Name: a novel method for localizing reporter fluorescent beads near the cell culture surface for traction force microscopy
Uploaded: 2014-09-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Localizing Reporter Fluorescent Beads Near the Cell Culture Surface for Traction Force Microscopy at JoVE.com

Forfatterne ønsker å erkjenne Tverrfaglig Innovation Initiative Program, University of Illinois, gi 12035. SK ble finansiert ved UIUC fra National Science Foundation (NSF) Grant 0.965.918 IGERT: Trening av neste generasjon av forskere i Cellular and Molecular Mekanikk og bionanoteknologi.

Fabrikere og funksjonalise PA geler av varierende stiffnesses med fluorescerende mikrokuler er innebygd i nærheten av cellekulturoverflaten. 1. funksjon Top Glass dekkglass <ol><li> Rene glass dekkglass (# 1.0, 12 mm diam.) Med såpe og vann, etterfulgt av etanol for å fjerne overflødig støv. </li><li> Plasser glassdeksel glipper på en revet overflate (dvs. pipettespissen holder) slik at de ikke berører å lette enkel interaksjon med dekkglass. </li><li> Dekk hele overflaten...

<ol>
	<li>Pelham, R. J., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+locomotion+and+focal+adhesions+are+regulated+by+substrate+flexibility.">Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate flexibility.</a> PNAS. 94 (25), 13661-13665 (1997).</li><li>Dembo, M., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stresses+at+the+cell-to-substrate+interface+during+locomotion+of+fibroblasts.">Stresses at the cell-to-substrate interface during locomotion of fibroblasts.</a> Biophys. J. 76 (4), 2307-2316 (1999).</li><li>Lo, C. M., Wang, H. B., Dembo, M., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+movement+is+guided+by+the+rigidity+of+the+substrate.">Cell movement is guided by the rigidity of the substrate.</a> Biophys. J. 79 (1), 144-152 (2000).</li><li>Aratyn-Schaus, Y., Oakes, P. W., Stricker, J., Winter, S. P., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Complaint+Matrices+for+Quantifying+Cellular+Contraction.">Preparation of Complaint Matrices for Quantifying Cellular Contraction.</a> JoVE. , (2010).</li><li>Kandow, C. E., Georges, P. C., Janmey, P. A., Beningo, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyacrylamide+Hydrogels+for+Cell+Mechanics:+Steps+Toward+Optimization+and+Alternative+Uses.">Polyacrylamide Hydrogels for Cell Mechanics: Steps Toward Optimization and Alternative Uses.</a> Methods in Cell Biol. 83, 29-46 (2007).</li><li>Marinkovic, A., Mih, J. D., Park, J. -. A., Liu, F., Tschumperlin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+throughput+traction+microscopy+reveals+pivotal+role+for+matrix+stiffness+in+fibroblast+contractility+and+TGF-&#946;+responsiveness.">Improved throughput traction microscopy reveals pivotal role for matrix stiffness in fibroblast contractility and TGF-&#946; responsiveness.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 303 (3), 169-180 (2012).</li><li>Buxboim, A., Rajagopal, K., Brown, A. E. X., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+deeply+cells+feel:+methods+for+thin+gels.">How deeply cells feel: methods for thin gels.</a> J. Phys.: Condens. Matter. 22 (2010), 194116-194126 (2010).</li><li>Polio, S. R., Rothenberg, K. E., Stamenovic, M. L., Smith, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+micropatterning+and+image+processing+approach+to+simplify+measurement+of+cellular+traction+forces.">A micropatterning and image processing approach to simplify measurement of cellular traction forces.</a> Acta Biomaterialia. 8, 82-88 (2012).</li><li>Wang, Y. L., Pelham, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+a+flexible,+porous+polyacrylamide+substrate+for+mechanical+studies+of+cultured+cells.">Preparation of a flexible, porous polyacrylamide substrate for mechanical studies of cultured cells.</a> Methods in Enzymol. 298, 489-496 (1998).</li><li>Tse, J. R., Engler, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+Hydrogel+Substrates+with+Tunable+Mechanical+Properties.">Preparation of Hydrogel Substrates with Tunable Mechanical Properties.</a> Current Protocols in Cell Biol. , 16 (2010).</li><li>Poellmann, M. J., Wagoner Johnson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+and+Patterning+Polyacrylamide+Substrates+Functionalized+with+N-Hydroxysuccinimide.">Characterizing and Patterning Polyacrylamide Substrates Functionalized with N-Hydroxysuccinimide.</a> Cell and Mol. Bioengineering. 6 (3), 299-309 (2013).</li><li>Tseng, Q., Duchemin-Pelletier, E., Deshiere, A., Balland, M., Guillou, H., Filhol, O., Th&#233;ry, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+organization+of+the+extracellular+matrix+regulates+cell&#8211;cell+junction+positioning.">Spatial organization of the extracellular matrix regulates cell&#8211;cell junction positioning.</a> PNAS. 109 (5), 1506-1511 (2012).</li><li>Trappmann, B., Gautrot, J. E., Connelly, J. T., Strange, D. G. T., Li, Y., Oyen, M. L., Cohen Stuart, M. A., Boehm, H., Li, B., Vogel, V., Spatz, J. P., Watt, F. M., Huck, W. T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular-matrix+tethering+regulates+stem-cell+fate.">Extracellular-matrix tethering regulates stem-cell fate.</a> Nature Materials. 11, 642-649 (2012).</li><li>Wong, J. Y., Leach, J. B., Brown, X. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balance+of+chemistry,+topography,+and+mechanics+at+the+cell-biomaterial+interface:+Issues+and+challenges+for+assessing+the+role+of+substrate+mechanics+on+cell+response.">Balance of chemistry, topography, and mechanics at the cell-biomaterial interface: Issues and challenges for assessing the role of substrate mechanics on cell response.</a> Surface Science. 570 (1-2), 119-133 (2004).</li><li>Mih, J. D., Sharif, A. S., Marinkovic&#769;, A., Symer, M. M., Tschumperlin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multiwell+Platform+for+Studying+Stiffness-Dependent+Cell+Biology.">A Multiwell Platform for Studying Stiffness-Dependent Cell Biology.</a> PLoS ONE. 6 (5), e19929 (2011).</li><li>Butler, J. P., Tolic&#769;-N&#248;rrelykke, I. M., Fabry, B., Fredberg, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traction+fields,+moments,+and+strain+energy+that+cells+exert+on+their+surroundings.">Traction fields, moments, and strain energy that cells exert on their surroundings.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 282, 595-605 (2001).</li><li>Tolic&#769;-N&#248;rrelykke, I. M., Butler, J. P., Chen, J., Wang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+traction+response+in+human+airway+smooth+muscle+cells.">Spatial and temporal traction response in human airway smooth muscle cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 283, 1254-1266 (2002).</li><li>Atanackovic, T., Guran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Theory of Elasticity for Scientists and Engineers. , (2000).</li></ol>

