Name: sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues
Uploaded: 2014-11-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

The authors thank Kerstin Glensk for preparing the MTases M.BseCI and Set7/9 and gratefully acknowledge funding by the Excellence Initiative of the German Federal and State Governments and RWTH Aachen University. The authors are happy to provide 6BAz and SeAdoYn or other cofactor analogues for collaborative research.

1. Genel Talimatlar <ol><li> Mağaza aziridin kofaktör (DMSO içinde) 6BAz ve protein MTase -80 ° C&#39;de Set7 / 9 ve çift aktif kofaktör SeAdoYn ve DNA MTase M.BseCI -20 ° C&#39;de (% 50 gliserol) da dahil olmak üzere diğer tüm reaktif maddeler. </li><li> Iyonu giderilmiş su içinde söndürme katsayısına ε 269nm (6BAz) = 16,000 cm -1 M 1 ve 260 nm ε (SeAdoYn) = 15.400 cm -1 M-1 kullanılarak UV / Vis spektroskopisi yoluyla 6BAz ve SeAdoYn ...

DNA MTases ve aziridin cofactors (gülümseyen DNA) ile DNA Bir adım etiketleme sağlam bir yöntemdir, ancak deney planlarken bazı yönleri dikkate alınmalıdır. Aziridin kofaktör: M.BseCI DNA etiketleme için 6BAz konsantrasyonu 60 uM idi. Diğer DNA MTases kullanırken kofaktör konsantrasyonu düşük 20 gibi uM DNA MTase M.TaqI 19 kullanılmıştır, örneğin konsantrasyonları optimize edilmelidir. Düşük 6BAz konsantrasyonları streptavidin (tahlil...

