Name: capsular serotyping of streptococcus pneumoniae by latex agglutination
Uploaded: 2014-09-25T00:00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination at JoVE.com

This work was part of the PneuCarriage project, funded by the Bill and Melinda Gates Foundation with contribution by the Victorian Government&#8217;s Operational Infrastructure Support Program.

1 Подготовка внутренних латексных реагентов <ol><li> Приготовление солевого буферного раствора глицина (GBS) <ol><li> Добавить 1,5 г глицина, 11,7 г хлористого натрия и 100 мл дистиллированной воды в стеклянном стакане 200 мл. </li><li> Смешать, чтобы растворить с помощью магнитной мешалки. </li><li> Передача смеси до 500 мл мерный цилиндр и добавить дистиллированную воду, чтобы сделать в общей сложности 200 мл. </li><li> Перенесите раствор обратно в 200 мл стакан, проверить рН и приспособиться к 8,2 гидроксидом 5 М натрий. ПРИМЕЧАНИЕ: гидроксид натрия вызывает коррозию, средства индивидуальной защиты. </li><li> Фильтр стерилизовать решение с использованием 0,22 мкм фильтры и несколько 60 мл шприцев в мл preautoclaved винт ограничен стеклянной бутылке 250. </li><li> Храните при комнатной температуре. </li></ol></li><li> Подготовка GBS с 0,2% бычьего сывороточного альбумина <ol><li> Добавить 0,2 г бычьего сывороточного альбумина (BSA) порошка и 100 мл GBS в стеклянном стакане 200 мл и перемешивают до растворения с использованием магнитной мешалки. </li><li> Фильтрстерилизовать раствор через 0,22 мкм фильтры, используя несколько 60 мл шприцев в мл preautoclaved винтовой крышкой стеклянной бутылке 250. </li><li> Хранить при 4 ° С. </li></ol></li><li> Подготовка Латекс реагент <ol><li> Этикетка 2 мл с круглым дном пробирке. ПРИМЕЧАНИЕ: круглым дном трубы используются для минимизации оседание частиц, которые могут повлиять на антитела привязанность. </li><li> Использование P1000 пипетки с стерильные наконечники добавить 975 мкл GBS в пробирке, затем добавить 25 мкл соответствующей пневмококковой антисыворотки для латекс реагент готовится (т.е., бассейн, группа, тип или фактор). Обратить пять раз перемешать. </li><li> Развести полистирольных латексных частиц 1:10 добавлением 120 мкл латексных частиц в 1080 мкл стерильного физиологического солевого раствора. Примечание: Это может быть сделано в больших объемах, но должны быть свежим каждый раз, когда латекс реагенты производятся. </li><li> Добавить 1000 мкл 1:10 латексной суспензии (полученного на стадии 1.3.3) к 1,000 мкл антисыворотки 1:40 подвеска (полученного на стадии 1.3.2). Обратить пять раз перемешать. </li><li> Инкубируют при 37 ° С на медленно вращающемся колесе (например, 4 оборота в минуту в течение колесо диаметром 38,5 см) в течение 2 часов. </li><li> Центрифуга течение 15 мин при 1100 х г. Жидкость над осадком сливают и осторожно ресуспендируют осадок в 2 мл стерильного физиологического раствора. </li><li> Центрифуга течение 15 мин при 1100 х г. Удалите супернатант и добавить 1 мл GBS и осторожно ресуспендируют осадок. </li><li> Внесите латекса суспензии в меченым 5 мл винт закрытой пробирке. Добавить еще 1 мл GBS. </li><li> Добавить 2 мл GBS содержащем 0,2% БСА (вес / объем) (рН 8,2) (полученного на стадии 1.2). Добавить 40 мкл 10% (масса / объем) раствора азида натрия в качестве консерванта. ПРИМЕЧАНИЕ: натрия азид опасен при вдыхании, и кожа, и раздражение глаз. Желательно приобрести готовую 10% раствор, а не порошкообразной форме, так как это сводит к минимуму риск вдыхания. Средства индивидуальной защиты (в том числе перчаткид Очкидлязащитыотбрызг) следует носить при работе с этим реагентом. Обратитесь к Паспорт безопасности для подробной информации. </li><li> Магазин латексные реагенты при температуре 4 ° С. </li></ol></li><li> Подготовка отрицательного контроля латекса реагента <ol><li> Этикетка 2 мл с круглым дном пробирке. ПРИМЕЧАНИЕ: круглым дном трубы используются для минимизации оседание частиц, которые могут повлиять на антитела привязанность. </li><li> Использование P1000 пипетки с стерильные наконечники добавить 975 мкл GBS в пробирке, затем добавить 25 мкл нормальной кроличьей антисыворотки. Обратить пять раз перемешать. </li><li> Действуйте с шагом 1.3.3 для 1.3.10 выше </li></ol></li></ol> 2 Контроль качества (QC) из латексных реагентов <ol><li> Доведите латекс реагент до комнатной температуры. Непосредственно перед использованием, осторожно перемешать латексный реагент путем обращения трубки несколько раз. </li><li> Проверьте реагент для autoagglutination с помощью пипетки 15 мкл на предметное стекло микроскопа и действуйте с шагом 4,7 и 4,8 ниже. Там не должно бытьgglutination из латексных частиц. Реагент должен появиться белая и гладкая. </li><li> Проверьте реагент против панели низкого прохода пневмококковых изолятов. Используйте недавно выращенные культуры, полученные, как в шаге 3 Панель изолятов должна включать изолятов в &quot;целевой&quot; серотипа (удельная серотип для реагента проходит испытания) и &quot;нецелевые&quot; серотипов (изоляты других серотипов, которые не должны обычно пересекают вступать в реакцию с реагентом). Включите по крайней мере один изолят каждой целевой и нецелевой серотипа для каждого латекса реагента, подвергающегося QC. Если есть только один целевые или нецелевые серотипа, тест две разные изоляты