Name: real-time imaging of axonal transport of quantum dot-labeled bdnf in primary neurons
Uploaded: 2014-09-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Imaging of Axonal Transport of Quantum Dot-labeled BDNF in Primary Neurons at JoVE.com

Nos gustaría dar las gracias a Yue (Pauline) Hu, Rachel Sinit por su asistencia técnica. El estudio está apoyado por el NIH subvención (PN2 EY016525) y por la financiación de Síndrome de Down y la Fundación de Investigación de Tratamiento y la Fundación Larry L. Hillblom.

Los procedimientos quirúrgicos y animales se llevan a cabo estrictamente de acuerdo con la Guía del NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. Todos los experimentos que implican el uso de animales son aprobados por UCSD Institucional Cuidado de Animales y el empleo Comisión. 1. plásmido de clonación, expresión y purificación de biotina-Mono BDNF (mBtBDNF) NOTA: Construir pre-proBDNFavi y cDNA BirA en el vector pcDNA3.1 y coexpresan en células HE...

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	<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+dynein-microtubule+network+is+required+for+NGF+signaling+through+the+Rap1/MAPK+pathway.">A functional dynein-microtubule network is required for NGF signaling through the Rap1/MAPK pathway.</a> Traffic. 8, 1503-1520 (2007).</li><li>Wortzel, I., Seger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ERK+Cascade:+Distinct+Functions+within+Various+Subcellular+Organelles.">The ERK Cascade: Distinct Functions within Various Subcellular Organelles.</a> Genes &amp; cancer. 2, 195-209 (2011).</li><li>Huang, E. J., Reichardt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trk+receptors:+roles+in+neuronal+signal+transduction.">Trk receptors: roles in neuronal signal transduction.</a> Annual review of biochemistry. 72, 609-642 (2003).</li><li>Nonomura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+pathways+and+survival+effects+of+BDNF+and+NT-3+on+cultured+cerebellar+granule+cells.">Signaling pathways and survival effects of BDNF and NT-3 on cultured cerebellar granule cells.</a> Brain research. Developmental brain research. 97, 42-50 (1996).</li><li>Weissmiller, A. M., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+advances+in+using+neurotrophic+factors+to+treat+neurodegenerative+disorders.">Current advances in using neurotrophic factors to treat neurodegenerative disorders.</a> Translational neurodegeneration. 1, 14 (2012).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+axonal+transport+of+Rab7+GTPase+results+in+dysregulated+trophic+signaling.">Defective axonal transport of Rab7 GTPase results in dysregulated trophic signaling.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 7451-7462 (2013).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature methods. 2, 599-605 (2005).</li><li>Cui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+at+a+time,+live+tracking+of+NGF+axonal+transport+using+quantum+dots.">One at a time, live tracking of NGF axonal transport using quantum dots.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 13666-13671 (2007).</li><li>Xie, W., Zhang, K., Cui, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+and+axonal+transport+of+quantum+dot+labeled+BDNF.">Functional characterization and axonal transport of quantum dot labeled BDNF.</a> Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro. 4, 953-960 (2012).</li><li>Sung, K., Maloney, M. T., Yang, J., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+producing+mono-biotinylated,+biologically+active+neurotrophic+factors:+an+essential+reagent+for+single+molecule+study+of+axonal+transport.">A novel method for producing mono-biotinylated, biologically active neurotrophic factors: an essential reagent for single molecule study of axonal transport.</a> Journal of neuroscience methods. 200, 121-128 (2011).</li><li>Tani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trafficking+of+a+ligand-receptor+complex+on+the+growth+cones+as+an+essential+step+for+the+uptake+of+nerve+growth+factor+at+the+distal+end+of+the+axon:+a+single-molecule+analysis.">Trafficking of a ligand-receptor complex on the growth cones as an essential step for the uptake of nerve growth factor at the distal end of the axon: a single-molecule analysis.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 25, 2181-2191 (2005).</li><li>Bronfman, F. C., Tcherpakov, M., Jovin, T. M., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand-induced+internalization+of+the+p75+neurotrophin+receptor:+a+slow+route+to+the+signaling+endosome.">Ligand-induced internalization of the p75 neurotrophin receptor: a slow route to the signaling endosome.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23, 3209-3220 (2003).</li><li>Kruttgen, A., Heymach, J. V., Kahle, P. J., Shooter, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+nerve+growth+factor+carboxyl+terminus+in+receptor+binding+and+conformational+stability.">The role of the nerve growth factor carboxyl terminus in receptor binding and conformational stability.</a> The Journal of biological chemistry. 272, 29222-29228 (1997).</li><li>Zuccato, C., Cattaneo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+in+neurodegenerative+diseases.">Brain-derived neurotrophic factor in neurodegenerative diseases.</a> Nature reviews. Neurology. 5, 311-322 (2009).</li><li>Gharami, K., Xie, Y., An, J. J., Tonegawa, S., Xu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+over-expression+in+the+forebrain+ameliorates+Huntington's+disease+phenotypes+in+mice.">Brain-derived neurotrophic factor over-expression in the forebrain ameliorates Huntington's disease phenotypes in mice.</a> Journal of neurochemistry. 105, 369-379 (2008).</li><li>Gauthier, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Huntingtin+controls+neurotrophic+support+and+survival+of+neurons+by+enhancing+BDNF+vesicular+transport+along+microtubules.">Huntingtin controls neurotrophic support and survival of neurons by enhancing BDNF vesicular transport along microtubules.</a> Cell. 118, 127-138 (2004).</li><li>Her, L. S., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+sensitivity+of+striatal+neurons+to+axonal+transport+defects+induced+by+mutant+huntingtin.">Enhanced sensitivity of striatal neurons to axonal transport defects induced by mutant huntingtin.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28, 13662-13672 (2008).</li><li>Rong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+intracellular+trafficking+of+huntingtin-associated+protein-1+is+critical+for+TrkA+protein+levels+and+neurite+outgrowth.">Regulation of intracellular trafficking of huntingtin-associated protein-1 is critical for TrkA protein levels and neurite outgrowth.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26, 6019-6030 (2006).</li></ol>

