Name: bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology
Uploaded: 2014-08-18T14:00:00
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Diese Studie wurde von NIH R37 R01 DK57284 DK54824 und Zuschüsse an LB unterstützt

Alle hier beschriebenen Verfahren werden von der IACUC Ausschuss an der Universität von Pittsburgh genehmigt. 1. Lösungen <ol><li> Vorbereitung Krebs-Lösung nach der Rezeptur. Zusammensetzung in mM: NaCl 118, KCl 4,7, CaCl 2 1,9, MgSO 4 1,2, NaHCO 3 24,9, KH 2 PO 4 1,2, Glucose 11,7. </li><li> Belüften Krebs mit 95% O 2, 5% CO 2 und legen Sie sie in einem 37 ° C Wasserbad auf während des Experiments verwende...

In dieser Arbeit haben wir beschrieben, in vitro die Kontraktilität der glatten Muskulatur Verfahren, das verwendet werden kann, um eine Anzahl von wichtigen wissenschaftlichen Fragen Blase Physiologie und Pathologie sowie der Unterstützung der Entdeckung neuer Medikamente zur Blase Dysfunktion im Zusammenhang beziehen sich auf eine einfache. Wir haben die Verwendung dieses Verfahrens zur Bewertung der Entwicklungs, pathologischen und pharmakologischen Eigenschaften der glatten Blasenmuskulatur Kontraktilitä...

