Name: porous silicon microparticles for delivery of sirna therapeutics
Uploaded: 2015-01-15T14:00:00
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The authors acknowledge financial support from Houston Methodist Research Institute, the National Natural Science Foundation of China (Nos., 21231007 and 21121061), the Ministry of Education of China (Nos., 20100171110013 and 313058), the National Basic Research Program of China (973 Program No. 2014CB845604), and the Fundamental Research Funds for the Central Universities.

1. PCPs कण तैयारी <ol><li> 2 घंटे के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर हाइड्रोजन पेरोक्साइड के एक 30% समाधान में गैर-Functionalized झरझरा सिलिकॉन कणों oxidize। 2% कोमल सरगर्मी के साथ 65 डिग्री सेल्सियस पर दो दिनों के लिए isopropyl शराब में (3 aminopropyl) tri...

<ol>
	<li>De Fougerolles, A., Vornlocher, H. P., Maraganore, J., Lieberman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interfering+with+disease:+a+progress+report+on+siRNA-based+therapeutics.">Interfering with disease: a progress report on siRNA-based therapeutics.</a> Nat Rev Drug Discov. 6 (6), 443-453 (2007).</li><li>Rolland, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+medicines:+the+end+of+the+beginning.">Gene medicines: the end of the beginning.</a> Adv Drug Deliv Rev. 57 (5), 669-673 (2005).</li><li>Oh, Y. K., Park, T. 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O., Evangelopoulos, M., Chiappini, C., Liu, X., Ferrari, M., Tasciotti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+and+biocompatibility+of+multistage+nanovectors+in+physiological+systems.">Degradation and biocompatibility of multistage nanovectors in physiological systems.</a> J Biomed Mater Res A. 102 (10), 3540-3549 (2014).</li><li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+chemotherapy+response+with+sustained+EphA2+silencing+using+multistage+vector+delivery.">Enhancing chemotherapy response with sustained EphA2 silencing using multistage vector delivery.</a> Clin Cancer Res. 19 (7), 1806-1815 (2013).</li><li>Xu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multistage+vectored+siRNA+targeting+ataxia-telangiectasia+mutated+for+breast+cancer+therapy.">Multistage vectored siRNA targeting ataxia-telangiectasia mutated for breast cancer therapy.</a> Small. 9 (9-10), 1799-1808 .</li><li>Shen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+capacity+nanoporous+silicon+carrier+for+systemic+delivery+of+gene+silencing+therapeutics.">High capacity nanoporous silicon carrier for systemic delivery of gene silencing therapeutics.</a> ACS Nano. 7 (11), 9867-9880 (2013).</li><li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycation-functionalized+nanoporous+silicon+particles+for+gene+silencing+on+breast+cancer+cells.">Polycation-functionalized nanoporous silicon particles for gene silencing on breast cancer cells.</a> Biomaterials. 35 (1), 423-431 (2014).</li><li>Ozpolat, B., Sood, A. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+hurdles+in+polyfectin+design+and+mechanistic+background+to+polycation+induced+cytotoxicity.">Molecular hurdles in polyfectin design and mechanistic background to polycation induced cytotoxicity.</a> Adv Drug Deliv Rev. 58 (14), 1523-1531 (2006).</li><li>Andrews, P. M., Bates, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+movement+of+cationic+molecules+across+the+glomerular+wall.">Dose-dependent movement of cationic molecules across the glomerular wall.</a> Anat Rec. 212 (3), 223-231 (1985).</li><li>Ananta, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometrical+confinement+of+gadolinium-based+contrast+agents+in+nanoporous+particles+enhances+T1+contrast.">Geometrical confinement of gadolinium-based contrast agents in nanoporous particles enhances T1 contrast.</a> Nat Nanotechnol. 5 (11), 815-821 (2010).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल की कोशिकाओं में siRNA के सफल प्रसव और अभिकर्मक के लिए एक विधि का वर्णन है। विशेष रूप से, siRNA के वितरण polycation-क्रियाशील साई कणों से मिलकर एक multifunctional मंच का उपयोग करके हासिल की है। siRNA चिकित्सा के उपयोग क...

