Name: stereological and flow cytometry characterization of leukocyte subpopulations in models of transient or permanent cerebral ischemia
Uploaded: 2014-12-28T15:00:00
Duration: 12 min 42 s
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This work was supported by grants from the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness CSD2010-00045 (MAM), SAF2012-33216 (MAM), SAF2011-23354 (IL) and RENEVAS RD06/0026/0005 (IL), and from the Local Government of Madrid S2010/BMD-2336 (MAM) and S2010/BMD-2349 (IL). IB and MIC are fellows of the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness.

<ol>
	<li>Chamorro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+acute+stroke.">The immunology of acute stroke.</a> Nature Reviews. Neurology. 8, 401-410 (2012).</li><li>Iadecola, C., Anrather, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunology+of+stroke:+from+mechanisms+to+translation.">The immunology of stroke: from mechanisms to translation.</a> Nat Med. 17, 796-808 (2011).</li><li>Ramlackhansingh, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+after+trauma:+microglial+activation+and+traumatic+brain+injury.">Inflammation after trauma: microglial activation and traumatic brain injury.</a> Annals of Neurology. 70, 374-383 (2011).</li><li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke:+role+of+inflammatory+cells.">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87, 779-789 (2010).</li><li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+thesubdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator.">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> The Anatomical Record. 231, 482-497 (1991).</li><li>Charleston, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+cell+number+in+the+central+nervous+system+by+stereological+methods:+the+optical+disector+and+fractionator.">Estimating cell number in the central nervous system by stereological methods: the optical disector and fractionator.</a> Current Protocols in Toxicology. 12 (Unit 12.6), (2001).</li><li>Begega, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+estimation+of+the+total+number+of+nervous+cells+and+volume+of+medial+mammillary+nucleus+in+humans.">Unbiased estimation of the total number of nervous cells and volume of medial mammillary nucleus in humans.</a> Experimental Gerontology. 34, 771-782 (1999).</li><li>Cuartero, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N2+Neutrophils,+Novel+Players+in+Brain+Inflammation+After+Stroke:+Modulation+by+the+PPARgamma+Agonist+Rosiglitazone.+Stroke;+a.">N2 Neutrophils, Novel Players in Brain Inflammation After Stroke: Modulation by the PPARgamma Agonist Rosiglitazone. Stroke; a.</a> Journal of Cerebral Circulation. 44 (12), 3498-3508 (2013).</li><li>Campanella, M., Sciorati, C., Tarozzo, G., Beltramo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+inflammatory+cells+in+ischemic+rat+brain.">Flow cytometric analysis of inflammatory cells in ischemic rat brain.</a> Stroke. 33, 586-592 (2002).</li><li>Carson, M. J., Reilly, C. R., Sutcliffe, J. G., Lo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mature+microglia+resemble+immature+antigen-presenting+cells.">Mature microglia resemble immature antigen-presenting cells.</a> Glia. 22, 72-85 (1998).</li><li>Perego, C., Fumagalli, S., De Simoni, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+pattern+of+expression+and+colocalization+of+microglia/macrophage+phenotype+markers+following+brain+ischemic+injury+in+mice.">Temporal pattern of expression and colocalization of microglia/macrophage phenotype markers following brain ischemic injury in mice.</a> J Neuroinflammation. 8, 174 (2011).</li><li>Denker, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+comprised+of+resident+brain+microglia+not+infiltrating+peripheral+monocytes+acutely+after+neonatal+stroke.">Macrophages are comprised of resident brain microglia not infiltrating peripheral monocytes acutely after neonatal stroke.</a> Journal of Neurochemistry. 100, 893-904 (2007).</li><li>Ballesteros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rosiglitazone-induced+CD36+up-regulation+resolves+inflammation+by+PPARgamma+and+5-LO-dependent+pathways.">Rosiglitazone-induced CD36 up-regulation resolves inflammation by PPARgamma and 5-LO-dependent pathways.</a> Journal of Leukocyte Biology. 95 (4), 587-598 (2013).</li><li>Michel, R. P., Cruz-Orive, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+the+Cavalieri+principle+and+vertical+sections+method+to+lung:+estimation+of+volume+and+pleural+surface+area.">Application of the Cavalieri principle and vertical sections method to lung: estimation of volume and pleural surface area.</a> J Microsc. 150, 117-136 (1988).</li><li>Hern&#225;ndez-Jim&#233;nez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silent+Information+Regulator+1+Protects+the+Brain+Against+Cerebral+Ischemic+Damage.">Silent Information Regulator 1 Protects the Brain Against Cerebral Ischemic Damage.</a> Stroke. 44 (8), 2333-2337 (2013).</li><li>Gundersen, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+stereological+tools:+disector,+fractionator,+nucleator+and+point+sampled+intercepts+and+their+use+in+pathological+research+and+diagnosis.">The new stereological tools: disector, fractionator, nucleator and point sampled intercepts and their use in pathological research and diagnosis.</a> APMIS. 96, 857-881 (1988).