Name: from fast fluorescence imaging to molecular diffusion law on live cell membranes in a commercial microscope
Uploaded: 2014-10-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope at JoVE.com

This work is supported in part by NIH-P41 P41-RRO3155 and NIH P50-GM076516 (grant to EG), and Fondazione Monte dei Paschi di Siena (grant to FB).

1 System Kalibrering <ol><li> Punktspridningsfunktion (PSF) kalibrering <ol><li> Späd 10 | il av 30 nm fluorescerande pärla lösning (ca 5 | iM) i 90 | il destillerat vatten och därefter sonikera lösningen under 20 min. Skär en kvadrat (1 cm x 1 cm) stycke av agarosgel (3%) och insättning 10 | il av lösningen på toppen av gelén. Störta den bit av gelen på botten glaset i en 2 cm petriskål och pressa droppe på glaset. </li><li> Slå på förvärvs setup, placera provet i hållaren, ställ in kameran expone...

Spårning enda partikel (SPT) är en av de vanligaste strategierna för att studera molekyldynamik och har den stora fördelen att mäta partikelbanor. Detta i sin tur gör det möjligt att sondera beteende ens några märkta partiklar i ett komplext system. Men för att nå denna fördel SPT behöver normalt en låg densitet av sonden och mycket ljusa etiketter. Särskilt för att få hög tidsupplösning (ps intervall) oorganiska sond krävs ofta (t.ex. kvantprickar eller metallnanopartiklar): i detta fall en...