Nükleik asitler ve proteinlerin 1,2 3,4 Özgül etiketleme fonksiyonel karakterizasyonlar, tıbbi teşhis ve (nano) biyoteknoloji için önemli ilgi alanıdır. Burada S -adenosyl-L-metionin (AdoMet veya SAM) bağlı metiltransferaz (MTases) dayanır, bu biyopolimerler için enzimatik bir etiketleme yöntemi sunulmaktadır. Bu enzim sınıfının (EC 2.1.1.), Nükleik asitlerin ve proteinlerin belirli artıkların tek tek nükleofilik pozisyonlar (nitrojen, oksijen, kükürt ve karbon atomu) yönelik olarak ve doğal olarak kofaktör AdoMet (Şekil 1A) 5 aktive metil grubunu aktarır. Buna ek olarak, MTases afinite etiketleri, floroforlar veya diğer etiketler (Şekil 1B) 6 belirli etiketleme için sentetik kofaktör analoglarını kullanabilir. AdoMet analoglarının iki sınıfı geliştirilmiştir: S Sequence özgü M ethyltransferase- I Aziridin kofaktörleri </strong&gt; Nduced L abel ing (gülümseyerek) 7 ve A ctivated G grupların aldığı m ethyltransferase-yönettiği T ransfer çift aktive AdoMet analogları (Mtag) 8. <img alt="Şekil 1," fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" width="700" /> Şekil 1.:. Metiltransferaz (MTases), DNA, RNA, proteinler ve küçük biyomoleküller dahil olmak üzere çeşitli yüzeyler için doğal kofaktör AdoMet (SAM) A. Metil grup transfer nükleik asitlerin ve proteinlerin B. Etiketleme / işlevselleştirme (NNNNN = katalize reaksiyonlar proteinler için RNA, ve amino asitler için temel DNA çiftleri, nükleotitler sentetik kofaktör analogları ile yeşil hedef tortu) ile MTase xxxxx = tanıma sekansı. Bir raportör grubu içeren Aziridin kofaktör (mavi küre)özellikle de hedef tortu (sol) ve iki aktif AdoMet analogları ile birlikte dizi adenin halkası olan bağlı bir ikinci aşamada bioorthogonal Click reaksiyonu ile etiketlenebilir, bir kimyasal raportör Y (sağ) taşıyan uzatılmış alkil zincirlerinin aktarmak yol açar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Aziridin kofaktör DNA MTases en iyi çalışır. Bir azot atomu 9 (veya bunun bir N 10,11 -mustard) yerine, sülfonyum merkezi olarak bir reaktif grup ile üç unsurlu bir halka ihtiva etmektedir. Bu nitrojen atomu protonlanma DNA ile bütün kofaktör bağlanması kovalent neden hedef nükleotid nükleofilik saldırı aziridin halkası aktive eder. Adenin halkasına raportör grupları takılarak aziridin kofaktörler (bir aşamada DNA etiket DNA MTases ile kombinasyon halinde de kullanılabilir <stron<html> g&gt; Sol Şekil 1B) 7,12. 15 (adenin halkasının 6 konumuna bağlı biyotin ile aziridin kofaktör) ve Bacillus stearothermophilus&#39;dan adenin özgü DNA MTase (M.BseCI) 16 (Şekil 2 - Bu 6BAz 13 DNA biyotinilasyon için detaylı olarak gösterilmektedir ) DNA&#39;nın Bir adım etiketleme aziridin kofaktörlerinin yoluyla: protokol bölümüne 2 bkz. Haemophilus heamolyticus gelen M.BseCI (5&#39;-ATCG T-3 &#39;tanıma sekansı), yani Thermus aquaticus (M.TaqI, 5&#39;-TCG bir -3 DNA MTases&#39;), ek olarak (M.HhaI, 5 &#39;-G Cı GC-3&#39;) ve Spiroplasma (M.SssI gelen 5&#39;-C G-3 &#39;), başarılı bir şekilde 6BAz 17 ile DNA biotinylate için kullanılmıştır. Ayrıca, aziridin kofaktörler tek aşamalı floresan DNA etiketleme 18,19 için kullanılabilecektir. ontent &quot;fo: keep-together.within-sayfa =&quot; always &quot;&gt; <img alt="Şekil 2," fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" width="700" /> Şekil 2:. M.BseCI ve 6BAz ile DNA sekansa özel tek-aşamalı biyotinilasyon DNA MTase M.BseCI çift bükümlü DNA dizisi 5&#39;-ATCG T-3 &#39;tanır ve doğal olarak, ikinci adenin amino grubunun metile Kalıntı (yeşil) AdoMet kullanarak. Aziridin kofaktör 6BAz ile reaksiyona ders değiştirilir ve M.BseCI hedef adenin ile biyotin (mavi) dahil olmak üzere tüm kofaktör birleştirilmesi ile spesifik DNA biyotinilasyonunu sırası yol açar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52014/52014fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Çift aktif AdoMet analogları doymamış yan zincirleri yerine sülfonyum merkezinde bir metil grubunu (Şekil 1B genişletilmiş içeren </strong&gt;, sağ) 20. sülfonyum merkezine β-konumunda doymamış çift veya üçlü bağ elektronik konjugatif istikrar ile geçiş devlet içinde olumsuz etkileri sterik dengeler. Sülfonyum merkezi ve doymamış bağ hem de enzimatik transferi için yan zinciri etkinleştirmek için, bu kofaktör çift aktive AdoMet analogları adlandırılmıştır. Tipik haliyle, bir ikinci aşamada 8,21 olarak kemo-seçici etiketleme, amino, alkin ve asit grupları gibi benzersiz kimyasal grupların (kimyasal muhabir) ile yan zincirleri aktarmak için kullanılır. RNA ve protein ek etiketleme sağlayan 28 - Genel olarak, iki aktif AdoMet analogları RNA MTases 22,23 DNA MTases 8,20,21 için değil, aynı zamanda yardımcı faktörler ve protein MTases 24 gibi yalnızca işlev görebilir. Ancak, genişletilmiş yan zincirler sterik daha bir metil grubu daha zorlu ve mühendislik sık sık bir protein MTase aktif siteleri büyütme vardırtr verimli aktarım hızları elde etmek için gerekli. Bakır kimyasal değişiklikler aşağıdaki için enzimatik transferi sırasında geçiş devletin 1. Sabitleme ve 2. reaktif kolu: Bu sorunun başka bir çözüm, küçük bir propargil terminali alkin iki fonksiyonu vardır grup (üç karbon) ile bir AdoMet analog kullanmak için katalize azid-alkin sikloadisyonu (CuAAC) kimyasını tıklayın. Bu Oluşan proparjilik AdoMet analog 29 nötr veya hafif bazik koşullar altında ve sadece sınırlı kullanımı oldukça kararsız olduğu ortaya çıktı. Bu dezavantajı selenyum ile kükürt atomu yerine sabit olabilir. Elde edilen kofaktör 5 &#39;- [(Se) [(3 S) -3-amino-3-karboksipropil] prop-2-ynylselenonio] -5&#39;-deoksiadenozin (SeAdoYn, Şekil 3) ile, vahşi tip DNA tarafından kabul edilir, RNA, ve protein MTases 30 - birçok durumda protein mühendisliği ihtiyacını ortadan kaldırmaz 32. Bu floresan pro ile tarif edilmektedir<html> histon H3 lizin ile tein etiketleme 4 (H3K4) MTase Set7 / 9 33 (: çift aktif kofaktör aracılığıyla İki aşamalı protein etiketleme Şekil 3, protokol bölümüne 3). <img alt="Şekil 3," fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/52014/52014fig3highres.jpg" width="700" /> Şekil 3:. Set7 / 9 histon H3 diziye özel iki-aşamalı floresan etiketleme, SeAdoYn ve TAMRA azid proteini MTase Set7 / 9 doğal AdoMet ile histon H3 lizin 4 amino grubunun (H3K4, yeşil) bileşi. Çift aktif kofaktör ile SeAdoYn MTase lisin kalıntıya küçük bir propargil grubu (kırmızı) aktarır. bağlı uç üçlü bağ daha sonra seçici azid türevlendirilmemiş TAMRA (tetrametilrodamin, mavi) florofor ile bioorthogonal click reaksiyonunun (bakır ile katalize edilen azit-alkin siklo, CuAAC) değiştirilir.yük / 52.014 / 52014fig3highres.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="669">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:139px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">6BAz</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Weinhold et al., Patent number US 8,129,106, published March 6, 2012.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">28625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acetic acid</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10304980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:139px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:119px;">16500100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ammonium persulfate (APS)</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">13375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bis-Tris</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Boric acid</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bromophenol blue Na salt</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right">15375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Copper(II) sulfate</td>
			<td style="width:139px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C1297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Chloroform</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right">10020090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Coomassie Brilliant Blue</td>
			<td style="width:139px;">Serva</td>
			<td align="right" style="width:119px;">17525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">EDTA disodium salt</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Ethanol</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">100983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">GelRed (10000x in water)</td>
			<td style="width:139px;">Biotium</td>
			<td align="right" style="width:119px;">41003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Glycerol (99.5%)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">FastRuler Low Range DNA Ladder</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SM1103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Histone H3</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Philipp Voigt and Prof. Danny Reinberg; expression and isolation according to T. J. Richmond et al., J. Mol. Biol. 1997, 272, 301-311.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">M.BseCI</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Dr. Michael Kokkinidis; expression and isolation according to Kapetaniou et al., Acta Cryst. 2006, F63, 12-14.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Methanol</td>
			<td style="width:139px;">Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">10675112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Magnesiumchloride&#160; hexahydrate</td>
			<td style="width:139px;">J.T. Baker</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">MOPS</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pH strip (Neutralit)</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1,095,330,001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">pBR322</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SD0041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">R.TaqI (10u/&#181;l)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td>ER0671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SeAdoYn</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Synthesized according to Willnow et al., ChemBioChem 2012, 13, 1167-1173.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Set7/9</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Expressionplasmid obtained from Prof. Danny Reinberg, expression and isolation according to D. Reinberg et al., Genes Dev.2002, 16, 479-489.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Streptavidin</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">3058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">(+)-Sodium L-ascorbate</td>
			<td style="width:139px;">Sigma Life Science</td>
			<td style="width:119px;">A7631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">SDS Granular</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">di-Sodiumhydrogenphosphat</td>
			<td style="width:139px;">Merck</td>
			<td align="right" style="width:119px;">106,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TAMRA-azide</td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">TaqI buffer (10x)</td>
			<td style="width:139px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">B28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:245px;">N,N,N&#39;,N&#39;-Tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td style="width:139px;">Acros Organics</td>
			<td align="right" style="width:119px;">42058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-HCl</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tris-X (TRIS-base)</td>
			<td style="width:139px;">Gerbu</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Tris(3-hydroxypropyltriazolyl-methyl)amine (THPTA)</td>
			<td style="width:139px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right" style="width:119px;">762342</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sequence-specific labeling of nucleic acids and proteins with methyltransferases and cofactor analogues