छोटे दखल RNAs (siRNAs) जीनों की अभिव्यक्ति को दबा सकते हैं कि डबल असहाय आरएनए अणु होते हैं। हाल के वर्षों में, siRNAs नैदानिक ​​अनुप्रयोगों 1-5 में भविष्य में इस्तेमाल के लिए चिकित्सीय क्षमता दिखाने कि biodrugs की एक नई पीढ़ी के रूप में विकसित किया गया है। हालांकि, siRNA चिकित्सा के सफल क्रियान्वयन के कारण न्युक्लिअसिज़, गरीब intracellular तेज, कम अभिकर्मक दक्षता और endosome / लाइसोसोम 5 से अक्षम रिलीज से क्षरण करने के लिए, एक काफी चुनौती बनी हुई है। इन बाधाओं में से कई लोग सुरक्षित रूप से और कुशलता से रोगग्रस्त ऊतकों को siRNA वितरित कर सकते हैं, जो वितरण प्लेटफार्मों का विकास, के द्वारा दूर किया जा सकता है। वायरल वाहकों की तुलना में, गैर वायरल प्लेटफार्मों इस तरह की सुरक्षा, कम लागत और सिलाई की आसानी के रूप में कई लाभ प्रदान करते हैं। ऐसे पॉलिमर और लिपिड के रूप में विशेष रूप से, cationic नैनोकणों में, siRNA वितरण 3 के लिए उपयोगी साबित हुई है। इससे पहले, हम एक चक्रिकाभ डॉ विकसित किया हैवितरण प्रणाली स्नातकीय, multistage वेक्टर (एमएसवी) करार दिया। इस मंच के एक वाहन एक दूसरे से जारी किया गया है, जिसमें अनुक्रमिक चरणों पर आधारित है। दूसरे चरण वाहनों दवाओं या विपरीत एजेंटों 6,7 के साथ भरी हुई नैनोकणों रहे हैं, जबकि पहले चरण वाहन, biodegradable, झरझरा सिलिकॉन (साई) से बने एक microparticle है। सी 8 degrades के रूप में साई सामग्री में एम्बेडेड रहे हैं जो नैनोकणों, धीरे-धीरे जारी कर रहे हैं। सी कणों का उपयोग करने का एक लाभ यह आकृति विज्ञान और सतह विशेषताओं आसानी से इष्टतम biodistribution और नशीली दवाओं के रिलीज को प्राप्त करने के आधार पर किया जा सकता है। हाल ही में, ट्यूमर के ऊतक को siRNA liposomes की डिलीवरी के लिए एमएसवी मंच का सफल प्रयोग एक डिम्बग्रंथि और स्तन कैंसर माउस मॉडल 9, 10 में दिखाया गया था। इस काम में, हम एमएसवी मंच के प्रिंसिपलों पर आधारित siRNA के लिए एक सार्वभौमिक वितरण प्रणाली गढ़े गए हैं। इस वितरण प्रणाली की प्रभावकारिता हमें पहले प्रदर्शन किया गया हैअलग siRNA आईएनजी 11 अणु है। प्रणाली polyethylenimine (पी) और arginine (ARG) के साथ grafted साई से मिलकर, एक polycation-क्रियाशील झरझरा सिलिकॉन (PCPs) वाहक है। Arg और साई पी की विषाक्तता को कम करने के लिए सेवा कर सकते हैं, जबकि पहले से 11 demonstarted के रूप में पी, siRNA साथ बातचीत electrostatic बनाने में सहायता कर सकते हैं। साई microparticles siRNA के संरक्षण और निरंतर जारी सक्षम है, जबकि इसके अलावा, पी की उपस्थिति, intracellular तेज और endosomal भागने में सहायता कर सकते हैं। साई कणों धीरे-धीरे जिससे एक अलग आकृति विज्ञान और एक संकीर्ण आकार वितरण 11 है जो Arg-पी / siRNA नैनोकणों (चित्रा 1) के गठन में जिसके परिणामस्वरूप, शारीरिक शर्तों के तहत नीचा। PCPs / siRNA प्रणाली की स्थिरता के बारे में जानकारी के लिए, शेन एट अल। 11 से अध्ययन करने के लिए देखें। दूसरे चरण नैनोकणों शुरू में prese नहीं कर रहे हैं के बाद से यह PCPs मंच, पारंपरिक एमएसवी से अलग हैपहले चरण के वाहक 11, 12 degrades के रूप में NT वाहक में है, लेकिन समय के साथ बनते हैं। PCPs प्रणाली की siRNA लोड हो रहा है दक्षता, cytotoxicity और जीन मुंह बंद दक्षता विट्रो में मूल्यांकन किया गया है। अभिकर्मक दक्षता डीएनए की मरम्मत 10 में शामिल है, जो (एटीएम) ओंकोजीन उत्परिवर्तित गतिभंग telangiectasia, के खिलाफ siRNA का उपयोग कर मापा गया था। इससे पहले, एटीएम का दमन एक स्तन कैंसर मॉडल 10 में ट्यूमर के विकास को कम करने के लिए दिखाया गया है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1812">
	<tbody>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;width:605px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:421px;">Company/Institution</td>
			<td style="width:133px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:653px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Polyethylenimine (PEI), branched</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">408727</td>
			<td style="width:653px;">Average molecular weight ~25,000 Da</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">L-Arginine</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">A5006</td>
			<td style="width:653px;">Reagent grade, &#8805;98%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Boc-Asp-OH</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">408-468</td>
			<td style="width:653px;">99%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">(3-&#8203;Aminopropyl)&#8203;triethoxysilane</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">440140</td>
			<td style="width:653px;">99%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Hydrogen peroxide solution</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">216763</td>
			<td style="width:653px;">30&#160;wt. % in H2O</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Sulfuric acid</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">339741</td>
			<td style="width:653px;">100.00%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">W292907</td>
			<td style="width:653px;">&#8805;99.7%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Ethanol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">459844</td>
			<td>&#8805;99.5%&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&#8242;-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>03449</td>
			<td>&#8805;99%</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Albumin from bovine serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7030-10G</td>
			<td>Blocking agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Ataxia-telangiectasia mutated siRNA&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Designed in-house</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Tris Acetate-EDTA buffer</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">T9650</td>
