Name: sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues
Uploaded: 2014-11-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

The authors thank Kerstin Glensk for preparing the MTases M.BseCI and Set7/9 and gratefully acknowledge funding by the Excellence Initiative of the German Federal and State Governments and RWTH Aachen University. The authors are happy to provide 6BAz and SeAdoYn or other cofactor analogues for collaborative research.

1. הוראות כלליות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקו-פקטור aziridine חנות 6BAz (בDMSO) וחלבון MTase Set7 / 9 ב -80 ° C וכל חומרים כימיים האחרים, כולל קו-פקטור מופעל כפול SeAdoYn וDNA MTase M.BseCI (ב- 50% גליצרול) ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את הריכוז של 6BAz וSeAdoYn באמצעות</e...

תיוג צעד אחד של DNA עם MTases DNA וקו-פקטורי aziridine (DNA מחייך) הוא שיטה חזקה אבל כמה היבטים יש לשקול בעת תכנון הניסוי. קו-פקטור Aziridine: ריכוז 6BAz לתיוג DNA עם M.BseCI היה 60 מיקרומטר. בעת השימוש בMTases DNA האחר ריכוז הקו-הפקטור צריך להיות מותאם, ריכו...

תיוג ספציפי של חומצות גרעין וחלבוני 1,2 3,4 הוא עניין גדול לאפיונים פונקציונליים, אבחון רפואי וביוטכנולוגיה (ננו). כאן אנו מציגים שיטת תיוג האנזימטית לbiopolymers אלה המבוסס על -adenosyl-l-מתיונין S (AdoMet או SAM) methyltransferases + התלוי (MTases). המעמד הזה של אנזימים (EC 2.1.1.) מיועד לעמדות פרט nucleophilic (חנקן, חמצן, גופרית ואטומה פחמן) בתוך שאריות ספציפיות של חומצות גרעין וחלבונים ובאופן טבעי מעביר את הקבוצה מתיל מופעלת של AdoMet cofactor (איור 1 א) 5. בנוסף, MTases יכול לנצל אנלוגים cofactor סינטטיים לתיוג ספציפי עם תגי זיקה, fluorophores או תוויות אחרות (איור 1) 6. שתי כיתות של אנלוגים AdoMet פותחו: קו-פקטורי Aziridine לי ethyltransferase- M S equence ספציפי </strong&gt; הבל nduced L ing (מחייך) 7 ואנלוגים כפולים מופעלים AdoMet לransfer T מ &#39;מכוון ethyltransferase של roups G ctivated (mTAG) 8. <img alt="איור 1" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" width="700" /> איור 1: תגובות זרזו ידי methyltransferases (MTases) העברת א תיל קבוצה מהקו-הפקטורים הטבעיים AdoMet (SAM) למצעים שונים, כולל DNA, RNA, חלבונים ומולקולות ביולוגיים קטנות B. התיוג / functionalization של חומצות גרעין וחלבונים (לעדכונו =.. זוגות בסיסים לDNA, נוקלאוטידים לחומצות אמינו RNA וחלבונים; XXXXX = רצף הכרה בMTase עם שאריות יעד בירוק) עם אנלוגים cofactor סינטטיים. קו-פקטורי Aziridine המכילים קבוצת כתב (כדור הכחול)מצורף לטבעת אדנין הם הרצף במיוחד בשילוב עם שאריות היעד (משמאל) ואנלוגים מופעלים כפולים AdoMet להוביל להעברת חלק מרשתות אלקיל הוארכו ביצוע Y כתב כימי (מימין) שיכול להיות מתויג בתגובה לחץ bioorthogonal בשלב שני. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> קו-פקטורי Aziridine יעבדו הכי טוב עם MTases DNA. הם מכילים טבעת membered שלוש עם אטום חנקן 9 (או N -mustard 10,11) במקום מרכז sulfonium קבוצה תגובתי כ. Protonation של אטום חנקן זה מפעיל את טבעת aziridine להתקפת nucleophilic ידי נוקלאוטיד היעד שמוביל לקוולנטיים צימוד של כל הקו-הפקטור עם DNA. על ידי הצמדת קבוצות כתב לטבעת אדנין הקו-פקטורי aziridine ניתן להשתמש בשילוב עם MTases DNA לתייג DNA בשלב אחד ( <stron<html> g&gt; איור 1, משמאל) 7,12. זו באה לידי הביטוי בפירוט לbiotinylation של DNA עם 13 6BAz - 15 (קו-פקטור aziridine עם ביוטין מצורף לעמדת 6 של טבעת אדנין) ואדנין הספציפי DNA MTase מstearothermophilus Bacillus (M.BseCI) 16 (איור 2, ראה פרוטוקול סעיף 2: תיוג צעד אחד של DNA באמצעות aziridine קו-פקטורים). בנוסף לM.BseCI (&quot;רצף ההכרה, MTases DNA מThermus aquaticus (M.TaqI, 5&#39;-TCG -3 5&#39;-ATCG T-3)&quot;), מheamolyticus Haemophilus (M.HhaI, 5 &quot;-G C GC-3 &#39;) ומספירופלסמה (M.SssI, 5&#39;- C G-3&quot;) שימשו בהצלחה לbiotinylate DNA עם 6BAz 17. יתר על כן, יכול להיות מועסק קו-פקטורי aziridine לתיוג DNA הקרינה צעד אחד 18,19. ontent &quot;fo: לשמור-together.within-page =&quot; תמיד &quot;&gt; <img alt="איור 2" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" width="700" /> איור 2:. Biotinylation צעד אחד ספציפי רצף של DNA עם M.BseCI ו6BAz DNA MTase M.BseCI מכיר את רצף פעמיים תקועים DNA 5&#39;-ATCG T-3 &quot;ובאופן טבעי methylates קבוצת אמינו של אדנין השני שאריות (ירוק) באמצעות AdoMet. עם הקו-פקטור aziridine 6BAz במהלך התגובה משתנה וM.BseCI מוביל לרצף biotinylation DNA הספציפי על ידי צימוד כל cofactor כולל ביוטין (כחול) עם אדנין היעד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> אנלוגים AdoMet מופעלים זוגי מכילים הוארכו שרשרות צד בלתי רוויות במקום קבוצה מתיל במרכז sulfonium (איור 1 </strong&gt;, מימין) 20. הקשר כפול או משולש בלתי רווי בβ-עמדה למרכז sulfonium אלקטרוני מפצה אפקטים סטרית שליליים בתוך מדינת המעבר על ידי ייצוב conjugative. מאחר ששני מרכז sulfonium והקשר בלתי רווי להפעיל את שרשרת הצד להעברה האנזימטית, הקו-הפקטורים הללו בשם אנלוגים AdoMet כפול הופעלו. בדרך כלל, הם משמשים להעברת רשתות בצד עם קבוצות ייחודיות כימיות (כתבים כימיים), כמו קבוצות אמינו, alkyne ויזיד, לתיוג הכימותרפיה סלקטיבי בשלב שני 8,21. באופן כללי, אנלוגים מופעלים כפולים AdoMet לא יכולים לתפקד רק כקו-פקטורים לDNA MTases 8,20,21 אלא גם לRNA MTases 22,23 וMTases חלבון 24-28 המאפשרים תיוג נוסף של RNA וחלבונים. עם זאת, בצד הרשתות המורחבות הן sterically תובעניים יותר מקבוצה מתיל והרחבת האתרים הפעילים MTase על ידי חלבון הנדסה היא לעתים קרובותen נדרש כדי להשיג קצבי העברה יעילה. פתרון נוסף לבעיה זו הוא להשתמש אנלוגי AdoMet עם קבוצה קטנה propargyl (שלושה פחמנים) שבו alkyne המסוף משרת שתי פונקציות: 1. ייצוב של מצב המעבר בעת ההעברה האנזימטית ו2. ידית תגובה לשינויים כימיים הבאים על ידי נחושת cycloaddition אזיד-alkyne זרז (CuAAC) לחץ כימיה. התברר כי propargylic כתוצאה האנלוגית AdoMet 29 הוא די יציב בתנאים ניטראליים או מעט בסיסיים ושימוש מוגבל בלבד. חסרון זה יכול להיות קבוע על ידי החלפת אטום הגופרית עם סלניום. הקו-פקטור תוצאת 5 &#39;- [(Se) [(3 S) -3-אמינו-3-carboxypropyl] אבזר-2-ynylselenonio] -5&#39;-deoxyadenosine (SeAdoYn, איור 3) מתקבל על ידי DNA wild-type, RNA וMTases חלבון 30-32 שיבטלו את הצורך בהנדסת חלבונים במקרים רבים. זה בא לידי ביטוי על ידי הקרינה פרו<html> תיוג חלבון עם ליזין H3 היסטון 4 (H3K4) MTase Set7 / 9 33 (איור 3, ראה סעיף פרוטוקול 3: תיוג חלבון שני שלבים באמצעות קו-פקטורים כפולים מופעלים). <img alt="איור 3" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig3highres.jpg" width="700" /> איור 3:. תיוג הקרינה שני שלבי רצף ספציפי של היסטון H3 עם Set7 / 9, אזיד SeAdoYn וטמרה החלבון MTase Set7 / 9 באופן טבעי methylates קבוצת אמינו של ליזין 4 בH3 היסטון (H3K4, הירוקה) באמצעות AdoMet. עם הקו-הפקטור מופעל הכפול SeAdoYn MTase מעביר קבוצה קטנה propargyl (אדום) לשאריות ליזין. הקשר משולש, המסוף המצורף מכן שונו באופן סלקטיבי בתגובת לחץ bioorthogonal (cycloaddition אזיד-alkyne-זרז נחושת, CuAAC) עם (tetramethylrhodamine, כחול) fluorophore-derivatized אזיד טמרה.עומס / 52,014 52014fig3highres.jpg &quot;target =&quot; / _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:139px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">6BAz</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Weinhold et al., Patent number US 8,129,106, published March 6, 2012.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">28625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acetic acid</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10304980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:139px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">16500100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ammonium persulfate (APS)</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">13375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bis-Tris</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Boric acid</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bromophenol blue Na salt</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right">15375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Copper(II) sulfate</td>
			<td style="width:139px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C1297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Chloroform</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right">10020090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Coomassie Brilliant Blue</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">17525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">EDTA disodium salt</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ethanol</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">100983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">GelRed (10000x in water)</td>
			<td style="width:139px;">Biotium</td>
			<td align="right" style="width:119px;">41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Glycerol (99.5%)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">FastRuler Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SM1103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Histone H3</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Philipp Voigt and Prof. Danny Reinberg; expression and isolation according to T. J. Richmond et al., J. Mol. Biol. 1997, 272, 301-311.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">M.BseCI</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Michael Kokkinidis; expression and isolation according to Kapetaniou et al., Acta Cryst. 2006, F63, 12-14.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Methanol</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10675112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Magnesiumchloride&#160; hexahydrate</td>
			<td style="width:139px;">J.T. Baker</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MOPS</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pH strip (Neutralit)</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1,095,330,001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pBR322</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SD0041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">R.TaqI (10u/&#181;l)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td>ER0671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SeAdoYn</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Willnow et al., ChemBioChem 2012, 13, 1167-1173.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Set7/9</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Prof. Danny Reinberg, expression and isolation according to D. Reinberg et al., Genes Dev.2002, 16, 479-489.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Streptavidin</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">(+)-Sodium L-ascorbate</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Life Science</td>
			<td style="width:119px;">A7631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SDS Granular</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">di-Sodiumhydrogenphosphat</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">106,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TAMRA-azide</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TaqI buffer (10x)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">B28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:245px;">N,N,N&#39;,N&#39;-Tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td style="width:139px;">Acros Organics</td>
			<td align="right" style="width:119px;">42058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-HCl</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-X (TRIS-base)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Tris(3-hydroxypropyltriazolyl-methyl)amine (THPTA)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">762342</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues

S -Adenosyl-l-מתיונין (AdoMet או SAM) methyltransferases + התלוי (MTase) לזרז את העברת הקבוצה מתיל מופעלת מAdoMet לתפקידים מסוימים בדנ&quot;א, רנ&quot;א, חלבונים ומולקולות ביולוגיים קטנות. תגובת מתילציה טבעית זה יכול להיות מורחב למגוון רחב של תגובות אלקילציה באמצעות אנלוגים cofactor סינטטיים. החלפה של מרכז sulfonium תגובה של AdoMet עם טבעת aziridine מובילה לקו-פקטורים שיכולים להיות בשילוב עם ה- DNA על ידי MTases DNA השונים. יכול להיות מצויד קו-פקטורי aziridine אלה עם קבוצות כתב בעמדות שונות של מחצית אדנין ומשמשים לM equence הספציפי S ethyltransferase- אני nduced ing הבל L של DNA (DNA מחייך). כדוגמא טיפוסית שאנו נותנים לפרוטוקול biotinylation של פלסמיד דנ&quot;א pBR322 ברצף 5&#39;-ATCG &#39;T-3 עם DNA MTase M.BseCI והקו-פקטורי aziridine 6BAz בצעד אחד. סיומת של קבוצה מתיל מופעלת עם תוצאות קבוצות אלקיל בלתי רוויות בסוג אחר של אנלוגים AdoMet המשמשים לransfer T מ &#39;מכוון ethyltransferase של roups ctivated G (mTAG). הואיל וצד הרשתות המורחבות מופעלות על ידי מרכז sulfonium וקשר בלתי רווי, קו-פקטורים אלה נקראים אנלוגים AdoMet כפולים הופעלו. אנלוגים אלה לא רק פונקציה כקו-פקטורים לMTases DNA, כמו הקו-פקטורי aziridine, אלא גם לRNA, חלבונים וMTases מולקולה קטנה. הם משמשים בדרך כלל לשינוי האנזימטית של מצעי MTase עם קבוצות פונקציונליות ייחודיות אשר כותרתו עם קבוצות כתב בצעד כימי שני. זה בא לידי ביטוי בפרוטוקול לתיוג הקרינה חלבון היסטון H3 של. קבוצת propargyl קטנה מועברת מSeAdoYn האנלוגי cofactor לחלבון על ידי ליזין H3 היסטון 4 (H3K4) MTase Set7 / 9 ואחריו תיוג לחיצהH3 היסטון alkynylated עם אזיד טמרה. תיוג בתיווך MTase עם אנלוגים cofactor הוא טכנולוגיה המאפשרת ליישומים מרגשים רבים כוללים זיהוי ומחקר פונקציונלי של מצעי MTase כמו גם genotyping DNA וגילוי מתילציה.