Ved bruk av denne teknikk, er det vesentlig at vulsten løsning er riktig fortynnet og perlene blir valgt på grunnlag av ønsket diameter, PA gel substrat stivhet, og størrelsen omfanget av de fenomener som er undersøkt i den ønskede eksperimentet. Forsiktighet bør utvises ved fortynne perle løsning før funksjon topp glass dekkglass. Avstanden mellom perlene på gelen overflaten kan endres ved å endre fortynningsfaktoren av kolloid oppløsning. Fortynning av oppløsningen for mye vil...

Den mekaniske interaksjonen mellom en levende celle med sin lokale miljøet har ofte blitt studert ved hjelp av PA gels. Disse substrater er avhengig av en enkel, godt karakterisert protokoll etablert av Dembo og Wang i 1997 1. En av de viktigste fordelene med disse substrater, er at deres stivhet kan bli innstilt ved å endre konsentrasjonen av bestemte komponenter i gelen løsning. Dette gir en ønskelig plattform for å studere cellenes interaksjon med miljøer av ulike stivheter. Når PA geler er belagt med ekstracellulær matrise (ECM) proteiner, celler holder seg til dem, å generere kraft. Som et resultat av cellekraft, deformerer den gel som et elastisk legeme. Denne deformasjon er avhengig av størrelsen av den kraft som utøves av cellene og de elastiske egenskapene til gelen. Ulike studier har ansatt PA gels å undersøke cellulære veigrep. I en variant av PA gel fabrikasjon, er fluorescerende mikrosfærer (perler) innebygd throughout gelen å kvantifisere celle trekk kraften på gels av ulike stivheter to. Ved celle force program, perler fortrenge fra sin opprinnelige plassering etter gel deformasjon. Den deformasjon felt måles fra de enkelte perle forskyvninger. Denne deformasjon feltet blir utnyttet med elastisitetsteorien, og de elastiske egenskapene til gelen for å beregne de trekkrefter. Disse målingene gir innsikt i hvordan celler mekanisk sanse og samhandle med sine lokale mikromiljøet tre. I mange hyppig benyttede PA-gel fabrikasjons protokoller, blir perlene blandes hele PA gel i sin væske, upolymerisert tilstand. Et fullt polymerisert PA gel inneholder fluoriserende perler i hele sitt volum. Ved beregning av celle veigrep, er perler fleste nærheten geloverflaten (celle-underlaget grensesnitt) overvåkes. De forskyvninger av disse perlene er antatt å forekomme på cellekulturoverflate for enkelhet i kraft calculation. Den faktiske plasseringen av perlene i dybde av gelen er sett bort fra. Imidlertid, i et elastisk medium (for eksempel PA-gel), en limstreng nærmere til et punkt over kraftpåførings vil bevege seg mer enn en limstreng som er lengre borte fra punktet. Således behandler forskyvningen av et punkt (ved vulsten plassering) distalt fra overflaten som det på overflaten resulterer i en undervurdering av cellulære tractions. Graden av feil avhenger av avstanden av vulsten fra flaten. Feilen kan ikke beregnes uten kjennskap til plassering av perlen. Behovet for en enkel metode for å begrense perler meget nær den cellekulturoverflate er løst ved noen teknikker. En måte er å øke tettheten av perlene i hele gelen, slik at det finnes et tilstrekkelig antall perler i den øverste fokalplanet for å måle bevegelse meget nær overflaten. En annen teknikk innebærer å bygge en konfokal avbildningskammer for levende celle avbildning slik at lyset frabare perlene i det øverste fokalplan samles 4. En annen metode involverer overlegging av et ekstremt tynt sjikt av PA-gel inneholdende perler på toppen av en allerede polymeriserte gel uten perler 5. En ulempe ved hver av disse teknikkene er at den nøyaktige plassering av kulene i gelen ikke er kjent. Dette introduserer feil i beregningen av forskyvningsfeltet av kulene, og dermed beregningen av cellekrefter. En annen teknikk omfatter konjugering av perler til den øvre flate av et allerede polymerisert PA under anvendelse av Sulfo-SANPAH 6. Denne teknikken sørger for perlene er faktisk bare på toppen av PA gel, men i hvilken grad de er innleiret i dybden av gelen er ukjent. Dette kan potensielt skape en lokal topografi for cellene, noe som kan endre celle atferd, som tidligere arbeid har foreslått at cellene kan forstand force flere mikrometer unna 7. Nylig ble en teknikk for patterning PA geler med 1 mikrometer diameter fluorescent fibronectin punktmarkører i en ordnet rekke ble etablert åtte. I dette tilfellet er dybden av de fluorescerende markører er kjent, og er i det vesentlige lik null, som fibronektin mønsteret er trykt på indirekte geloverflaten. Men denne metoden ikke gir en kontinuerlig miljø på hvilke celler kan feste, som ECM protein er begrenset til 1 mikrometer diameter prikker. Har ennå etableres En fremgangsmåte for full integrering av tracker perler innen PA geler og avgrense dem til en kjent posisjon svært nær overflaten til. Her utvikler vi en teknikk for å