			<td style="width:653px;">For DNA agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">TWEEN 20</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:653px;">Polyethylene glycol sorbitan monolaurate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">2-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:421px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium dodecyl sulfate</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3771</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>71496</td>
			<td style="width:653px;">For making phosphate buffer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sodium phosphate dibasic</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>71640</td>
			<td style="width:653px;">For making phosphate buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Mouse IgG</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">A4416</td>
			<td style="width:653px;">Secondary antibody (anti-mouse) for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">N-Hydroxysuccinimide (NHS)</td>
			<td style="width:421px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:133px;">130672</td>
			<td style="width:653px;">98%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">CELLSTAR 96W Microplate Tissue Culture Treated Clear w/ Lid</td>
			<td style="width:421px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:133px;">655182</td>
			<td style="width:653px;">96-well plate</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">10X Tris-Glycine Liquid</td>
			<td style="width:421px;">Li-Cor&#160;</td>
			<td style="width:133px;">928-40010</td>
			<td style="width:653px;">Transfer buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Paraformaldehyde solution 4% in PBS&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Santa Cruz</td>
			<td>Sc-281692</td>
			<td style="width:653px;">Fixation of cells</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)</td>
			<td style="width:421px;">Promega</td>
			<td style="width:133px;">G5421</td>
			<td style="width:653px;">Proliferation assay</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">BP399-500</td>
			<td style="width:653px;">10 X Solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Corning cellgro Dulbecco&#39;s Modification of Eagle&#39;s (Mod.)</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">MT-15-017-CM</td>
			<td style="width:653px;">Cell culture media, 1X solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td>AC21568-2500</td>
			<td style="width:653px;">Octyl phenol ethoxylate, permeabilization agent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Cover glass</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12-530C&#160;</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Methanol</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>A412-1</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot transfer buffer</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Plastic Cuvettes</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">14-377-010&#160;</td>
			<td style="width:653px;">For size measurements using Zetasizer Nano ZS</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Molecular BioProducts RNase AWAY Surface Decontaminant</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">14-754-34</td>
			<td style="width:653px;">Spray for removing RNAse contamination</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Agarose</td>
			<td style="width:421px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:133px;">BP165-25</td>
			<td style="width:653px;">Low melting point, for running RNA samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td>P36935</td>
			<td style="width:653px;">Antifade reagent with DAPI, nucelus detection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">A12379</td>
			<td style="width:653px;">Dissolve 300 units in 1.5 ml methanol, detection of filamentous actin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">SYBR Safe DNA Gel Stain</td>
			<td style="width:421px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">S33102</td>
			<td style="width:653px;">Visualization of RNA</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Negative Control siRNA</td>
			<td style="width:421px;">Qiagen</td>
			<td style="width:133px;">1022076</td>
			<td style="width:653px;">Control siRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">AllStars Neg. siRNA AF 555</td>
			<td style="width:421px;">Qiagen</td>
			<td style="width:133px;">1027294</td>
			<td style="width:653px;">Fluorescent control siRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Cell scraper</td>
			<td style="width:421px;">Celltreat</td>
			<td>229310</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BioLite Multidishes and Microwell Plates</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>130184</td>
			<td style="width:653px;">6-well plate</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce LDS Sample Loading Buffer (4X)&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>84788</td>
			<td style="width:653px;">Sample loading buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Pierce BCS Protein Assay Kit</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:133px;">23227</td>
			<td style="width:653px;">Protein quantification assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktails (100X)</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:133px;">78430</td>
			<td style="width:653px;">Protease inhibitor cocktail, use at 1X</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:133px;">78501</td>
			<td style="width:653px;">Protein extraction reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Sorvall Legend Micro 21R</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002440</td>