En este estudio, se presenta el desarrollo de una nueva técnica para producir biológicamente activa, monobiotinylated BDNF (mBtBDNF) que se puede utilizar para rastrear el transporte axonal de BDNF. Por la conjugación de la proteína a la estreptavidina punto cuántico, y el uso de una cámara de microfluidos, el método permite una para detectar el transporte axonal de BDNF en las neuronas primarias con sensibilidad única molécula, en tiempo real y con las resoluciones espaciales y temporales. Las herramientas uti...

Las neuronas son células altamente cuyos procesos de largo ya menudo muy elaborado, son fundamentales para el establecimiento y mantenimiento de la estructura y función de los circuitos neuronales polarizados. El axón juega un papel vital en el que transporten cargas desde y hacia las sinapsis. Las proteínas y orgánulos sintetizados en el soma celular necesitan ser transportados a través de los axones para llegar a la terminal presináptica para apoyar la función neuronal. Correspondientemente, señales recibidas en los axones distales necesitan ser transducidas y se transportan a la soma. Estos procesos son esenciales para la supervivencia neuronal, diferenciación y mantenimiento. En que el transporte axonal en algunas neuronas debe llevarse a cabo a través de distancias más de 1000 veces el diámetro del cuerpo celular, la posibilidad se prevé fácilmente que incluso pequeños déficits podrían afectar notablemente la función neuronal y el circuito. Brain-factor neurotrófico derivado (BDNF), un miembro de la familia de las neurotrofinas de factores de crecimiento, está presente en maregiones del cerebro ny, incluyendo el hipocampo, corteza cerebral, y el cerebro anterior basal. BDNF juega un papel crucial en la formación de la cognición y la memoria mediante el apoyo a la supervivencia, diferenciación y función de las neuronas que participan en circuitos cognitivos. BDNF se une a su receptor, el TrkB tirosina quinasa, en el axón terminal donde activa vías de señalización mediada por TrkB, incluyendo la proteína quinasa activada por mitógeno / regulada por señal extracelular de la proteína quinasa (MAPK / ERK), fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K) y la fosfolipasa C-gamma (PLCγ). Las proteínas que participan en estas vías de señalización están empaquetados en estructuras vesiculares endocítica para formar el BDNF / TrkB señalización endosoma 1-6 que luego son retrógradamente transportado al soma neuronal. La cámara de cultivo de microfluidos es una plataforma muy útil para estudiar la biología axonal en condiciones normales, así como en el ajuste de la lesión y la enfermedad 7,8. Por axones de aislamientoa partir de los cuerpos celulares, el dispositivo ha permitido uno para estudiar el transporte específicamente en los axones 8-10. Las plataformas de microfluidos PDMS base con 450 micras barreras microsurco utilizados en este estudio fueron adquiridos comercialmente (ver Tabla de Materiales). Para examinar el transporte BDNF, hemos desarrollado una nueva tecnología para producir BDNF monobiotinylated (mBtBDNF). Aprovechamos el péptido aceptor de biotina, AP (también conocido como AviTag). Es una secuencia de 15 aminoácidos que contiene un residuo de lisina que puede ligarse específicamente a una biotina por la enzima ligasa de biotina coli Escherichia, BirA. Hemos fusionado el AviTag a la C-terminal de la pre-ratón proBDNF ADNc mediante PCR (Figura 1A). La construcción se clonó en el vector de expresión de mamífero, pcDNA3.1-myc su vector. También clonado el ADN bacteriana BirA en el pcDNA3.1-myc su vector. Los dos plásmidos se co-transfectaron transitoriamente en células HEK293FT para expresar ambas proteínas. BirA catalizó la ligadura de Bioten concreto a la lisina residen dentro del AviTag en el C-terminal de BDNF en una proporción de 1: 1 para producir monómero monobiotinylated BDNF. Biotinilado, BDNF maduro con una masa molecular de ~ 18 kDa fue recuperado y purificado a partir de los medios de comunicación utilizando resina de Ni-(Figura 1C). La biotinilación de BDNF era completa, como se juzga por la incapacidad de detectar sin modificar BDNF por inmunotransferencia (Figura 1D). Puntos cuánticos conjugados con estreptavidina, QD 655, se utilizan para etiquetar mBtBDNF hacer QD-BDNF. La presencia de la AviTag no interfiera con la actividad del BDNF como la mBtBDNF fue capaz de activar TrkB fosforilado (Figura 1E) y estimular el crecimiento de neuritas (Figura 1F) en la medida de BDNF humano recombinante (rhBDNF). Inmunotinción demostró que QD-BDNF colocalized con TrkB en los axones del hipocampo, lo que indica que QD-BDNF es bioactivo (Figura 1G). Para estudiar el transporte BDNF, QD-BDNF fue añadido al compartimento de axón distalculturas de microfluidos que contienen rata E18 neuronas del hipocampo (Figura 2A). QD-BDNF