Name: flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology
Uploaded: 2014-06-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology at JoVE.com

The authors thank Dr. Amir Rattner for helpful comments on the manuscript. Supported by the Howard Hughes Medical Institute.

Denne studien ble utført i henhold til anbefalingene i Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr av National Institutes of Health. Alle dyrene ble håndtert i henhold til godkjent institusjonelle dyr omsorg og bruk komité (IACUC) protokoll MO11M29 av Johns Hopkins Medical Institutions. Kontakt lokale Institutional Animal Care og bruk Komiteens retningslinjer for godkjente metoder for aktiv dødshjelp. Bruk hansker, frakk og vernebriller ved håndtering av aldehyd fiksativ eller organiske løsemidler. <p class="jove_...

<ol>
	<li>Burns, T., Breathnach, S., Cox, N., Griffiths, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Rook's Textbook of Dermatology. 8th ed. , (2010).</li><li>Lee, J., Tumbar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hairy+tale+of+signaling+in+hair+follicle+development+and+cycling.">Hairy tale of signaling in hair follicle development and cycling.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 23, 906-916 (2012).</li><li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuronal+organization+of+the+retina.">The neuronal organization of the retina.</a> Neuron. 76, 266-280 (2012).</li><li>Chang, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+hair+follicle-associated+structures+to+loss+of+planar+cell+polarity+signaling.">Responses of hair follicle-associated structures to loss of planar cell polarity signaling.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 110, (2013).</li><li>Wallingford, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planar+cell+polarity+and+the+developmental+control+of+cell+behavior+in+vertebrate+embryos.">Planar cell polarity and the developmental control of cell behavior in vertebrate embryos.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 28, 627-653 (2012).</li><li>Guo, N., Hawkins, C., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frizzled6+controls+hair+patterning+in+mice.">Frizzled6 controls hair patterning in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 9277-9281 (2004).</li><li>Wang, Y., Badea, T., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+from+disorder:+Self-organization+in+mammalian+hair+patterning.">Order from disorder: Self-organization in mammalian hair patterning.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103, 19800-19805 (2006).</li><li>Wang, Y., Chang, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+whorls+collide:+the+development+of+hair+patterns+in+frizzled+6+mutant+mice.">When whorls collide: the development of hair patterns in frizzled 6 mutant mice.</a> Development. 137, 4091-4099 (2010).</li><li>Lumpkin, E. A., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+sensory+transduction+in+the+skin.">Mechanisms of sensory transduction in the skin.</a> Nature. 445, 858-865 (2007).</li><li>Wu, H., Williams, J., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+diversity+of+cutaneous+sensory+afferents+revealed+by+genetically+directed+sparse+labeling.">Morphologic diversity of cutaneous sensory afferents revealed by genetically directed sparse labeling.</a> Elife. 1, (2012).</li><li>Bianchi, N., Depianto, D., McGowan, K., Gu, C., Coulombe, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+keratin+17+gene+promoter+to+visualize+live+cells+in+epithelial+appendages+of+mice.">Exploiting the keratin 17 gene promoter to visualize live cells in epithelial appendages of mice.</a> Mol. Cell. Biol. 25, 7249-7259 (2005).</li><li>Alonso, L., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hair+cycle.">The hair cycle.</a> J. Cell Sci. 119, 391-393 (2006).</li><li>Braun, K. M., Niemann, C., Jensen, U. B., Sundberg, J. P., Silva-Vargas, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+stem+cell+proliferation+and+lineage+commitment:+visualisation+of+label-retaining+cells+in+wholemounts+of+mouse+epidermis.">Manipulation of stem cell proliferation and lineage commitment: visualisation of label-retaining cells in wholemounts of mouse epidermis.</a> Development. 30, 5241-5255 (2003).</li><li>Badea, T. C., Wang, Y., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+noninvasive+genetic/pharmacologic+strategy+for+visualizing+cell+morphology+and+clonal+relationships+in+the+mouse.">A noninvasive genetic/pharmacologic strategy for visualizing cell morphology and clonal relationships in the mouse.</a> J. Neurosci. 23, 2314-2322 (2003).</li><li>Rotolo, T., Smallwood, P. M., Williams, J., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically-directed,+cell+type-specific+sparse+labeling+for+the+analysis+of+neuronal+morphology.">Genetically-directed, cell type-specific sparse labeling for the analysis of neuronal morphology.</a> PLoS One. 3, (2008).</li><li>Devenport, D., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planar+polarization+in+embryonic+epidermis+orchestrates+global+asymmetric+morphogenesis+of+hair+follicles.">Planar polarization in embryonic epidermis orchestrates global asymmetric morphogenesis of hair follicles.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1257-1268 (2008).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+organization+of+cutaneous+low-threshold+mechanosensory+neurons.">The functional organization of cutaneous low-threshold mechanosensory neurons.</a> Cell. 147, 1615-1627 (2011).</li><li>Meyers, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lighting+up+the+senses:+FM1-43+loading+of+sensory+cells+through+nonselective+ion+channels.">Lighting up the senses: FM1-43 loading of sensory cells through nonselective ion channels.</a> J. Neurosci. 23, 4054-4065 (2003).</li><li>Fujiwara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basement+membrane+of+hair+follicle+stem+cells+is+a+muscle+cell+niche.">The basement membrane of hair follicle stem cells is a muscle cell niche.</a> Cell. 144, 577-589 (2011).</li><li>Orsini, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+preparation,+study+and+photography+of+benzyl-benzoate+cleared+material+for+embryological+studies.">Technique of preparation, study and photography of benzyl-benzoate cleared material for embryological studies.</a> J. Reprod. Fertil. 3, 283-287 (1962).</li><li>Ke, M. T., Fujimoto, S., Imai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SeeDB:+a+simple+and+morphology-preserving+optical+clearing+agent+for+neuronal+circuit+reconstruction.">SeeDB: a simple and morphology-preserving optical clearing agent for neuronal circuit reconstruction.</a> Nat. Neurosci. 16, 1154-1161 (2013).</li><li>Kuwajima, T., Sitko, A. A., Bhansali, P., Jurgens, C., Guido, W., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClearT:+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue.">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140, 1364-1368 (2013).</li><li>Hama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neurosci. 14, 1481-1488 (2011).</li><li>Aal Ert&#252;rk, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat. Protoc. 7, 1983-1995 (2012).</li><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nat. Methods. 10, 508-513 (2013).</li></ol>