</li><li>Godino, M. E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+ischemic+brain+damage+by+peritoneal+dialysis.">Amelioration of ischemic brain damage by peritoneal dialysis.</a> J Clin Invest. 123, 4359-4363 (2013).</li><li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia:+implications+for+translational+stroke+research.">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32, 1310-1316 (2012).</li><li>Garc&#237;a-Y&#233;benes, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+overload,+measured+as+serum+ferritin,+increases+brain+damage+induced+by+focal+ischemia+and+early+reperfusion.">Iron overload, measured as serum ferritin, increases brain damage induced by focal ischemia and early reperfusion.</a> Neurochem Int. 61, 1364-1369 (2012).</li><li>Sobrado, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+lipoxin+A4+by+5-lipoxygenase+mediates+PPARgamma-dependent,+neuroprotective+effects+of+rosiglitazone+in+experimental+stroke.">Synthesis of lipoxin A4 by 5-lipoxygenase mediates PPARgamma-dependent, neuroprotective effects of rosiglitazone in experimental stroke.</a> J Neurosci. 29, 3875-3884 (2009).</li><li>Cuartero, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N2+Neutrophils,+Novel+Players+in+Brain+Inflammation+After+Stroke:+Modulation+by+the+PPAR&#947;+Agonist+Rosiglitazone.">N2 Neutrophils, Novel Players in Brain Inflammation After Stroke: Modulation by the PPAR&#947; Agonist Rosiglitazone.</a> Stroke. 44, 3498-3508 (2013).</li><li>Ford, A. L., Foulcher, E., Goodsall, A. L., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+digestion+with+dispase+substantially+reduces+lymphocyte+and+macrophage+cell-surface+antigen+expression.">Tissue digestion with dispase substantially reduces lymphocyte and macrophage cell-surface antigen expression.</a> Journal of Immunological Methods. 194, 71-75 (1996).</li><li>Pfenninger, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133+is+not+present+on+neurogenic+astrocytes+in+the+adult+subventricular+zone,+but+on+embryonic+neural+stem+cells,+ependymal+cells,+and+glioblastoma+cells.">CD133 is not present on neurogenic astrocytes in the adult subventricular zone, but on embryonic neural stem cells, ependymal cells, and glioblastoma cells.</a> Cancer Research. 67, 5727-5736 (2007).</li><li>Tham, C. S., Lin, F. F., Rao, T. S., Yu, N., Webb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+activation+state+and+lysophospholipid+acid+receptor+expression.">Microglial activation state and lysophospholipid acid receptor expression.</a> International Journal of Developmental Neuroscience : the Official Journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 21, 431-443 (2003).</li><li>Nikodemova, M., Watters, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+isolation+of+live+microglia+with+preserved+phenotypes+from+adult+mouse+brain.">Efficient isolation of live microglia with preserved phenotypes from adult mouse brain.</a> Journal of Neuroinflammation. 9, 147 (2012).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

El modelo de isquemia cerebral introducido aquí da los volúmenes de infarto altamente reproducibles determinaron 24-48 horas y 7 días después de la ligadura de MCA por diferentes enfoques 8,15,17. Este modelo MCAO tiene una tasa de mortalidad baja (menos del 1%) en comparación con otros, minimizando el número de animales utilizados en los estudios. Un paso crítico para obtener esta baja tasa de mortalidad es de asepsia adecuadas para evitar las infecciones que pudieran afectar la supervivencia después del accidente cerebrovascular inducción. Este modelo MCAO no sólo se puede utilizar como un modelo MCAO permanente, que se considera un modelo relevante para la investigación clínica de traslación 18, sino también como un modelo transitorio por la ligadura transitoria de la CCA y MCA con un nudo corredizo y la reperfusión posterior en el tiempo deseado 19. Este método ha sido utilizado con éxito en ratones y ratas 17,20. Todo esto evidencia indica que MCAO por la ligadura es un modelo versátil alta de la isquemia cerebral con múltiples aplicaciones. Un critiCal paso de esta técnica es que requiere cirugía invasiva bajo un microscopio estereoscópico; la craneotomía debe realizarse con mucho cuidado para no dañar el hueso cigomático, así como la MCA. Sin embargo, (no se realiza que están sometidos a la técnica quirúrgica sino CCA y MCA ligadura) el uso de animales de simulación proporciona una herramienta útil para discriminar los efectos del procedimiento dependiente quirúrgicos. La extensión de la lesión cerebral después de esta técnica puede ser cuantificada por varios métodos. Nuestro protocolo de seccionamiento cerebro, la tinción de Nissl y posterior estimación del volumen por Cavalieri permite una cuantificación exacta de la región dañada y minimiza el número de ratones utilizados en este tipo de estudios, ya que las secciones del cerebro de serie también se pueden utilizar para diferentes análisis inmunohistoquímico. Para un mejor rendimiento de esta metodología, es fundamental para elegir los parámetros adecuados utilizados en el software estereología (Tabla 1), que será necesario para la estimación ªe volumen de las diferentes regiones por la fórmula: V = 1 / SSF * a * f * t ΣP i (SSF es la fracción de muestreo rebanada, t es el espesor medio de las secciones, una f es el área de la separación de la red y ΣP el número de puntos que golpean la estructura). El MCAO distal por la ligadura puede ser útil para caracterizar los leucocitos infiltrados y subpoblaciones de células inmunes 