Name: sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues
Uploaded: 2014-11-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

The authors thank Kerstin Glensk for preparing the MTases M.BseCI and Set7/9 and gratefully acknowledge funding by the Excellence Initiative of the German Federal and State Governments and RWTH Aachen University. The authors are happy to provide 6BAz and SeAdoYn or other cofactor analogues for collaborative research.

1. Общие инструкции <ol><li> Магазин азиридин кофактором 6BAz (в ДМСО), и белок МТАазы Set7 / 9 при -80 ° С, и все другие реагенты, включая двойной активирована кофактора SeAdoYn и ДНК МТАазы M.BseCI (в 50% глицерина) при -20 ° С. </li><li> Определите концентрацию 6BAz и SeAdoYn с помощью UV / VIS спектроскопии с использ...

Один шаг маркировки ДНК с MTases ДНК и азиридиновых кофакторов (улыбается ДНК) является надежным методом, но некоторые аспекты следует учитывать при планировании эксперимента. Азиридин кофактором: концентрация 6BAz для маркировки ДНК с M.BseCI был 60 мкм. При использовании ?...

Удельный маркировка нуклеиновых кислот 1,2 и белков 3,4 представляет большой интерес для функциональных характеристик, медицинской диагностики и (нано) биотехнологии. Здесь мы представляем ферментативного метода маркировки для этих биополимеров, который основан на S -adenosyl-L-метионина (AdoMet или SAM) -зависимых метилтрансфераз (MTases). Этот класс ферментов (EC 2.1.1.) Цели отдельных нуклеофильные позиции (азот, кислород, сера и атомами углерода) в пределах конкретных остатков нуклеиновых кислот и белков, и, естественно, передает активированного метильной группы кофактора AdoMet (1А) 5. Кроме того, MTases могут использовать синтетические аналоги кофактором для конкретного маркировки со сродством теги, флуорофорами или других меток (рис 1б) 6. Два класса AdoMet аналогов были разработаны: Азиридин кофакторов для S equence специфической M ethyltransferase- I </strong&gt; Nduced L Абель Инг (улыбается) 7 и двухместные активированные аналоги AdoMet для м ethyltransferase-направленного T ransfer Л ctivated G roups (Мечел Трейдинг АГ) 8. <img alt="Рисунок 1" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" width="700" /> Рисунок 1: реакций, катализируемых метилтрансфераз (MTases) Групповой трансфер А. Метил из природного кофактора AdoMet (SAM) на различных подложках, включая ДНК, РНК, белков и малых биомолекул Б. Маркировка / функционализации нуклеиновых кислот и белков (NNNNN =.. пар оснований для ДНК, нуклеотиды РНК и аминокислот для белков; XXXXX = последовательность признание МТАазе с целевой остатка в зеленый) с синтетическими аналогами кофактора. Азиридин кофакторов содержащие репортер группу (синий шар)прикреплен к аденин кольце последовательность специально в сочетании с целевой остаток (слева) и дважды активируется аналогов AdoMet привести к передаче расширенных алкильных цепей, несущих Chemical Reporter Y (справа), которые могут быть помечены bioorthogonal реакции мыши на втором этапе. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.</a> Азиридин алгебраические лучше всего работают с ДНК MTases. Они содержат трехчленное кольцо с атомом азота 9 (или N -mustard 10,11) вместо сульфониевого центра, реактивная группа. Протонирование этого атома азота активирует Азиридиновое кольцо для нуклеофильной атаки по целевой нуклеотид, что приводит к ковалентного связывания всей кофактора с ДНК. Присоединив репортерных групп в кольце аденин азиридиновые кофакторы могут быть использованы в сочетании с ДНК MTases маркировать ДНК в одну стадию ( <stron<html> г&gt; Рисунок 1B, слева) 7,12. Это показано более подробно на биотинилирования ДНК с 6BAz 13 - 15 (азиридинового кофактора с биотином, прикрепленной к 6 положении кольца аденина) и аденин-специфической ДНК МТАазы из Bacillus stearothermophilus (M.BseCI) 16 (фиг.2, смотрите раздел протокола 2: один шаг маркировки ДНК с помощью азиридиновых кофакторов). В дополнение к M.BseCI (&#39;Sequence признание, ДНК MTases из Thermus адиайсиз (M.TaqI, 5&#39;-TCG -3 5&#39;-ATCG Т-3)&#39;), из Haemophilus heamolyticus (M.HhaI, 5 &#39;-g C GC-3&#39;) и от Spiroplasma (M.SssI, 5&#39;-C G-3 &#39;) были успешно использованы для biotinylate ДНК с 6BAz 17. Кроме того, азиридиновые кофакторы могут быть использованы для одностадийного маркировки флуоресценции ДНК 18,19. ontent &quot;FO: Keep-together.within-страницу =&quot; всегда &quot;&gt; <img alt="Рисунок 2" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" width="700" /> Рисунок 2:. Последовательность, специфичную один шаг биотинилирование ДНК с M.BseCI и 6BAz ДНК МТАазы M.BseCI распознает последовательность двухцепочечной ДНК 5&#39;-ATCG Т-3 &#39;и, естественно, метилирует аминогруппы второй аденина Остаток (зеленый) с помощью AdoMet. С азиридинового кофактора 6BAz ходом реакции изменяется и M.BseCI приводит к последовательностью, специфичной биотинилирование ДНК путем связывания всю кофактор в том числе биотин (синий) с целевой аденина. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.</a> Двойные активированные аналоги AdoMet содержат расширенные ненасыщенные боковые цепи вместо метильной группы в сульфониевого центра (рисунок 1b </stronг&gt;, справа) 20. Ненасыщенные двойную или тройную связь в β-положении к сульфониевых центра компенсирует неблагоприятные стерических эффектов в переходном состоянии от конъюгативного стабилизации. Так как сульфоний центр и ненасыщенные связи активировать боковую цепь для ферментативного переноса, эти алгебраические были названы дважды активированные аналоги AdoMet. Как правило, они используются для передачи боковые цепи с уникальными химических групп (химические репортеров), как и аминокислоты, алкинов и азид групп, для химико-селективный маркировки на втором этапе 8,21. В общем, двойные активированные аналоги AdoMet не может работать только в качестве кофакторов ДНК MTases 8,20,21, но и для РНК MTases 22,23 и белковых MTases 24 - 28 позволяет дополнительно маркировки РНК и белков. Тем не менее, расширенные боковые цепи являются стерически более жесткими, чем метильной группой и расширение МТАазы активные участки от белка инженерии частоан требуется для получения эффективных скорости передачи. Другое решение этой проблемы состоит в использовании аналога AdoMet с небольшим пропаргил группы (три атомов углерода), где терминал алкина выполняет две функции: 1. стабилизации переходного состояния во время