Name: flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology
Uploaded: 2014-06-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology at JoVE.com

The authors thank Dr. Amir Rattner for helpful comments on the manuscript. Supported by the Howard Hughes Medical Institute.

Denna studie utfördes i strikt enlighet med rekommendationerna i Guide för skötsel och användning av försöksdjur av National Institutes of Health. Alla djuren hanterades enligt godkänd Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) protokoll MO11M29 av Johns Hopkins Medical Institutions. Rådgör med din lokala Institutional Animal Care och användning kommittén riktlinjer för godkända metoder för dödshjälp. Använd handskar, skyddsrock och skyddsglasögon vid hantering av aldehyd fixativ elle...

<ol>
	<li>Burns, T., Breathnach, S., Cox, N., Griffiths, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Rook's Textbook of Dermatology. 8th ed. , (2010).</li><li>Lee, J., Tumbar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hairy+tale+of+signaling+in+hair+follicle+development+and+cycling.">Hairy tale of signaling in hair follicle development and cycling.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 23, 906-916 (2012).</li><li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuronal+organization+of+the+retina.">The neuronal organization of the retina.</a> Neuron. 76, 266-280 (2012).</li><li>Chang, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+hair+follicle-associated+structures+to+loss+of+planar+cell+polarity+signaling.">Responses of hair follicle-associated structures to loss of planar cell polarity signaling.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 110, (2013).</li><li>Wallingford, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planar+cell+polarity+and+the+developmental+control+of+cell+behavior+in+vertebrate+embryos.">Planar cell polarity and the developmental control of cell behavior in vertebrate embryos.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 28, 627-653 (2012).</li><li>Guo, N., Hawkins, C., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frizzled6+controls+hair+patterning+in+mice.">Frizzled6 controls hair patterning in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 9277-9281 (2004).</li><li>Wang, Y., Badea, T., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+from+disorder:+Self-organization+in+mammalian+hair+patterning.">Order from disorder: Self-organization in mammalian hair patterning.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103, 19800-19805 (2006).</li><li>Wang, Y., Chang, H., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+whorls+collide:+the+development+of+hair+patterns+in+frizzled+6+mutant+mice.">When whorls collide: the development of hair patterns in frizzled 6 mutant mice.</a> Development. 137, 4091-4099 (2010).</li><li>Lumpkin, E. A., Caterina, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+sensory+transduction+in+the+skin.">Mechanisms of sensory transduction in the skin.</a> Nature. 445, 858-865 (2007).</li><li>Wu, H., Williams, J., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+diversity+of+cutaneous+sensory+afferents+revealed+by+genetically+directed+sparse+labeling.">Morphologic diversity of cutaneous sensory afferents revealed by genetically directed sparse labeling.</a> Elife. 1, (2012).</li><li>Bianchi, N., Depianto, D., McGowan, K., Gu, C., Coulombe, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+keratin+17+gene+promoter+to+visualize+live+cells+in+epithelial+appendages+of+mice.">Exploiting the keratin 17 gene promoter to visualize live cells in epithelial appendages of mice.</a> Mol. Cell. Biol. 25, 7249-7259 (2005).</li><li>Alonso, L., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hair+cycle.">The hair cycle.</a> J. Cell Sci. 119, 391-393 (2006).</li><li>Braun, K. M., Niemann, C., Jensen, U. B., Sundberg, J. P., Silva-Vargas, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+stem+cell+proliferation+and+lineage+commitment:+visualisation+of+label-retaining+cells+in+wholemounts+of+mouse+epidermis.">Manipulation of stem cell proliferation and lineage commitment: visualisation of label-retaining cells in wholemounts of mouse epidermis.</a> Development. 30, 5241-5255 (2003).</li><li>Badea, T. C., Wang, Y., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+noninvasive+genetic/pharmacologic+strategy+for+visualizing+cell+morphology+and+clonal+relationships+in+the+mouse.">A noninvasive genetic/pharmacologic strategy for visualizing cell morphology and clonal relationships in the mouse.</a> J. Neurosci. 23, 2314-2322 (2003).</li><li>Rotolo, T., Smallwood, P. M., Williams, J., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically-directed,+cell+type-specific+sparse+labeling+for+the+analysis+of+neuronal+morphology.">Genetically-directed, cell type-specific sparse labeling for the analysis of neuronal morphology.</a> PLoS One. 3, (2008).</li><li>Devenport, D., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planar+polarization+in+embryonic+epidermis+orchestrates+global+asymmetric+morphogenesis+of+hair+follicles.">Planar polarization in embryonic epidermis orchestrates global asymmetric morphogenesis of hair follicles.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1257-1268 (2008).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+organization+of+cutaneous+low-threshold+mechanosensory+neurons.">The functional organization of cutaneous low-threshold mechanosensory neurons.</a> Cell. 147, 1615-1627 (2011).</li><li>Meyers, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lighting+up+the+senses:+FM1-43+loading+of+sensory+cells+through+nonselective+ion+channels.">Lighting up the senses: FM1-43 loading of sensory cells through nonselective ion channels.</a> J. Neurosci. 23, 4054-4065 (2003).</li><li>Fujiwara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basement+membrane+of+hair+follicle+stem+cells+is+a+muscle+cell+niche.">The basement membrane of hair follicle stem cells is a muscle cell niche.</a> Cell. 144, 577-589 (2011).</li><li>Orsini, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+preparation,+study+and+photography+of+benzyl-benzoate+cleared+material+for+embryological+studies.">Technique of preparation, study and photography of benzyl-benzoate cleared material for embryological studies.</a> J. Reprod. Fertil. 3, 283-287 (1962).</li><li>Ke, M. T., Fujimoto, S., Imai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SeeDB:+a+simple+and+morphology-preserving+optical+clearing+agent+for+neuronal+circuit+reconstruction.">SeeDB: a simple and morphology-preserving optical clearing agent for neuronal circuit reconstruction.</a> Nat. Neurosci. 16, 1154-1161 (2013).</li><li>Kuwajima, T., Sitko, A. A., Bhansali, P., Jurgens, C., Guido, W., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClearT:+a+detergent-+and+solvent-free+clearing+method+for+neuronal+and+non-neuronal+tissue.">ClearT: a detergent- and solvent-free clearing method for neuronal and non-neuronal tissue.</a> Development. 140, 1364-1368 (2013).</li><li>Hama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nat. Neurosci. 14, 1481-1488 (2011).</li><li>Aal Ert&#252;rk, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+solvent-cleared+organs+using+3DISCO.">Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO.</a> Nat. Protoc. 7, 1983-1995 (2012).</li><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nat. Methods. 10, 508-513 (2013).</li></ol>

