthОВОС. </li><li> не Введите послеоперационного обезболивания (IP) после 24 часов, а затем ежедневно до пятого дня после операции: Carprofen 4 мг / кг. </li></ol> 3. Шам Операция Выполните все процедуры идентично операции, описанной выше - в том числе истончение черепа и его удаления - для не коагулирование подвергаются артерии исключением. 4. Тест цилиндра 13 <ol><li> Место животное в прозрачной акриловой стеклянный цилиндр (диаметр: 8 см, высота: 25 см) перед двумя зеркалами и видеопленку в течение 5 мин. Настройка камеры централизованно перед двумя зеркалами и цилиндром для получения оптимального видео (рис. 3А). </li><li> Для оценки самостоятельного применения передних конечностей, оценка (1) контакт стенке цилиндра с одним передних конечностей во время полной задней и (2) посадка с одним передней конечности на полу после полного сзади. Всего по крайней мере 20 контактов для одной передней лапы, используя медленное движение или кадр за фрAme функция Клиента Видео Lan (VLC) бесплатное программное обеспечение ( <a href="http://www.videolan.org/vlc">http://www.videolan.org/vlc</a> ). </li><li> Для анализа исходной ситуации до операции: выполнить тест два раза на мышь, с перерывом 1 час между испытаниями. Передних конечностей использование выражается как отношение правой / левосторонний, самостоятельного применения передних конечностей. </li><li> После коагуляции MCA: снова выполнить тест дважды на мышь, с перерывом между 1 часа испытаний, как указано выше. </li></ol> 5. Перфузии <ol><li> Анестезировать животных (например, кетамин и ксилазина 120/16 мг / кг массы тела, соответственно). </li><li> Fix животное в лежачем положении и вскрыть брюшную полость со средним разреза. Удалить разрывы и грудины. Сделайте небольшой надрез в правом предсердии. Вставка перфузии канюлю в левом желудочке и медленно заливать 20 мл физиологического раствора. </li><li> Обезглавить животное, откройте свода черепа и осторожно отделить мозг от основания черепа. </li><li&gt; Замораживание мозги в -40 ° C холодной изопентана в течение 10 мин. Затем удалите мозги от изопентана и магазина до дальнейшего анализа при -80 ° С </li></ol> 6. Инфаркта Волюметри <ol><li> Cryosectioning: Cut мозги поочередно на криостат 20 мкм толстых секций каждый 400 мкм на слайдах и хранить слайды при -20 ° С </li><li> Крезил фиолетовый (CV) окрашивание: <ol><li> Подготовьте красящего раствора: Смешать 0,5 г CV ацетата в 500 мл H 2 O. Перемешать и тепло (60 ° C), пока кристаллы не растворятся. Пусть решение прохладно и хранить в темной бутылке. Reheat до 60 ° С и фильтруют перед каждым использованием. </li><li> Сушат слайды при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем поместите их в 95% этаноле в течение 15 мин, а затем в 70% этаноле в течение 1 мин, а затем в 50% этаноле в течение 1 мин. </li><li> Поместите слайды в дистиллированной воде в течение 2 минут, обновите дистиллированную воду и поместите их в течение 1 мин. Затем поместите препараты в красящим раствором (60 ° С) еили 10 мин и мыть их дважды в дистиллированной воде в течение 1 мин. </li><li> Поместите слайды в 95% этаноле в течение 2 мин. Затем поместите их в 100%-ном этаноле в течение 5 мин, обновите 100% этанола и поместите их в течение 2 мин. Затем покрыть слайды с монтажной среды. </li><li> Анализ: Сканирование слайдов и анализировать косвенную объем инфаркта методом Свонсон 14 для коррекции отека: (Ишемическая площадь) = (Cortex площадь противоположной стороне) - (не ишемическая площадь кора той же стороне) (рис. 4А). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Donnan, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371, 1612-1623 (2008).</li><li>Di Carlo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+stroke+in+Europe:+A+collaborative+study+of+population-based+cohorts.+ILSA+Working+Group+and+the+Neurologic+Diseases+in+the+Elderly+Research+Group.