передачи ферментативной и реактивной 2. ручкой для следующей химической модификации от медью катализируемой азид-алкин циклоприсоединения (CuAAC) нажмите химию. Выяснилось, что в результате пропаргиловой AdoMet аналог 29 является довольно нестабильны в нейтральной или слегка щелочной среде, и только ограниченное применение. Этот недостаток можно исправить, заменив атом серы с селеном. Полученный кофактором 5 &#39;- [(Se) [(3S) -3-амино-3-карбоксипропил] проп-2-ynylselenonio] -5&#39;-дезоксиаденозин (SeAdoYn, рисунок 3) принимается дикого типа ДНК, РНК, и белковые MTases 30 - 32, которые отменяют необходимость белковой инженерии во многих случаях. Это подтверждается флуоресценции про<html> белок маркировка с гистона H3 лизина 4 (H3K4) МТАазе Set7 / 9 33 (рис 3, смотрите раздел протокола 3: маркировка двухступенчатой ​​белка, с помощью двойного активированных кофакторов). <img alt="Рисунок 3" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig3highres.jpg" width="700" /> Рисунок 3:. Последовательность конкретных двухступенчатый флуоресценции маркировки гистона Н3 с Set7 / 9, SeAdoYn и TAMRA азид белок МТАазы Set7 / 9, естественно метилирует аминогруппы лизина 4 в гистона Н3 (H3K4, зеленый), используя AdoMet. С двойной активирована кофактора SeAdoYn МТАазы передает небольшой пропаргил группу (красный) до остатка лизина. Прилагается терминал тройная связь выборочно модифицировать в bioorthogonal реакции мыши (медно-катализируемой азид-алкин циклоприсоединения, CuAAC) азидной-производные TAMRA (тетраметилродамин, синий) флюорофора.нагрузка / 52014 / 52014fig3highres.jpg &quot;TARGET =&quot; _ пустое &quot;&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:139px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">6BAz</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Weinhold et al., Patent number US 8,129,106, published March 6, 2012.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">28625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acetic acid</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10304980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:139px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">16500100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ammonium persulfate (APS)</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">13375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bis-Tris</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Boric acid</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bromophenol blue Na salt</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right">15375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Copper(II) sulfate</td>
			<td style="width:139px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C1297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Chloroform</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right">10020090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Coomassie Brilliant Blue</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">17525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">EDTA disodium salt</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ethanol</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">100983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">GelRed (10000x in water)</td>
			<td style="width:139px;">Biotium</td>
			<td align="right" style="width:119px;">41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Glycerol (99.5%)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">FastRuler Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SM1103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Histone H3</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Philipp Voigt and Prof. Danny Reinberg; expression and isolation according to T. J. Richmond et al., J. Mol. Biol. 1997, 272, 301-311.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">M.BseCI</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Michael Kokkinidis; expression and isolation according to Kapetaniou et al., Acta Cryst. 2006, F63, 12-14.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Methanol</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10675112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Magnesiumchloride&#160; hexahydrate</td>
			<td style="width:139px;">J.T. Baker</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MOPS</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pH strip (Neutralit)</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1,095,330,001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pBR322</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SD0041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">R.TaqI (10u/&#181;l)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td>ER0671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SeAdoYn</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Willnow et al., ChemBioChem 2012, 13, 1167-1173.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Set7/9</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Prof. Danny Reinberg, expression and isolation according to D. Reinberg et al., Genes Dev.2002, 16, 479-489.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Streptavidin</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">(+)-Sodium L-ascorbate</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Life Science</td>
			<td style="width:119px;">A7631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SDS Granular</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">di-Sodiumhydrogenphosphat</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">106,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TAMRA-azide</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TaqI buffer (10x)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">B28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:245px;">N,N,N&#39;,N&#39;-Tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td style="width:139px;">Acros Organics</td>
			<td align="right" style="width:119px;">42058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-HCl</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-X (TRIS-base)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Tris(3-hydroxypropyltriazolyl-methyl)amine (THPTA)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">762342</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues

S -Adenosyl-L-метионин (AdoMet или SAM) зависимых метилтрансферазы (МТАазе) катализируют перенос активированного метильной группы от AdoMet к отдельным позициям в ДНК, РНК, белков и малых биомолекул. Это естественная реакция метилирования может быть расширена до широкого спектра реакций алкилирования с использованием синтетических аналогов кофактора. Замена реактивной сульфониевой центре AdoMet с Азиридиновое кольцо приводит к кофакторов, которые могут быть в сочетании с различными ДНК MTases ДНК. Эти кофакторы азиридиновые может быть оснащен репортерных групп в различных положениях аденина и используется для S equence конкретных М ethyltransferase- Я nduced л Abel Ing ДНК (ДНК улыбается). В качестве типичного примера приведем протокол для биотинилирования pBR322 плазмиды ДНК в последовательности 5&#39;-ATCG Т-3 &quot;с ДНК МТАазе M.BseCI и азиридинового кофактора 6BAz водин шаг. Расширение активированного метильной группы с ненасыщенных алкильных групп приводит к другому классу AdoMet аналогов, которые используются для м ethyltransferase-направленный Т ransfer Л ctivated G roups (MTAG). Поскольку расширенные боковые цепи активируются сульфониевой центра и ненасыщенной связи, эти кофакторы называются дважды активированные аналоги AdoMet. Эти аналоги не только в качестве кофакторов ДНК MTases, как азиридиновых кофакторов, но и для РНК, белков и малых MTases молекулы. Они обычно используются для модификации ферментативной МТАазы субстратов с уникальными функциональными группами, которые меченных репортерных групп во втором химическом этапе. Это видно на примере протокола для флуоресценции маркировки гистона H3 белка. Небольшой пропаргил группы передается от аналогового кофактором SeAdoYn с белком в гистона Н3 лизина 4 (H3K4) МТАазы Set7 / 9 с последующим щелчком маркировкиalkynylated гистонов H3 с TAMRA азида. МТАазе-опосредованной маркировки с кофактора аналогов технологией для многих интересных приложений, включая идентификацию и функциональный изучения МТАазе субстратов, а также генотипирования ДНК и обнаружения метилирования.