8,13 que participan en el proceso inflamatorio después de una lesión cerebral 1-4. Aquí, se proponen dos metodologías diferentes para la caracterización de las células inmunes del cerebro, un enfoque estereológico precisa y un análisis de citometría de flujo para una mejor caracterización de varias subpoblaciones de leucocitos. Tomando ventaja de seccionamiento cerebro de serie, la cuantificación del número total de neutrófilos se puede lograr por el método del fraccionador óptico 16, que estima el número total de células a partir del número de células en la muestra del ingenioha muestreo aleatorio (SRS) conjunto sistemático de espacios virtuales imparciales de conteo que cubren toda la región de interés, en nuestro caso la región del infarto, con una distancia uniforme entre los espacios virtuales de conteo imparciales en las direcciones X, Y y Z. Este método proporciona una herramienta precisa para estimar el número total de neutrófilos en el cerebro isquémico en diferentes momentos después de la ligadura. Aunque no se ha demostrado en este estudio, este protocolo también se puede utilizar para la estimación de las diferentes subpoblaciones de neutrófilos después de la isquemia y 21 para una cuantificación exacta de cualquier otra población de células que se encuentra en el cerebro isquémico como otros leucocitos infiltrados (monocitos / macrófagos) así como la estimación neuronas supervivientes o incluso para la cuantificación neurogénesis después del accidente cerebrovascular. El paso más importante para una estimación precisa en el área deseada es la selección de los parámetros adecuados, como los que se muestran en la Tabla 3 para la cuantificación de los neutrófilos en la zona isquémica.Estos parámetros se utilizan para que el software estereología para calcular el número total de células positivas (N) mediante el uso de la ecuación N = ΣQ- x 1 / ssf x 1 / asf x 1 / TSF (ΣQ- es el número total de células contadas con fraccionador, ssf es la fracción de muestreo sección, asf es el área fracción de muestreo, y TSF es el espesor fracción de muestreo) 5. Aunque esta metodología es más lenta que otras técnicas de cuantificación (por ejemplo, el análisis de marcadores de los neutrófilos por mg de tejido, densitometría de imágenes o el número de neutrófilos por campo de representación), tiene la ventaja de ser un imparcial y una técnica sólida que proporciona una precisa la cuantificación del número de células. El enfoque de aislamiento de leucocitos cerebro permite una identificación y cuantificación simultánea de varios subtipos de células inmunes sin la necesidad de sesgo del sistema por tinción in vivo o manipulaciones genéticas. Tras la clasificación celular de la p mieloide caracterizadoopulations o su separación inmunomagnética se pueden utilizar para múltiples aplicaciones posteriores, tales como nuevos estudios sobre expresión de genes o proteínas. La caracterización precisa de neutrófilos, monocitos y microglía obtenido con este método proporciona una alta especificidad con respecto a los métodos existentes, tales como los estudios de inmunohistoquímica, una ventaja que permite la asignación de funciones específicas a las diferentes células mieloides que median cerebro respuesta inmune innata. Además, se puede ampliar aún más para caracterizar otras poblaciones cerebrales con la etiqueta apropiada, como sangre nacido macrófagos (CD11b + CD45 hi CD68 +), y se puede aplicar para el estudio de otras patologías del SNC o lesiones. Por lo tanto, esta técnica proporciona una herramienta esencial para explorar la heterogeneidad de la respuesta inflamatoria en el cerebro. Una limitación principal de esta técnica reside en la preparación de las suspensiones de leucocitos a partir de tejido cerebral fresco, que puede alterar laestado de activación de las células o su alteración antígeno. Aunque esta técnica permite una caracterización cualitativa más detallada en comparación con los estudios inmunohistoquímicos, que proporciona una cuantificación precisa menos basado en el aislamiento de células. A pesar de esto, la eficacia de nuestro protocolo de aislamiento de células es similar a otras metodologías publicadas 9 y puede ser utilizado de manera eficiente para detectar diferencias en el número de células inmunes del cerebro entre el control y los grupos de MCAO o incluso entre los grupos MCAO sometidas a diferentes tratamientos 8. Los pasos críticos de este protocolo son la disección del tejido, el procedimiento de interrupción del tejido, y la retirada de mielina. En cuanto a la recogida de tejidos, una etapa de normalización puede ser incluido (pesando el tejido recogido) para evitar la variabilidad debido a las diferentes actuaciones de disección. Además, la normalización entre los diferentes grupos MCAO también puede ocurrir a través de el volumen de infarto (determinado previamente por Magnetic Resonance). Otra manera de resolver este problema es utilizar todo el hemisferio ipsilateral de ambos grupos isquémicos y de control, o incluso usar el hemisferio contralateral del ratón isquémico como un control para minimizar el número de animales utilizados. Si bien este enfoque evita diferencias entre cada disección, tiene una desventaja principal; un factor de dilución se añade mediante el aumento del número total de células, pero no el número de células mieloides que se encuentran exclusivamente en las áreas centrales y peri-infarto de la corteza ipsilateral. En cuanto a la