Med utgångspunkt från den ursprungliga &quot;vätske mosaik&quot; modell av Singer och Nicolson, bilden av cellplasmamembranet har kontinuerligt uppdaterats under de senaste decennierna för att inkludera den framväxande roll cytoskeleton och lipid domänerna 1,2. De första observationerna erhölls genom fluorescerande återhämtning efter fotoblekning (FRAP) avtäckningen att en betydande fraktion av membranproteiner är orörlig 3-5. Dessa banbrytande studier, även om mycket informativt, led av den relativt dåliga upplösningen i rymden (mikron) och tid (sekunder) i FRAP inställningar. Dessutom är en ensemble medelvärdesmätning, FRAP saknar i att ge information om enda molekyl beteende. I detta sammanhang är det möjligt att specifikt märka en enda molekyl med mycket ljusa taggar (möjliggör studiet av diffusionsprocessen en molekyl i taget) har varit mycket framgångsrikt. Speciellt, genom att trycka påtidsupplösning av den inre Particle Tracking (SPT) inställning till mikrosekunder tidsskalan, Kusumi, et al. fått tillgång till okända funktioner i lipid och proteindynamik som kraftigt bidragit till erkännandet av den roll aktin baserade membranskelett i membranfysiologi 6 , 7. Dessa fynd genererade den så kallade &quot;strejkvakt och staket&quot; modell, där lipid och protein diffusion regleras av aktin baserade skelettet. Men för att få tillgång till den enorma mängd information som SPT många experimentella frågor måste lösas. Speciellt är märkningsförfarandet vanligen består av många steg som produktion, rening och införande av de märkta arter i systemet. Dessutom stora etiketter, som kvantprickar eller metallnanopartiklar, ofta krävs för att nå under millisekund tid och tvärbindningen av målmolekyler med etiketten kunde inte undvikas i många fall. Slutligen, många banormåste registreras för att passa statistiska kriterier och samtidigt en låg densitet av etiketten krävs för att möjliggöra spårning. Jämfört med SPT, fluorescens-korrelationsspektroskopi (FCS), övervinna många av dessa nackdelar, är ett mycket lovande tillvägagångssätt för att studera molekylär dynamik. I själva verket fungerar FCS bra även med dim och täta etiketter, som gör det möjligt att studera dynamiken i fluorescerande protein-märkta molekyler i gående transfekterade celler. Dessutom möjliggör det att nå höga statistik i en begränsad tid. Slutligen, trots den &quot;höga&quot; densitet av etiketter FCS erbjuder enstaka molekyler information. Tack vare alla dessa egenskaper, FCS är en mycket enkel metod och har tillämpats i stor utsträckning för att studera lipid och protein dynamik både i modellmembran och i levande-celler 8-10. Många olika metoder har föreslagits för att öka förmågan hos FCS att avslöja detaljerna i molekylär diffusion. Till exempel var det shegna som genom att utföra FCS på olika stora observationsområdena kan man definiera en &quot;FCS diffusion lag&quot; upplysande dolda funktioner i molekylär rörelse 11,12. Förutom att vara varierade i storlek, var det prioriterade området också dupliceras 13, flyttade i rymden längs linjerna 14-20 eller konjugerade med snabba kameror 21,22. Med hjälp av dessa &quot;tid och rum&quot; korrelation tillvägagångssätt, var relevanta biologiska parametrar för flera membrankomponenter kvantitativt beskrivas både modellmembran och faktiska biologiska sådana, vilket således ger inblick i membran rumslig organisation. Men i alla FRAP och FCS-program hittills beskrivna storleken på det prioriterade området utgör en gräns i rumslig upplösning som inte kan övervinnas. Flera super upplösning avbildningsmetoder har nyligen utvecklats för att kringgå denna gräns. En del bygger på lokalisering precision, till exempel stokastiska optisk rekonstruktion mikroskopi (STORM) &lt;sup&gt; 23,24, foto lokalisering mikroskopi (PALM) 25, fluorescens PALM (FPALM) 26, och single-partikel tracking PALM (sptPALM) 27: den relativt stora mängd fotoner som krävs på varje stillbild, men begränsar den tid upplösning dessa metoder till åtminstone flera millisekunder, vilket hämmar deras tillämplighet in vivo. Däremot har ett lovande alternativ för superupplösning avbildning öppnats av rumsligt modulera fluorescens emission med stimulerade utarmning utsläppsmetoder (STED eller reversibla mätt optiska fluorescens övergångar (RESOLFT)) 28,29. Dessa tillvägagångssätt kombinerar utformningen av observationsvolymen långt under diffraktionsgränsen med möjlighet att använda snabb scanning mikroskop och detekteringssystem. I kombination med fluorescensfluktuationer analys, STED mikroskopi tillåtet att direkt söka av nanoskala Spatiotemporal dynamik lipider och proteins i levande cellmembran 30,31. Samma fysiska kvantiteter av STED baserad mikroskopi kan erhållas genom en modifierad tid och rum bildkorrelationsspektroskopi (STICS 32,33) metod som är lämplig för att studera dynamiken i fluorescerande-märkta membranproteiner och / eller lipider i levande celler och genom en kommersiell mikroskop. Den experimentella protokollet presenteras här består av några få steg. Den första kräver en snabb avbildning av regionen av intresse på membranet. Därefter resulte trave bilder används för att beräkna den genomsnittliga rumsliga-temporala korrelationsfunktioner. Genom att montera den serie av korrelationsfunktioner, kan den molekylära &quot;diffusion lag&quot; erhållas direkt från avbildning i form av en skenbar diffusivitet (D app) - vs -Genomsnittlig förskjutning tomt. Denna tomt är kritiskt beroende miljön utforskas av molekylerna och tillåter att erkänna direkt själva spridningssättav lipid / protein av intresse. I mer detaljer, som tidigare visats 34, den tid och rum autokorrelationsfunktion för den förvärvade bildserie beror kritiskt på dynamiken i molekylerna rör sig i den insamlade bildserien (observera att samma resonemang kan tillämpas på en rad förvärv där bara en dimension i rymden anses). Särskilt definierar vi korrelationsfunktionen som: <img fo:content-width="2.3in" src="/files/ftp_upload/51994/51994eq1.jpg" width="230" /> (1) där <img fo:content-width=".5in" src="/files/ftp_upload/51994/xyt.jpg" width="50" /> representerar den uppmätta fluorescensintensiteten i den position x, y och vid tiden t, <img fo:content-width=".08in" src="/files/ftp_upload/51994/e.jpg" width="8" /> och <img fo:content-width=".1in" src="/files/ftp_upload/51994/x.jpg" width="10" /> representerar avståndet i x-ochy-riktningarna respektive, <img fo:content-width=".1in" src="/files/ftp_upload/51994/t.jpg" width="10" /> representerar viss tid och <img fo:content-width=".2in" src="/files/ftp_upload/51994/brackets.jpg" width="20" /> representerar genomsnittet. Denna funktion kan uttryckas som: <img fo:content-width="2.3in" src="/files/ftp_upload/51994/51994eq2.jpg" width="230" /> (2) där &quot;N&quot; representerar det genomsnittliga antalet molekyler i området observation, <img fo:content-width=".10in" src="/files/ftp_upload/51994/circlex.jpg" width="10" /> representerar konvolution drift i rymden, och <img fo:content-width=".5in" src="/files/ftp_upload/51994/ex.jpg" width="50" /> representerar autokorrelationen för den instrumen midjan. Detta senare kan tolkas som ett mått på hur fotoner från en enda sändare är utspridda i rymden på grund av att den optiska / inspelning setup (den så kallade punktspridningsfunktionen, PSF, genrally väl approximeras med en Gauss-funktion). Slutligen <img fo:content-width=".5in" src="/files/ftp_upload/51994/ext.jpg" width="50" /> representerar sannolikheten för att finna en partikel på ett avstånd <img fo:content-width=".10in" src="/files/ftp_upload/51994/e.jpg" width="10" /> och <img fo:content-width=".10in" src="/files/ftp_upload/51994/x.jpg" width="10" /> efter en tidsfördröjning <img