Name: assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells
Uploaded: 2014-08-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av et stipend fra US-Israel BSF til B og EDSBS er en incumbent av Hilda og Cecil Lewis professor stol i Molecular Genetics.

MERK: prosedyrer som involverer dyr fag har blitt godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité (IACUC) ved Weizmann Institute of Science. 1. Prøvepreparering <ol><li> Isolering av bukspyttkjertelen acini <ol><li> Forbered 300 ml frisk Krebs-Ringer bikarbonat HEPES (KRBH) medium før start. Bland 140 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,16 mM MgCl2, 1 mM CaCl 2, 11 mM glukose, 10 mm HEPES. Legg bovint serumalbumin (BSA) og 0,1 mg / ml soyabønne trypsin-inhibitor (STI) (re...

<ol>
	<li>Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+pancreatic+acinar+cell+function.">Regulation of pancreatic acinar cell function.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).</li><li>Schnekenburger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+kinesin,+dynein+and+microtubules+in+pancreatic+secretion.">The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).</li><li>Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directing+exocrine+secretory+vesicles+to+the+apical+membrane+by+actin+cables+generated+by+the+formin+mDia1.">Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+secretagogues+on+a+new+preparation+of+functionally+intact,+isolated+pancreatic+acini.">Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini.</a> The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).</li><li>Jerdeva, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+non-muscle+myosin+II+facilitate+apical+exocytosis+of+tear+proteins+in+rabbit+lacrimal+acinar+epithelial+cells.">Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells.</a> Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).</li><li>Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersed+pancreatic+acinar+cells+and+pancreatic+acini.">Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini.</a> Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).</li><li>Bi, Y., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Rho+and+Rac+in+secretagogue-induced+amylase+release+by+pancreatic+acini.">A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).</li><li>Palade, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+aspects+of+the+process+of+protein+synthesis.">Intracellular aspects of the process of protein synthesis.</a> Science. 189, 867 (1975).</li><li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+the+actomyosin+complex+in+regulated+exocytosis+revealed+by+intravital+microscopy.">Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).</li><li>Petersen, H., Grossman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+exocrine+secretion+in+anesthetized+and+conscious+rats.">Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats.</a> The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+for+the+actin+cytoskeleton+during+regulated+exocytosis.">Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).</li></ol>

Foruten den ex vivo-kultur, alternativt oppsett for studiet av eksokrin sekresjon omfatter intravital mikroskopi og måling av fluider fra bukspyttkjertelkanalen. Intramikroskopi ble vist seg å fungere godt i musen spyttkjertler 10. Denne metoden kan ta opp sekresjon i sanntid i intakte dyr, men er begrenset i sin oppløsning og ved at innretningen for å manipulere det eksokrine vev. Vurdere sekresjon ved å samle væske fra bukspyttkjertelen duct ble oppnådd i bedøvede rotter 11. Imid...

Den eksokrin pancreas utgjør mesteparten av massen av pattedyr bukspyttkjertelen og er dedikert til produksjon og sekresjon av fordøyelsesenzymer en. Den funksjonelle enhet av eksokrin bukspyttkjertelen, acinus, er en klynge av epitelceller som danner og deler en felles lumen. Ved hormonell eller neuronal stimulering, blir vesiklene er fylt med enzymer transportert til den apikale celleoverflaten, sikring med den og utvise deres innhold inn i hulrommet 1-3. De utskilte enzymer blir deretter drenert av et koalescerende sett med kanaler inn i tynntarmen, hvor de katalyserer nedbrytingen av maten til næringsstoffer. Denne videoen viser hvordan intakt acini er isolert fra hele bukspyttkjertelen og hvordan deres sekretorisk kapasitet kan vurderes. Ved hjelp av dette oppsettet er pankreatisk sekresjon kvantifiseres ved å måle den relative mengde av amylase som ble frigjort etter stimulering. Alternativt kan sekresjon avbildes lever ved bruk av forskjelligesensorer og fargestoffer. Den ex vivo oppsett av pankreatisk acini er fordelaktig, siden isolert acini, som beholde mange egenskaper ved de intakte bukspyttkjertelen, kan manipuleres og overvåkes lettere enn i hele dyret 4-6. Dette oppsettet ble opprinnelig utviklet på slutten av 1970-tallet og var siden utvidet for studiet av flere eksokrine vev som spytt og brystkjertler 3-7. Spesielt, innrømmer det studiet av sekresjon med minimal forstyrrelse for de komplekse cellulære organisasjoner av disse polariserte epitel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="655">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">ICR mice</td>
			<td style="width:115px;">Harlan</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:203px;">Any strain will do</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HBSS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H8264</td>
			<td>Can substitude for KRB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BSA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Fraction V</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase XI&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352360</td>
			<td>70-100&#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amylase infinity reagent&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>TR25421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CCK</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C2175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FM4-64</td>
			<td>Lifetechnologies</td>
			<td>F34653</td>
			<td>Diluted to 16&#181;M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20mL scintillation vial</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z190527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DeltaVision system&#160;</td>
			<td>Applied Precision</td>
			<td></td>
			<td>Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeiss 510 or 710 confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>60x/1.4 or 100x/1.4 objectives&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra Microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>ELx808</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the secretory capacity of pancreatic acinar cells

