Name: bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology
Uploaded: 2014-08-18T14:00:00
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Questo studio è stato sostenuto da NIH R37 e R01 DK54824 DK57284 sovvenzioni a LB.

Tutte le procedure descritte qui sono approvati dal comitato IACUC presso l&#39;Università di Pittsburgh. 1. Solutions <ol><li> Preparare la soluzione Krebs secondo la ricetta. Composizione in mM: NaCl 118, 4.7 KCl, CaCl 2 1.9, MgSO4 1.2, NaHCO3 24.9, KH 2 PO 4 1.2, destrosio 11.7. </li><li> Aerare Krebs con il 95% O 2, 5% di CO 2 e collocarlo in un bagno di 37 ° C acqua da utilizzare tutto l&#39;esperimento. In...

In questo lavoro abbiamo descritto un semplice metodo in vitro liscio contrattilità muscolare che può essere utilizzato per affrontare una serie di importanti questioni scientifiche relative alla fisiologia della vescica e della patologia, oltre a favorire la scoperta di nuovi farmaci per il trattamento di disfunzioni della vescica. Abbiamo illustrato l&#39;utilizzo di questo metodo per valutare le proprietà di sviluppo, patologiche e farmacologiche di contrattilità della vescica muscolo liscio (fig...

La muscolatura liscia della vescica si rilassa per permettere il riempimento di urina, e contratti di suscitare l&#39;eliminazione delle urine. Il relax è mediata da proprietà intrinseche della muscolatura liscia e tonica rilascio di noradrenalina (NE) dai nervi simpatici, che attiva i recettori adrenergici beta (β 3 AR in umana) nel detrusore. Svuotamento si ottiene inibendo l&#39;ingresso simpatico e l&#39;attivazione dei nervi parasimpatici che rilasciano ACh / ATP di contrarre la vescica muscolo liscio 1. Numerose condizioni patologiche, tra cui il cervello e / o lesioni del midollo spinale, malattie neurodegenerative, diabete, ostruzione dello sbocco vescicale o cistite interstiziale, possono alterare profondamente la funzione della vescica, con grave impatto sulla qualità di vita del paziente 2. Queste condizioni alterano la contrattilità del muscolo liscio influendo uno o più componenti della vescica: il muscolo liscio, afferenti o nervi efferenti e / o lamucosa. Diversi in vivo e metodi in vitro per studiare la funzione della vescica sono stati sviluppati. In vivo, cistometria è la misura primaria di funzione della vescica. Anche se questo è un preparato intatto che permette la raccolta di informazioni in condizioni prossime a quelle fisiologiche, ci sono una serie di circostanze in cui è preferibile l&#39;utilizzo di strisce muscolari lisce. Questi includono situazioni quando chirurgica e / o manipolazioni farmacologiche possano pregiudicare la sopravvivenza e la stabilità della preparazione in vivo, o quando gli studi richiedono l&#39;uso del tessuto umano o chimici costosi. Questo metodo facilita anche un esame degli effetti dei farmaci, età e patologia su ogni componente della vescica, cioè la muscolatura liscia, mucosa, afferenti ed efferenti nervi. Strisce della vescica sono stati impiegati nel corso degli anni da molti gruppi per rispondere a una serie di questioni scientifiche. Essi sono stati usati per evacambiamenti luate in attività spontanea miogenico indotto dalla patologia. Questa attività è creduto di contribuire ai frequenza ed urgenza i sintomi della vescica iperattiva (OAB), ed è quindi un bersaglio per i farmaci in fase di sviluppo per OAB 3-9. Strisce della vescica sono stati utilizzati anche per studiare i fattori miogenici e neuronali che modulano il tono della muscolatura liscia con l&#39;obiettivo di scoprire canali ionici e / o recettori e / o le vie intracellulari che potrebbero essere mirati per indurre il rilassamento sia o contrazione della muscolatura liscia 3,10- 13. Altri studi si sono concentrati sulla natura della neurotrasmissione, compresi trasmettitori e recettori coinvolti e variazioni indotte dalla patologia 14,15. Inoltre, il metodo è stato utilizzato per il confronto di tessuti da 18 a 16 specie diverse, tra organi 19-21, e la valutazione delle relazioni struttura-attività farmaco 22-24. Un&#39;estensione di questo