Die glatte Muskulatur der Blase entspannt, Urin Reinrichtungen und Verträge Harnausscheidung zu entlocken. Entspannung wird durch intrinsische Eigenschaften der glatten Muskulatur und Tonic Freisetzung von Noradrenalin (NE) von den sympathischen Nerven, die adrenergen Beta-Rezeptoren (β 3 AR in Menschen) in der Detrusor aktiviert vermittelt. Entleerung wird durch die Hemmung der sympathischen Eingabe und Aktivierung der parasympathischen Nerven, die ACh / ATP, um die glatte Muskulatur der Blase 1 Vertrag Veröffentlichung erreicht. Zahlreiche pathologischen Bedingungen, einschließlich Gehirn und / oder Rückenmarksverletzungen, neurodegenerative Erkrankungen, Diabetes, Blasenauslassobstruktion oder interstitielle Zystitis, kann zutiefst verändern Blasenfunktion, mit gravierenden Auswirkungen auf die Lebensqualität des Patienten 2. Diese Bedingungen ändern, die Kontraktilität der glatten Muskulatur durch Beeinflussung einer oder mehrerer Komponenten der Blase: die glatte Muskulatur, den afferenten und efferenten Nerven und / oderSchleimhaut. Mehrere in vivo und in vitro-Verfahren zur Blasenfunktion zu untersuchen wurden entwickelt. In vivo ist Zystometrie die primäre Messung der Blasenfunktion. Obwohl dies ein intaktes Präparat, das Sammeln von Informationen unter beinahe physiologischen Bedingungen ermöglicht, gibt es eine Reihe von Umständen, unter denen die Verwendung von glatten Muskelstreifen bevorzugt. Diese umfassen Situationen, in denen chirurgische und / oder pharmakologischen Manipulationen das Überleben und die Stabilität der Zubereitung in vivo oder beeinflussen, wenn die Untersuchungen erfordern die Verwendung des menschlichen Gewebes oder teure Chemikalien. Dieses Verfahren ermöglicht auch eine Überprüfung der Wirkungen von Drogen, Alter und Pathologie von jeder Komponente der Blase, dh der glatten Muskulatur, Schleimhaut-und abführenden Nerven. Blasenstreifen wurden über die Jahre von vielen Gruppen verwendet worden, um eine Reihe von wissenschaftlichen Fragen zu beantworten. Sie wurden eva verwendetluate Veränderungen in myogene Spontanaktivität von Pathologie induziert. Diese Tätigkeit wird angenommen, dass auf die Dringlichkeit und Häufigkeit Symptome der überaktiven Blase (OAB) beitragen, und ist daher ein Ziel für Drogen, die für OAB 3-9 entwickelt. Blasenstreifen wurden auch verwendet, um myogene und neuronale Faktoren, die Tonus der glatten Muskulatur mit dem Ziel der Entdeckung von Ionenkanälen und / oder Rezeptoren und / oder die intrazelluläre Signalwege, die gezielte könnte entweder Relaxation oder Kontraktion der glatten Muskulatur induziert werden modulieren untersuchen 3,10- 13. Andere Studien haben sich auf die Art der Neurotransmission, einschließlich Sendern und Rezeptoren beteiligt und Änderungen Pathologie 14,15 induzierte konzentriert. Darüber hinaus ist die Methode für den Vergleich zwischen verschiedenen Arten von Gewebe 16 zwischen den Organen 18 19-21, und die Bewertung der Arzneimittel Struktur-Aktivitäts-Beziehungen 22-24 verwendet wurde. Eine Erweiterung dieser Methode wurde verwendet, um measure die Wirkung von Drogen auf die Transmitterfreisetzung aus efferenten Nerven 25. Weiterhin ist eine Vielzahl von Geweben (Blase, Harnröhre, Gastrointestinaltrakt, GI) von Tieren oder Menschen (von Operationen bzw. Organspendergewebe für Forschung anerkannt) geerntet und aus einer Vielzahl von Tiermodellen, einschließlich Verletzungen des Rückenmarks (SCI), Blasenausgangsobstruktion (BOO) oder interstitielle Zystitis (IC) können mit dieser Technik untersucht werden. In dieser Arbeit veranschaulichen wir die Anwendung dieses Verfahrens zusammen mit notwendigen experimentellen Protokollen mehreren vorstehend erwähnten wissenschaftlichen Fragen anzugehen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Wir beschreiben ein in vitro Verfahren zur glatten Blasenmuskel-Kontraktions zu messen, und ihre Verwendung zur Untersuchung der physiologischen und pharmakologischen Eigenschaften der glatten Muskulatur sowie Änderungen von Pathologie induziert. Dieses Verfahren liefert wichtige Informationen für das Verständnis der Funktion der Blase unter Überwindung großen methodischen Schwierigkeiten bei in vivo-Versuchen festgestellt, wie chirurgischen und pharmakologischen Manipulationen, die Stabilität und das Überleben der Zubereitungen betreffen, die Verwendung von menschlichem Gewebe und / oder den Einsatz von teuren Chemikalien. Es bietet auch einen Weg, um die Eigenschaften der einzelnen Blasenkomponente (dh der glatten Muskulatur, Schleimhaut, Nerven) bei gesunden und pathologischen Bedingungen zu untersuchen. Die Harnblase wird von einem narkotisierten Tier, in Krebs-Lösung gelegt und in Streifen schneiden entfernt. Streifen werden in einer Kammer mit warmem Krebs-Lösung gefüllt war. Ein Ende ist mit einem isometrischen tensio befestigtn Wandlers an Kontraktionskraft zu messen, wird das andere Ende an einem feststehenden Stab angebracht ist. Gewebe wird durch direkte Zugabe Verbindungen dem Bad oder durch die elektrischen Feldstimulationselektroden, die Nerven, ähnlich wie bei Auslösung Blasenkontraktionen in vivo aktivieren stimuliert. Wir zeigen die Anwendung dieses Verfahrens auf die spontane Kontraktilität der glatten Muskulatur während der Entwicklung und nach einer Versuchsrückenmarksverletzung zu bewerten, die Art der Neurotransmission (Sender und Rezeptoren beteiligt sind), Faktoren der Modulation der glatten Muskelzellen-Aktivität beteiligt ist, die Rolle der einzelnen Komponenten Blase, und Arten und Organ Unterschiede in Reaktion auf pharmakologische Mittel. Zusätzlich ist es für die Untersuchung der intrazellulären Signalwege in der Kontraktion und / oder Relaxation der glatten Muskulatur, Drogen Struktur-Aktivitäts-Beziehungen und Auswertung der Transmitterausschüttung beteiligt sind, verwendet werden könnte. Die in-vitro-Verfahren Kontraktilität der glatten Muskulatur wurde ausgiebig genutzt for mehr als 50 Jahren und hat Daten, die wesentlich zu unserem Verständnis der Blasenfunktion sowie der pharmazeutischen Entwicklung von derzeit klinisch zur Blasenmanagement verwendeten Verbindungen beigetragen vorgesehen.

Spontane Aktivität Myogenic Spontane myogene Aktivität ist ein wichtiger glatten Muskulatur Merkmal, das ändert sich mit der postnatalen Entwicklung 6-9 und Pathologie (zB, SCI, BOO) 3-5 unterzogen. Da diese Aktivität wird angenommen, daß die Symptome der überaktiven Blase (OAB) 2 tragen, ist von großem Interesse für die Entwicklung von wirksamen Behandlungen für OAB und andere Störungen der glatten Muskulatur eine Auswertu...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Dieses Manuskript stellt eine einfache, aber leistungsstarke, In-vitro-Verfahren zur Auswertung der glatten Muskulatur Kontraktilität in Reaktion auf pharmakologische Wirkstoffe oder Nervenstimulation. Hauptanwendungen sind Drogen-Screening und Verständnis Gewebe Physiologie, Pharmakologie und Pathologie.

Glatten Muskulatur der Blase Streifen Kontraktilität als eine Methode zur unteren Harnwege Pharmakologie Bewerten

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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Forschung

Medizin

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Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

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The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...