Name: a manual small molecule screen approaching high-throughput using zebrafish embryos
Uploaded: 2014-11-08T15:00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos at JoVE.com

وأيد هذا العمل من خلال تمويل للمختبر أبحاث Wingert مما يلي: المعاهد الوطنية للصحة منح K01 DK083512، DP2 OD008470، وR01 DK100237. مسيرة الدايمات باسل أوكونور كاتب الباحث جائزة منحة # 5 FY12-75. بدء الأموال من جامعة نوتردام كلية العلوم وقسم العلوم البيولوجية؛ وهدية سخية للجامعة نوتردام من إليزابيث ومايكل غالاغر نيابة عن غالاغر الأسرة لتعزيز أبحاث الخلايا الجذعية. كان للممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتحليلها، قرار نشر أو إعداد المخطوطة. نشكر بول كروجر T. الابن لتوفير التغذية المرتدة حاسم على المخطوطة. نشكر موظفي قسم العلوم البيولوجية على دعمهم، ومركز للبحوث اسماك الزرد في نوتردام لتفانيهم المتميز في رعاية ورفاهية لدينا مستعمرة الزرد. أخيرا، نشكر أعضاء من الباحثين و لدينامختبر الفصل على تعليقاتهم والمناقشات والأفكار حول هذا العمل.