begrense sub-mikrometer til mikrometer diameter fluoriserende perler til et fokusplanet svært nær cellekultur overflaten innen PA gel. En gel blir typisk herdet ved sandwiching upolymerisert flytende gel-løsning mellom to glassplater. En av platene er funksjonalisert slik at gelen kleber sterkt til den. Den andre er unfunctionalized og fjernes etter gel botemidler. Vi modifisere denne flyttbare glass surface ved å belegge den med et lag av perler. Ved sandwiching flytende gel mellom funksjonalisert og vulsten belagt glassoverflate, den perler overføring til gel mens den herder. Dette begrenser avstanden av perlene &#39;integrering inn i gelen innen 1,6 mikrometer på overflaten. Glass-bunn petriskåler ble anvendt som den vedheftende flate der gelen er herdet. For å danne en flat toppoverflate gel under polymeriseringen, er en sirkulær glass dekkglass som brukes til sandwich-gelen med glass-bunn petriskål. Før gel fabrikasjon, er den øverste glass dekkglass belagt med poly-D-lysin (PDL), hvilket ga en positiv overflateladning. Den PDL blåses bort med trykkluft, og en løsning av perler i vann avsettes på dekkglass. Vi bruker karboksylerte fluorescerende microbeads, som bærer en negativ ladning, og samhandle med positivt ladet overflate skapt av behandling med PDL. Etter blåser perlen løsning av dekkglass med trykkluft, et enkelt lag avperler forblir elektro koblet til den tørre dekkglass. Den PDL belegget påvirker ikke klebrighet av glasset til gelen overflate, som glass-slides er uskadet, og fjernes fra PA gel helt intakt. Glass-bunn petriskåler er gjort klebende ved behandling med 97% 3-aminopropyl-trimethoxysliane og 0,5% glutaraldehyd. PA gelene ønskede stivheter er laget ved å blande egnede konsentrasjoner av akrylamid, og akrylamid via en standard prosedyre 9. En dråpe av gelen oppløsningen ble pipettert inn i glass-bunn petriskål. Glasset dekkglass inneholdende perlene blir brukt til sandwich-gelen med petriskål. Når gelen er herdet, er den øvre dekkglass fjernes etterlater kulene er innleiret i PA gel i løpet av 1,6 um fra overflaten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="502">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Name</td>
			<td style="width:128px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">97% 3-Aminopropyl-trimethoxysliane (APTES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>281778</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">70% Glutaraldehyde</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>111-30-8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1M HEPES buffer solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>83264</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">40% Acrylamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4058</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">2% Bisacrylamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1533</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">0.1 um Fluorescent microspheres (mCherry)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>F8801</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Fibronectin, Human, 1mg</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354008</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Ammonium Persulfate</td>
			<td>Bio-RAD</td>
			<td>161-0700</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td>Bio-RAD</td>
			<td>161-0801</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Poly-D-Lysine</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>A-003-E</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:255px;">1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride (EDC)&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>22980</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">N-hydroxysulfosuccinimide (NHS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>24500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">.05% Trypsin-EDTA (1X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25300-054</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">NaCL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Acrylic Acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>147230</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7757</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3671</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">35 mm Glass bottom dish with 14 mm micro-well #1 cover glass</td>
			<td>In Vitro Scientific</td>
			<td>D35-14-1-N</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Glass cover slips, 12 mm diam.</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>26023</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel method for localizing reporter fluorescent beads near the cell culture surface for traction force microscopy