transporte retrógrado dentro de los axones fue capturado por el tiempo real de imágenes en vivo de la etiqueta fluorescente de color rojo (con soporte para vídeos S1, S2). Mediante el análisis de la quimógrafo generado, QD-BDNF se observó para ser transportado retrógradamente a una velocidad de movimiento de alrededor de 1,06 m / seg (Figura 3A). GFP o marcado con mCherry BDNF se han utilizado para seguir el movimiento axonal de BDNF. Los principales inconvenientes son que no son lo suficientemente brillantes para los estudios de una sola molécula. Además, la presencia de tanto anterógrada y retrógrada movimientos de BDNF hace que sea difícil evaluar si o no el BDNF retrógradamente transportado estaba en un complejo neurotrofina / receptor. En este video, nos demuestran las técnicas que se utilizan para examinar el tráfico directo de QD-BDNF en las cámaras de microfluidos que utilizan las neuronas primarias. El ultrabrightness y excelente fotoestabilidad de los puntos cuánticos MAKes posible realizar el seguimiento a largo plazo del transporte BDNF. Estas técnicas pueden ser explotados para mejorar estudios de la función axonal en AD, HD, y otros trastornos neurodegenerativos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="641">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:261px;">Name</td>
			<td style="width:205px;">Company</td>
			<td style="width:175px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Platinum pfx DNA polymerase&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11708021</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EcoRI&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>FD0274</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BamHI&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>FD0054</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEK293FT cells</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R70007</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM-high glucose media</td>
			<td>Mediatech</td>
			<td>10-013-CV</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">d-biotin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B4639</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TurboFect&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>R0531</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PMSF&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">aprotinin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6279</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ni-NTA resins</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>30250</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">protease inhibitors cocktail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;S8820</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">silver staining kit&#160;</td>
			<td>G-Biosciences</td>
			<td>786-30</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">human recombinant BDNF</td>
			<td>Genentech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microfluidic chambers</td>
			<td>Xona</td>
			<td>SND450</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">24x40 mm No. 1 glass coverslips&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-060</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">poly-L-Lysine&#160;</td>
			<td>Cultrex</td>
			<td>3438-100-01</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DNase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Neurobasal&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FBS&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000-044</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GlutaMax&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>35050-061</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">B27&#160;&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">QD655-streptavidin conjugates</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>&#160;Q10121MP</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-Avi tag antibody</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>A00674</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">streptavidin-agarose beads&#160;</td>
			<td>Life Technology</td>
			<td>&#160;SA100-04</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">trichloroacetic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T6399</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HRP-streptavidin&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>N100</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-pTrkB antibody</td>
			<td colspan="2">a generous gift from Dr M. Chao of NYU</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-TrkB antibody</td>
			<td>BD Science</td>
			<td>610101</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time imaging of axonal transport of quantum dot-labeled bdnf in primary neurons