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

تحديد العقاقير العلاجية فعالة لعلاج الأمراض التي تصيب الإنسان هو نهاية اللعبة بالنسبة لكثير من الباحثين الطبية الحيوية. في حين أن تحديد وتوصيف وكلاء الدوائية المحتملة للتطبيقات السريرية له قيمة واضحة للرعاية الصحية، إلا انه لا يزال يشكل تحديا كبيرا. في نهاية المطاف، وتطوير العديد من المركبات العلاجية تأتي من معرفة كيفية أنواع معينة من الخلايا إما تتطور أو وظيفة. الزرد، دانيو rerio، هو مكتملة العظام المياه العذبة من عائلة شبوطيات التي أصبحت كائن النموذج السائد في البيولوجيا التطورية 1. الزرد وراثيا الفقاريات الانقياد التي هي سهلة للحفاظ على والتلاعب للدراسات العلمية 2،3. الجنين الزرد شفافة، المخصبة خارجيا، ويمكن أن تنتج من قبل مئات من زوج واحد التزاوج الكبار في أسبوع واحد فقط 2،3. وعلاوة على ذلك، حصة أجهزة الجسم الرئيسية الزرد وتمتلك د كبيرegree التشابه الجيني مع الثدييات، بما في ذلك البشر 4. لافت للنظر، و 70٪ من الجينات البشرية لها orthologue الزرد 4. ونتيجة لهذا التشابه، كانت الزرد نظام التجريبية ذات أهمية كبيرة لدراسة آليات تطوير الفقاريات وعلم وظائف الأعضاء، و قد استخدمت لتلخيص العديد من الأمراض التي تصيب الإنسان 5-7. هذه الأسباب وغيرها، جعلت الزرد مرشحا مثاليا لمواصلة التحقيقات الوراثية ونتج عنه زيادة مطردة التقدير لفائدة الزرد في أبحاث الطب الحيوي 6،7. على مدى العقود القليلة الماضية، وقد وضعت وفرة من الأدوات الوراثية في الزرد. الجينوم الزرد غير قابلة للالطفرات وtransgenesis 3. حتى الآن، تم تنفيذ عدد كبير من الأمام وعكس الدراسات الجينية، مما يؤدي إلى توليد أكثر من 9،000 المسوخ 3. وعلاوة على ذلك، العديد من خطوط المعدلة وراثيا لها أن تكونخلق أون، والتي مكنت من وضع العلامات وعزل أنواع معينة من الخلايا 3. فقد كانت هناك جهود كبيرة الجارية لتركيز وتوزيع هذه الموارد للمجتمع البحوث، والتي يمكن الوصول إليها عن المختبرات بتكلفة منخفضة نوعا ما من خلال المركز الدولي للاسماك الزرد الموارد (ZIRC) 8. وعلاوة على ذلك، مستودع واسعة من المعلومات البيولوجية والأدوات الجزيئية، بدءا من أنماط التعبير الجيني لmorpholino متواليات والبروتوكولات، وقد تم شرحها بشكل تدريجي على شبكة المعلومات الزرد (ZFIN) 9-11. وقد بذلت هذه البنية التحتية البحثية الزرد ممكن من خلال دعم NIH كبير والدعوة لهذا النموذج الحيواني 8. استمر هذا المخبأ من المسوخ الزرد، خطوط المعدلة وراثيا، والمعلومات ذات الصلة لتكون ذات قيمة استثنائية للمجتمع الأبحاث البيولوجية ككل. ومع ذلك، في حين الزرد الآن نموذج كائن راسخة والبارز، فإنها لا تمثلrgely غير مستغل لدراسة البيولوجيا التطورية والأمراض من خلال استخدام شاشات الوراثية الكيميائية. علم الوراثة الكيميائية هي استخدام الجزيئات الصغيرة، مثل المخدرات أو غيرها من المركبات، أن تؤثر عملية بيولوجية ضمن نظام المعيشة 12. يمكن تطبيق علم الوراثة الكيميائية لفهم الآليات الجزيئية وظيفة الجين، مثل التعرف على العوامل التي الإنقاذ أو تفاقم خلل جيني معين 12. وعلاوة على ذلك، وعلم الوراثة الكيميائية تمثل سبيلا رئيسيا واحدا لإجراء البحوث متعدية 12. بينما كانت شاشات الوراثية التقليدية إلى الأمام في النماذج الحيوانية قوية جدا في ربط جينات معينة للأمراض، فهي تفتقر إلى البعد الزماني، مما يجعل من الصعب أو من المستحيل أحيانا لمراقبة الظواهر التي قد تنشأ بعد مرحلة التطور الجنيني المبكر. بالإضافة إلى ذلك، يمكن التكرار الجيني يجعل النتائج لوحظ من علم الوراثة إلى الأمام يصعب تفسيرها. بدلا من ذلك، وشاشات جينية الكيميائيةالسماح للسيطرة الزمنية الدقيقة وتوفير وقت واحد نقطة انطلاق قيمة لاكتشاف المخدرات 12،13. علم الوراثة الكيميائية يمكن أن يؤديها في استخدام أنظمة الأنابيب (مثل خطوط الخلايا والبروتينات) أو باستخدام نظام في الجسم الحي، مثل الحي كله. يمكن استخدام النظام في المختبر لعلم الوراثة الكيميائية يكون مفيدا لأنه أبسط من نظام الحي كله، وأسهل للعمل مع على نطاق واسع، أقل تكلفة، وأقل استهلاكا للوقت. ونتيجة لذلك، في المختبر أنظمة تسمح لكلا الإنتاجية العالية الفرز (HTS) وفحص عالية المحتوى (HCS). هناك عدد من المزايا لاستخدام نظام في المختبر التي يجب أخذها في الاعتبار عند الاقتراب الوراثة الكيميائية، ولكن أيضا قيود كبيرة. أحد أوجه القصور الرئيسية لاستخدام خط الخلية هو أن جزيئات صغيرة يمكن أن يكون فعال وغير سامة في خط خلية معينة، ولكن عندما تصبح سامة أدخلت في الحي كله. وبالتالي، فإن جوهرالقضية هي أن في المختبر أنظمة لا تعبر عن السياق العام للكائن الحي، وبالتالي ليست قادرة على تقليد بدقة ما يحدث في الحي كله دائما. في حين أن الاختبار المركب في الكائنات كلها يمكن الالتفاف على هذه القضايا، واستخدام الثدييات نماذج الحي كله يطرح عددا من القيود المادية والأخلاقية. على سبيل المثال، فحص المخدرات في الماوس وأعاقت وجستيا من الفضاء والنفقات اللازمة لاختبار حجم العينة المناسب. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يكون من الصعب الأسئلة التنموية للدراسة، ويرجع ذلك إلى حقيقة أن تطور الثدييات في الرحم. أخيرا، في حين أن إجراء البحوث الطبية الحيوية له قيمة اجتماعية كبيرة، ومع ذلك هناك احتياجات كبيرة لحماية الرفق بالحيوان عن طريق الحد من دراسات مكثفة وتخفيف الألم والمعاناة من الحيوانات المستخدمة في الأبحاث. الزرد توفر بديلا صالحا للعمل مع الفقاريات العليا مثل الثدييات، وعلاوة على ذلك، العديد من المواضيع يمكن دراستها باستخدام علم الوراثة الكيميائية فيالمراحل الجنينية واليرقات عند معالجة العصبية غائب أو المنطوق عند مستوى منخفض 12،13. حتى الآن، تم إجراء عدد لا يحصى من شاشات الوراثية الكيميائية باستخدام الأجنة الزرد على وجه الخصوص، وتسليم المجمع يمكن تحقيق ذلك عن طريق غمر الأجنة في وسائل الإعلام التي تحتوي على المخدرات من اهتمام 12-15. وعلاوة على ذلك، كانت هناك