			<td>Centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Beta Actin Antibody&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;</td>
			<td>MA1-91399</td>
			<td>&#946;-actin primary antibody (from mouse) for western blor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6X TriTrack DNA Loading Dye</td>
			<td style="width:421px;">Thermo Scientific</td>
			<td>R1161</td>
			<td style="width:653px;">DNA loading dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nuclease-Free Water&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Life Technologies</td>
			<td>AM9938</td>
			<td style="width:653px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Fat Dry Milk</td>
			<td style="width:421px;">Lab Scientific</td>
			<td>M0841</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-well BD Falcon culture slides&#160;</td>
			<td style="width:421px;">BD Biosciences</td>
			<td>354102</td>
			<td style="width:653px;">2-well culture slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amersham ECL Western blot detection reagent.&#160;</td>
			<td style="width:421px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td style="width:133px;">RPN2106</td>
			<td style="width:653px;">Western blot detection reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BA Membranes</td>
			<td style="width:421px;">GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>10402096</td>
			<td style="width:653px;">Nitrocellulose membrane for Wester blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ATM (D2E2) Rabbit mAb</td>
			<td style="width:421px;">Cell Signaling</td>
			<td>2873S</td>
			<td style="width:653px;">ATM primary antibody (from rabbit) for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td style="width:421px;">Cell Signaling&#160;</td>
			<td>7074</td>
			<td style="width:653px;">Secondary antibody (anti-rabbit) for Western blot&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Folded capillary cells</td>
			<td style="width:421px;">Malvern&#160;</td>
			<td style="width:133px;">DTS 1061</td>
			<td style="width:653px;">For zeta potentail measurements using Zetasizer Nano ZS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">MDA-MB-231 cell line</td>
			<td style="width:421px;">ATCC</td>
			<td style="width:133px;">HTB-26</td>
			<td style="width:653px;">Mammary Gland/Breast</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">12% Mini-PROTEAN TGX Gel</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>456-1043&#160;</td>
			<td style="width:653px;">For Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biorad PowerPac HC</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>164-5052</td>
			<td>Power supply for electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x Tris/Glycine/SDS Buffer</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>161-0732</td>
			<td>Running buffer for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wide Mini-Sub Cell GT Cell</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>170-4405</td>
			<td>Electrophoresis equipment for DNA agarose gel&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini-PROTEAN Tetra cell</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>165-8000</td>
			<td>Electrophoresis equipment for Western blot</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ChemiDoc XRS+ System with Image Lab Software</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>170-8265</td>
			<td>Image acquisition and analysis software for gels and blots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#34; (10cm) dia., 5x7mm diced Silicon Wafer</td>
			<td>Ted Pella&#160;</td>
			<td>16007</td>
			<td>Silicon waferfor scanning electron microscopy and atomic force microscopy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermomixer R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22670107</td>
			<td>Shaker&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoton II diluent</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>8546719</td>
			<td>Isoton diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multisizer 4 Coulter Counter</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A63076</td>
			<td>Particle counting analyzer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Non-functionalized porous silicon particles&#160;</td>
			<td style="width:421px;">Microelectronics Research Center, University of Texas at Austin</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Dicoidal shape. 2.6 &#956;m (diameter) x 0.7 &#956;m (hight), provided in isopropyl alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Zetasizer Nano ZS</td>
			<td style="width:421px;">Malvern</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle analyzer system for size and zeta potential&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Scanning Electron Microscope</td>
			<td style="width:421px;">FEI</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle size and shape&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:605px;">Atomic Force Microscope</td>
			<td style="width:421px;">Bruker</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Particle size and shape</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:605px;">Fluo ViewTM 1000 Confocal Microscope</td>
			<td style="width:421px;">Olympus</td>
			<td style="width:133px;"></td>
			<td style="width:653px;">Visualization of fixed and live cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