S -Adenosyl-L-metionin (AdoMet veya SAM) bağlı metiltransferaz (MTase) DNA, RNA, proteinler ve küçük biyomoleküller belirli konumlara AdoMet aktive metil grubu transferini katalize eder. Bu doğal metilasyon reaksiyonu sentetik kofaktör analoglarını kullanarak alkilasyon reaksiyonları de çok çeşitli genişletilebilir. Bir aziridin halkası ile AdoMet reaktif sülfonyum merkezi değiştirilmesi çeşitli DNA MTases ile DNA ile birleştirilebilir kofaktörler yol açar. Bu aziridin kofaktörler adenin parçasının farklı pozisyonlarda raportör grup ile donatılmıştır ve DNA (Smiling DNA) L Abel ing nduced ethyltransferase- S Sequence özgü M kullanılabilir. Tipik bir örnek olarak, DNA MTase M.BseCI ve aziridin kofaktör 6BAz içinde olan 5&#39;-ATCG T-3 &#39;dizisi bir pBR322 plazmid DNA biyotinilasyon için bir protokol eldebir adım. Bir ctivated G grupların aldığı (Mtag) m ethyltransferase-yönettiği T ransfer için kullanılan AdoMet benzerlerinin başka bir sınıf doymamış alkil grupları sonuçları ile aktive edilmiş bir metil grubunun çıkarılması. Uzun yan zincirler sülfonyum merkezi ve doymamış bağ ile aktive olduğundan, bu kofaktörler çift aktif AdoMet analogları olarak adlandırılır. Bu analoglar aziridin kofaktörlerinin gibi DNA MTases için kofaktör olarak işlev, aynı zamanda RNA, protein ve küçük molekül MTases için değil sadece. Bunlar tipik olarak ikinci bir kimyasal aşama raportör grup ile etiketlenmiş olan eşsiz fonksiyonel gruplarla MTase substratların enzimatik modifikasyonu için kullanılır. Bu histon H3 proteinin floresan etiketlemesi için bir protokol örneklenmiştir. Küçük bir propargil grubu tıklama etiketleme ardından histon H3 lizin 4 (H3K4) MTase Set7 / 9 ile proteine ​​kofaktör analog SeAdoYn aktarılırTAMRA azit ile alkynylated histon H3. Kofaktör analoglarıyla MTase aracılı etiketleme tanımlanması ve fonksiyonel çalışma MTase alt tabakalar hem de DNA genotiplemesi ve metilasyon tespiti de dahil olmak üzere pek çok verici uygulama için elverişli bir teknolojidir.