Behärskning av dissektion metoder som beskrivs ovan kräver bara tålamod, en stadig hand, och några bra dissektion verktyg. Rygghuden dissektion är relativt lätt, men de svans och fötter hud dissektioner - särskilt vid tidig postnatal åldrar - är mer utmanande. Vid tidig prenatal åldrar (t.ex. före E15), är svårt att ta bort utan att riva sönder det i huden. Bekvämt, för många studier av tillväxt och mönstring av hud strukturer i möss, de händelser av intresse inträffar postnatalt, som set...

Huden är ett av de största organ i kroppen, med viktiga funktioner i somato-sensation, isolering / värmereglering, och immunförsvaret 1. Att förstå den molekylära och cellulära grunden för hudens utveckling och funktion har varit för långvarigt intresse på grund av den grundläggande betydelsen av huden som ett biologiskt system och dess relevans för dermatologi. Mammaliehud innehåller en mängd flercelliga strukturer, inklusive skiktade lager av keratinocyter, dermal bindväv, flera typer av hårsäckar, talgkörtlar, arrector pili muskler, blodkärl, och minst ett dussin olika typer av afferenta (sensoriska) och efferenta nerv fibrer (figur 1). Olika regioner av kroppen är associerade med karakteristiskt olika typer av hud. I de flesta däggdjur, är nästan hela kroppsytan täckt med hud som tätt är packad med hårsäckar. [Människor och nakna mole råttor utgör undantag till thär mönstret.] Hår saknas Palmar ytorna i händer och fötter, som också förknippas med specialiserade epidermala mönster (dermatoglyphs), exokrina körtlar och sensoriska nervändar. De cellulära och molekylära händelser som styr tillväxt, differentiering och rumsliga arrangemanget av celler i hårsäcken är av speciellt intresse eftersom varje follikel utställningar, i miniatyr, många av de centrala dragen i organogenesen 2. Dessa funktioner inkluderar att det finns stamceller och stamcellsnischen, exakt koreograferade cellmigrationer, och montering av flercelliga strukturer från embryologiskt skilda komponenter. I artikeln beskrivs metoder för att dissekera, fixering, märkning och bildhantering mus hud som ett intakt tvådimensionellt ark, kallad &quot;hela berget&quot; eller &quot;flat montera&quot; förberedelse. Sedan mushud är relativt tunn, är det möjligt att bilden genom hela tjockleken av tillplattad skidan med användning av konventionell konfokalmikroskopi. Den platta monterings metod för avbildning däggdjurshud är tekniskt fördelaktigt eftersom det kringgår behovet av fysiska sektione därigenom medge strukturer som skall rekonstrueras uteslutande genom optisk sektionering. Eftersom nästan hela huden behandlas som ett enda objekt, den platta montera tillvägagångssätt underlättar också avbildning av multipla regioner av kroppsytan och samtidigt bevara information om position och orientering i förhållande till kroppens axel. Slutligen strukturer inom huden är typiskt i mönster som upprepas med jämna mellanrum, vilket underlättar insamlingen av bilder från flera representanter för en given struktur. Dessa egenskaper är bekanta för neurobiologists som arbetar på näthinnan, en tvådimensionell del av det centrala nervsystemet som har liknande fördelar för studier av neuronal morfologi 3. Den platta montera metod som beskrivs här är av särskild Utility för att studera strukturer som uppvisar rumslig organisation i relativt stor skala i det tvådimensionella planet i huden. Ett exempel på storskaliga rumsliga organisation är den samordnade polaritet hårsäckar och hårsäcken-associerade strukturer - Merkel cellkluster, arrector pili muskler, talgkörtlar och nervändar 4. Hårsäckar är orienterade i en vinkel i förhållande till planet för huden, och komponenten av follikel vektor som ligger inom det 2-dimensionella planet av huden i allmänhet uppvisar en orientering med avseende på kroppens axlar som är exakt bestämd för varje läge på kroppen. Till exempel, för att hårsäckarna på baksidan punkten från rostral kaudala och hår på den övre delen av fötterna pekar från proximalt distalt. Hårsäcken orientering styrs av plana cellpolaritet signalering (PCP, även kallad vävnads polaritet 5). Detta signaleringssystem upptäcktes i Drosophila där en litenuppsättning centrala PCP gener befanns styra inriktningen av cuticular hår och borst. Tre mammaliska ortologer av kärn PCP gener - frizzled homologa 6 (Fzd6, även hänvisad till som FZ6) cadherin EGF LAG sju-pass av G-typ-receptor 1 (Celsr1) och vang-like 2 (Vangl2) - spela analoga roller i däggdjurs- hud, samordna riktlinjerna i hårsäckarna med kroppsaxlarna. Studier av Fz6 knockoutmöss (Fzd6 tm1Nat, nedan kallat FZ6 - / -) visar att den primära defekten i frånvaro av PCP signalering är en initial randomisering eller desorganisation av hårsäcken läggning, utan