конкретного серотипа. ПРИМЕЧАНИЕ: Тестирование панель должна включать в себя несколько изолятов каждого серотипа, некоторые из которых являются редкостью в инвазивных заболеваний и / или коллекций культур типа. Желательно, чтобы включать в себя некоторые каретки изолирует, так как они часто более требовательный к серотипа (данные не показаны), тем самым дополнительно проверки Выхе реагентов и обеспечение того, чтобы реагенты, скорее всего, способны серотипирование как инвазивные и перевозку изолирует. </li><li> Продолжайте тестирования латексных реагентов с являющихся и не являющихся целевой пневмококковой изолирует согласно методу, описанному в пунктах 3 и 4 ниже. </li><li> Контроль качества реагентов в момент производства, а затем, по меньшей мере ежегодно. Примечание: Если реагент не пройти контроль качества, партия должна быть отброшена и новый препарат производства. В случае отказа повторите QC мы рекомендуем реагенты быть представлено с использованием альтернативных методов, описанных в Ortika и др., 2013 8 и в обсуждении ниже. </li></ol> 3 Получение пневмококковой культур для серотипирования <ol><li> Использование стерильной петли выбрать один колонию пневмококковой изолировать и серия на это на твердую неселективном кровяной агар так, что основная посевной охватывает примерно треть поверхности пластины. Подряд для отдельных колоний. ПРИМЕЧАНИЕ: Плиты, изготовленные из дефибринированной лошади или овечьей крови подходят; но пластины крови, полученные с человеческой крови или цитратной крови животных нет. </li><li> Планшеты инкубируют O / N при 37 ° С в атмосфере 5% CO 2. </li><li> Соблюдайте рост на тарелке для чистоты и оценить, что есть достаточный рост для серотипирования. ПРИМЕЧАНИЕ: чистая культура пневмококковой изолята требуется для серотипирования. В нашем опыт, сливающиеся, или вблизи сплошной рост, охватывающий примерно одну треть поверхности пластины, как правило, достаточно для завершения серотипирование. Как пневмококковых культуры могут быть склонны к автолиза, культуры, подготовленные для серотипирования должны быть проверены в течение 24 часов субкультуры. Не берите культуры пластину из инкубатора более 15 до 20 мин, после чего серотипирование начинается. </li></ol> 4.Проведение Латекс Агглютинация Серотипирование <ol><li> Удалите все латексные реагенты из холодильника и дайте им нагреться до комнатной температуры в течение примерномерно 30 мин. Непосредственно перед использованием, осторожно инвертируют трубы для смешивания реагентов. </li><li> Этикетка микроскопа. </li><li> Поместите 15 мкл отрицательного контроля латекса реагента на предметное стекло. </li><li> Используя стерильный одноразовый 1 мкл петлю взять размах пневмококковой культуры так, чтобы петля примерно наполовину. </li><li> Аккуратно смазать инокулята на поверхность ползуна, близкой к капле отрицательного контроля латекса реагента. Посевной должны быть видны на стекле. </li><li> Быстро и тщательно перемешать посевной в отрицательную контроль латексной реагента с помощью петли. Убедитесь, что падение не распространяется дальше, чем его первоначальный размер. </li><li> Возьмите слайд, удерживая ее на обоих концах. Рок скользить назад и вперед в течение 1 мин. Следите, чтобы жидкость медленно, и убедитесь, что размер капли не увеличивается. ПРИМЕЧАНИЕ: Можно также использовать пластины рокер. </li><li> Соблюдайте для макроскопического склеивания (т.е., поневооруженным глазом) и очистка суспензии на черном фоне. </li><li> Если отрицательный контроль латекс реагент не показывает агглютинацию или очистка продолжить тестирование культуру, заменив тест латексные реагенты для отрицательного контроля латекса реагента с шагом 4,1 до 4,8 выше. Свежий цикл должен быть использован каждый раз. Продолжать с тестированием латексных реагентов, начиная с бассейнами. </li><li> Испытание каждого из «пула» латексных реагентов в последовательности, пока не будет получен положительный тест. ПРИМЕЧАНИЕ:. Порядок тестирования из бассейнов может быть сделано в &#39;раундов &quot;, чтобы отразить местную частоты отдельных серотипов (например, путем проверки на трех наиболее вероятных бассейнов на первом слайде Если положительная реакция не получается, то тест Следующие три, скорее всего, из оставшихся бассейнов на втором слайде, и так далее, пока не будет получена положительная реакция). Это гарантирует, что наиболее распространенные серотипы испытания первого, минимизируя время и реагенты, необходимые. </li><li>Использование ключа антисыворотки производителя определить, какие конкретные антисыворотки представлены в положительном бассейна. </li><li> Тестирование каждой из групп или типов, содержащихся в положительном бассейне по отдельности, чтобы определить &quot;Группа&quot; или &quot;тип&quot;, как в шагах 4,1 до 4,8 выше. </li><li> Определите результат на ссылкой на ключ Антисыворотка производителя. Если «тип» определяется (например, серотипа 5), то дальнейшие испытания не требуется, и этот результат записывается. </li><li> Если «группа» определяется (например, группа 19), то обратитесь к ключу производителей, чтобы определить факторы, которые будут опробованы. Продолжить тестирование с отдельными &quot;фактор&quot; латексных реагентов и определения окончательного серотип (например, серотипа 19В). </li></ol>

