Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00
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इस काम के बी एस अमेरिका इसराइल बीएसएफ से एक अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया और EDSBS आणविक आनुवंशिकी में हिल्डा और सेसिल लुईस प्राध्यापकीय कुर्सी के एक अवलंबी है.

नोट: पशु विषयों को शामिल प्रक्रियाओं Weizmann विज्ञान संस्थान में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है. 1 नमूना तैयार <ol><li> अग्नाशय acini का अलगाव <ol><li> शुरू करने से पहले ?...

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

पूर्व vivo संस्कृति इसके अलावा, बहि: स्राव के अध्ययन के लिए वैकल्पिक setups अग्नाशय वाहिनी से तरल पदार्थ की intravital माइक्रोस्कोपी और माप शामिल हैं. Intravital माइक्रोस्कोपी लार 10 ग्रंथियों माउस में अच्छी तरह से ...

बहि अग्न्याशय स्तनधारी अग्न्याशय का द्रव्यमान का सबसे गठन और पाचन एंजाइमों 1 के उत्पादन और स्राव के लिए समर्पित है. बहि अग्न्याशय, एसिनस, के कार्यात्मक इकाई एक संयुक्त लुमेन रूपों और शेयरों जो उपकला कोशिकाओं का एक समूह है. हार्मोनल या neuronal उत्तेजना पर, एंजाइमों से भर पुटिकाओं इसके साथ, शिखर कोशिका की सतह तक फ्यूज ले जाया जाता है और लुमेन 1-3 में अपनी सामग्री निष्कासित. स्रावित एंजाइमों तो वे पोषक तत्वों में भोजन के टूटने उत्प्रेरित जहां छोटी आंत में नलिकाओं की एक coalescing सेट से सूखा कर रहे हैं. यह वीडियो पूरे अग्न्याशय से अलग कर रहे हैं और उनके स्रावी क्षमता कैसे मूल्यांकन किया जा सकता है कि कैसे बरकरार acini दर्शाता है. इस स्थापना का उपयोग कर, अग्नाशय के स्राव उत्तेजना के बाद जारी किया गया था कि एमिलेज के रिश्तेदार राशि को मापने के द्वारा मात्रा निर्धारित है. वैकल्पिक रूप से, स्राव अलग के उपयोग से लाइव imaged किया जा सकता हैसेंसर और रंजक. बरकरार अग्न्याशय की कई विशेषताओं को बनाए रखने, जो पृथक acini, चालाकी और पूरे पशु 4-6 की तुलना में अधिक आसानी से नजर रखी जा सकती क्योंकि अग्नाशय acini के पूर्व vivo सेटअप फायदेमंद है. इस सेटअप मूल रूप से देर से 1970 में विकसित किया है और इस तरह के लार और स्तन ग्रंथियों 3-7 के रूप में कई बहि ऊतकों का अध्ययन के लिए बढ़ाया के बाद किया गया था. विशेष रूप से, यह इन polarized epithelia की जटिल सेलुलर संगठनों के लिए कम से कम हस्तक्षेप के साथ स्राव के अध्ययन की अनुमति देता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">ICR mice</td>
			<td style="width:115px;">Harlan</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:203px;">Any strain will do</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8264</td>
			<td>Can substitude for KRB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Fraction V</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase XI&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td>70-100&#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amylase infinity reagent&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TR25421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCK</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FM4-64</td>
			<td>Lifetechnologies</td>
			<td>F34653</td>
			<td>Diluted to 16&#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20mL scintillation vial</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z190527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeltaVision system&#160;</td>
			<td>Applied Precision</td>
			<td></td>
			<td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के निर्माण और पाचन एंजाइमों का स्राव. इन कोशिकाओं को एक संयुक्त लुमेन रूपों और शेयर जो एक क्लस्टर के रूप में आयोजित कर रहे हैं. यह काम इन कोशिकाओं के स्राव का क्षमता अलग acini की संस्कृति से मूल्यांकन किया जा सकता है दर्शाता है. बरकरार बहि अग्न्याशय की कई विशेषताओं को बनाए रखने, जो पृथक acini, चालाकी और पूरे पशु की तुलना में अधिक आसानी से नजर रखी जा सकती क्योंकि सेटअप फायदेमंद है. पूर्व vivo संस्कृति acini के vivo प्रकृति का प्रतिनिधित्व करेंगे कि इतने अग्नाशय acini के समुचित अलगाव एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है. प्रोटोकॉल माउस अग्न्याशय से बरकरार acini अलग करने के लिए कैसे करें. बाद में, अग्नाशय के स्राव के मूल्यांकन के लिए दो पूरक तरीकों प्रस्तुत कर रहे हैं. अग्नाशय के स्राव का प्रत्यक्ष इमेजिंग एक उप सेलुलर संकल्प पर स्राव के लक्षण वर्णन अनुमति देता है, जबकि एमिलेज स्राव परख, एक वैश्विक उपाय के रूप में कार्य करता है. सामूहिक रूप से, तकनीक presenटेड यहाँ बहि: स्राव का अध्ययन करने के प्रयोगों की एक व्यापक स्पेक्ट्रम सकें.