Mestring av disseksjon metodene beskrevet ovenfor krever bare tålmodighet, en stødig hånd, og et par gode Disseksjonsverktøyer. Rygghuden disseksjon er relativt enkel, men halen og fot hud disseksjoner - spesielt på tidlig postnatal aldre - er mer utfordrende. På tidlig prenatal aldre (f.eks før E15), huden er vanskelig å fjerne uten å rive det. Beleilig, for mange studier av vekst og fordelingen av hud strukturer i mus, hendelsene oppstår interesse postnatalt, sett for eksempel i studier av veksten a...

Huden er en av de største organene i kroppen, med viktige funksjoner i somato-sensasjon, isolasjon / termoregulering, og immunforsvaret en. Forstå det molekylære og cellulære grunnlag av huden utvikling og funksjon har vært av langvarig interesse på grunn av den grunnleggende betydningen av huden som et biologisk system og dets relevans for dermatologi. Pattedyrhud inneholder en rekke flercellede strukturer, inkludert lagdelte lag av keratinocytter, dermal bindevev, flere typer hårsekker, talgkjertler, arrector pili muskler, blodårer, og minst et dusin forskjellige klasser av afferente (sensoriske) og efferent nerve fibre (figur 1). Forskjellige regioner av kroppen, er forbundet med karakteristisk forskjellige typer hud. I de fleste pattedyr, er nesten hele kroppsoverflaten er dekket med hud som er tettpakket med hårsekker. [Mennesker og nakne muldvarp rotter utgjør unntak til ther mønster.] Hair mangler fra palmar flater av hender og føtter, som også er forbundet med spesialiserte epidermal mønstre (dermatoglyphs), eksokrine kjertler, og sensoriske nerveender. Cellulære og molekylære hendelser som styrer vekst, differensiering, og romlig organisering av celler i hårsekken er av spesiell interesse som hver hårsekken utstillinger, i miniatyr, mange av de sentrale funksjonene i organogenesen to. Disse funksjoner inkluderer eksistensen av stamceller og en stamcelle nisje, nettopp koreografert cellevandring, og montering av flercellede strukturer fra embryologisk forskjellige komponenter. Denne artikkel beskriver metodene for å dissekere, festing, merking, og avbildnings mus huden som en intakt todimensjonalt ark, referert til som en &quot;hel mount&quot; eller &quot;flat montere&quot; preparat. Siden muse huden er relativt tynt, er det mulig å bilde gjennom den fulle tykkelse av flat skin ved hjelp av konvensjonelle konfokalmikroskopi. Den flate mount tilnærming til bildebehandling pattedyrhud er teknisk fordelaktig fordi den omgår behovet for fysisk seksjonering, og dermed lar strukturer som skal rekonstrueres i sin helhet av optisk snitting. Siden nesten hele huden behandles som en enkelt gjenstand, flat monterings tilnærmingen muliggjør også avbildning av flere regioner av kroppsoverflaten og samtidig bevare informasjon om posisjon og orientering i forhold til kroppens akse. Endelig strukturer i huden er vanligvis til stede i mønstre som gjentas med jevne mellomrom, noe som letter oppsamling av bilder fra flere representanter for en gitt konstruksjon. Disse egenskapene er kjent for nevrobiologer som arbeider på netthinnen, en to-dimensjonal del av sentralnervesystemet som nyter analoge fordeler for studier av neuronal morfologi tre. Den flate montere tilnærmingen som beskrives her er av spesiell Utility for å studere strukturer som utviser romlig organisering på en forholdsvis stor skala i løpet av de to-dimensjonale planet av huden. Ett eksempel på storskala romlige organiseringen er koordinert polaritet av hårsekkene og hårsekken-assosiert strukturer - Merkel celle klynger, arrector pili muskler, talgkjertler, og nerveender fire. Hårsekker er orientert med en vinkel med hensyn til planet av huden, og den komponent av hårsekken vektor som ligger innenfor det to-dimensjonale planet av huden generelt fremviser en orientering med hensyn til kroppens akse det er nettopp bestemt for hvert stilling på kroppen. For eksempel til hårsekkene på baksiden punktet fra rostral hale og hår på framsiden av føttene peker fra proksimale til distale. Hårsekken orientering styres av planar celle polaritet signale (PCP, også kalt tissue polaritet 5). Denne signaleringssystem ble oppdaget i Drosophila der et litesett av kjerne PCP gener ble funnet til å styre retningen på cuticular hår og bust. Tre pattedyr orthologues av kjerne PCP gener - frizzled homologe 6 (Fzd6, også referert til som FZ6), cadherin EGF LAG sju-pass G-type reseptor 1 (Celsr1), og vang lignende 2 (Vangl2) - spille analoge roller i pattedyr hud, koordinere orienteringer av hårsekkene med kroppens akser. Studier av FZ6 knockout mus (Fzd6 tm1Nat, heretter referert til som FZ6 - / -) viser at den primære defekten i fravær av PCP signalering er en første randomisering eller uorden av hårsekken orientering, og har ingen effekt på den indre struktur av follikler 6-8. En annen ikke-PCP systemet fungerer senere å fremme lokal justering av nærliggende follikler, noe som fører til produksjon av store hår mønstre som spinnehjul og dusker. Et annet eksempel på storskalaromlige organiseringen innenfor huden er sett i morfologi av sensoriske axon lysthus. Sensoriske nevroner som innerverer huden har sine celle organer i dorsal root og trigeminusgangliene. Disse neuroner detektere temperatur, smerte, kløe, og forskjellige typer av mekaniske deformasjoner impinging på huden og håret 9.. De kan deles inn i undertyper basert på axon diameter og ledningshastighet, terminal nerve slutt struktur, og mønstrene av ekspresjon av reseptorer, kanaler og andre molekyler. På grunn av den høye tettheten av innervasjon i huden, analyser som involverer visualisere alle aksoner (f.eks anti-neurofilament farging) eller til og med alle axons av en enkelt klasse (sett når en enkelt celletype er preget av uttrykk av et fluorescerende reporter) åpenbarer generelt en tett superposisjon av aksoner som gjør det umulig å definere morfologien til et individ Arbor. For å omgå dette problemet, har vi brukt svært sparsom genetisk rettet labeling å produsere rygghuden prøver hvor enkelt godt isolerte axon arbors er visualisert ved uttrykk for et histochemical reporter, human placenta alkalisk fosfatase 10. Denne tilnærmingen gjør det entydig visualisering av individuelle axon arbor morfologi og en definisjon av somatosensoriske nevroner typer basert på morfologiske kriterier.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="824">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:256px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-bromo-4-chloro-indolyl phosphate (BCIP)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11383221001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AM1-43</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>70024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AM4-65</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>70039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>402834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benzyl benzoate</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>B-6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Zeiss</td>
			<td style="width:145px;">LSM700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cy3-alpha smooth muscle actin antibody</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>C6198</td>
			<td>1:400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokeratin-8&#160;</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>TROMA-I-c</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection tools&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>scissors and forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electric razor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoromount G</td>
			<td>EM Sciences</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass dishes</td>
			<td>Pyrex&#160;</td>
			<td></td>
			<td>6 cm and 10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass plates</td>
			<td>Amersham Biosciences</td>
			<td>SE202P-10</td>
			<td>10 cm x 8 cm x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hair remover&#160;</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Horizontal rotating platform&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Hoefer</td>
			<td style="width:145px;">PR250 Orbital shaker</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine/xylazine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>K113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitroblue tetrazolium (NBT)</td>
			<td>Roche&#160;</td>
			<td>11383213001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oil Red O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Razor Blades</td>
			<td style="width:256px;">VWR</td>
			<td style="width:145px;">55411-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary antibodies&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Alexa-dye conjugated&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard-184</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9020938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue culture plastic dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue culture plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>6- and 12-well&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology

Skin er en svært heterogen vev. Intra-dermal strukturer inkluderer hårsekkene, arrector pili muskler, epidermal spesialiseringer (som Merkel celle klynger), talgkjertler, nerver og nerveender, og kapillærer. Den romlige anordning av disse strukturene er kontrollert på en mikroskopisk målestokk - som sett, for eksempel i en ordnet anordning av celletyper i en enkelt hårsekken - og på en makroskopisk målestokk - som sett av de nesten identiske orienteringer av tusener av hår follikler innenfor et lokalt område av huden. Visualisering av disse strukturene uten fysisk seksjonering huden er mulig på grunn av den to-dimensjonal geometri i dette organ. I denne protokollen, viser vi at mus huden kan bli dissekert, fast, permeabilized, farget, og avklares som en intakt todimensjonale objekt, en flat mount. Protokollen muliggjør enkel visualisering av hud strukturer i sin helhet gjennom hele tykkelsen av store områder av huden ved optical seksjonering og gjenoppbygging. Bilder av disse strukturene kan også integreres med informasjon om posisjon og orientering i forhold til kroppens akse.

Lysfelt avbildning av hud flatmounts kan brukes til å avbilde kutane sensoriske afferenter (figur 3A) og 10 hårsekken mønstre basert på melanin pigmentering (figur 4). Confocal avbildning av hud flatmounts kan brukes til å definere geometrien av (1) Merkel celleklynger, visualisert med anti-cytokeratin-6 eller med AM fargestoffopptak (figur 3I-L), (2) arrector pili muskler, visualisert med anti glatt muskulatur aktin (figurene 3G, H), (3...

Watch this Scientific Journal Video about Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology at JoVE.com

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

Pattedyrhud inneholder et variert utvalg av strukturer - for eksempel hårsekkene og nerveendene - som viser karakteristiske mønstre av romlige organiseringen. Analysere huden som en flat monterings utnyttet to-dimensjonal geometri i dette vev for å produsere fulltykkelse høyoppløselige bilder av hud strukturer.

Flat Mount Imaging of Mouse Hud og sin søknad til Analyse av hårsekken Mønster og Sensory Axon morfologi

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Preparering og farging av Mouse Sensoriske nervefibre Innervating Hud og Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hele Mount immunolabeling av olfactory Receptor nevroner i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenne

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hel-mount Imaging av Mouse Embryo Sensory Axon Anslag

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Dynamics i Cone fotoreseptor Axon terminaler Mouse Retina

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hele Mount Dissection og Immunfluorescens av Adult Mouse Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Combined Recording of Mechanically Stimulated Afferent Output and Nerve Terminal Labelling in Mouse Hair Follicle Lanceolate Endings

Kombinert Opptak av mekanisk stimulert afferent Output og Nerve Terminal Merking i Muse hårsekken lansettformede Endings

A novel dissection and recording technique is described for monitoring afferent firing evoked by mechanical displacement of hairs in the mouse pinna. The ...

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Optisk overvåkingen av levende Nerve Terminal Merking i hårsekken lansettformede Endings av<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mouse Ear Skin

A novel dissection and recording technique is described for optical monitoring staining and de-staining of lanceolate terminals surrounding hair follicles ...

Patch Clamp Recording of Starburst Amacrine Cells in a Flat-mount Preparation of Deafferentated Mouse Retina

Patch Clamp Opptak av Starburst Amacrine celler i en Flat-mount Utarbeidelse av Deafferentated Mouse Retina

The mammalian retina is a layered tissue composed of multiple neuronal types. To understand how visual signals are processed within its intricate synaptic ...