<ol>
	<li>Rudan, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+etiology+of+childhood+pneumonia+in+2010:+estimates+of+incidence,+severe+morbidity,+mortality,+underlying+risk+factors+and+causative+pathogens+for+192+countries.">Epidemiology and etiology of childhood pneumonia in 2010: estimates of incidence, severe morbidity, mortality, underlying risk factors and causative pathogens for 192 countries.</a> J Glob Health. 3 (10401), (2013).</li><li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years:+global+estimates.">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li><li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae.">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J Clin Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li><li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease:+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use,+part+I.">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin Infect Dis. 30, 100-121 (2000).</li><li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li><li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li><li>Satzke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae:+Updated+recommendations+from+the+World+Health+Organization+Pneumococcal+Carriage+Working+Group.">Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group.</a> Vaccine. , (2013).</li><li>Ortika, B. D., Habib, M., Dunne, E. M., Porter, B. D., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+latex+agglutination+reagents+for+pneumococcal+serotyping.">Production of latex agglutination reagents for pneumococcal serotyping.</a> BMC Res Notes. 6 (49), (2013).</li><li>Adegbola, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+and+antimicrobial+susceptibility+patterns+of+isolates+of+Streptococcus+pneumoniae+causing+invasive+disease+in+The+Gambia+1996-2003.">Serotype and antimicrobial susceptibility patterns of isolates of Streptococcus pneumoniae causing invasive disease in The Gambia 1996-2003.</a> Trop Med Int Health. 11, 1128-1135 (2006).</li><li>Slotved, H. C., Kaltoft, M., Skovsted, I. C., Kerrn, M. B., Espersen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple,+rapid+latex+agglutination+test+for+serotyping+of+pneumococci+(Pneumotest-Latex).">Simple, rapid latex agglutination test for serotyping of pneumococci (Pneumotest-Latex).</a> J Clin Microbiol. 42, 2518-2522 (2004).</li><li>Turner, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+nasopharyngeal+cocolonization+by+multiple+pneumococcal+serotypes+by+use+of+latex+agglutination+or+molecular+serotyping+by+microarray.">Improved detection of nasopharyngeal cocolonization by multiple pneumococcal serotypes by use of latex agglutination or molecular serotyping by microarray.</a> J Clin Microbiol. 49, 1784-1789 (2011).</li><li>Mudany, M. A., Kikuchi, K., Totsuka, K., Uchiyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+new+serotyping+kit+for+Streptococcus+pneumoniae.">Evaluation of a new serotyping kit for Streptococcus pneumoniae.</a> J Med Microbiol. 52, 975-980 (2003).</li><li>Lalitha, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+by+agglutination+assays:+a+cost-effective+technique+for+developing+countries.">Serotyping of Streptococcus pneumoniae by agglutination assays: a cost-effective technique for developing countries.</a> Bull World Health Organ. 74, 387-390 (1996).</li><li>Shutt, C. K., Samore, M., Carroll, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+Denka+Seiken+slide+agglutination+method+to+the+quellung+test+for+serogrouping+of+Streptococcus+pneumoniae+isolates.">Comparison of the Denka Seiken slide agglutination method to the quellung test for serogrouping of Streptococcus pneumoniae isolates.</a> J Clin Microbiol. 42, 1274-1276 (2004).</li><li>Gella, F., Serra, J., Gener, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Latex+agglutination+procedures+in+immunodiagnosis.">Latex agglutination procedures in immunodiagnosis.</a> Pure Appl Chem. 63, 1131-1134 (1991).</li><li>Habib, M., Porter, B. D., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsular+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+using+the+Quellung+reaction.">Capsular serotyping of Streptococcus pneumoniae using the Quellung reaction.</a> J. Vis. Exp. (84), (2014).</li><li>Arai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+antiserum-coated+latex+particles+for+serotyping+Streptococcus+pneumoniae.">Use of antiserum-coated latex particles for serotyping Streptococcus pneumoniae.</a> Microbiol Immunol. 45, 159-162 (2001).</li><li>Lafong, A. C., Crothers, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+latex+agglutination+method+for+typing+pneumococci.">Simple latex agglutination method for typing pneumococci.</a> J Clin Pathol. 41, 230-231 (1988).</li><li>Ortega-Vinuesa, J. L., Bastos-Gonzalez, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+factors+affecting+the+performances+of+latex+agglutination+tests.">A review of factors affecting the performances of latex agglutination tests.</a> J Biomater Sci Polym Ed. 12, 379-408 (2001).</li><li>Yap, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+slide+latex+agglutination+test+for+rotavirus+antigen+detection.">Development of a slide latex agglutination test for rotavirus antigen detection.</a> Malays J Pathol. 16, 49-56 (1994).</li><li>Severin, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Latex+agglutination+in+the+diagnosis+of+meningococcal+meningitis.">Latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis.</a> J Clin Pathol. 