+Italian+Longitudinal+Study+on+Aging.">Frequency of stroke in Europe: A collaborative study of population-based cohorts. ILSA Working Group and the Neurologic Diseases in the Elderly Research Group. Italian Longitudinal Study on Aging.</a> Neurology. 54, 28-33 (2000).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombolysis+with+alteplase+3+to+4.5+hours+after+acute+ischemic+stroke.">Thrombolysis with alteplase 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke.</a> N. Engl. J. Med. 359, 1317-1329 (2008).</li><li>Jauch, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+early+management+of+patients+with+acute+ischemic+stroke:+a+guideline+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44, 870-947 (2013).</li><li>Longa, E. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J. Vis. Exp. (47), e2423 (2011).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 17, 123-135 (1997).</li><li>Tamura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17, 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+strokes+for+different+folks:+the+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia.">Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).</li><li>Schallert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Swanson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semiautomated+method+for+measuring+brain+infarct+volume.">A semiautomated method for measuring brain infarct volume.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 290-293 (1990).</li><li>Kitano, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1108-1128 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intravenous+recombinant+tissue+plasminogen+activator+on+ischemic+stroke+lesion+size+measured+by+computed+tomography.+NINDS;+The+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+(NINDS)+rt-PA+Stroke+Study+Group.">Effect of intravenous recombinant tissue plasminogen activator on ischemic stroke lesion size measured by computed tomography. NINDS; The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) rt-PA Stroke Study Group.</a> Stroke. 31, 2912-2919 (2000).</li><li>Sowell, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+cortical+change+across+the+human+life+span.">Mapping cortical change across the human life span.</a> Nat. Neurosci. 6, 309-315 (2003).</li><li>Brott, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+acute+cerebral+infarction:+lesion+size+by+computed+tomography.">Measurements of acute cerebral infarction: lesion size by computed tomography.</a> Stroke. 20, 871-875 (1989).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant'+middle+cerebral+artery+territory+infarction:+clinical+course+and+prognostic+signs.">Malignant' middle cerebral artery territory infarction: clinical course and prognostic signs.</a> Arch. Neurol. 53, 309-315 (1996).</li><li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains.">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31, 2707-2714 (2000).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boosting+regulatory+T+cells+limits+neuroinflammation+in+permanent+cortical+stroke.">Boosting regulatory T cells limits neuroinflammation in permanent cortical stroke.</a> J. Neurosci. 33 (44), 17350-17362 (2013).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lymphocyte+trafficking+shields+the+brain+against+deleterious+neuroinflammation+after+stroke.">Inhibition of lymphocyte trafficking shields the brain against deleterious neuroinflammation after stroke.</a> Brain. 134, 704-720 (2011).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 259, 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nat. Protoc. 4, 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 207-214 (2002).</li><li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion.">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38, 2771-2778 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33, 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Arch. Neurol. 59, 1870-1873 (2002).</li></ol>