Один шаг Маркировка ДНК с помощью Азиридин кофакторами В этом примере реакцию проводят с ДНК МТАазы M.BseCI, который изменяет второй аденин остаток в 5&#39;-ATCG Т-3 &#39;последовательности двунитевой и имеет один сайт узнавания на плазмиде pBR322 (фиг.4А). Чтобы проверит...

Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues

ДНК и белки-последовательность специально помечены близости или люминесцентных репортер групп с использованием ДНК или белка-метилтрансферазы и синтетические аналоги кофактора. В зависимости от кофактора специфики ферментов, азиридина или двойных активированных аналогов кофактора используются для одно- или двухступенчатой ​​маркировки.

Последовательность конкретных Маркировка нуклеиновых кислот и белков с метилтрансферазы и кофактора аналогов

S-Adenosyl-l-methionine (AdoMet or SAM)-dependent methyltransferases (MTase) catalyze the transfer of the activated methyl group from AdoMet to specific ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue

Иммунофлуоресцентного Обнаружение два аналога тимидина (CldU и ПИН) в первичных тканей

Accurate measurement of cell division is a fundamental challenge in experimental biology that becomes increasingly complex when slowly dividing cells are ...

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

Профилирование метилтрансферазы и других S-Аденозил- L-Гомоцистеин-связывающих белков Захват соединения масс-спектрометрия (CCMS)

There is a variety of approaches to reduce the complexity of the proteome on the basis of functional small molecule-protein interactions such as affinity ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

NanoDrop микрообъеме Количественное определение нуклеиновых кислот

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Исследование конформационной динамики мембранных белков На месте С Сайт-направленный флуоресцентная маркировка

Two electrode voltage clamp electrophysiology (TEVC) is a powerful tool to investigate the mechanism of ion transport1 for a wide variety of membrane ...

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Lineage Маркировка данио рерио Клетки с лазерной Uncagable Fluorescein Декстран

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

Определение концентрации нуклеиновых кислот и белков Использование Micro объемом Био-спецификации Nano Спектрофотометр

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

ReAsH/FlAsH Labeling and Image Analysis of Tetracysteine Sensor Proteins in Cells

ReAsH / Flash Маркировка и анализ изображений белков Tetracysteine ​​датчика в клетках

Fluorescent proteins and dyes are essential tools for the study of protein trafficking, localization and function in cells.  While fluorescent 
proteins ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Метаболический Подтверждение пути и Discovery Через 13 C-маркировки протеиногенных Аминокислоты

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Измерительная ячейка Кинетика цикла прогрессии с метаболическим Маркировка и проточной цитометрии

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Analyzing and Building Nucleic Acid Structures with 3DNA

Анализ и построение структуры нуклеиновых кислот с 3DNA

The 3DNA software package is a popular and versatile bioinformatics tool with capabilities to analyze, construct, and visualize three-dimensional nucleic ...