fo:content-width=".10in" src="/files/ftp_upload/51994/t.jpg" width="10" /> . Om vi ​​betraktar en diffusiva dynamik, där partiklar rör sig slumpmässigt i alla riktningar och nettoflöden inte är närvarande, är denna funktion också väl approximeras med en Gauss-funktion där variansen kan identifieras som Mean Square Displacement (MSD) i rörliga partikeln . Sålunda midjan på korrelationsfunktionen (även kallat <img fo:content-width=".3in" src="/files/ftp_upload/51994/2t.jpg" width="30" /> ), Kan definieras som summan av de partikel muskuloskeletala sjukdomar och den instrument midja och kan mätas genom en gaussisk passformting av korrelationsfunktionen för varje tidsfördröjning. Den uppmätta i MSD kan användas för att beräkna en skenbar diffusiviteten hos de rörliga molekyler <img fo:content-width=".4in" src="/files/ftp_upload/51994/dappt.jpg" width="40" /> och en genomsnittlig förskjutning <img fo:content-width=".4in" src="/files/ftp_upload/51994/rt.jpg" width="40" /> som: <img fo:content-width="1.7in" src="/files/ftp_upload/51994/51994eq3.jpg" width="170" /> (3) <img fo:content-width="1.7in" src="/files/ftp_upload/51994/51994eq4.jpg" width="170" /> (4) Några överväganden på experimentuppställning som används kan vägleda läsaren genom de följande avsnitten. För att selektivt excitera fluoroforema på basalmembranet av levande celler som vi kommer att använda en total inre reflektion (TIR) ​​belysning, med hjälp av ett kommersiellt TIR fluorescens (TIRF) mikroskop (detaljer finns i materialet avsnitt). Dessutom, för att samla in the fluorescens vi kommer att använda en hög förstoring mål (100X NA 1,47, är hög numerisk apertur som krävs för TIRF belysning) och en EMCCD kamera (fysiska storleken på pixel på chipet 16 um). För att nå en pixelstorlek på 100 nm tillämpar vi en extra förstoringslins 1,6X. Såsom diskuteras nedan, skulle en tidsupplösning under en ms krävas för att korrekt beskriva dynamiken i snabba membranlipider nedanför 100 nm. För att uppnå denna tidsupplösning måste vi välja ett område av intresse (ROI) som är mindre än hela chipet av kameran (512 x 512). På detta sätt kommer kameran läsa ett reducerat antal linjer ökande tidsupplösningen. Men i denna avläsning regim ramtiden skulle begränsas av den tid som krävs för att flytta de avgifter från exponering för utläsningschipset på kameran och är oftast i storleksordningen millisekunder för 512 x 512 pixel EMCCD. För att slå denna gräns, kan en ny teknik flytta ROI-linjerna i stället för hela ramen, wed en praktisk effektiv minskning av den exponerade chip storlek (kallas Cropped Sensor läge i vårt EMCCD). För denna konfiguration för att vara effektiv, måste chipet utsidan av ROI täckas av ett par slitsar som är monterade i den optiska banan. Tack vare denna inställning en tidsupplösning ned till 10 -4 sekunder kan uppnås. Observera dock att detta tillvägagångssätt kan kopplas till många olika experimentella uppställningar, som förklaras i &quot;diskussionen&quot; avsnittet. Demonstration av metoden kommer att tillhandahållas i levande celler, genom att använda både en ATTO488 märkt 1-palmitoyl-2-hydroxi-sn-glycero-3-fosfoetanolamin (ATTO488-PPE) och en GFP-märkt variant av transferrinreceptorn (GFP- TfR). I fallet med ATTO488-PPE kan detta tillvägagångssätt lyckades återställa en nästan konstant D appen som en funktion av genomsnittlig förskjutning indikerande en mestadels fri diffusion, såsom tidigare rapporterats 30,35. Däremot visar TfR-GFP en minskande D <sub&gt; app som funktion av genomsnittlig förskjutning, vilket tyder delvis begränsad diffusion 6. Dessutom är det i det senare fallet är möjligt att kvantifiera den lokala diffusionskonstanten och genomsnitts inneslutning område under många mikrometer på membranplanet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1142">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:183px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:480px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">iXon Ultra 897</td>
			<td style="width:183px;">Andor</td>
			<td>DU-897U-CS0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Solis</td>
			<td style="width:183px;">Andor</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">CHO-K1</td>
			<td style="width:183px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL-61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ATTO 488 labeled PPE</td>
			<td style="width:183px;">ATTO-TEC GmbH</td>
			<td>AD 488-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">DOPE</td>
			<td style="width:183px;">Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">850725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">DOTAP</td>
			<td style="width:183px;">Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">890890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">100X Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">FBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">HEPES</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15630-106&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">PBS</td>
			<td style="width:183px;">Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">SimFCS 3.0</td>
			<td style="width:183px;">Globals Software</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>the software can be downloaded here: http://www.lfd.uci.edu/globals/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMI6000 with TIRF modulus</td>
			<td style="width:183px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">LAS AF</td>
			<td style="width:183px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Lipofectamine 2000</td>
			<td style="width:183px;">Lipofectamine</td>
			<td>11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Matlab</td>
			<td style="width:183px;">MathWork</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Imagej</td>
			<td style="width:183px;">NIH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">C-terminal GFP tagged Tranferrin Receptor</td>
			<td style="width:183px;">OriGene</td>
			<td>RG200980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Agar</td>
			<td style="width:183px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>A5306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Chloroform</td>
			<td style="width:183px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">528730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Latex beads, fluorescent yellow-green, 30 nm</td>
			<td style="width:183px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>L5155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">SONICA Ultrasonic Cleaners</td>
			<td>SOLTEC</td>
			<td style="width:119px;">ETH S3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Petri Dishes</td>
			<td style="width:183px;">Willco</td>
			<td>GWSt-3522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Bio-Format importer for Matlab</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>http://www.openmicroscopy.org/site/support/bio-formats5/users/matlab/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">ICS-MatLab Tools</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td><a href="https://www.cellmigration.org/resource/imaging/software/ICSMATLAB_28-02-06.zip">https://www.cellmigration.org/resource/imaging/software/ICSMATLAB_28-02-06.zip</a></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Simulation by Matlab Tutorial</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>https://www.cellmigration.org/resource/imaging/icsmatlab/ICSTutorial.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:361px;">Simulation by SimFCS Tutorial</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>https://www.cellmigration.org/resource/imaging/ppt-pdf/RICS%20Simulations.ppt</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