interrupción del tejido, este protocolo ilustra los pasos para la ruptura mecánica de las células del cerebro, evitando tratamientos enzimáticos y prevenir antígeno de superficie alteración 9,22, una cuestión esencial para su posterior análisis cualitativo y cuantitativo de las subpoblaciones de células inflamatorias. Además de la preparación de la suspensión celular de interés, la eliminación de mielina de muestras de cerebro es un paso muy recomendable para evitar interferencias con downstresma aplicaciones, tales como la separación de células inmunomagnética o citometría de flujo 23,24. Esto se puede lograr usando diferentes métodos, como sacarosa o gradientes de Percoll, o perlas anti-mielina. Aquí, y en base a estudios previos que comparan diferentes métodos para el aislamiento de suspensión de células del cerebro, rotura mecánica en combinación con el uso de Percoll para eliminar la mielina se utiliza para mejorar el rendimiento y la viabilidad celular 25.

Morfológicas, fenotípicas y alteraciones de la expresión génica de microglia, así como la extravasación y la activación de los macrófagos y neutrófilos hematógenas se cree que desempeñan un papel fundamental en la cascada fisiopatológica después de una lesión cerebral 1-4. Este protocolo proporciona dos métodos para estimar el número de diferentes subconjuntos de células mieloides del cerebro isquémico y para llevar a cabo su caracterización fenotípica. Además, también proporciona una descripción de un modelo experimental de isquemia cerebral en ratones, que consiste en la ligadura transitoria o permanente de la arteria cerebral media tanto distal (MCA) y la arteria carótida común (CCA), incluyendo la forma de evaluar el infarto por el método de Cavalieri precisa el uso de un software estereológico. El primer enfoque para caracterizar subconjuntos de células mieloides del cerebro isquémico es un método estereológico basado en el enfoque fraccionador óptico 5. Este es el máscomúnmente utilizado sonda estereológico en ciencias de la vida y proporciona un alto grado de precisión con bajos coeficientes de error 5-7. Esta es la mejor opción para la cuantificación de células cuando el tejido se corta en secciones, ya que evita el sesgo en la estimación de la célula debido a la fragmentación del tejido en secciones. Este método es una forma muy poderosa para caracterizar los números, la dinámica y los cambios fenotípicos de las subpoblaciones de neutrófilos infiltrados del tejido isquémico 8. El segundo enfoque se basa en la caracterización de un protocolo modificado de Campanella y colaboradores 9 que proporciona una manera simple para aislar suspensiones de leucocitos cerebrales y caracterizarlos por citometría de flujo. En contraste con las técnicas de inmunohistoquímica convencionales, citometría de flujo caracterización permite diferenciar entre microglia (CD45 lo CD11b +) y se infiltró células mieloides (CD45 hi CD11b +) en función de su difflos niveles de expresión de CD45 erent 9-13. Además, los monocitos proinflamatorios (CD45 hi CD11b + Ly-6G - hi Ly-6C), neutrófilos (CD45 hi CD11b + Ly-6G +) y otros leucocitos subconjuntos del tejido isquémico se pueden distinguir. Este enfoque proporciona un ensayo rápido y fiable para evaluar la neuroinflamación en modelos experimentales de isquemia cerebral. Sin embargo, el procesamiento de tejido puede influir en el estado de activación y los números de las diferentes poblaciones de células que se encuentran en el tejido isquémico proporcionar una caracterización semi-cuantitativa.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1018">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:215px;">Company</td>
			<td style="width:215px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:215px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Photonic Led F1</td>
			<td style="width:215px;">WPI</td>
			<td style="width:215px;">571329-8</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Temp Controller&#160;</td>
			<td style="width:215px;">Panlab&#160;</td>
			<td style="width:215px;">HB 101/2</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Volvere GX</td>
			<td style="width:215px;">NSK</td>
			<td style="width:215px;">Ne22L</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Microscope</td>
			<td style="width:215px;">WPI</td>
			<td style="width:215px;">PZMIII-BS</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Stainless Steel Burrs</td>
			<td style="width:215px;">FST</td>
			<td style="width:215px;">19007-14</td>
			<td>Surgical material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Forceps Dumont #5/45&#160;</td>
			<td style="width:215px;">FST</td>
			<td style="width:215px;">11251-35</td>
			<td>Surgical material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Forceps Dumont #5SF</td>
			<td style="width:215px;">FST</td>
			<td style="width:215px;">11252-30</td>
			<td>Surgical material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Suture 6/0</td>
			<td style="width:215px;">LorcaMarin</td>
			<td style="width:215px;">55108</td>
			<td>Surgical material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Suture 9/0</td>
			<td style="width:215px;">LorcaMarin</td>
			<td style="width:215px;">61966</td>
			<td>Surgical material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Nikon Eclipse&#160;</td>
			<td style="width:215px;">Nikon</td>
			<td style="width:215px;">TE300</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:215px;">Esteve</td>