25, 1079-1082 (1972).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Латекс агглютинации является простой, быстрый и недорогой метод для пневмококковой серотипирования. Коммерческие пневмококковых латекс агглютинации реагенты доступны, но они в настоящее время не проводится различия все известные пневмококковой серотипы 10,12. Однако, латекс агглютинации реагенты могут быть легко получены в доме с помощью приобрели антитела на конкретных пневмококковых капсульных антигенов. В способе, описанном здесь, антитела пассивно прикреплен к латексных частиц, чтобы сделать набор реагентов латексной агглютинации. Положительная реакция латекс происходит, когда специфические антитела, связанные с частицами латекса придают антигенов на полисахарид капсулы из пневмококковых изолировать 18,19. Частицы латекса, прикрепленные к антителам позволяют специфическая реакция антиген-антитело, чтобы быть визуализированы без увеличения. Латекс агглютинации является подходящим методом для высокой пропускной лабораторий апD также для ограниченными ресурсами. Основные преимущества метода латекс агглютинации в том, что никакое специализированное оборудование не требуется для выполнения теста, реагенты имеют срок годности не менее 2 лет при хранении при 4 ° С 8, и что это недорого, просто и быстро выполнить. Серологическое типирование пневмококковой изолят на латексной агглютинации занимает около 10 мин, и до четырех латексные реагенты могут быть проверены параллельно на одном слайде. Кроме того, если распространенность серотипов известен соответствующий эпидемиологического, тестирование может быть выполнено в раундах, начиная с бассейнов, содержащих наиболее распространенных серотипов аналогично испытанию Quellung 17. Такой подход снижает количество тестов, необходимых для определения серотипа. Способ также высокой воспроизводимостью между различными операторами (данные не показаны). Недостатком латекс агглютинации серотипирования в том, что производство реагентов требует больших затрат времени, с приблизительно 4 ч; хотя многократного reageНТС могут быть легко получены параллельно. Кроме того, некоторые антигены, являются общими для различных серотипов пневмококков, в результате чего перекрестных реакций с некоторой антисыворотки (например, серотипа 29, 42 и группа 35). Тем не менее, эти перекрестные реакции хорошо охарактеризованы при использовании коммерческого антисыворотки (который, как правило, предварительно адсорбированный для удаления более проблематичным перекрестно реагирующих антител) и дополнительные таблицы реакции, при условии, производителем для того, чтобы различать, который присутствует серотипа. Латекс реагенты могут также пересекать реагировать, если антитела не выровнены латексных частиц; они определяются как КК неудач. По нашему опыту, строгий контроль качества является залогом успеха этого метода, даже если имеющиеся в продаже антисыворотки используются для производства. КК занимает примерно 15 мин для каждого реагента и зависит от набора соответствующего QC изолятов, как описано выше. Метод, описанный здесь приводит реагентов, которые дают положительную реакцию также Wiтонкий тестовый период. По нашему опыту, ложных срабатываний редки в практике (данные не представлены). Наблюдаются Иногда ложные негативные реакции; обычно они касаются известных проблем с конкретной антисыворотки (например, серогруппы 6 изоляты не может реагировать с бассейном B антисыворотки), или вниз регуляции экспрессии капсулы по изолята. Использование серотипирования algrorithm, предоставляемая производителем Также важно, как и в большинстве случаев ложный положительный или отрицательный реакция приведет к &quot;слепой конец &#39;результате. В этих случаях, и когда реакции трудно интерпретировать, мы рекомендуем повторить тестирование и / или тестирование с помощью альтернативного способа, таких как реакции Quellung. Некоторые устранение неисправностей иногда требуется сделать удовлетворительные латексные реагенты. В способе, описанном здесь, антитело прикрепляется к латексных частиц с помощью пассивной адсорбции 15,19, таким образом, является критической переменной концентрации антител использовали, который определяет, насколько хорошоповерхность латексных частиц покрыта и последующее выравнивание антител активных участков 15,20. Следовательно, если слишком мало или слишком антитело присоединены к латексных частиц, что реакции антиген-антитело не будет оптимальным, и неудовлетворительные реагенты могут быть получены 15,20,21. Как титры антител варьироваться между различными партиями антисыворотки, стандартный набор разведения не могут производить реагенты, которые хорошо 8. В качестве отправной точки использовать разбавление антисыворотки 1:40, и если это не удается, разбавить антисыворотки дальше. По нашему опыту это обычно решает проблему 8. В небольшом количестве случаев реагенты могут показать слабую агглютинацию, что не сопровождается очистки суспензии, при проверке с целевой изолирует. В этих случаях разбавление антисыворотки не улучшает качество реагента, но, как правило, удовлетворительные реагенты могут быть получены путем исключения центрифугирования и промывки шаги 8,22 </sup&gt;. , Покрытых антителом, частицы латекса обычно используются в диагностической микробиологии для обнаружения, идентификации или серотипирования различных микробов 15,20. Таким образом, способ, описанный здесь, может быть пригоден для получения латекса реагенты для других целей, при условии, пригодны антисыворотки доступен, и соответствующие процедуры КК принимаются.