PA geler har lenge vært brukt som en plattform for å studere celletrekkrefter pga lett fabrikasjon og evnen til å stille sine elastiske egenskaper. Når substratet er belagt med et ekstracellulært matriksprotein, celler holder seg til gelen og anvende krefter, noe som fører til at gelen deformeres. Den deformasjon avhenger av celle trekkraft og de elastiske egenskapene til gelen. Hvis deformasjonen feltet på overflaten er kjent, kan overflate trekkraft bli beregnet ved hjelp av elastisitetsteori. Gel deformasjon blir vanligvis målt ved å inkludere fluorescerende markør perler jevnt inn i gelen. Sondene fortrenge som gel deformeres. Probene i nærheten av overflaten av gelen blir sporet. De forskyvninger er rapportert av disse sonder er ansett som overflateforskyvninger. Deres dybder fra overflaten blir ignorert. Denne antakelsen introduserer feil i trekkraft evalueringer. For nøyaktig måling av cellekrefter, er det avgjørende for plasseringen av perlene for å være kjent. Vi har utvikleten teknikk som benytter enkel kjemi å begrense fluorescerende markør perler, 0,1 og 1 mikrometer i diameter, i PA-geler, innen 1,6 mikrometer på overflaten. Vi frakk en dekkglass med poly-D-lysin (PDL) og fluoriserende perler. PA gel-løsning blir deretter klemt mellom dekkglass og et vedheftende overflate. De fluorescerende perler overføring til gel-løsning under herding. Etter polymeriseringen, inneholder PA gel fluorescerende perler på et plan i nærheten av geloverflaten.

