Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door een subsidie ​​van de VS en Israël BSF BS en EDSBS is een taak van de Hilda en Cecil Lewis leerstoel in Molecular Genetics.

OPMERKING: De procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan het Weizmann Institute of Science. 1 Monstervoorbereiding <ol><li> Isolatie van pancreatische acini <ol><li> Bereid 300 ml vers Krebs-Ringer bicarbonaat HEPES (KRBH) medium voordat u begint. Meng 140 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,16 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 11 mM glucose, 10 mM HEPES. Voeg runderserumalbumine (BSA) en 0,1 mg / ml sojaboontrypsineremmer (...

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

Naast het ex vivo kweken, alternatieve opstellingen voor de studie van exocriene secretie omvatten intravitale microscopie en meting van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus. Intravitale microscopie bleek goed werken in de muis speekselklieren 10. Deze werkwijze kan opnemen secretie in real time in het intacte dier, maar is beperkt in de resolutie en de middelen voor het manipuleren van de exocriene weefsel. Beoordelen van afscheiding door het verzamelen van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus...

De exocriene pancreas vormt meeste van de massa van de pancreas van zoogdieren en is gewijd aan de productie en secretie van spijsverteringsenzymen 1. De functionele eenheid van de exocriene pancreas, de acinus is een cluster van epitheliale cellen die een gemeenschappelijke lumen vormt en aandelen. Bij hormonale neuronale stimulatie, zijn blaasjes gevuld met enzymen getransporteerd naar het apicale celoppervlak, zekering met het verdrijven en de inhoud ervan in het lumen 1-3. Het uitgescheiden enzymen worden vervolgens afgevoerd door een coalescentie aantal kanalen in de dunne darm, waar ze katalyseren de afbraak van voedsel in voedingsstoffen. Deze video laat zien hoe intact acini worden geïsoleerd van de gehele alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld. Met behulp van deze opstelling wordt pancreassecretie gekwantificeerd door het meten van de relatieve hoeveelheid amylase die werd uitgebracht na stimulatie. Alternatief kan secretie live afgebeeld door het gebruik van verschillendesensoren en kleurstoffen. De ex vivo opstart pancreatische acini is voordelig omdat geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte alvleesklier behouden kan worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier 4-6. Deze opstelling werd oorspronkelijk ontwikkeld in de late jaren 1970 en was sinds verlengd voor de studie van verscheidene exocriene weefsels zoals het speeksel en borstklieren 3-7. Met name is het mogelijk de studie van secretie met minimale interferentie met de complexe cellulaire organisatie van deze gepolariseerde epitheel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">ICR mice</td>
			<td style="width:115px;">Harlan</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:203px;">Any strain will do</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8264</td>
			<td>Can substitude for KRB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Fraction V</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase XI&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td>70-100&#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amylase infinity reagent&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TR25421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCK</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FM4-64</td>
			<td>Lifetechnologies</td>
			<td>F34653</td>
			<td>Diluted to 16&#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20mL scintillation vial</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z190527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeltaVision system&#160;</td>
			<td>Applied Precision</td>
			<td></td>
			<td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

Acinaire cellen produceren en uitscheiden spijsverteringsenzymen. Deze cellen zijn georganiseerd als een cluster, die een gezamenlijke lumen vormt en aandelen. Dit werk laat zien hoe de secretoire capaciteit van deze cellen kan worden bepaald door de cultuur van geïsoleerde acini. De opstelling is voordelig aangezien geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte exocriene pancreas behouden kunnen worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier. Een goede isolatie van pancreatische acini is een eerste vereiste zodat het ex vivo kweken van de in vivo aard van de acini vertegenwoordigt. Het protocol laat zien hoe intact acini isoleren van de muis pancreas. Vervolgens twee complementaire methoden voor de evaluatie pancreassecretie worden gepresenteerd. De amylase secretie assay dient als een globale maat, terwijl de directe beeldvorming van de pancreas secretie kan de karakterisering van afscheiding bij een sub-cellulaire resolutie. Gezamenlijk de technieken presented hier staat een breed spectrum van experimenten exocriene secretie bestuderen.

Pancreas acini die goed werden geïsoleerd weer een stereotype morfologie wanneer het voor een licht. Hun basolateral domeinen moeten verschijnen rond en zonder blaasjes. De apicale domein wordt omgeven door honderden secretorische blaasjes en donkerder van kleur (Figuur 2A, B). De kernen liggen basale aan de vesiculaire gebied. Celafval en onderdelen van de pancreas ductaal systeem en de endocriene pancreas, dat kan worden gedetecteerd in een vroeg stadium van acini isolatie (figuur 2C, D),</st...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

Geïsoleerde pancreas acini behouden hun in vivo morfologie en activiteit en bieden krachtige mogelijkheden voor het monitoren en manipuleren secretie. Dit werk toont hoe acini kan worden geïsoleerd uit de muis alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld.

Het beoordelen van de Secretory Capaciteit van Pancreatic acinuscellen

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Isolatie van stamcellen uit menselijke pancreaskanker xenotransplantaten

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

Bereiding van acinaire cellen ten behoeve van Calcium Imaging, Cell Injury Metingen en adenovirale infectie

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolatie en Cultuur van de Muis Primaire Pancreatic Acinaire Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Fenotypering Mouse Longfunctie<em&gt; In Vivo</em&gt; Met de Lung diffusiecapaciteit

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

Differentiatie capaciteit van menselijke aorta gerelateerde adipeus voorlopercellen

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging calcium dynamica in subpopulaties van muizen pancreatic eilandje cellen

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Assessing Protein Interactions in Live-Cells with FRET-Sensitized Emission

Beoordeling van eiwitinteracties in levende cellen met FRET-gesensibiliseerde emissie

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) is the radiationless transfer of energy from an excited donor to an acceptor molecule and depends upon the ...

The Use of the Patch-Clamp Technique to Study the Thermogenic Capacity of Mitochondria

Het gebruik van de patch-clamp-techniek om de thermogene capaciteit van mitochondriën te bestuderen

Mitochondrial thermogenesis (also known as mitochondrial uncoupling) is one of the most promising targets for increasing energy expenditure to combat ...

Quantifying Retinal Pigment Epithelial Phagocytosis and Lipofuscin Accumulation

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures (Video) | JoVE 

Verbeterde lipofuscinemodellen en kwantificering van de fagocytosecapaciteit van het buitenste segment in sterk gepolariseerde menselijke retinale pigmentepitheelculturen

The daily phagocytosis of photoreceptor outer segments by the retinal pigment epithelium (RPE) contributes to the accumulation of an intracellular aging ...