العديد من التطورات العلمية والتكنولوجية لجعل شاشات الوراثية الكيميائية ممكن ويمكن التحكم 16-20. وكان بيترسون وزملاؤه أول من استخدم الزرد في شاشة الوراثية الكيميائية في عام 2000، وفيما بعد في عام 2004 حددت مجمع أن قمعت طفرة تضيق الأبهر في الزرد 21،22. ومنذ ذلك الحين نفذت شاشات الكيميائية لدراسة عدة أنسجة نامية (مثل القلب والدم والأوعية) 23-25، الوظائف الفسيولوجية (على سبيل المثال، أساس العصبية للسلوك) 26، 27،28 تجديد الكبار، وامراض<html> النماذج الإلكترونية (مثل ضمور العضلات والسرطان) 29،30. من بين هذه الشاشات الكيميائية الزرد، اتخذت اكتشاف البروستاجلاندين التي تنظم الخلايا الجذعية المكونة للدم إلى التجارب السريرية على البشر، مما يدل على القدرة على الانتقال من &quot;دبابات إلى السرير&quot; 23،31-33 (NIH، Trials.gov السريرية، NCT00890500. NCT01627314). وفي الآونة الأخيرة، ظهرت علاجات واعدة المرشح لأجهزة معقدة مثل الكلى وعلاجها علم الأمراض الخلوي الذي في مرض الكلى المتعدد الكيسات (PKD) 34 و قصور كلوي حاد 27،35، على الرغم من أن هذه لديها حتى الآن للانتقال إلى التجارب السريرية. تظهر هذه الشاشات الوراثية الكيميائية على نطاق واسع فائدة اختبار المركبات الصغيرة في الزرد النامية والقدرة على تطبيق علم الوراثة الكيميائية لاستجواب وظيفة الأنسجة الكبار. وعلاوة على ذلك، هناك قائمة متزايدة من مجموعات الأدوية المتاحة تجاريا التي تكون متاحة للدراسات الأكاديمية 19. ove_content &quot;&gt; وفي السنوات القليلة الماضية، كانت هناك تطورات بارزة في مجال تكنولوجيا الفحص الجيني الكيميائية، بما في ذلك استخدام النظم الآلية الروبوتات الاستغناء عن المخدرات والتعامل معها، جنبا إلى جنب مع أنظمة التصوير الآلي 36-38. هذه النظم تسمح بإمكانية اختبار عدة آلاف من المركبات على حد سواء لتحقيق HTS وHCS 36-38. وللأسف، فإن التعهد شاشات الوراثية الكيميائية مع هذه المؤسسات الروبوتية مبتكرة تتطلب عادة موارد كبيرة. هذه الأنواع من الموارد تشكل عائقا كبيرا للعديد من المؤسسات التي تفتقر إلى رؤوس الأموال للحصول على وتشغيل وصيانة هذه الأجهزة. ورغم تأسيس البنية التحتية للمعالجة الآلية للمكتبات الكيميائية، بما في ذلك نقل الأجنة إلى المحتشدة لوحات، لا تزال باهظة بالنسبة لكثير من المختبرات والتصوير الآلي وتحليل التكاليف عموما أكثر يمكن الوصول إليها 12. تمكن الآلي فحص الصورة الكمي من الفلورسنت إعادة المعدلة وراثياالحمالين ويسهل تحليل المظهري محدد 12،15. على الرغم من أن النظم الآلية تمثل التقدم التكنولوجي مفيدة، أسئلة كثيرة يمكن معالجتها من خلال شاشات اليدوي أكثر تركيزا، مثل الاستعلام من عدة آلاف من المركبات النشطة بيولوجيا في العملية التنموية مع كامل جبل الموقع التهجين (WISH) قراءات في 39. وعلاوة على ذلك، في حين أن عددا متزايدا من مختبرات والتذرع شاشات الكيميائية الزرد للتحقيق في مسألة بحثية، وعدد قليل التشبع (إن وجدت) وصلت الجهود والعديد من المواضيع حتى الآن لم يتم اختراقها باستخدام علم الوراثة الكيميائية. يمكن تنفيذها باستخدام شاشات الكيميائية الزرد مستعمرة صغيرة تتألف من عدد قليل فقط من النوع البري أو الدبابات المعدلة وراثيا. لذا، ينبغي أن يكون هذا الشكل من الاستجواب الجيني يمكن بلوغه من قبل معظم المجموعات البحثية الزرد المهتمة في توسيع / ​​تنويع في هذه الساحة. المكتبات الكيميائية متفاوتة الحجم يمكن شراؤها من الموزع التجاري و / أو عمودlaborators. لهذه الأسباب، يمكن أن الوراثة الكيميائية يكون مجديا اقتصاديا حتى في المناخات القاسية التمويل. ومع ذلك، هناك عقبات في بداية شاشة الوراثة الكيميائية، مثل كيفية تخطيط الجوانب اللوجستية للشاشة: على سبيل المثال، فإن عدد الموظفين اللازمين لشاشة ناجحة، وتخصيص وقت مخصص والتفكيك معا بروتوكول المادي لعينات العملية يدويا هذا العدد من بضع مئات إلى عدة آلاف. هنا، ونحن بالتفصيل بروتوكول الإنتاجية العالية اليدوي لأداء الوراثة الكيميائية في الجنين الزرد مع WISH بمثابة قراءة المغادرة. يتضمن هذا الأسلوب العلاج من تعاطي المخدرات من الأجنة الزرد، تليها الكشف riboprobe النصوص مرنا. باستخدام هذا البروتوكول، فريق صغير أو حتى فرد واحد يمكن فحص وتحليل معقول مكتبة الكيميائية متواضعة حوالي 600 مركبات في غضون 9 أسابيع.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="893">
	<tbody>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:252px;">JoVE 51922 MATERIALS</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:252px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:101px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.1 - 10 &#965;L natural pipet tips</td>
			<td style="width:191px;">USA Scientific</td>
			<td>1111-3800</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">1 X E3</td>
			<td>N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate using 50X E3 and DI water.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">1 X Pbst</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 0.1% Tween-20 in 1 X Pbs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">10X Pbs&#160;</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB11072</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">12-well staining dish</td>
			<td style="width:191px;">BD-Falcon</td>
			<td style="width:101px;">35-3225</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">20X SSC</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB13156</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 well plate</td>
			<td style="width:191px;">BD-Falcon</td>
			<td>35-3226</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">4% PFA/1X Pbs</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 4% PFA (w/v) in 1 X Pbs - boil then freeze and store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">48 well plate</td>