BDNF juega un papel importante en varias facetas de la supervivencia neuronal, la diferenciación, y la función. Déficits estructurales y funcionales en los axones se consideran cada vez más como una característica temprana de enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer (AD) y la enfermedad de Huntington (HD). Hasta el momento no está claro es el mecanismo (s) por el cual se induce lesión axonal. Se presenta el desarrollo de una nueva técnica para producir biológicamente activo, monobiotinylated BDNF (mBtBDNF) que se puede utilizar para rastrear el transporte axonal de BDNF. BDNF marcado con puntos cuánticos (QD-BDNF) fue producido por la conjugación de punto cuántico 655 a mBtBDNF. Un dispositivo de microfluidos se utilizó para aislar los axones de los cuerpos celulares de las neuronas. La adición de QD-BDNF al compartimiento axonal permite imágenes en vivo de transporte BDNF en los axones. Hemos demostrado que QD-BDNF movido esencialmente exclusivamente retrógradamente, con muy pocas pausas, a una velocidad de movimiento de alrededor de 1,06 m / seg. Este sistema se puede utilizar para investigar memecanis- de la función axonal alterada en la EA o HD, así como otros trastornos degenerativos.

Producción y purificación de biológicamente activos BDNF Mono-biotina El vector de expresión de BDNF fusionado con una secuencia de AviTag (GGGLNDIFEAQKIEWHE) fue creado de acuerdo con un protocolo previamente publicado 10. La masa molecular de la proteína de fusión de longitud completa se predijo a ser ~ 32 kDa ( <a href="http://ca.expasy.org/tools/pi_tool.html" target="_blank">http://ca.expasy.org/tools/pi_tool.html</a> ) fue producido Monobiotinylated BDNF maduro con una ...

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Real-time Imaging of Axonal Transport of Quantum Dot-labeled BDNF in Primary Neurons

El transporte axonal de BDNF, un factor neurotrófico, es crítico para la supervivencia y la función de varias poblaciones neuronales. Algunos trastornos degenerativos están marcadas por disrupción de la estructura y la función axonal. Hemos demostrado las técnicas utilizadas para examinar el tráfico directo de QD-BDNF en las cámaras de microfluidos que utilizan las neuronas primarias.

Imágenes en tiempo real de Axonal Transporte de Quantum Dot-etiquetado BDNF en las neuronas primarias

BDNF plays an important role in several facets of neuronal survival, differentiation, and function. Structural and functional deficits in axons are ...

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