Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00
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이 작품은 BS하기 위해 미국 - 이스라엘 BSF로부터의 보조금에 의해 자금을 지원하고 EDSBS는 분자 유전학의 힐과 세실 루이스 교수의 의자 현직있다.

주 : 동물 대상으로 한 절차는 과학의 와이즈만 연구소의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 1 샘플 준비 <ol><li> 췌장 선포 세포의 분리 <ol><li> 시작하기 전에 신선한 크렙스 - 링거 중탄산 HEPES (KRBH) 매체의 300 ML를 준비합니다. 140 밀리미터의 NaCl, 4.7 밀리미터의 KCl을 혼합 1.16 mM의 MgCl2를, 1 mM의 염화칼슘이, 11 mM의 포도당, 10 mM의 HEPES...

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

생체 문화 외에, 외분비 분비의 연구를위한 대안 설정은 췌관에서 유체의 intravital 현미경 및 측정을 포함한다. 의 intravital 현미경은 타액이 10 땀샘 마우스에서 잘 작동 것으로 나타났다. 이 방법은 그대로 동​​물에서 실시간으로 분비를 기록 할 수 있지만, 그것의 해상도와 외분비 조직을 조작하기위한 수단에 의해 제한된다. 췌관에서 유체를 수집하여 분비를 평가는 마취 된 쥐 ...

외분비 췌장은 포유 동물의 췌장의 질량의 대부분을 구성하고, 소화 효소 하나의 생산 및 분비에 전념하고 있습니다. 외분비 췌장, acinus의 기능 유닛은 공동 루멘을 형성하고, 주 상피 세포의 클러스터이다. 호르몬 또는 신경 자극되면, 효소로 가득 소포가 그것으로, 혀끝의 세포 표면에 퓨즈를 수송하고 루멘 1-3로 콘텐츠를 추방. 분비 된 효소는 그 때 영양소로 음식의 분해를 촉진 소장에 관의 유착 세트에 의해 배출된다. 이 동영상은 전체 췌장에서 고립되고, 자신의 분비 능력이 어떻게 평가 될 수있는 방법을 그대로 꽈리 보여줍니다. 이 설정을 사용하여, 췌장 분비를 자극 다음 출시 된 아밀라아제의 상대적인 양을 측정하여 정량화한다. 대안 적으로, 서로 다른 분비를 이용하여 묘화 될 수있는 라이브센서 및 염료. 본래 췌장의 여러 특성을 유지하는 절연 꽈리는, 조작 및 전체 동물 4-6에서보다 더 용이하게 모니터링 할 수 있기 때문에 췌장 선포 세포의 생체 외 설치가 유리하다. 이 설정은 원래 1970 년대 후반에 개발 및 타액 및 유선 3-7로 여러 외분비 조직의 연구를 위해 확장 된 이후였다. 특히, 이러한 편광 상피 세포의 복잡한 세포 조직에 최소한의 간섭 분비의 연구를 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">ICR mice</td>
			<td style="width:115px;">Harlan</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:203px;">Any strain will do</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8264</td>
			<td>Can substitude for KRB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Fraction V</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase XI&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td>70-100&#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amylase infinity reagent&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TR25421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCK</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FM4-64</td>
			<td>Lifetechnologies</td>
			<td>F34653</td>
			<td>Diluted to 16&#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20mL scintillation vial</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z190527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeltaVision system&#160;</td>
			<td>Applied Precision</td>
			<td></td>
			<td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

췌장 선포 세포 생산 및 소화 효소를 분비한다. 이 세포는 공동 루멘을 형성하고 주 클러스터로 구성됩니다. 이 작품은 이러한 세포의 분비 능력이 고립 꽈리의 문화에 의해 평가 될 수있는 방법을 보여줍니다. 그대로 외분비 췌장의 여러 특성을 유지 절연 꽈리는, 조작 및 전체 동물에서보다 더 용이하게 모니터링 할 수 있기 때문에 설치가 유리하다. 생체 문화가 꽈리의 생체 내 특성을 대표 할 수 있도록 췌장 선포 세포의 적절한 분리가 핵심 요구 사항이다. 이 프로토콜은 마우스의 췌장에서 그대로 선포 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 그 후, 췌장 분비를 평가하는 두 개의 보완적인 방법이 제공됩니다. 췌장 분비 직접 이미징 서브 해상도 분비 세포의 특성화를 허용하면서 아밀라아제 분비 분석은, 글로벌 계수로서 기능한다. 종합적으로, 기술은 presen와여기 테드의 외분비 분비를 연구하기 위해 실험의 폭 넓은 스펙트럼을 할 수 있습니다.

전송 된 빛에 의해 볼 때 제대로 분리 한 췌장 선포 세포는에 박힌 형태를 표시합니다. 이들의 기저 도메인은 라운드 기흉의 결여 나타납니다. 혀끝의 도메인이 분비 소포의 수백에 의해 둘러싸여 있으며, 색상 (그림 2A, B)에서 어두운 나타납니다. 핵 기공을 갖는 영역으로 기저에 위치하고 있습니다. 세포 파편 및 췌장 유관 시스템 및 선포 세포 분리 (도 2C, D)의 초기 단계...

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Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

고립 된 췌장 선포 세포는 생체 형태와 활동을 유지하고 모니터링 및 분비를 조작하기위한 강력한 방법을 제공합니다. 이 작업은 샘 꽈리가 마우스의 췌장으로부터 단리 할 수​​ 있고, 자신의 분비 능력이 어떻게 평가 될 수 있는지 보여준다.

췌장 선포 세포의 분비 능력 평가

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

당뇨병 마우스의 신장 캡슐으로 췌장 아일 레츠의 이식

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

연구

생물학

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

인간 췌장암의 Xenografts에서 줄기 세포의 분리

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

칼슘 이미징의 목적, 세포 상해 측정 및 아데노 바이러스 감염 췌장 포상 세포의 준비

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

마우스 기본 췌장 포상 세포의 분리 및 문화

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

표현형 마우스 폐 기능<em&gt; 생체</em&gt; 폐 확산 능력

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

인간의 대동맥 혈관 주위 지방 조상 세포의 분화 능력

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

마우스 췌도 세포의 하위 집단에 있는 화상 진찰 칼슘 역학

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Assessing Protein Interactions in Live-Cells with FRET-Sensitized Emission

FRET-Sensitized Emission with FRET-Sensitized Release를 사용한 살아있는 세포의 단백질 상호 작용 평가

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) is the radiationless transfer of energy from an excited donor to an acceptor molecule and depends upon the ...

The Use of the Patch-Clamp Technique to Study the Thermogenic Capacity of Mitochondria

미토콘드리아의 열원성 능력을 연구하기 위한 패치 클램프 기술의 사용

Mitochondrial thermogenesis (also known as mitochondrial uncoupling) is one of the most promising targets for increasing energy expenditure to combat ...

Quantifying Retinal Pigment Epithelial Phagocytosis and Lipofuscin Accumulation

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures (Video) | JoVE 

The daily phagocytosis of photoreceptor outer segments by the retinal pigment epithelium (RPE) contributes to the accumulation of an intracellular aging ...