			<td style="width:191px;">CytoOne</td>
			<td>CC7672-7548</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">50 X E3</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 16.5 mM CaCl2, 16.5 mM MgSO4, 250mM NaCl, and 8.5mM KCl in DI water.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 deep well plate</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td>100-11-940</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well plate sealing mat</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10011-946</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">anti-digoxigenin antibody</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11-093-274-910</td>
			<td style="width:349px;">Keep at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">anti-fluorescein antibody</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11-426-338-910</td>
			<td style="width:349px;">Keep at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">BCIP stock</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">B8503</td>
			<td style="width:349px;">Generate 50 mg/mL using 100% DMF - freeze then store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">block solution</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 50 mL using 10 mL BSA (10%), 5 mL FCS, and 35 mL MABT. (Thaw BSA and FCS at 37 &#176;C.)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:252px;">BSA (bovine serum albumin) stock</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB00448</td>
			<td style="width:349px;">Generate 10% BSA by stirring BSA flakes in MAB at room temperature then freeze and store at -20 &#176;C. (Keep unused BSA flakes at 4 &#176;C.)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">DIG/FLU labeled riboprobe in vitro transcription reaction reagents</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11175025910; 11685619910</td>
			<td style="width:349px;">Consult the manufacturer procedure.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">DMF (dimethylformaldehyde)</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB00450</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">DNase 1 inhibitor, 10 X DNase 1buffer</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">4716728001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">embryo incubation dish</td>
			<td style="width:191px;">Falcon</td>
			<td style="width:101px;">35-1005</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">epT.I.P.S 20-300 &#965;L</td>
			<td style="width:191px;">Eppendorf</td>
			<td>22492284</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">Ethanol (EtOH)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">E7023</td>
			<td style="width:349px;">Generate 50mL of 70% EtOH with molecular grade H2O and 100% EtOH then store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">FCS (fetal calf serum) stock</td>
			<td style="width:191px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:101px;">16140089</td>
			<td style="width:349px;">Keep at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">filter sterilization unit</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td style="width:101px;">430516</td>
			<td style="width:349px;">0.45 &#965;m CA / 1L volume</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">fine forceps</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:101px;">RS-1050</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">flat-bottom microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td style="width:101px;">87003-300; 87003-298</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:252px;">Formamide</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB00600</td>
			<td style="width:349px;">Keep at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass basin 90 x 50</td>
			<td>Kimax Kimble</td>
			<td>23000</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass pipette</td>
			<td style="width:191px;">VWR</td>
			<td>14673-010</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">glass vial</td>
			<td style="width:191px;">Wheaton</td>
			<td style="width:101px;">225012</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">glycerol</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">G7893</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">glycine</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">G8898</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">glycogen</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">10901393001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">HYB+</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:349px;">Generate 50% formamide, 0.1% Tween-20, 5X SSC, 5 mg/mL yeast torula RNA, and 50 &#965;L/&#965;L heparin</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">INT stock</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">I8377</td>