någon effekt på den inneboende strukturen hos folliklarna 6-8. En andra icke-PCP systemet agerar senare för att främja lokal inriktning av närliggande folliklar, vilket leder till produktion av storskaliga hår mönster såsom virvlar och tofsar. Ett andra exempel på storskaligarumslig organisation i huden ses i morfologier av sensoriska axon hållare. Sensoriska nervceller som innerverar huden har sina cellkroppar i dorsala och trigeminala ganglier. Dessa neuroner detektera temperatur, smärta, klåda, och olika typer av mekaniska deformationer som träffar huden och håret 9. De kan delas in i undertyper baserade på axon diameter och ledningshastighet, terminal nervänden struktur, och de mönster av uttryck av receptorer, kanaler och andra molekyler. På grund av den höga tätheten av innervation i huden, analyser som involverar visualisera alla axoner (t.ex. anti-neurofilament immunofärgning) eller till och med alla axoner av en enda klass (som kan ses när en enda celltyp är märkt genom uttryck av en fluorescerande reporter) allmänhet avslöjar en tät lagring av axoner som gör det omöjligt att definiera morfologi av en enskild berså. För att kringgå detta problem har vi använt mycket gles genetiskt riktad lAbeling att producera dorsala hudprov där enskilda välisolerade axon arbors visualiseras genom expression av en histokemisk reporter, humant placentalt alkaliskt fosfatas 10. Detta tillvägagångssätt gör det entydiga visualisering av enskilda axon arbor morfologier och en definition av somatosensoriska neuron typer baserat på morfologiska kriterier.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="824">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:256px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-bromo-4-chloro-indolyl phosphate (BCIP)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11383221001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AM1-43</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>70024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AM4-65</td>
			<td>Biotium</td>
			<td>70039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>402834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benzyl benzoate</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>B-6630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Zeiss</td>
			<td style="width:145px;">LSM700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cy3-alpha smooth muscle actin antibody</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>C6198</td>
			<td>1:400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokeratin-8&#160;</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>TROMA-I-c</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection tools&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>scissors and forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Electric razor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoromount G</td>
			<td>EM Sciences</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass dishes</td>
			<td>Pyrex&#160;</td>
			<td></td>
			<td>6 cm and 10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass plates</td>
			<td>Amersham Biosciences</td>
			<td>SE202P-10</td>
			<td>10 cm x 8 cm x 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hair remover&#160;</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Horizontal rotating platform&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Hoefer</td>
			<td style="width:145px;">PR250 Orbital shaker</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insect pins</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine/xylazine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>K113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitroblue tetrazolium (NBT)</td>
			<td>Roche&#160;</td>
			<td>11383213001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oil Red O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:256px;">Razor Blades</td>
			<td style="width:256px;">VWR</td>
			<td style="width:145px;">55411-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary antibodies&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Alexa-dye conjugated&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard-184</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9020938</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue culture plastic dishes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 cm diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue culture plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>6- and 12-well&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flat mount imaging of mouse skin and its application to the analysis of hair follicle patterning and sensory axon morphology