Bukspyttkjertelen akinærceller produsere og skille ut fordøyelsesenzymer. Disse cellene er organisert som en klynge som danner og deler en felles lumen. Dette arbeidet viser hvordan den sekretoriske evne av disse cellene kan bli vurdert ved dyrking av isolerte acini. Oppsettet er fordelaktig, siden isolert acini, som beholde mange karakteristikker av intakt eksokrin pankreas kan manipuleres og overvåkes lettere enn i hele dyret. Riktig isolering av pankreatisk acini er en viktig forutsetning for at den ex vivo-kultur vil representere in vivo natur acini. Protokollen viser hvordan du isolere intakt acini fra musen bukspyttkjertelen. Deretter blir to komplementære fremgangsmåter for evaluering av pankreatisk sekresjon presenteres. Den amylase sekresjon assay tjener som et globalt mål, mens direkte avbildning av pankreatisk sekresjon tillater karakterisering av sekresjonen ved en sub-cellulær oppløsning. Kollektivt, teknikker preseted her, lar et bredt spekter av eksperimenter for å studere eksokrin sekresjon.

Bukspyttkjertelen acini som ble isolert skikkelig vise en stereotyp morfologi sett lyset. Deres basolateral domener skal vises rundt og blottet for blebs. Den apikale domenet er omgitt av hundrevis av sekretoriske vesikler og er mørkere i fargen (Figur 2A, B). Kjernene er plassert basal til vesikulært området. Cellerester og komponenter av pankreatisk duktalt systemet og i det endokrine pankreas, som kan detekteres på et tidlig stadium av acini isolert (figur 2C, D), bør være frav...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells at JoVE.com

Assessing the Secretory Capacity of Pancreatic Acinar Cells

Isolerte bukspyttkjertelen acini beholde sin in vivo morfologi og aktivitet og tilby effektive måter for å overvåke og manipulere sekresjon. Dette arbeidet viser hvordan acini kan bli isolert fra muse bukspyttkjertelen, og hvordan deres sekretoriske kapasiteter kan vurderes.

Vurdere sekretoriske Kapasitet av bukspyttkjertelen akinærceller

Pancreatic acinar cells produce and secrete digestive enzymes. These cells are organized as a cluster which forms and shares a joint lumen. This work ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

Utarbeidelse av acinøse Cells for hensikten med Kalsium Imaging, celleskade Measurements, og adenovirus infeksjon

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolasjon og kultur av mus Primær acinøse Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Fenotyping Mouse lungefunksjon<em&gt; I Vivo</em&gt; Med Lung diffuse Kapasitet

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Differentiation Capacity of Human Aortic Perivascular Adipose Progenitor Cells

Differensiering kapasitet på menneskelig aorta Perivascular liggende under Adipose Progenitor celler

Adipose tissue is a rich source of multi-potent mesenchymal stem cells (MSC) capable of differentiating into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imaging kalsium Dynamics i subpopulasjoner av mus bukspyttkjertelen Holme celler

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Assessing Protein Interactions in Live-Cells with FRET-Sensitized Emission

Vurdering av proteininteraksjoner i levende celler med FRET-sensibilisert utslipp

F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET) is the radiationless transfer of energy from an excited donor to an acceptor molecule and depends upon the ...

The Use of the Patch-Clamp Technique to Study the Thermogenic Capacity of Mitochondria

Bruken av Patch-Clamp-teknikken for å studere den termogene kapasiteten til mitokondrier

Mitochondrial thermogenesis (also known as mitochondrial uncoupling) is one of the most promising targets for increasing energy expenditure to combat ...

Quantifying Retinal Pigment Epithelial Phagocytosis and Lipofuscin Accumulation

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures

Improved Lipofuscin Models and Quantification of Outer Segment Phagocytosis Capacity in Highly Polarized Human Retinal Pigment Epithelial Cultures (Video) | JoVE 

Forbedrede lipofuscinmodeller og kvantifisering av fagocytosekapasitet i høyt polariserte humane retinale pigmentepitelkulturer

The daily phagocytosis of photoreceptor outer segments by the retinal pigment epithelium (RPE) contributes to the accumulation of an intracellular aging ...