			<td style="width:349px;">Generate 55mg/mL using 70% DMF and 30% H2O - freeze then store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:252px;">MAB</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:101px;"></td>
			<td style="width:349px;">Generate by adding 55.0 g Trisma base, 8 mL of 1M Tric-HCl pH 9.5, 23.2 g maleic acid, and 17.5 g NaCl to 1.5 L of deionized H2O. Then fill with deionized H2O to 2L and autoclave.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">MABT</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 0.1% Tween-20 in MAB</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">MeOH</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">34860-4L</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:252px;">mesh tea strainer</td>
			<td style="width:191px;">English Tea Store</td>
			<td style="width:101px;">SKU #ASTR_KEN, MPN#1705</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">molecular grade distilled water</td>
			<td style="width:191px;">Mediatech</td>
			<td style="width:101px;">25-055-CM</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">multi 8-channel pipette 0.5 - 10 &#965;L</td>
			<td style="width:191px;">Eppendorf</td>
			<td>3122000.019</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">multi 8-channel pipette 30 - 300 &#965;L</td>
			<td style="width:191px;">Eppendorf</td>
			<td>3122000.051</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">nanodrop</td>
			<td style="width:191px;">Thermo</td>
			<td style="width:101px;">ND-2000c</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">NBT stock</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:101px;">N6876</td>
			<td style="width:349px;">Generate 50mg/mL using 70% DMF and 20% H2O - freeze then store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">paraformaldehyde</td>
			<td style="width:191px;">Electron Microscopy Services</td>
			<td style="width:101px;">19210</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PCR-Film adhesive</td>
			<td style="width:191px;">Eppendorf</td>
			<td>30127.48</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">plate container (Pencil Box)</td>
			<td style="width:191px;">Sterilite</td>
			<td>1722</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:252px;">pre-staining&#160; buffer</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate 01% Tween-20, 50 mM MgCl2, 100 mM NaCl, and 100 mM Tris pH 9.5. (Make fresh for use each time.)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Pronase</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11459643001</td>
			<td style="width:349px;">Generate 50mg/mL using E3, freeze then store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">Proteinase K</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">03-115-879-001</td>
			<td style="width:349px;">Generate 10mg/mL in DI water then freeze and store at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">RNase 1 inhibitor</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">3335399001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">rubber bulb</td>
			<td style="width:191px;">Fisherbrand Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-22</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">small plastic Petri dish</td>
			<td style="width:191px;">Corning</td>
			<td style="width:101px;">430589, 430588</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">SP6 RNA polymerase</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11487671001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">staining solution-purple</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate using 45 &#965;L of NBT and 35 &#965;L of BCIP for every 10 mL needed in pre-staining buffer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">staining solution-red</td>
			<td style="width:191px;">N/A</td>
			<td style="width:101px;">N/A</td>
			<td style="width:349px;">Generate using 31.5 &#965;L of INT and 35 &#965;L of BCIP for every 10 mL needed in pre-staining buffer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:252px;">stereomicroscope</td>
			<td style="width:191px;">Nikon</td>
			<td style="width:101px;">SMZ645, SMZ1000</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">T3 RNA polymerase</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">11031171001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">T7 RNA polymerase</td>
			<td style="width:191px;">Roche</td>
			<td style="width:101px;">10881775001</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">transfer pipet</td>
			<td style="width:191px;">Samco</td>
			<td style="width:101px;">202, 204</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Tween-20 stock</td>
			<td style="width:191px;">American Bioanalytical</td>
			<td style="width:101px;">AB02038</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:252px;">waterbath</td>
			<td style="width:191px;">Thermo</td>
			<td style="width:101px;">51221073</td>
			<td style="width:349px;">(Model # 2831)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a manual small molecule screen approaching high-throughput using zebrafish embryos