Пневмококк (пневмококк) является одной из основных причин заболеваемости и смертности среди детей в возрасте до пяти лет во всем мире, особенно в условиях ограниченных ресурсов 1,2. Пневмококковые диапазоны болезни от локализованных инфекций, угрожающих жизни заболеваний, таких как пневмония, сепсис и менингит 1,2. Более 90 серотипов пневмококков были выявлены на основе различий в их капсульного полисахарида 3. Современные вакцины нацелены на капсульный полисахарид и обеспечивают защиту от основных серотипов, вызывающих инвазивное заболевание 4. Серологическое типирование пневмококковых изолятов важно для оценки влияния вакцинации на перевозки и болезней, а также обеспечения более широкого эпидемиологическую информацию 5,6. Способ пневмококковой серотипирования ток «золотым стандартом» является тест Quellung, но это занимает много времени и требует определенных навыков для PERFOгт 7. Латекс агглютинации является альтернативным методом серотипирование рекомендовано Всемирной организацией здравоохранения 7. Латекс агглютинации быстро и просто выполнять, и используется во многих лабораториях по всему миру 8-11. Важно отметить, что латекс-агглютинации показал сопоставимую точность в тесте Quellung для пневмококковой серотипирования 10,12-14. В целом, этот метод идеально подходит для ограниченными ресурсами, а также с высокой пропускной лабораторий. Латекс агглютинации реагенты (&#39;латексные реагенты ») создаются привязанности антител к латексных частиц 15. В положительной реакции, эти меченые частицы агглютинации в присутствии специфического антигена. Коммерческие латексные реагенты доступны для ограниченного круга серотипов. Латекс реагенты могут быть также получены в доме с использованием коммерчески доступных сывороток 10. Смеси антисыворотками (&#39;бассейны&#39;), а также антисыворотки к пневмококковой сerogroups (например, группа 19), отдельные серотипы (например, серотипа 5), а также специфические антигены (факторы &quot;&#39;, например., коэффициент 19C признать серотип 19а) для дальнейшего определения серотипов в группах имеются 16. Эта рукопись излагаются основные этапы производства латексных реагентов с использованием пассивного вложения имеющихся в продаже антисыворотки латексных частиц. Контроль качества (QC) аспекты этого метода описаны, и протокол для использования латексных реагентов для пневмококковой серотипирования включен.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1085">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:180px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:263px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:299px;">Microparticles based on polystyrene, 800 nm</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:127px;">65984-10 ml-F</td>
			<td style="width:263px;">Or other volumes as required</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:299px;">Normal rabbit serum</td>
			<td style="width:180px;">Antibodies Australia&#160;</td>
			<td style="width:127px;">NRS-1ml</td>
			<td style="width:263px;">Or other volumes as required, bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:299px;">Pneumococcus (Neufeld) antisera</td>
			<td style="width:180px;">SSI Diagnostica</td>
			<td style="width:127px;">Various</td>
			<td style="width:263px;">Bring to room temperature before use 
			<a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:299px;">Sterile Bovine Albumin&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Sigma</td>
			<td style="width:127px;">A-4503</td>
			<td style="width:263px;">Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:299px;">Sodium azide 10% (v/v) solution&#160;</td>
			<td style="width:180px;">VWR International</td>
			<td style="width:127px;">ROAC3902/100ml</td>
			<td style="width:263px;">Caution: hazardous if inhaled; skin and eye irritant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Eppendorf Safe-Lock tubes, 2 ml</td>
			<td style="width:180px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:127px;">0030 120.094</td>
			<td style="width:263px;">Round bottom</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:127px;">10241.AP</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:299px;">Calibrated disposable inoculating loops 1 &#181;l</td>
			<td style="width:180px;">Copan</td>
			<td style="width:127px;">CD175SO1</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:299px;">Glass microscope slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td style="width:180px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">LBS 2950RC</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:299px;">5 M NaOH</td>
			<td style="width:180px;">BDH</td>
			<td style="width:127px;">10252</td>
			<td style="width:263px;">Caution: highly corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Glycine</td>
			<td style="width:180px;">Merck</td>
			<td style="width:127px;">10119.05</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Horse Blood Agar (HBA) plates</td>
			<td style="width:180px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">PP2001</td>
			<td>Bring to room temperature before use 
			<a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au</a></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">Rotating wheel</td>
			<td style="width:180px;">Wyble Engineering Development Corporation</td>
			<td style="width:127px;">Not available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:299px;">Polystyrene flat bottom screw cap tube, 5 ml</td>
			<td style="width:180px;">Technoplas</td>
			<td style="width:127px;">S5016SU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">60 ml syringes without needles</td>
			<td style="width:180px;">Terumo</td>
			<td style="width:127px;">SS-60L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Millex-GP syringe filter unit, 0.22 &#181;m</td>
			<td style="width:180px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:127px;">SLGP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Brochure on Neufeld antisera</td>
			<td style="width:180px;">Statens Serum Institut</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td>Key to determining serotypes 
			<a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">Key to pneumococcal factor serum</td>
			<td style="width:180px;">Statens Serum Institut</td>
			<td align="right" style="width:127px;">18058</td>
			<td style="width:263px;">For determining serotype within Groups 
			<a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">*alternative sources are available for most materials</td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capsular serotyping of streptococcus pneumoniae by latex agglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major cause of morbidity and mortality world-wide. Current vaccines target the pneumococcal capsule, and there are over 90 capsular serotypes. Serotyping pneumococcal isolates is therefore important for assessing the impact of vaccination programs and for epidemiological purposes. The World Health Organization has recommended latex agglutination as an alternative method to the &#8216;gold standard&#8217; Quellung test for serotyping pneumococci. Latex agglutination is a relatively simple, quick and inexpensive method; and is therefore suitable for resource-poor settings as well as laboratories with high-volume workloads. Latex agglutination reagents can be prepared in-house utilizing commercially-sourced antibodies that are passively attached to latex particles. This manuscript describes a method of production and quality control of latex agglutination reagents, and details a sequential testing approach which is time- and cost-effective. 
This method of production and quality control may also be suitable for other testing purposes.