Aziridin kofaktörlerinin yoluyla DNA&#39;nın Bir adım Etiketleme Bu örnek, reaksiyon, çift kollu bir 5&#39;-ATCG T-3 &#39;dizisi içindeki ikinci adenin kalıntısı değiştirir ve pBR322 plazmidi (Şekil 4A) ilgili bir tanıma sitesi vardır DNA MTase M.BseCI ile gerçekleştirilir. Plazmid etiketleme test etmek için, pBR322 kısıtlama endonükleaz (artma) R.TaqI (5&#39;-TCGA-3 &#39;) ile tehdit edildi. R.TaqI M.BseCI sitede yer alan bunlar...

Watch this Scientific Journal Video about Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues at JoVE.com

Sequence-specific Labeling of Nucleic Acids and Proteins with Methyltransferases and Cofactor Analogues

DNA ve proteinler dizi-spesifik afinite ya da DNA ya da protein Methyltransferases sentetik kofaktör analogları kullanılarak flüoresan raportör grup ile etiketlenir. Enzimler, aziridin veya çift aktif kofaktör benzerlerinin kofaktör özelliğine göre bir veya iki adım etiketleme için kullanılmaktadır.

Methyltransferases ve Kofaktör Analoglarının ile Nükleik Asitler ve Proteinler Dizi-spesifik Etiketleme

S-Adenosyl-l-methionine (AdoMet or SAM)-dependent methyltransferases (MTase) catalyze the transfer of the activated methyl group from AdoMet to specific ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue

İlköğretim Doku İki timidin analogları Immunofluorescent Algılama (CldU ve IDU)

Accurate measurement of cell division is a fundamental challenge in experimental biology that becomes increasingly complex when slowly dividing cells are ...

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry (CCMS)

Profiling of Methyltransferases and Other S-adenosyl-L-homocysteine-binding Proteins by Capture Compound Mass Spectrometry CCMS

Methyltransferases, profilleme ve Diğer S Adenosil- L</subYakalama Bileşik Kütle Spektrometresi (CCMS)> homosistein bağlayıcı Proteinler

There is a variety of approaches to reduce the complexity of the proteome on the basis of functional small molecule-protein interactions such as affinity ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

Nükleik Asitlerin NanoDrop Microvolume kantitasyonu

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Examining the Conformational Dynamics of Membrane Proteins in situ with Site-directed Fluorescence Labeling

Membran Proteinleri Konformasyonel Dynamics incelenmesi In situ Site Floresan Etiketleme

Two electrode voltage clamp electrophysiology (TEVC) is a powerful tool to investigate the mechanism of ion transport1 for a wide variety of membrane ...

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Lazer Uncagable Floresein Dextran&#39;ın Zebra balığı Hücre Lineage Etiketleme

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

Konsantrasyon belirlenmesi Micro hacimli Bio-spec Nano Spektrofotometre Nükleik Asitler ve Proteinler

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

ReAsH/FlAsH Labeling and Image Analysis of Tetracysteine Sensor Proteins in Cells

ReAsH / Flash Etiketleme ve Hücreler Tetracysteine ​​Sensör Proteinlerin Görüntü Analizi

Fluorescent proteins and dyes are essential tools for the study of protein trafficking, localization and function in cells.  While fluorescent 
proteins ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Sayesinde Metabolik Pathway Onay ve Keşif 13</supAminoasittir> C-etiketleme

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Metabolik Etiketleme ve Flow Sitometri ile Hücre Döngüsü İlerleme Kinetik Ölçüm

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Analyzing and Building Nucleic Acid Structures with 3DNA

3DNA ile Nükleik Asit Yapıları analiz ve Yapı

The 3DNA software package is a popular and versatile bioinformatics tool with capabilities to analyze, construct, and visualize three-dimensional nucleic ...