أصبحت الزرد نموذج كائن يستخدم على نطاق واسع للتحقيق في الآليات التي تقوم عليها البيولوجيا التطورية ودراسة علم الأمراض الأمراض التي تصيب البشر بسبب درجة كبيرة من المحافظة الجيني مع البشر. علم الوراثة الكيميائية يتطلب اجراء اختبارات مفادها أن الجزيئات الصغيرة لديها على عملية بيولوجية، وأصبحت وسيلة شعبية الأبحاث المترجمة للتعرف على المركبات العلاجية. الزرد جذابة خصيصا لاستخدامها في علم الوراثة الكيميائية بسبب قدرتها على إنتاج براثن كبيرة من أجنة شفافة، والتي يتم إخصابها خارجيا. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يكون بسهولة الأجنة الزرد المخدرات يعامل بإضافة بسيطة من مركب إلى وسائل الإعلام الجنين. باستخدام كله يشن الموقع التهجين (WISH) في، التعبير مرنا يمكن تصور واضح داخل الأجنة الزرد. معا، وذلك باستخدام علم الوراثة الكيميائية وWISH، يصبح الزرد سياق الحي كله قوي فيها لتحديد الخلوية والفسيولوجيةآثار جزيئات صغيرة. وقد تم إحراز تقدم في التقنيات المبتكرة التي تستخدم إجراءات الفرز القائم على الجهاز، ولكن للعديد من المختبرات مثل هذه الخيارات لا يمكن الوصول إليها أو لا تزال باهظة التكاليف. بروتوكول الموصوفة هنا يوضح كيفية تنفيذ شاشة عالية الإنتاجية اليدوية الكيميائية الوراثية التي تتطلب موارد الأساسية، ويمكن تحقيق ذلك عن طريق فريق فردي أو صغير واحد في فترة زمنية فعالة. وبالتالي، يوفر هذا البروتوكول استراتيجية مجدية والتي يمكن تنفيذها من قبل مجموعات بحثية لأداء الوراثة الكيميائية في الزرد، والتي يمكن أن تكون مفيدة لاكتساب الأفكار الأساسية في العمليات التنموية، وآليات المرض، والتعرف على مركبات جديدة ومسارات الإشارات التي لها تطبيقات ذات الصلة طبيا .