from fast fluorescence imaging to molecular diffusion law on live cell membranes in a commercial microscope

Det har blivit alltmer uppenbart att den geografiska fördelningen och rörelse membrankomponenter såsom lipider och proteiner är nyckelfaktorer i regleringen av många cellulära funktioner. Men på grund av de snabba dynamiken och de små strukturer är involverade, är en mycket hög spatio-temporal upplösning som krävs för att fånga den verkliga beteendet hos molekyler. Här presenterar vi det experimentella protokollet för att studera dynamiken i fluorescensmärkta plasmamembran proteiner och lipider i levande celler med hög Spatiotemporal upplösning. Noterbart är, denna strategi behöver inte spåra varje molekyl, men det beräknar befolknings beteende med hjälp av alla molekyler i en viss region av membranet. Utgångspunkten är en snabb avbildning av en viss region på membranet. Efteråt är en komplett tid och rum autokorrelationsfunktion beräknas korrelerar förvärvade bilder öka tidsfördröjningar, exempelvis vardera 2, 3, n upprepningar. Det är möjligt att visa att breddeni toppen av de spatiala autokorrelationsfunktionen ökar vid ökande tidsfördröjning som funktion av partikelrörelse på grund av diffusion. Därför passar den serie av autokorrelationsfunktioner gör det möjligt att extrahera den faktiska proteinmedelkvadrat förskjutning från imaging (iMSD), här i form av sken diffusivitet vs genomsnittlig förskjutning. Detta ger en kvantitativ bild av de genomsnittliga dynamiken i enstaka molekyler med nanometer precision. Genom användning av en GFP-märkt variant av transferrinreceptorn (TfR) och en ATTO488 märkt 1-palmitoyl-2-hydroxi-sn-glycero-3-fosfoetanolamin (PPE) är det möjligt att observera spatiotemporal regleringen av protein och lipid diffusion på im stora membran regioner i mikro-till-milli-sekund tidsintervall.