Авторы не имеют конкурирующие интересы раскрывать.

Настоящий протокол описывает экспериментальную модель хода дистальной, постоянного MCAO по транскраниальной электрокоагуляции - так называемая &quot;модель свертывания&quot;. Эта модель тем временем стал одним из наиболее часто используемых моделях животных в экспериментальных исследованиях инсульта 12. По сравнению с другими координационных моделей ишемии головного мозга, модель коагуляции, как представлено в этом видео имеет то преимущество, что за очень короткое время работы примерно 10 мин при исполнении квалифицированного ученого. Таким образом, краткие раз анестезии может быть достигнута в этой модели, которая является благоприятным признаком экспериментальной модели инсульта потому что воздействие анестетиков на нейропротекции и исхода инсульта хорошо известна 15. Кроме того, как описано ранее Carmichael и соавт. 11, мы подтверждают, что полученный объем инфаркта и локализации после дистального постоянного MCA коагуляции соответствует ишемических поражений головного мозга в большинстве человекаударов в пропорции к размеру мозга. Человека инсульт в основном небольшие по размеру с поражениями примерно 5-15% от полушария, на основе предыдущих исследований популяций и клинических испытаний визуализации 16-18, в отличие от обширных поражениях нажатий на сжатие отека мозга, которые происходят в менее чем 10% клиническая поглаживает 19. Таким образом, поражения инсульта на территории MCA около 12% от полушария, достигнутого представленной модели можно рассматривать как поступательно соответствующего ударного объема. Тем не менее, должно быть принято во внимание, что различные штаммы мыши или используемые протоколы анестезии может повлиять на результирующий объем поражения 20. Смертность во время периода наблюдения после инсульта индукции в этой модели практически отсутствует. Общая смертность составляет менее 5% в основном состоит из смертей во время работы из-за анестезиологической осложнений или жертву, потому что достижение критериев исключения. Для того чтобы гарантировать с низким напряжениемariability этой модели и ее превосходной воспроизводимостью, мы предлагаем следующие критерии исключения: 1) Любой субарахноидального кровоизлияния во время операции. 2) Время работы дольше, чем 15 мин. 3) Реканализация СМА после двух попыток для электрокоагуляции только с транзиторной MCAO. Кроме того, животные должны быть исследованы в день после MCAO (основной физиологической поведения, меха внешности и веса тела), чтобы управлять для боль, дискомфорт или поведения болезни. Несколько меры могут быть реализованы для анализа исхода инсульта, как измерения лазерной спекл, магнитно-резонансной томографии, поведенческих тестов или гистологического анализа. В этом протоколе мы обеспечиваем Примеры способов анализа поведения и анализа объема инфаркта. Несколько испытаний для анализа поведения после очаговой ишемии головного мозга были разработаны и использованы в экспериментальных исследований хода. Подходящие тесты для сенсомоторной дисфункции, ранее использовавшегося нашей группы в этом модельном ход 21,22 мыповторно теста Rotarod 23, тест Важно этикетки 24, Уголок тесте 25 и тест цилиндра 13, который демонстрируется в этом видео. Тест цилиндр последовательно изображает моторной асимметрии в острой фазе после дистальной постоянного MCAO а также обнаруживает подряд вернуть моторной функции. Несмотря на очевидные преимущества, некоторые ограничения этой модели инсульта должны быть приняты во внимание. Во-первых, трепанация черепа необходима для того, для коагуляции артерию, тем самым получая потенциальный доступ для пригородных оперативные инфекций головного мозга, хотя бактериальные инфекции операционной раны, височной мышцы или самого мозга никогда не были обнаружены сами или документально другими, используя эту модель. Кроме того, механические повреждения коры во время подготовки и коагуляции не может быть исключена, но может быть ограничен путем тщательного бурения и удаления части черепа, постоянное увлажнение хирургического сайте и минимальным пе<html> cessary электрокоагуляция (см. критерии исключения). Хотя ход MCA, как изображено на рисунке 2 находится в большинстве мышей C57BL / 6, опишем в протоколе, как действовать в нормальных изменений курса судна, чтобы минимизировать вариабельность модели. Кроме того, мы предлагаем использование нескольких (3 в случае бифуркации; 2 без бифуркации МКА) окклюзии сайтов, чтобы свести к минимуму риск частичной реканализации MCA, которые по нашему опыту является важным фактором для изменчивости этой модели. С точки зрения поведенческих тестах, только незначительные поведенческие дефициты могут быть обнаружены в вышеупомянутых поведенческих тестов и функциональный регенерации можно наблюдать в течение первой недели после инсульта. Таким образом, более продвинутые тест-системы с высокой чувствительностью и качественных параметров испытаний, таких как опытного, достигающего тесте 27 может быть более подходящим для выявления долгосрочного функциональный результат в этой модели. ontent &quot;&gt; Наконец, из-за постоянного коагуляции MCA не реперфузии не могут быть получены, которая представляет собой свойство наблюдается в значительной части пациентов, перенесших инсульт из-за спонтанного лизис сгустка или терапии 28. Однако было описано ранее модель тромбоэмболических ход 26 обеспечивает вариант для бесплатного модели инсульта с реперфузии корковой ишемии мозга. Взятые вместе, высокая воспроизводимость, возможно долгосрочное наблюдение в связи с минимальной смертности и по сравнению с аналогичным объемом относительная инфаркта и локализации в отношении человеческого инсульта отличить &quot;модель коагуляции&quot; как ценная модель для основного и трансляционных исследований инсульта.