النهج اليدوي الموصوفة هنا يسمح للباحث واحد بكفاءة وبنجاح إجراء إنتاجية عالية شاشة الوراثة الكيميائية جزيء صغير باستخدام نموذج الجنين الزرد (الشكل 1). باستخدام هذه الطريقة، فمن العملي لشخص واحد لأداء شاشة الوراثة الكيميائية، بحيث على مدار 9 أسابيع شخص واحد (ملتزمة أسبوع العمل 40 ساعة) يمكن إجراء مسح لل~ 600 مركبات (الشكل 1) . وبالتالي، لا يمكن للوقت مقاعد البدلاء لشخص واحد تجاوز الحاجة إلى معدات مطالبين ذات الموارد المرتفعة، مثل النظم الآلية. المفاضلة هي أن الشاشة يدوية تتطلب عدة أسابيع من الجهد المتفاني. في المقابل، يمكن استخدام النظم الآلية ضغط الوقت تشارك في 1-2 أسابيع من الوقت الروبوتية، ويمكن أن يترتب على الحد الأدنى نسبيا جهد الباحث عموما. طريقة واحدة لزيادة كفاءة و / أو نطاق الشاشة الدليل هو حشد 2-3 الباحثين في المجموع، والتي من شأنها أن تمكن من فحص ممركبات خام، متفاوتة تركيز مركب، و / أو غربلة على مدى فترة زمنية أقصر. ويوضح الخطوات الأولية المشاركة في بروتوكول لإكمال الشاشة الوراثة الكيميائية في الأجنة الزرد مع قراءات WISH بمثابة مخطط (الشكل 2). ويمكن تقسيم المهام التجريبية إلى نوعين من أسابيع العمل: (1) التعرض للمواد الكيميائية ووضع البطاقات التعريفية الجنين، و (2) تحليل والتصوير. في أسبوع العمل التعرض للمواد الكيميائية، وهذه الخطوات تشمل اقامة البالغين الزرد (يوم 1)، وجمع الجنين والأجنة arraying والعلاج من تعاطي المخدرات (يوم 2)، وإعداد الأجنة لفي الموقع التهجين (يوم 3)، والتهجين في الموقع (اليوم 4 -6). في الأسبوع التحليل / التصوير، والباحث يحلل التعبير مرنا ليسجل الأجنة ويضرب صورة (يوم 11/07). جزء هام من أداء الشاشة الوراثة الكيميائية هو تسمية باستمرار وبدقة جيدا المواقع. كما الشاشة الوراثة الكيميائية صrocess مفصلة هنا ينطوي على نقل مجموعات من الأجنة من بئر في لوحة واحدة لبئر في لوحة مختلفة عدة مرات، والحاجة لوصفها دقيقا وواضحا أمر بالغ الأهمية، حتى أنه عندما سجل ضربة كيماوية يمكن أن يكون خطيا وسهولة ارجاعه لهويتها داخل المكتبة الكيميائية (الشكل 3). طريقة سهلة لضمان ذلك هي تسمية لوحات في مثل هذه الطريقة أنه في أي وقت ومكان جيد لمجموعة من الأجنة تعامل من قبل مجمع مباريات مباشرة المكتبة وحة المخدرات المكان جيدا الكيميائي للمركب يستخدم لعلاج هذه الأجنة (الشكل 3). هنا، يستخدم نظام مزدوج من الألوان الترميز والعلامات العددية لتنظيم العينات التي تمت إضافتها إلى لوحات الشاشة باستخدام علامات دائمة (الشكل 3). في حين أن تحليل نتائج شاشة عالية الإنتاجية، وهناك حاجة ماسة لتطوير طريقة لتنظيم بشكل صحيح، تعليم، وتحليل جزيء صغير محتملالزيارات. لذا، يجب أن يكون شاشة الوراثة الكيميائية نظام الدرجات دقيق وواضح التي تم تصميمها بعناية والتقيد التام بها. وينبغي لهذا النظام بسهولة وبشكل كامل تنقل ديناميكية هامة للمجمع وتوفر وسيلة مختصرة لعرض نتائج الشاشة النهائية. طريقة واحدة لبناء مثل هذا النظام هو أن الأجنة درجة الاستفادة من النظام الطبقي، وهذا ما يفسر شدة المورفولوجية العامة وثقة ضرب. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يقترن فئات الطبقة مع (+) أو (-) لوصف أي تأثير توسعية أو التخفيض على المنطقة (ق) من الفائدة. هنا، تعرض الأجنة الزرد إلى مركبات فردية من مكتبة النشطة بيولوجيا (انزو الكيماويات) من 50٪ إلى 24 اكتفار HPF، ثم يعاير من قبل WISH باستخدام مزيج من ثلاثة riboprobes للكشف عن قطاعات كليون (الشكل 4A). باعتبارها نظام الدرجات سبيل المثال، بئر يحتوي على مجموعة من الأجنة التي لديها convolu القريبة الموسع بشكل كبيرتيد أنبوب صغير (PCT) من سليفة الكلوة، الكلى الجنينية الزرد، من شأنه أن يتسبب في مركب يستخدم لعلاج بشكل جيد يتم تصنيفها على أنها (الدرجة الأولى)، وهو في هذه الحالة من شأنه أن يمثل الطبقة المرتبطة عيب أشد وأعلى مستوى الثقة في النمط الظاهري لاحظ الشكل (4B). عندئذ المشروح المجمع مع (PCT) و (+)، ويجري تدوين كامل (الدرجة الأولى - PCT +) (الشكل 4B). هذا مفهوم التصنيف يوفر وسيلة بسيطة وسريعة لوصف مجموعة نفيسة من المعلومات المتعلقة جزيء صغير من اهتمام، بما في ذلك من شدة تأثير المركبات على الكائن الحي، المنطقة التي يتأثر المخدرات والطريقة التي كانت المنطقة تتأثر (الشكل 4B). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52063/52063fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1. &amp; #160؛ دليل الزرد استراتيجية شاشة الجنين الكيميائية ويمكن للباحث يختبر عمليا في 96 لوحة جيدا للمواد الكيميائية على الأجنة الزرد وتنفيذ معالجة WISH لاحق خلال أسبوع واحد. أداء أسبوعين من الاختبارات الكيميائية (1 أسبوع (يوم 06/01) و2 أسبوع (يوم 12/7)) يمكن إرفاقها مع الأسبوع الثالث مخصص لأخذ عينات التحليل. ما يقرب من 96 لوحات تستحق عينات من الشاشة ويمكن تصويرها وسجل 3 أسبوع (يوم 13-17). هذا السيناريو يصل إلى ما يقرب من 200 فحص المركبات في فترة زمنية 3 أسابيع، ما يعادل مكتبة صغيرة من حوالي 600 فحص المركبات بشكل كامل من قبل 9 أسابيع. يمكن تعديل هذه الاستراتيجية اليدوية اعتمادا على الموارد المتاحة. على سبيل المثال، يمكن أن تقلل من ثلاثة باحثين من الوقت لاستكمال شاشة حوالي 600 مركبات إلى 3 أسابيع مقارنة مع 9 أسابيع سيستغرق مع أحد الباحثين. استراتيجيات الفحص يمكن تكييفها عن طريق تعيين الباحثين لجوانب محددة من الشاشة، مثل علاج المخدراتمنة والموقع التهجين أو توجيه الباحثين في إجراء عملية الفرز بشكل مستقل بالكامل على أجزاء منفصلة من مكتبة الكيميائية. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52063/52063fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. مخطط انسيابي: انهيار سير العمل الشاشة 6 أيام ويمكن تقسيم عملية الفرز الكيميائية بتحفظ وصولا إلى 6 أيام. يوم 1 ويتكون من إنشاء أزواج التزاوج الزرد (= /&gt; 25) لتزويد أجنة لكل 96 لوحة جيدا ليتم عرضه. يوم 2 يشمل جمع الأجنة من غرف التزاوج وarraying لهم في عمق 96 لوحة جيدا، تليها العلاج من تعاطي المخدرات. في يوم 3 أجنة مستعدة لWISH، بما في ذلك dechorionation، تثبيت الأنسجة والأجنة الجفاف. أخيرا، يتم تنفيذ WISH على الأجنة خلال 4-6 يوم. يرجى ملاحظة أن إجراءات بديلة تلطيخ على عينات ثابتة يمكن أن يكون بسهولة Substituted لWISH. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52063/52063fig3highres.jpg" width="500" /> الرقم 3. لوحة توسيم نقل التخطيطي. والمحتشدة الأجنة الزرد والمخدرات يعامل في 96 لوحة جيدا ثم انتقلت إلى 24 لوحة جيدا لإزالة الأنقاض والتعرض pronase. ثم يتم نقل الأجنة إلى 48 لوحات جيدة لإعداد الجنين، WISH، وتثبيت الأنسجة. بعد ذلك، يتم نقل الأجنة إلى 12 لوحات جيدة للتسجيل والتصوير، والتخزين. ويتم إنجاز arraying الدقيق للأجنة من خلال استخدام نظام الترميز اللوني الذي يمكن للباحث لتتبع المواد الكيميائية المنشأ لكل عينة اختبار. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52063/52063fig3highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 4" fo:content العرض = &quot;5in&quot; SRC = &quot;/ ملفات / ftp_upload / 52063 / 52063fig4highres.jpg&quot; العرض = &quot;500&quot; /&gt; الرقم 4. مثال نظام الدرجات: تجزئة فحص الكلى تمكن تجربة WISH الباحث إلى وصمة عار أنواع معينة من الخلايا استنادا إلى هوية تحقيقات التي تم تحديدها، والسماح للتقييم التغيرات في الظواهر الجنين وفقا للتغيرات في موقع مرنا النسخ و/ أو المستويات. على سبيل المثال، ثلاثة قطاعات من الكلى الجنينية الزرد، وسليفة الكلوة، وقد وصفت باستخدام شاشة ميكس 1. شاشة ميكس 1 هو مزيج من تحقيقات تتكون من wt1b، الذي يموضع تحديدا في podocytes (P)، slc20a1a الذي يصادف القريبة الملتوية نبيب (PCT)، وslc12a1 التي تصف البعيدة في وقت مبكر (DE) شريحة 47. و(+) بجانب رمز تسمية المنطقة يستخدم لتعليم التوسع أو التحول الإيجابي في تلك المنطقة، في حين أن - يستخدم رمزا لإملاء التقليل من منطقة (). هنا، طب الطوارئbryos المخدرات تعامل مع رابطة الدول المستقلة 13-RA لها الداني الملتوية أنبوب صغير الموسع وخسارة كاملة من الجزء القاصي المبكر مع أي تأثير واضح على podocytes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52063/52063fig4highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos at JoVE.com