metodo è stato utilizzato per MEASURvia e l&#39;effetto dei farmaci sul rilascio del trasmettitore da nervi efferenti 25. Inoltre, una varietà di tessuti (vescica, uretra, tratto gastrointestinale, GI) raccolti da animali o esseri umani (da interventi chirurgici o tessuti donatore di organi riconosciuti per la ricerca) e da una varietà di modelli animali tra cui lesioni del midollo spinale (SCI), della vescica presa di ostruzione (BOO), o cistite interstiziale (IC) possono essere studiate usando questa tecnica. In questo articolo illustriamo l&#39;uso di questo metodo insieme a necessari protocolli sperimentali, per risolvere diverse questioni scientifiche di cui sopra.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Descriviamo un metodo in vitro per misurare vescica contrattilità della muscolatura liscia, e il suo uso per indagare le proprietà fisiologiche e farmacologiche della muscolatura liscia così come i cambiamenti indotti dalla patologia. Questo metodo fornisce informazioni fondamentali per comprendere la funzione della vescica, mentre superando notevoli difficoltà metodologiche incontrate in vivo, come ad esempio le manipolazioni chirurgiche e farmacologiche che influenzano la stabilità e la sopravvivenza dei preparativi, l&#39;uso di tessuti umani, e / o l&#39;uso di prodotti chimici costosi. Esso fornisce anche un modo per indagare le proprietà di ogni componente della vescica (cioè muscolatura liscia, mucosa, nervi) in condizioni sane e patologiche. La vescica urinaria è rimosso da un animale anestetizzato, posto in soluzione di Krebs e tagliato a listarelle. Le strisce sono posti in una camera riempita con soluzione calda di Krebs. Una estremità è collegata ad un tensioattivo isometrican trasduttore per misurare la forza di contrazione, l&#39;altra estremità è collegata ad una canna fissa. Tissue è stimolata da aggiungere direttamente composti al bagno o da elettrodi di stimolazione di campo elettrico che attivano i nervi, simile a innescare le contrazioni della vescica in vivo. Dimostriamo l&#39;uso di questo metodo per valutare la contrattilità della muscolatura liscia spontanea durante lo sviluppo e dopo una lesione del midollo spinale sperimentale, la natura della neurotrasmissione (trasmettitori e recettori coinvolti), fattori coinvolti nella modulazione dell&#39;attività della muscolatura liscia, il ruolo dei componenti della vescica individuali, e le specie e le differenze di organi in risposta ad agenti farmacologici. Inoltre, potrebbe essere utilizzata per indagare meccanismi intracellulari coinvolti nella contrazione e / o rilassamento della muscolatura liscia, droga relazioni struttura-attività e la valutazione di rilascio del trasmettitore. Il metodo di contrattilità della muscolatura liscia in vitro è stato ampiamente utilizzato for più di 50 anni, e ha fornito dati che hanno contribuito in modo significativo alla nostra comprensione della funzione della vescica, nonché allo sviluppo farmaceutico di composti attualmente utilizzati clinicamente per la gestione della vescica.

Spontanea Attività Miogenica Attività miogena spontanea è una caratteristica importante della muscolatura liscia che subisce cambiamenti con lo sviluppo postnatale 6-9 e patologia (ad esempio, SCI, BOO) 3-5. Poiché questa attività è creduto di contribuire ai sintomi della vescica iperattiva (OAB) 2, una valutazione di recettori, vie intracellulari e agenti farmacologici che modulano essa, è di grande interesse per lo sviluppo ...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Questo manoscritto presenta una semplice, ma potente, metodo in vitro per valutare la contrattilità della muscolatura liscia in risposta ad agenti farmacologici o la stimolazione del nervo. Le applicazioni principali sono lo screening di stupefacenti e la fisiologia dei tessuti comprensione, farmacologia e patologia.

Vescica muscolo liscio Striscia contrattilità come un metodo per valutare Lower Urinary Tract Farmacologia

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

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