			<td style="width:215px;">571329-8</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Sodium Pentobarbital</td>
			<td style="width:215px;">Vetoquinol</td>
			<td style="width:215px;">570681</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Freezing microtome</td>
			<td style="width:215px;">Leica Microsystems GmbH</td>
			<td style="width:215px;">SM2000R</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Superfrost slides</td>
			<td style="width:215px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:215px;">2014-07</td>
			<td>Lab material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Cresyl violet acetate</td>
			<td style="width:215px;">Sigma</td>
			<td style="width:215px;">C5042</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Microscope&#160;</td>
			<td style="width:215px;">Nikon</td>
			<td style="width:215px;">Nikon Eclipse TE300</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">XYZ motorized computer stage and controller</td>
			<td style="width:215px;">Ludl electronics Products</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Stereo Investigator System</td>
			<td style="width:215px;">Microbrightfield</td>
			<td style="width:215px;">Version 7.003 software</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">5 ml Tissue Grinder, Potter-Elv with teflon pestle</td>
			<td style="width:215px;">Thomas Scientific</td>
			<td>0913X70</td>
			<td>Lab Material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene 50mL Oak Ridge Centrifuge Tube</td>
			<td style="width:215px;">Nalgene</td>
			<td>3119-0050&#160;</td>
			<td>Lab material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Percoll</td>
			<td style="width:215px;">Sigma</td>
			<td style="width:215px;">p1644-100</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:215px;">Lonza</td>
			<td style="width:215px;">BE12-702F</td>
			<td>Chemical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Beckman Ultracentrifugue</td>
			<td style="width:215px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Beckman Coulter ultracentrifuge rotor 45 Ti</td>
			<td style="width:215px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">BD Sterile Cell Strainer, 40 Micron</td>
			<td style="width:215px;">BD</td>
			<td style="width:215px;">BD 352340</td>
			<td>Lab Material</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:215px;">Sigma</td>
			<td style="width:215px;">A3733-500G</td>
			<td>Reagment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">FcR Blocking Reagent, mouse</td>
			<td style="width:215px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:215px;">130-092-575</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">CD11b-FITC, human and mouse</td>
			<td style="width:215px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:215px;">130-098-085</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">CD45-PE, mouse</td>
			<td style="width:215px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:215px;">130-102-596</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">Anti-Ly-6G-APC, mouse</td>
			<td style="width:215px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:215px;">130-102-936</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">PerCP/Cy5.5 anti-mouse Ly-6C</td>
			<td style="width:215px;">Biolegend</td>
			<td style="width:215px;">128012</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">BD FACS Flow</td>
			<td style="width:215px;">BD</td>
			<td style="width:215px;">342003</td>
			<td>Reagment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">BD FACSCalibur; 4-color</td>
			<td style="width:215px;">BD</td>
			<td style="width:215px;">342975</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">BD Cell Quest Pro Software</td>
			<td style="width:215px;">BD</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:373px;">FlowJo software</td>
			<td style="width:215px;">Treestar inc.</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereological and flow cytometry characterization of leukocyte subpopulations in models of transient or permanent cerebral ischemia

Activación de la microglía, así como la extravasación de los macrófagos y neutrófilos hematógena, se cree que desempeñan un papel fundamental en la lesión cerebral después del accidente cerebrovascular. Estas subpoblaciones de células mieloides pueden mostrar diferentes fenotipos y funciones y la necesidad de ser distinguido y caracterizado para estudiar su regulación y su contribución al daño tisular. Este protocolo proporciona dos metodologías diferentes para la caracterización de las células inmunes del cerebro: un enfoque estereológico precisa y un análisis de citometría de flujo. El enfoque estereológicos se basa en el método fraccionador óptico, que calcula el número total de células en un área de interés (cerebro infartado) estimado por un muestreo aleatorio sistemático. El segundo enfoque caracterización proporciona una manera simple para aislar suspensiones de leucocitos cerebro y caracterizar ellos por citometría de flujo, lo que permite la caracterización de microglia, infiltrado de monocitos y neutrófilos del tejido isquémico. Además, también D.etails un modelo de isquemia cerebral en ratones que afecta exclusivamente corteza cerebral, generando infartos altamente reproducibles con una baja tasa de mortalidad, y el procedimiento para el procesamiento histológico del cerebro para caracterizar el volumen de infarto por el método de Cavalieri.