Положительная реакция латекс имеет место, когда тип-специфическое антитело прикрепляется к латексной частицы связывается с капсулой пневмококка и агглютинации частиц в антитело, меченное наступает 15. 1А показывает положительную реакцию, которая характеризуется видимой агглютинации и очистки фоне подвеска. Отрицательная реакция характеризуется латекс агглютинации реагента оставшейся гладкой и белой (фиг.1В) суспензии. Реагенты оптимизированы таким образом, что положительная реакция следует соблюдать до конца временного интервала одним мин (обычно обнаруживаемого в приблизительно 20 сек). Мы не рекомендуем читать реакции после временного интервала 1 мин. Очень редко, реакции отображения слабую агглютинацию вокруг края капли, которая не сопровождается, очистив фонового приостановления или появляются &quot;тягучий&quot; без фоновой очистки (данные не представлены). Это самые как<html> LY негативные реакции. В таких случаях мы рекомендуем повторное тестирование и / или дальнейшего расследования, используя другой метод серотипирования (например реакции Quellung 17). <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51747/51747fig1highres.jpg" width="500" /> Рисунок 1. Положительные и отрицательные реакции латекс агглютинации. Препараты пневмококковой изолировать смешивают с латексом агглютинации реагента, показывая положительную реакцию (А) или отрицательную реакцию (B). Агглютинация сопровождается очистки фоне видится в позитивной реакции (А) .There не видно агглютинации с отрицательным контроль латексной реагента или в негативной реакции теста (B). Фотографии 8 используется с ее разрешения.&quot;Целевых =&quot; _blank &quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Watch this Scientific Journal Video about Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination at JoVE.com