Инсульт является третьей наиболее распространенной причиной смерти и одной из основных причин приобретенной взрослой инвалидности в развитых странах 1. Около 80% этой острой неврологической болезни вызвана ишемией мозга в результате обструкции мозгового кровотока при этом около 15% вызваны внутримозгового кровоизлияния 2. Несмотря на продолжающиеся исследования, внутривенное введение тканевого активатора плазминогена является единственной одобренной фармакологическое лечение для ишемического инсульта до сих пор и доступна только меньшинству пациентов, перенесших инсульт из-за короткого утвержденного временного окна 4,5 ч после начала инсульта 3,4. Как нет модели нет в пробирке, которые могут правильно смоделировать сложные взаимодействия между мозга, сосудистой и системных патофизиологических механизмов во время инсульта, животные модели имеют важное значение для доклинических исследований инсульта. Таким образом, несколько ишемических инсульта модели были разработаны в различщества видов. Один из наиболее часто используемых моделей инсульта является &quot;модель накаливания&quot;, где шов нить временно вводится в внутренней сонной артерии и направляется, пока наконечник закрывает происхождение артерии средней мозговой (MCA), в результате чего остановки кровотока и последующее инфаркт головного мозга подкорковых и при длительном окклюзии также областях коры 5,6. В фототромботического моделей ишемического инсульта, фотохимический окклюзия облученного коркового судна достигается после инъекции фотосенсибилизатора в результате небольших, локально очерченных поражений 7. Постоянный окклюзия СМА из дистальных артерий lenticulostriatal может быть достигнуто путем лигирования артерии, ее переходных прессованием, либо с постоянной 8,9 коагуляции. В результате инфаркта в этой модели преимущественно влияет на неокортекса 10, поскольку окклюзия СМА в этой модели дистальнее стоячихulostriatal артерии, которые снабжают базальных ганглиев. Поскольку большинство поражений человека инсульта расположены на территории средней мозговой артерии, все общие моделей инсульта напоминают окклюзии СМА или одного из его филиалов 11. MCA является одним из главных артерий, что обеспечивает приток крови к мозгу; это вытекает из внутренней сонной артерии, маршрутов вдоль боковой борозды, где он затем филиалы и проекты в базальных ганглиях и боковых поверхностях лобной, теменной и височной долей, в том числе первичной моторной и сенсорной коры. Правое и левое MCA подключены к передней мозговой артерии и задней соединительной артерии, которые подключаются к задней мозговых артерий, создавая круг Уиллиса (рис. 1). Как ранее сообщал Кармайкл и др.. 11, инфаркты, моделируемые дистальной средней мозговой ArTery окклюзия (МСАО) модель на мышах охватывают около 10-15% полушария, тем самым имитируя большинство поражений инсульта человека, которые расположены в корковом MCA территории 11,12. В 1981 году Тамура и др.. Описано постоянный, транскраниальная модель МСАО коагуляции у крыс 8. Тем не менее, модель, описываемая Тамура участие ближний окклюзии MCA для того, чтобы обойти более дальний бифуркации артерии. Таким образом, исходная &quot;Тамура модель&quot; вызывает не только корковых, но и стриарные поражения, похожие на поражений, полученных &quot;модели накаливания&quot; 6. Здесь мы описываем постоянный дальний модель МСАО транскраниальная электрокоагуляции у мышей. Кроме того, мы сообщаем связанный гистологические и функциональные методы анализа итогов хода в этой модели. Все методы основаны на стандартных оперативных процедур, разработанных и используемых в наших лабораториях.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Camera Canon Eos 500D</td>
			<td style="width:224px;">Canon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:324px;">optics: 18-55 mm; 30 fps; 640x480 video function</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mirror</td>
			<td style="width:224px;">Kristallform</td>
			<td style="width:119px;">2677089</td>
			<td>30x30 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transparent acrylic glass cylinder</td>
			<td style="width:224px;">H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>diameter: 8 cm,&#160; height: 25 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Fine Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mayor Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Forceps</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotons</td>
			<td style="width:224px;">NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td style="width:119px;">974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Saline solution</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;">131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Bepanthen pomade</td>
			<td style="width:224px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:224px;">Abbot</td>
			<td style="width:119px;">B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomikroskop&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Electrosurgical device</td>
			<td colspan="2">ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgieger&#228;t</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Drill</td>
			<td style="width:224px;">Proxxon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">D-34343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ketamine</td>
			<td style="width:224px;">Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Xylacine</td>
			<td style="width:224px;">Albrecht</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5ml Syringe&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate Buffered Saline PH: 7,4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td style="width:119px;">P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isopentane</td>
			<td style="width:224px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td style="width:119px;">ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td style="width:224px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">C57Bl/6J mice</td>
			<td style="width:224px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery

Инсульт является третьей наиболее распространенной причиной смерти и одной из главных причин приобретенной взрослой инвалидности в развитых странах. Только очень ограниченные терапевтические опции доступны для небольшой части пациентов, перенесших инсульт в острой фазе. Современные исследования интенсивно ищет новых терапевтических стратегий и уделяет все большее внимание на суб-острого и хронического фазы после инсульта, потому что больше пациентов могут иметь право на получение терапевтических вмешательств в окне длительное время. Эти замедленные механизмы включают в себя важные патофизиологические пути, такие как после инсульта воспаления, ангиогенеза, нейрональной пластичности и регенерации. Для того чтобы проанализировать эти механизмы и впоследствии оценить новые цели снадобья, модели экспериментальные инсульта с клинической значимости, низкой смертностью и высокой воспроизводимости пользуются большим спросом. Кроме того, мыши являются самыми маленькими млекопитающими, в котором фокусное ход поражения могут быть вызваны и для которых широкий спектр трансгенных моделейдоступны. Таким образом, мы описываем здесь модель мыши транскраниального, постоянный коагуляцию средней мозговой артерии через электрокоагуляции дистальной из lenticulostriatal артерий, так называемой &quot;модели свертывания&quot;. В результате инфаркта в этой модели расположены в основном в коре головного мозга; относительный объем инфаркта в связи с размером мозга соответствует большинству человеческих инсультов. Кроме того, модель выполняет вышеупомянутых критериев воспроизводимости и низкой смертности. В этом видео нам демонстрируют хирургические методы индукции инсульта в &quot;модели свертывания&quot; и сообщить гистологические и функциональные инструменты анализа.

