Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione della BSF USA-Israele a BS e EDSBS è un incombente della cattedra Hilda e Cecil Lewis in Genetica Molecolare.

NOTA: Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dalla cura e uso degli animali Comitato Istituzionale (IACUC) presso il Weizmann Institute of Science. Preparazione del campione 1 <ol><li> Isolamento di acini pancreatici <ol><li> Preparare 300 ml di fresca bicarbonato di Krebs-Ringer HEPES (KRBH) mezzo prima di iniziare. Mescolare 140 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.16 mM MgCl 2, 1 mM CaCl 2, 11 Glucosio mM, HEPES 10 mM. Aggiungi albumina sierica bovina...

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

Oltre alla cultura ex vivo, configurazioni alternative per lo studio della secrezione esocrina includono la microscopia intravitale e la misurazione di fluidi dal dotto pancreatico. Microscopia intravitale ha dimostrato di operare bene nel topo ghiandole salivari 10. Questo metodo può registrare la secrezione in tempo reale nel intatta di un animale, ma è limitato nella sua risoluzione e dai mezzi per manipolare il tessuto esocrino. Valutare la secrezione attraverso la raccolta di fluidi dal dotto ...

Il pancreas esocrino costituisce la maggior parte della massa del pancreas mammiferi ed è dedicata alla produzione e secrezione di enzimi digestivi 1. L&#39;unità funzionale del pancreas esocrino, l&#39;acino, è un ammasso di cellule epiteliali che formano e condivide un lume congiunta. Dopo stimolazione ormonale o neuronale, vescicole piene di enzimi vengono trasportati alla superficie della cellula apicale, si fondono con esso ed espellono il loro contenuto nel lume 1-3. Gli enzimi secreti vengono poi svuotati da una serie coalescenza di condotti nel piccolo intestino, dove si catalizzano la ripartizione del cibo in sostanze nutritive. Questo video dimostra come acini intatti sono isolate dal pancreas intero e come la loro capacità secretoria può essere valutata. Utilizzando questa impostazione, la secrezione pancreatica viene quantificato misurando la quantità relativa di amilasi che è stato rilasciato dopo stimolazione. In alternativa, la secrezione può essere realizzata live dall&#39;uso di differentisensori e coloranti. L&#39;ex vivo installazione di acini pancreatici è vantaggiosa in quanto acini isolato, che conservano molte caratteristiche del pancreas intatti, può essere manipolata e controllata più facilmente che in tutta animali 4-6. Questa configurazione è stato originariamente sviluppato alla fine degli anni 1970 ed è stato dato prorogato per lo studio di diversi tessuti esocrine, come salivari e ghiandole mammarie 3-7. In particolare, consente lo studio della secrezione con la minima interferenza alle complesse organizzazioni cellulari di questi epiteli polarizzati.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">ICR mice</td>
			<td style="width:115px;">Harlan</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:203px;">Any strain will do</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8264</td>
			<td>Can substitude for KRB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Fraction V</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase XI&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td>70-100&#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amylase infinity reagent&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TR25421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCK</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FM4-64</td>
			<td>Lifetechnologies</td>
			<td>F34653</td>
			<td>Diluted to 16&#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20mL scintillation vial</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z190527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeltaVision system&#160;</td>
			<td>Applied Precision</td>
			<td></td>
			<td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

Cellule acinose pancreatiche producono e secernono enzimi digestivi. Queste cellule sono organizzate come un gruppo che forma e condivide un lume congiunta. Questo lavoro dimostra come la capacità secretoria di queste cellule può essere valutata mediante coltura di isolati acini. La configurazione è vantaggiosa in quanto acini isolato, che conservano molte caratteristiche del pancreas esocrino intatto può essere manipolata e controllata più facilmente che in tutta animali. Isolamento corretto di acini pancreas è un requisito chiave in modo che la cultura ex vivo rappresenterà la natura in vivo degli acini. Il protocollo dimostra come isolare acini intatti dal pancreas del mouse. Successivamente, due metodi complementari per la valutazione della secrezione pancreatica sono presentati. Il dosaggio secrezione dell&#39;amilasi serve come misura globale, mentre l&#39;imaging diretto della secrezione pancreatica permette la caratterizzazione della secrezione ad una risoluzione sub-cellulare. Collettivamente, le tecniche Presented qui consentono un ampio spettro di esperimenti per studiare la secrezione esocrina.

Acini pancreas che sono stati isolati correttamente visualizzare una morfologia stereotipata se visti da luce trasmessa. I loro domini basolaterali dovrebbero apparire rotondo e privo di vesciche. Il dominio apicale è circondato da centinaia di vescicole secretorie e appare di colore più scuro (Figura 2A, B). I nuclei sono situati basale alla zona vescicolare. Detriti cellulari e componenti del sistema duttale del pancreas e del pancreas endocrino, che può essere rilevato nelle fasi iniziali di acini...

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Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

Isolato acini pancreatici mantengono la loro morfologia e l&#39;attività in vivo ed offrono modi potenti per il controllo e la manipolazione della secrezione. Questo lavoro dimostra come acini possono essere isolate dal pancreas del mouse, e come le loro capacità di secrezione possono essere valutati.

Valutare la capacità secretoria delle cellule pancreatiche acinari

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Research

JoVE Journal

Biology

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