El modelo de isquemia cerebral que se muestra aquí genera infartos visto exclusivamente en la corteza, sin afectar el tejido estriatal desde las ramas lenticulostriatal de la MCA que irrigan el cuerpo estriado no se ocluyen (Figura 1). Por tinción de Nissl, el área dañada puede ser identificado como un área cortical hipocrómica (Figura 2). Este modelo se caracteriza por volúmenes de infarto altamente reproducibles a las 24 horas después de MCAO (% IH 15,89 ± 0,28) estimado por el método de Cavalieri en secciones teñidas con Nissl (Figura 2). Estimación del volumen infartado por el método de Cavalieri es un enfoque preciso con un bajo error que se refleja en el coeficiente de error (CE) de Gundersen en los hemisferios contralesional y ipsilesional así como en el área infartada (Tabla 2). Volumen de tejido dañado puede ser expresada en mm 3, sino también como% IH usando la fórmula en la sección 3.2.13. Además, la estimacióndel volumen total de las regiones ipsilesional y contralesional permite el cálculo del índice de edema de corregir el volumen infartado y para evitar una sobreestimación del tejido dañado (Tabla 2). Dado el procesamiento de seccionamiento de serie del tejido cerebral, esto puede ser aprovechado para llevar a cabo una estimación exacta del número total de las subpoblaciones de células, como los neutrófilos infiltrados, en el área isquémica, utilizando el enfoque fraccionador óptico (Figura 3 y Tabla 4) con los parámetros que se muestran en la Tabla 3. Este protocolo se estima un total de neutrófilos (células Ly6G-positivos) en el área infartada de 23.328 ± 3.623 a las 24 horas y 82 856 ± 8143 a las 48 h en ratones después pMCAO (Figura 3D). De acuerdo con estudios anteriores, la infiltración de neutrófilos se correlaciona directamente con el tamaño del infarto (Figura 3E). Estimación de tél número de neutrófilos por el método fraccionador óptico es un enfoque preciso con un bajo error que se refleja por la CE de Gundersen (Tabla 4). El aislamiento de leucocitos y citometría de flujo protocolo de caracterización permite el aislamiento de 47.922 ± 23.174 células mieloides a partir de la corteza del hemisferio ipsilesional de los ratones isquémicos. Esto comprende el 10-30% de los eventos totales se encuentran en la suspensión celular. La gran mayoría de los eventos capturados utilizando este protocolo presente un parámetro bajo FSC, asociado a restos celulares (Figura 4). Tinción CD11b muestra que las células CD11b + tienen un valor FSC más alto (Figura 4), ​​lo que sugiere que los restos celulares no está etiquetado con este marcador y, como se ha indicado anteriormente, que se puede excluir del análisis adicional ajustando el umbral FSC en 200 9. La cantidad variable de los residuos celulares obtenidos con este método sugiere que las diferencias en el proceso de la muestraING (tiempo, la conservación del tejido, temperatura de la muestra, la eliminación de mielina eficiente, etc.) puede dar cuenta de ello. Además, también se necesita el uso de filtros celulares para evitar la presencia de abrazaderas celulares en las muestras; este paso se debe hacer antes de la tinción celular. Usando la estrategia gating se muestra en la Figura 5 que se basa en CD11b y CD45 expresión, podemos discriminar entre residente y células mieloides infiltrado en el tejido isquémico. Este CD11b + aumento de la población en el hemisferio isquémico en comparación con la ingenua y con el grupo de simulación, en el que estas células se asocian principalmente a una baja expresión de CD45 indica que la microglia está proliferando después de la isquemia (Figura 4, Figura 5 y Tabla 5) . Esta diferencia es probablemente debido a la infiltración de células de la periferia, como se evidencia por la aparición de una subpoblación de células CD11b + hi CD45 en el cerebro isquémico (Figura 4, La Figura 5 y la Tabla 5), que es de bajo número en ingenuo y en el cerebro simulado. La contribución de los infiltrados a la población de células CD11b + en la isquemia cerebral es un proceso muy dinámico 4. En el modelo MCAO por ligadura, que puede variar de 30% a 60% del total de células CD11b +, dependiendo del tamaño de la lesión y del tiempo cuando la caracterización se ha hecho. Los neutrófilos, caracterizadas como células Ly-6G +, son los más numerosos de la población de células infiltradas encontrado a las 24 horas después de MCAO en el cerebro isquémico ratón usando este modelo de isquemia cerebral, ya que constituyen el 70-80% de la CD11b + CD45 hi. El resto de las células son en su mayoría una subpoblación de CD11b + CD45 hi Ly-6G - Ly-6C hi monocitos proinflamatorios. En este modelo, esta población se incrementará en número en las áreas cerebrales isquémicos de 24 a 48 horas después de MCAO. Figura 1:. Procedimiento quirúrgico para la ligadura de MCA (A) después de la retracción del músculo temporal, un pequeño craneotomía se lleva a cabo en el cráneo del ratón. MCA es ligado por un nudo o un nudo corredizo con sutura 9/0. (B) Imágenes representativas de la lesión cortical generada por el modelo MCAO. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52031/52031fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52031/52031fig2.jpg" /> Figura 2: Cuantificación de volumen de infarto por Cavalieri. (A) Imágenes representativas de secciones del cerebro teñidas con Nissl 24 horas después de la ligadura permanente MCA. El gran aumento muestra el área hipocromatic después de la tinción de Nissl queidentifica el área dañada (núcleo) después de MCAO. También se muestra la (PI) región peri-infarto. (B) Cuantificación del volumen del infarto representado como% hemisferio infartado (IH%) utilizando el método de Cavalieri en secciones teñidas con Nissl de serie, 24 horas después de MCAO (n = 50 ratones ). <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52031/52031fig3.jpg" /> Figura 3: la cuantificación Estereológico de neutrófilos en el área infartada 24 y 48 hr después de la ligadura, utilizando el método fraccionador óptico. (A) Imagen Representante de neutrófilos (células infiltradas Ly6G-positivos) en el área isquémica en 24 horas después de MCAO. Delimitación muestra el área infartada. (B, C) ​​Ejemplos de un disector óptico para la cuantificación de neutrófilos por el fraccionador óptico. (D) Cuantificación de los neutrófilos totales en la región infartada a las 24 y 48 h (n = 4 ratones). (E)La correlación del número de neutrófilos con el tamaño del infarto a las 24 y 48 horas después de la ligadura de MCA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52031/52031fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52031/52031fig4.jpg" /> Figura 4:. Representante análisis de dispersión punto de parcelas de leucocitos cerebrales obtenido de hemisferios ingenuo, farsa y isquémica (24 horas después de MCAO) sobre la base de parámetros físicos (SSC y FSC) Se identificó una población de eventos que expresan CD11b (rojo) en todos los grupos. Esta población fue cerrada y caracteriza de acuerdo a la expresión de CD45. Las células que expresan bajos niveles de CD45 (verde) estaban presentes en la corteza cerebral isquémica y no isquémica y correspondían a las células microgliales. En contraste, las células que expresan altos niveles de CD45 (amarillo) eran sóloque se encuentra en el hemisferio isquémico y en menor medida en grupo simulado. Un análisis más detallado de la población de alta CD11b + CD45 indica que los neutrófilos (Ly-6G + células, azul) y pro-inflamatorias monocitos (células hi Ly-6C, naranja) son los principales subpoblaciones de células que se encuentran en el cerebro se infiltra en las 24 horas después del accidente cerebrovascular. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52031/52031fig4large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52031/52031fig5.jpg" /> Figura 5:. Gating estrategias para diferenciar residente a partir de células mieloides infiltrado en el tejido isquémico celular CD11b + fueron cerrada primero de acuerdo con la intensidad de fluorescencia de isotipo (A). Un gráfico de puntos representativos de las suspensiones de células del cerebro isquémico se muestra en la esquina superior derecha del panel. EnAdemás, los valores típicos para el número total de eventos y para el número de CD11b + eventos adquiridos usando esta técnica se muestra (no de células / hemisferio cerebral isquémico;. (A) análisis de intensidad de fluorescencia CD45 de las células CD11b + se muestra en el panel B. Un análisis representativo gráfico de puntos de CD45 y CD11b expresión de la cerrada subpoblación CD11b + se muestra en la esquina superior derecha del panel. Además, el número típico de células CD45 hi lo CD45 adquiridos por el hemisferio cerebral isquémico utilizando esta técnica se muestra (B). <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><colgroup><col span="2" /></colgroup><tbody><tr><td colspan="2"> Los parámetros utilizados para el método de Cavalieri </td></tr><tr><td> Sección Espesor (t) </td><td> 30 micras </td></tr><tr><td> Objetivo </td><td> 10X </td></tr><tr><td> Fracción de muestreo de la rebanada (SSF) </td><td> 1/ 20 </td></tr><tr><td> Distancia entre secciones </td><td> 600 micras </td></tr><tr><td> Espaciado de cuadrícula </td><td> 100 micras </td></tr></tbody></table> Tabla 1: Parámetros utilizados para la cuantificación estereológicos del tejido infartado. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Resultados </td><td> Contralesional </td><td> Ipsilesional </td><td> Infarto </td></tr><tr><td> Superficie (μm²) </td><td> 151460000 </td><td> 155060000 </td><td> 22600000 </td></tr><tr><td> Volumen (μm³) </td><td> 90876000000 </td><td> 93036000000 </td><td> 13560000000 </td></tr><tr><td> Volumen corregido por A lo largo de la proyección (μm³) </td><td> 89957100000 </td><td> 92046300000 </td><td> &lt;strong&gt; 13416600000 </td></tr><tr><td> Coeficiente de error (Gundersen), m = 0 </td><td> 0,068 </td><td> 0,077 </td><td> 0,067 </td></tr><tr><td> Coeficiente de error (Gundersen), m = 1 </td><td> 0,015 </td><td> 0,017 </td><td> 0,015 </td></tr><tr><td> Coeficiente de error (Gundersen), alfa (q) </td><td> 0,068 </td><td> 0,077 </td><td> 0,067 </td></tr><tr><td colspan="2"> % Hemisferio Infartado </td><td colspan="2"> 14.90 </td></tr><tr><td colspan="2"> Cerebral Edema (Ips Vol / Vol Cont) </td><td colspan="2"> 1.02 </td></tr></tbody></table> Tabla 2: Ejemplos representativos de volúmenes contralesional, ipsilesional y de infarto por el método de Cavalieri utilizar el Software Investigador estéreo. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td colpalmo = &quot;2&quot;&gt; Parámetros utilizados para el fraccionador óptico </td></tr><tr><td> Sección Espesor (TSF) </td><td> 30 micras </td></tr><tr><td> Objetivo </td><td> 100X </td></tr><tr><td> Fracción de muestreo de la rebanada (SSF) </td><td> 1/10 </td></tr><tr><td> Contando Cuadro Altura </td><td> 40 micras </td></tr><tr><td> Contando Ancho de marco </td><td> 40 micras </td></tr><tr><td> Tamaño de la cuadrícula X </td><td> 230 micras </td></tr><tr><td> Tamaño de la cuadrícula X </td><td> 230 micras </td></tr><tr><td> Safe Guard </td><td> 2 micras </td></tr><tr><td> Óptico Disector Altura </td><td> 14 micras </td></tr></tbody></table> Tabla 3: Parámetros utilizados para la cuantificación estereológico de neutrófilos infiltrados tras la isquemia cerebral con la sonda fraccionador óptico utilizando el Software Investigador estéreo. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="2"> Estimación de neutrófilos por el fraccionador óptico </td></tr><tr><td> Número de sitios de muestreo </td><td> 430 </td></tr><tr><td> Forma Factor </td><td> 6.24 </td></tr><tr><td> Marcadores totales Contado </td><td> 166 </td></tr><tr><td> Los neutrófilos Estimados fraccionador óptico </td><td> 117,608.03 </td></tr><tr><td> Coeficiente de error (Gundersen), m = 0 </td><td> 0.22 </td></tr><tr><td> Coeficiente de error (Gundersen), m = 1 </td><td> 0.09 </td></tr></tbody></table> Tabla 4: Ejemplo representativo de los neutrófilos infiltrados estimados después de la isquemia cerebral con la sonda fraccionador óptico utilizando el Software Investigador estéreo. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> CD11b + </td><td> Los neutrófilos </td><td> Los monocitos </td><td> La microglía </td></tr><tr><td> Ingenuo </td><td> 25863 ± 4,575.8 </td><td> 473 ± 75.8 </td><td> 525 ± 191,4 </td><td> 19012 ± 1523 </td></tr><tr><td> Sham 24 horas </td><td> 24563 ± 5263 </td><td> 873 ± 192,5 </td><td> 1.124 ± 391,5 </td><td> 23734 ± 2910 </td></tr><tr><td> pMCAO 24 horas </td><td> 47922 ± 23174 </td><td> 4.874 ± 748,7 </td><td> 4,826 ± 1,345 </td><td> 35395 ± 10833 </td></tr></tbody></table> Tabla 5: Los resultados representativos de las células mieloides estimados después de la isquemia cerebral con la citometría de flujo enfoque.

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Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Cerebro células mieloides caracterización después del accidente cerebrovascular se puede realizar por estereología utilizando el método del fraccionador óptico, o por un análisis de citometría de flujo de cerebro leucocitos suspensiones. Ambas son técnicas útiles para realizar una distinción fenotípica precisa de los principales subconjuntos de células mieloides que se encuentran en el cerebro isquémico.

Estereológico y Citometría de Flujo Caracterización de leucocitos subpoblaciones en Modelos de transitorios o isquemia cerebral permanente

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