Konfokal avbildning ble brukt for å fastslå at perlene var faktisk under gel overflate og for å kvantifisere deres nøyaktige posisjon innenfor den gel dybde. Fluorescent perler av en annen bølgelengde enn de inne i gel ble tillatt å slå seg ned på overflaten, og avstanden mellom de innleirede fluorescerende nanopartikler og de på overflaten ble beregnet ved hjelp av en sentroide identifikasjonsalgoritme. Plasseringen av vulsten på gelen overflaten tjener som en referanse for den øvre overflate av gelen-der ce...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method for Localizing Reporter Fluorescent Beads Near the Cell Culture Surface for Traction Force Microscopy at JoVE.com

A Novel Method for Localizing Reporter Fluorescent Beads Near the Cell Culture Surface for Traction Force Microscopy

En ny metode for lokalisering Reporter fluoriserende perler Nær Cell Culture Surface for trekkraft Mikros

Tradisjonelle teknikker for å fabrikkere polyakrylamid (PA) geler inneholdende fluorescerende prober innebære sandwiching en gel mellom en vedheftende overflate, og en glass-slide. Her viser vi at belegg dette lysbildet med poly-D-lysin (PDL) og fluorescerende prober lokaliserer sondene til innenfor 1,6 mikrometer fra gelen overflaten.

PA gels have long been used as a platform to study cell traction forces due to ease of fabrication and the ability to tune their elastic properties. When ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

Egenrapportering Stillaser for 3-dimensjonal Cell Culture

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Fluorescens-slukking av en Liposomalinnkapslet Nær-infrarød fluoroforen som et verktøy for<em&gt; I Vivo</em&gt; Optisk Imaging

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

Surface Potential Measurement of Bacteria Using Kelvin Probe Force Microscopy

Overflaten Potential Måling av bakterier ved hjelp av Kelvin Probe Force Mikros

Surface potential is a commonly overlooked physical characteristic that plays a dominant role in the adhesion of microorganisms to substrate surfaces. ...

Atomic Force Microscopy Imaging and Force Spectroscopy of Supported Lipid Bilayers

Atomic Force Microscopy Imaging and Force spektroskopi av Supported lipidbilag

Atomic force microscopy (AFM) is a versatile, high-resolution imaging technique that allows visualization of biological membranes. It has sufficient ...

A High-throughput Cell Microarray Platform for Correlative Analysis of Cell Differentiation and Traction Forces

En High-throughput Cell microarray plattform for samsvarende analyse av celledifferensiering og Traction Forces

Microfabricated cellular microarrays, which consist of contact-printed combinations of biomolecules on an elastic hydrogel surface, provide a tightly ...

Fabrication and Implementation of a Reference-Free Traction Force Microscopy Platform

Fabrikasjon og implementering av en referanse-fri traction Force mikroskopi plattform

Quantifying cell-induced material deformation provides useful information concerning how cells sense and respond to the physical properties of their ...

Traction Microscopy Integrated with Microfluidics for Chemotactic Collective Migration

Traction mikroskopi integrert med materialer for chemotactic kollektiv migrasjon

Cells change migration patterns in response to chemical stimuli, including the gradients of the stimuli. Cellular migration in the direction of a chemical ...

Traction Force Microscopy to Study B Lymphocyte Activation

Trekkraft Force mikroskopi å studere B lymfocytt aktivering

Traction force microscopy (TFM) enables the measurement of forces produced by a cell on a substrate. This technique infers traction force measurements ...

Simultaneous Quantification of Selected Kynurenines Analyzed by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry in Medium Collected from Cancer Cell Cultures

Samtidig kvantifisering av utvalgte kynureniner analysert av flytende kromatografi-massespektrometri i medium samlet fra kreftcellekulturer

The kynurenine pathway and the tryptophan catabolites called kynurenines have received increased attention for their involvement in immune regulation and ...

Application of Atomic Force Microscopy to Detect Early Osteoarthritis

Anvendelse av atomic force mikroskopi for å oppdage tidlig slitasjegikt

Biomechanical properties of cells and tissues not only regulate their shape and function but are also crucial for maintaining their vitality. Changes in ...