प्रेषित प्रकाश द्वारा देखे जाने पर ठीक से पृथक किया गया कि अग्नाशय acini एक stereotypic आकारिकी प्रदर्शित करते हैं. उनके basolateral डोमेन दौर और blebs से रहित दिखाई देनी चाहिए. शिखर डोमेन स्रावी vesicles के सैकड़ों से घिरा हुआ ह?...

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Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

पृथक अग्नाशय acini उनके इन विवो आकारिकी और गतिविधि को बनाए रखने और निगरानी और स्राव जोड़ तोड़ के लिए शक्तिशाली तरीके प्रदान करते हैं. इस काम acini माउस अग्न्याशय से अलग किया जा सकता है, और उनके स्रावी क्षमता कैसे मूल्यांकन किया जा सकता है दर्शाता है.

अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं की स्रावी क्षमता का आकलन

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

अग्नाशय islets के मधुमेह चूहे की किडनी कैप्सूल में ट्रांसप्लांटेशन

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

मानव अग्नाशय के कैंसर xenografts से स्टेम सेल के अलगाव

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

कैल्शियम इमेजिंग का प्रयोजन, सेल चोट माप, और adenoviral संक्रमण के लिए अग्नाशय कोष्ठकी कक्ष की तैयारी

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Phenotyping माउस पल्मोनरी फंक्शन<em&gt; Vivo</em&gt; फेफड़े diffusing क्षमता के साथ

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

मानव aortic परिसंवहनी एडिपोज जनक कोशिकाओं की भेदभाव क्षमता

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

माउस अग्नाशय आइलेट कोशिकाओं की उपआबादी में इमेजिंग कैल्शियम गतिशीलता

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Assessing Protein Interactions in Live-Cells with FRET-Sensitized Emission

फ्रेट-संवेदनशील उत्सर्जन के साथ लाइव-कोशिकाओं में प्रोटीन इंटरैक्शन का आकलन करना

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) is the radiationless transfer of energy from an excited donor to an acceptor molecule and depends upon the ...

The Use of the Patch-Clamp Technique to Study the Thermogenic Capacity of Mitochondria

माइटोकॉन्ड्रिया की थर्मोजेनिक क्षमता का अध्ययन करने के लिए पैच-क्लैंप तकनीक का उपयोग

Mitochondrial thermogenesis (also known as mitochondrial uncoupling) is one of the most promising targets for increasing energy expenditure to combat ...

Quantifying Retinal Pigment Epithelial Phagocytosis and Lipofuscin Accumulation

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures (Video) | JoVE 

अत्यधिक ध्रुवीकृत मानव रेटिना वर्णक उपकला संस्कृतियों में बेहतर लिपोफसिन मॉडल और बाहरी खंड फागोसाइटोसिस क्षमता का परिमाणीकरण

The daily phagocytosis of photoreceptor outer segments by the retinal pigment epithelium (RPE) contributes to the accumulation of an intracellular aging ...