תיוג צעד אחד של DNA באמצעות קו-פקטורי Aziridine תגובת דוגמא זו מתבצעת עם DNA MTase M.BseCI, אשר משנה את שאריות אדנין השניה בתוך רצף פעמיים תקועים 5&#39;-ATCG T-3 &quot;ויש לו אתר הכרה אחד על פלסמיד pBR322 (איור 4 א). כדי לבדוק תיוג פלסמיד, pBR322 הוא...

Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues

DNA וחלבונים-במיוחד רצף שכותרתו עם זיקה או קבוצות כתב ניאון באמצעות methyltransferases DNA או חלבון ואנלוגים cofactor סינטטיים. בהתאם לסגולי כקו-הפקטורים של האנזימים, aziridine או אנלוגים cofactor מופעלים כפולים מועסקים תיוג אחת או שני שלבים.

תיוג רצף ספציפי של חומצות גרעין וחלבונים עם Methyltransferases ואנלוגים כקו-פקטורים

S-Adenosyl-l-methionine (AdoMet or SAM)-dependent methyltransferases (MTase) catalyze the transfer of the activated methyl group from AdoMet to specific ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue

איתור Immunofluorescent של שני אנלוגים Thymidine (CldU ו IdU) ברקמה ראשי

Accurate measurement of cell division is a fundamental challenge in experimental biology that becomes increasingly complex when slowly dividing cells are ...

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

פרופיל של Methyltransferases ועל אחרים S-Adenosyl- L-הומוציסטאין מחייב חלבונים על ידי ספקטרומטריית מתחם המיסה לכידה (CCMS)

There is a variety of approaches to reduce the complexity of the proteome on the basis of functional small molecule-protein interactions such as affinity ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

NanoDrop Microvolume quantitation של חומצות גרעין

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

בחינת Dynamics קונפורמציה של חלבונים בממברנה באתרו עם תיוג, האתר מכוון פלואורסצנטי

Two electrode voltage clamp electrophysiology (TEVC) is a powerful tool to investigate the mechanism of ion transport1 for a wide variety of membrane ...

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Lineage תיוג של תאים דג הזברה עם לייזר Uncagable והעמסת dextran

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

קביעת ריכוז חומצות גרעין וחלבונים שימוש Micro בנפח Bio-spec ספקטרופוטומטר Nano

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

ReAsH/FlAsH Labeling and Image Analysis of Tetracysteine Sensor Proteins in Cells

ReAsH / פלאש סימון ניתוח מקדימה של חלבונים בתאים חיישן Tetracysteine

Fluorescent proteins and dyes are essential tools for the study of protein trafficking, localization and function in cells.  While fluorescent 
proteins ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

מסלול אישור דיסקברי מטבולית ודרך 13 C-תיוג של חומצות אמינו Proteinogenic

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

מדידת מחזור התא קינטיקס התקדמות עם סימון מטבוליות cytometry זרימה

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Analyzing and Building Nucleic Acid Structures with 3DNA

ניתוח ובניית מבני חומצות גרעין עם 3DNA

The 3DNA software package is a popular and versatile bioinformatics tool with capabilities to analyze, construct, and visualize three-dimensional nucleic ...