porous silicon microparticles for delivery of sirna therapeutics

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the successful implementation of siRNA therapy requires the use of delivery platforms that can overcome the major challenges of siRNA delivery, such as enzymatic degradation, low intracellular uptake and lysosomal entrapment. Here, a protocol for the preparation and use of a biocompatible and effective siRNA delivery system is presented. This platform consists of polyethylenimine (PEI) and arginine (Arg)-grafted porous silicon microparticles, which can be loaded with siRNA by performing a simple mixing step. The silicon particles are gradually degraded over time, thereby triggering the formation of Arg-PEI/siRNA nanoparticles. This delivery vehicle provides a means for protecting and internalizing siRNA, without causing cytotoxicity. The major steps of polycation functionalization, particle characterization, and siRNA loading are outlined in detail. In addition, the procedures for determining particle uptake, cytotoxicity, and transfection efficacy are also described.

इस प्रोटोकॉल सुरक्षित और कुशल siRNA अभिकर्मक के लिए एक गैर-वायरल वितरण प्रणाली के उपयोग का वर्णन करता है। SEM के परिणामों PCPs कणों आकार में बेलनाकार हैं और 2.6 माइक्रोन (2A चित्रा) की एक व्यास है कि पता चलता ?...

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Porous Silicon Microparticles for Delivery of siRNA Therapeutics

डिलिवरी छोटे दखल शाही सेना (siRNA) के चिकित्सीय कार्यान्वयन के लिए मुख्य चुनौती बनी हुई है। इस प्रोटोकॉल arginine और polyethylenimine grafted झरझरा सिलिकॉन microparticles से मिलकर, एक multifunctional और biocompatible siRNA वितरण मंच का इस्तेमाल शामिल है।

SiRNA चिकित्सा विज्ञान की डिलीवरी के लिए झरझरा सिलिकॉन microparticles

Small interfering RNA (siRNA) can be used to suppress gene expression, thereby providing a new avenue for the treatment of various diseases. However, the ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Soft Lithographic Functionalization and Patterning Oxide-free Silicon and Germanium

शीतल Lithographic functionalization और ऑक्साइड मुक्त patterning सिलिकॉन और जर्मेनियम

The development of hybrid electronic devices relies in large part on the integration of (bio)organic materials and inorganic semiconductors through a ...

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

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Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

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के ऑप्टिकल पहचान<em&gt; ई. कोली</emMesoporous सिलिकन biosensors के द्वारा&gt; जीवाणु

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ऊतक इंजीनियरिंग के लिए Thermogelling पाली (एन isopropylacrylamide) Alginate microparticles साथ -graft-chondroitin सल्फेट कंपोजिट के संश्लेषण

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Preparation of Neutrally-charged, pH-responsive Polymeric Nanoparticles for Cytosolic siRNA Delivery

साइटोसोलिक सिरना डिलिवरी के लिए तटस्थ-आवेशित, पीएच-उत्तरदायी पॉलीमेरिक नैनोकणों की तैयारी

The success of siRNA as a targeted molecular medicine is dependent upon its efficient cytosolic delivery to cells within the tissue of pathology. Clinical ...