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Латекс тестирование агглютинации является простым, быстрым и недорогим методом для серотипирование Пневмококк, и также широко применяется в диагностической микробиологии. Эта рукопись описывает в собственное производство латексной агглютинации реагентов, процедур контроля качества и применение этого метода к пневмококковой серотипирования.

Капсульная серотипирования<em&gt; Пневмококк</em&gt; По латексной агглютинации

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Использование изображений Биолюминесцентный по расследованию синергизм между Пневмококк И вируса гриппа А в младенческой Мыши

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Invasion of Human Cells by a Bacterial Pathogen

Вторжение клеток человека от бактериальных патогенов

Here we will describe how we study the invasion of human endothelial cells by bacterial pathogen Staphylococcus aureus . The general protocol can be ...

Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification

Частица Агглютинация Метод Полиовирус Идентификация

In the Global Polio Eradication Initiative, laboratory diagnosis plays a critical role by isolating and identifying PV from the stool samples of acute ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Живая изображений Ячейка Сенная Bacillus И Пневмококк С использованием средства аварийного Покадровый микроскопии

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Характеристика воспалительных реакций во время интраназальной колонизации стрептококковой пневмонией

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Мониторинг изменения мембранного полярность, мембраны целостности и внутриклеточных концентрации ионов в<em&gt; Пневмококк</em&gt; Использование флуоресцентных красителей

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Капсульная серотипирования<em&gt; Пневмококк</em&gt; Использование реакции реакция набухания капсулы

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Протеомный профилирования макрофагов 2D электрофореза

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Мышиной модели группы B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Вагинальный Колонизация

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...