Huden är en mycket heterogen vävnad. Intra-dermal strukturer inkluderar hårsäckar, arrector pili muskler, epidermal inriktningar (t.ex. Merkel cell kluster), talgkörtlar, nerver och nervändar, och kapillärer. Det rumsliga arrangemanget av dessa strukturer är tätt styrd i mikroskopisk skala - såsom ses, till exempel, i ett ordnat arrangemang av celltyper inom en enskild hårsäck - och i makroskopisk skala - såsom framgår av den nästan identiska orienteringar av tusentals av hår folliklar inom ett lokalt område av huden. Visualisering dessa strukturer utan att fysiskt sektione huden är möjligt på grund av två-dimensionell geometri av detta organ. I detta protokoll, visar vi att musen hud kan dissekeras, fast, permeabilized, färgas, och klar som en intakt tvådimensionella objekt, en platt fäste. Protokollet möjliggör enkel visualisering av hud strukturer i sin helhet genom hela tjockleken av stora hudområden genom optical sektione och återuppbyggnad. Bilder av dessa strukturer kan också integreras med information om position och orientering i förhållande till kroppen axlarna.

Brightfield avbildning av hud flatmounts kan användas till bild kutana sensoriska afferenter (Figur 3A 10) och hårsäcken mönster som bygger på melaninpigmentering (Figur 4). Konfokal avbildning av hud flatmounts kan användas för att definiera geometri (1) Merkel cellkluster, visualiseras med anti-cytokeratin-6 eller med AM färgupptagning (figurerna 3I-L), (2) arrector pili muskler, visualiserades med anti- glattmuskelaktin (fig. 3G, H),</stron...

Watch this Scientific Journal Video about Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology at JoVE.com

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

Mammaliehud innehåller en mångfald av strukturer - t.ex. hårsäckar och nervändar - som uppvisar distinkta mönster av rumslig organisation. Analysera hud som en platt fäste drar nytta av den 2-dimensionella geometrin hos denna vävnad för att producera full tjocklek högupplösta bilder av hud strukturer.

Flat Mount avbildning av Mouse Hud och dess tillämpning till Analys av Hårsäck Mönstring och Sensory Axon morfologi

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

Flera-mus neuroanatomiska Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

Tissue Upprättande och immunfärgning av Mouse känselnervtrådar Innervating Hud och Limb Bones

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hela Mount immunomärkning av luktreceptor nervceller i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenn

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Hela-mount avbildning av Mouse Embryo Sensorisk Axon Projektioner

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca2+ Dynamics in Cone Photoreceptor Axon Terminals of the Mouse Retina

Imaging Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Dynamik i Cone ljusmätare Axon terminaler i Mouse Retina

Retinal cone photoreceptors (cones) serve daylight vision and are the basis of color discrimination. They are subject to degeneration, often leading to ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Hela Mount Dissekering och Immunofluorescence i vuxen mus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

Combined Recording of Mechanically Stimulated Afferent Output and Nerve Terminal Labelling in Mouse Hair Follicle Lanceolate Endings

Kombinerad Registrering av mekaniskt stimulerad Afferent utgång och nervändsluten Märkning mus hårsäcken lanceolate Endings

A novel dissection and recording technique is described for monitoring afferent firing evoked by mechanical displacement of hairs in the mouse pinna. The ...

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Optisk övervakning av Living nervändsluten Märkning i hårsäcken lanceolate Endings av<em&gt; Ex vivo</em&gt; Mus Ear Skin

A novel dissection and recording technique is described for optical monitoring staining and de-staining of lanceolate terminals surrounding hair follicles ...

Patch Clamp Recording of Starburst Amacrine Cells in a Flat-mount Preparation of Deafferentated Mouse Retina

Patch Clamp Registrering av Starburst amakrina celler i en platt-mount Framställning av Deafferentated mus Retina

The mammalian retina is a layered tissue composed of multiple neuronal types. To understand how visual signals are processed within its intricate synaptic ...