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

الزرد هو كائن حي تجريبي ممتاز لدراسة العمليات التنموية الفقاريات والأمراض التي تصيب البشر النموذج. هنا، نحن تصف بروتوكول بشأن كيفية تنفيذ اليدوية شاشة الكيميائية عالية الإنتاجية في الأجنة الزرد مع ككل جبل التهجين الموضعي (WISH) في القراءة خارج.

دليل جزيء صغير شاشة تقترب عالية الإنتاجية عن طريق الزرد الأجنة

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

توليد الأجنة اسماك الزرد همي بواسطة زرع

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

أسلوب الإنتاجية العالية للحصول على الحيوانات المنوية الحفظ بالتبريد واسماك الزرد في المختبر التسميد

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

اسماك الزرد نطاق واسع ، واستنادا في الجسم الحي شاشة جزيء صغير

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

شاشة إنتاجية عالية للنشاط Biomining سلولاز من مكتبات Metagenomic

Cellulose, the most abundant source of organic carbon on the planet, has wide-ranging industrial applications with increasing emphasis on biofuel ...

High-throughput Yeast Plasmid Overexpression Screen

شاشة عالية الإنتاجية الخميرة Overexpression البلازميد

The budding yeast, Saccharomyces cerevisiae, is a powerful model system for defining fundamental mechanisms of many important cellular processes, ...

High-throughput Screening for Small-molecule Modulators of Inward Rectifier Potassium Channels

الفرز الفائق الإنتاجية الصغيرة للجزيء المغيرون من الداخل قنوات البوتاسيوم المعدل

Specific members of the inward rectifier potassium (Kir) channel family are postulated drug targets for a variety of disorders, including hypertension, ...

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

الإنتاجية العالية فحص وظيفية باستخدام محلية الصنع ثنائي توهج luciferase الفحص

We present a rapid and inexpensive high-throughput screening protocol to identify transcriptional regulators of alpha-synuclein, a gene associated with ...

A Method of Permeabilization of Drosophila Embryos for Assays of Small Molecule Activity

A Method of Permeabilization of Drosophila Embryos for Assays of Small Molecule Activity

A طريقة Permeabilization من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة للفحوصات الصغيرة جزيء آخر

The Drosophila embryo has long been a powerful laboratory model for elucidating molecular and genetic mechanisms that control development. The ease of ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

التعافي من اسماك الزرد الكبار قلوب للتطبيقات عالية الإنتاجية

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

الإنتاجية العالية للكشف عن المغيرون الكيميائية من الجينات المشاركة ما بعد transcriptionally الخاضعة للرقابة

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...