Из-за короткого анестезии времени и умеренной повреждения головного мозга, примерно 10 мин после перевода в своих клетках все животные бодрствовали, свободно перемещаясь в клетку и взаимодействуя с помета. Смертность во время операции MCAO было менее 5%, главным образом в результате случайного субарахноидального кровоизлияния или неправильной анестезии. Смертность во время 7 дней наблюдения после индукции инсульта происходит очень редко примерно 1-2% животных. В эксплуатации серии из 10 животных для этого отчета все животные пережили операцию и 7-дневный период наблюдения, ни один из них не пришлось исключить из-за критериев исключения. Поведенческие дефициты после MCA коагуляции оценивали с помощью теста цилиндра использование 13 анализа лапка асимметрии. В этом тесте, отношение независимой левой и правой передней лапой использования измеряется в указанные временные точки после такта впуска и по сравнению с исходными значениями, полученными 24ч до MCAO (рис. 3В). Животные представлены значительные изменения в использовании конечностей асимметрии для разведки в сочетании стенки в цилиндр теста 24 часов (1.72 ± 0,326, р &lt;0,05) и 3 дня (1,36 ± 0,17, р &lt;0,05) после MCAO. Хотя соотношение улучшилось в течение 1 недели времени наблюдения, двигатель асимметрии был все еще значительное 7 дней после МСАО (1,35 ± 0,29, р &lt;0,05) по сравнению с исходными значениями. Мы провели инфаркта Волюметри помощью крезиловый фиолетовый окрашенных серийные корональные срезы головного мозга через 7 дней после инсульта индукции (рис. 4В). Средний объем инфаркта составила 15,4 мм 3, тем самым представляя 12% от одного мозга полушарии (рис. 4С). Изменчивость этой модели инсульта очень низкая со стандартным отклонением около 10%. Площадь поражения охватывает соматосенсорной и двигательной области лишь с незначительными поражением подкорковых структур. Кроме того, локализация инфарктаОбласть весьма предсказуемым только с минимальной изменчивости, как показано на схематическом рисунке распределения (рис. 4D). <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig1highres.jpg" width="500" /> Рисунок 1. Схематическое изображение Круга Уиллиса. Артериальное Круг Уиллис формируется средних мозговых артерий (MCA) и передних мозговых артерий (ACA), какая ветвь от внутренней сонной артерии (ВСА), а также по задней мозговой артерии (PCA) и задней соединительной артерии (PComA). MCA проходит в боковой борозды, где он филиалов к коре головного мозга. Доминирующая MCA филиал поставляет основную часть моторной коры и часть соматосенсорной коре постоянно поглощается демонстрируемой модели (ACOMA = Передняя соединительная артерия; ВА = основной артерии; SUCA = Улучшенный cerebelЛар артерии). <img alt="Рисунок 2" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig2highres.jpg" width="400" /> Рисунок 2. Транскраниальной вид после удаления височной мышцы и схематический вид MCA окклюзии. (А) После удаления височной мышцы корковые артерии можно просмотреть с помощью частично полупрозрачного черепа мыши (в 8-12 недельных мышей). Доминирующая отрасль MCA могут быть идентифицированы в ростральной части височной зрения, а также дальнейших корковых артерий ветвящихся от MCA и СПС в хвостовой части. (Б) Схематическое изображение от доминирующего MCA отрасли в своей преобладающей вариации с бифуркации на боковой височной коре после бурения заусенцев отверстие и удаление череп. (C) черные квадраты представляют коагуляции сайтов MCA в проксимальных и дистальных сторон бифуркации. Рисунок 3. Анализ поведенческих дефицитов. (А) тест цилиндра настройки: мышь помещают в вертикальном цилиндре и зеркала размещены за того, чтобы зарегистрировать все движения с помощью видеокамеры (B) использование передних конечностей асимметрия была проанализирована с помощью теста блока цилиндров.. Влево / Вправо отношения самостоятельного применения передних конечностей были рассчитаны 24 ч до MCAO и в указанные моменты времени после индукции инсульта. N = 10, * р &lt;0,05 между указанной точке времени и исходного значения (контроль). <img alt="Рисунок 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" width="500" /> Рисунок 4. Объемный анализ инфаркта и инфаркта исход после дистальной MCAO. (А) представитель образ крезиловый фиолетового окрашенных корональной бюстгальтерв разделе 7 дней после MCAO. Желтая линия указывает, выбор в контралатеральной (справа) коры и красная линия является выбор без инфаркта (окрашенных) кору ипсилатеральном мозга. Бледно-область в левом полушарии изображает область инфаркта ткани. (B) Объем инфаркта анализ мозга 10 (каждая точка представляет один индивидуальный мозг) 24 часа в сутки, 3 дня и 7 дней после дистального MCA коагуляции. Горизонтальная красная линия представляет среднее, ошибок указывают стандартное отклонение. (С) представитель крезиловый фиолетовый окрашенные корональные срезы головного мозга 400 мкм в 7 дней каждые после MCA коагуляции. (D) Схематическое распределение инфаркта мозговой ткани через 7 дней после MCAO. Каждый слайд изображает накопленную информацию распределения инфаркта (цвета кодируются как указано) в данном разделе по отношению к темени (изменение изображения с:. Liesz др., Brain, 2011; с разрешения Oxford University Press). &lt;Нет созданных плейлистов: = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg&quot; целевых = &quot;_blank&quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Различные мышиные модели окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) широко используются в экспериментальных исследованиях мозга. Здесь мы демонстрируем модель транскраниальной постоянного дистальной MCAO который производит последовательную корковой инфаркт размером, соответствующим повреждения, введенного большинства ишемических инсультов человека.

Моделирование Ход у мышей: Постоянный Коагуляция артерии Дистальный средней мозговой

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Моделирование инсульта у мышей - окклюзии средней мозговой артерии с накаливания Модель

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Мышь модели окклюзии средней мозговой артерии

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) Модель развития ишемического инсульта с лазерной допплеровской флоуметрии Руководство у мышей

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Применение постоянных средней мозговой артерии Лигирование в мышь

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Эндотелина-1 Индуцированные средней мозговой артерии модели развития ишемического инсульта с лазерной доплеровской флоуметрии руководство в Крысы

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Используя черепно окна для визуализации средней мозговой артерии во время эндотелина-1 Индуцированные окклюзии средней мозговой артерии

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Оптимизированная система для мониторинга церебральный перфузии у крыс хода модели внутрипросветного окклюзии средней мозговой артерии

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Постоянный церебральный окклюзия судна<em&gt; С помощью</em&gt; Двойной лигатура и Перерезка

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Эмболические средней мозговой артерии Окклюзия (MCAO) для ишемического инсульта с гомологичными сгустки крови у крыс

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Количественное нейрососудистой защите После Серийное гипоксического прекондиционирования и переходных средней мозговой артерии Окклюзия у мышей

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...