För att kalibrera den instrument midjan, kan bilden av en fluorescerande nano pärla vara åtgärd som beskrivs i protokoll steg 1.1. En typisk fluorescerande bild av dessa pärlor presenteras i Figur 1. Montering av intensitetsfördelningen från en 2D Gaussfunktion ger tillbaka goda rester och låter mäta instrumen midjan vid 270 nm. Detta värde är i god överensstämmelse med den förväntade diffraktionsgränsen uppskattas genom Rayleigh-ekvationen. Denna kalibrering inte är nödvändig för m?...

Watch this Scientific Journal Video about From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope at JoVE.com

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Från Snabb fluorescens avbildning till molekylär diffusion lagen om Live cellmembran i en kommersiell mikroskop

Spatial distribution and temporal dynamics of plasma membrane proteins and lipids is a hot topic in biology. Here this issue is addressed by a spatio-temporal image fluctuation analysis that provides conceptually the same physical quantities of single particle tracking, but it uses small molecular labels and standard microscopy setups.

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fluorescence Lifetime Imaging of Molecular Rotors in Living Cells

Fluorescens Lifetime Imaging of Molecular Rotorer i levande celler

Diffusion is often an important rate-determining step in chemical reactions or biological processes and plays a role in a wide range of intracellular ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell imaging att migrera celler som uttrycker fluorescerande-taggade proteiner i en tredimensionell matris

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Att använda Mikrofluidik Chips för Live avbildning och studier av Skade svar i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver

Live imaging is an important technique for studying cell biological processes, however this can be challenging in live animals. The translucent cuticle of ...

A Microfluidic Technique to Probe Cell Deformability

En mikroflödesteknik till probcell Deformationsklass

Here we detail the design, fabrication, and use of a microfluidic device to evaluate the deformability of a large number of individual cells in an ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Tracking i en modifierad Två-foton Mikroskop: En ansökan till spårning av intracellulära vesiklar

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

Levande cell imaging under mekanisk Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Planar Gradient Diffusion System to Investigate Chemotaxis in a 3D Collagen Matrix

Planar Gradient Diffusion System för att undersöka Chemotaxis i en 3D kollagenmatris

The importance of cell migration can be seen through the development of human life. When cells migrate, they generate forces and transfer these forces to ...

Fluorescence Recovery after Merging a Droplet to Measure the Two-dimensional Diffusion of a Phospholipid Monolayer

Fluorescens Återhämtning efter Sammanfoga en droppe att mäta de tvådimensionella Spridning av en Phospholipid Mono

We introduce a new method to measure the lateral diffusivity of a surfactant monolayer at the fluid-fluid interface, called fluorescence recovery after ...

Selective Cell Elimination from Mixed 3D Culture Using a Near Infrared Photoimmunotherapy Technique

Selektiv Cell Eliminering från Mixed 3D kultur med hjälp av en Near Infrared Photoimmunotherapy Technique

Recent developments in tissue engineering offer innovative solutions for many diseases. For example, tissue engineering using induced pluripotent stem ...

A Microcontroller Operated Device for the Generation of Liquid Extracts from Conventional Cigarette Smoke and Electronic Cigarette Aerosol

En mikrokontroller drivs enhet för generering av flytande extrakt från konventionella cigarett rök och elektronisk cigarett Aerosol

Electronic cigarettes are the most popular tobacco product among middle and high schoolers and are the most popular alternative tobacco product among ...