Name: detection of human leukocyte antigen biomarkers in breast cancer utilizing label-free biosensor technology
Uploaded: 2015-03-24T13:00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology at JoVE.com

These studies were supported in part by the Development Corporation of Abilene which provides laboratory space and salary support for Experimmune, a Center for Immunotherapeutic Development at Texas Tech University Health Sciences Center and Resonant Sensors Incorporated.

بيان الأخلاق: تم الحصول على عينات الأنسجة والبلازما البشرية التي تم تحديدها دي من مركز هندريك الطبية في ظل مجلس المراجعة المؤسسية الموافقة على البروتوكول. 1. إضافة المعقدة البيروكسيديز الأجسام المضادة ملاحظة: رصد من هذه الخطوة هو اختياري. انظر البروتوكول البديل إن لم يكن الرصد. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على مشتقات المغلفة لوحات أفيدين المتاحة تجاريا (انظر المواد والمعدات الجدول). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) الرقم الهيدروجيني 7.2 إلى الآبار. ملاحظة: يحضن مسبقا PBS في 28 ° C للحد من تحولات الرنين درجة الحرارة ذات الصلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البرمجيات مفتوحة الأحيائي الماسح الضوئي واتبع معالج الإعداد لتحديد الإجراء التجريبي الذي يضم مجموعة من الفراغات والمعايير والعينات في تخطيط لوحة، وتحديد درجة الحرارة (28 ° C)، وعدد من مسح لكل دقيقة (1)، وطول التجربة ( 150 دقيقة لاستيعاب الخطوات التحضيرية). </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة فحص أعدت في التسمية الأحيائي الحر الماسح الضوئي والبدء في الفحص الأول. عندما الفحص الأول هو كاملة، حدد &quot;إشارة الذاتي لبدء&quot;. الأساس هو مجموعة أولية من المسح التي تم جمعها في بداية التجربة. إذا كانت هذه هي أول قراءة أجريت على هذه اللوحة محددة، والسماح للالماسح الضوئي لتشغيل لكي تتوازن درجة الحرارة والقضاء على الانجراف في الأساس. انظر الشكل 2 لقطة من خط الأساس تليها عينة بالإضافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن استقر خط الأساس، أو على الأقل 5 بالاشعة، وقفة القراءة وإخراج اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة PBS عن طريق الإغراق في الحوض وإضافة 50 ميكرولتر RL21A المعقدة البيروكسيديز الأجسام المضادة في [10 ميكروغرام / مل في PBS الرقم الهيدروجيني 7.2] للجميع ولكن آبار المراقبة على لوحة. إضافة 50 ميكرولتر PBS إلى آبار المراقبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة العودة إلى الماسح الضوئي الأحيائي واستئناف القراءة حتى يتم التوصل إلى التشبع، ما يقرب من 1.5 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقفة القراءة وإخراج اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل<html> لوحة 3 مرات مع 200 ميكرولتر / جيد الفوسفات مخزنة المالحة + 0.05٪ توين 20 (PBST) تليها 3 يشطف مع 200 ميكرولتر / جيد PBS الرقم الهيدروجيني 7.2. كرر مع برنامج تلفزيوني. اضغط PBS الزائدة من لوحة على مناشف ورقية قبل الانتقال إلى الخطوة التالية. ملاحظة: هذه الخطوة يمكن أن يؤديها على صفيحة غسالة أوتوماتيكية أو غسل لوحة 3 مرات مع 200 PBST ميكرولتر عن طريق الإغراق السائل إلى بالوعة واستبدال PBST مع ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر PBS الرقم الهيدروجيني 7.2 لجميع الآبار النشطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة العودة إلى الماسح الضوئي الأحيائي واستئناف القراءة لمراقبة ما بعد غسل-الرنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف القراءة وإخراج اللوحة. </li></ol> بروتوكول بديل للالخطوة 1: <ol start="13" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر RL21A الأجسام المضادة المعقدة البيروكسيديز في [10 ميكروغرام / مل PBS] لجميع الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 1.5 ساعة أو بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل لوحة 3 مرات مع 200 ميكرولتر / جيد PBST تليها 3 يشطف مع 200 ميكرولتر / جيد PBS كما في الخطوة 1.9. </li></ol>jove_title &quot;&gt; 2. إضافة الحليلة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة برنامج تلفزيوني وإضافة 50 ميكرولتر لكل بئر من العازلة الفحص المناسب. لهذا الاختبار، تم استخدام المتاحة تجاريا المصل البشري الطبيعي المخفف 01:20 في برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مفتوحة الأحيائي برنامج الماسح الضوئي واتبع معالج الإعداد لتحديد الإجراء التجريبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة في الماسح الضوئي الأحيائي ويبدأ خط الأساس قراءتها. إذا كانت هذه هي أول قراءة أجريت على هذه اللوحة محددة، والسماح للتشغيل الماسح الضوئي لكي تتوازن درجة الحرارة والقضاء على الانجراف في الأساس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن استقر خط الأساس، أو على الأقل 5 بالاشعة، وقفة القراءة وإخراج اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المخزن المؤقت فحص من الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضوابط سبايك مع HLA A * 02: 01 مونومر تحمل ذات الصلة (FLSL) أو غير ذات صلة (SLLV، YLEV، أو KVL) الببتيدات بتركيزات تتراوح بين [،625-10 ميكروغرام / مل] العازلة في الفحص. إضافة 50 ميكرولتر من المعايير لآبار السيطرة على لوحة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر من تحليلها في المخزن فحص لعينةالآبار من لوحة. لهذا الاختبار، وارتفعت تم استخدام مصل الدم البشري متاحة تجاريا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة العودة إلى الماسح الضوئي الأحيائي واستئناف القراءة حتى يتم التوصل إلى التشبع، حوالي 30-60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقفة القراءة وإخراج اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل لوحة 3 مرات مع 200 ميكرولتر / جيد PBST تليها 3 يشطف مع 200 ميكرولتر / جيد PBS كما في الخطوة 1.9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 50 ميكرولتر عازلة فحص لجميع الآبار النشطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج لوحة العودة إلى الماسح الضوئي الأحيائي واستئناف القراءة لمراقبة ما بعد غسل-الرنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف القراءة وإخراج اللوحة. ملاحظة: المخزن المؤقت الفحص يمكن أن يكون PBS، الأنسجة وسائل الإعلام والثقافة، أو المصل البشري المخفف 01:20 في برنامج تلفزيوني اعتمادا على الهدف من الفحص. </li></ol> تحليل 3. البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل باستخدام برنامج الأحيائي الماسح الضوئي أو تصدير ملفات البيانات الخام إلى فضل برامج التحليل الإحصائي. برنامج الأحيائي الماسح الضوئي تلقائيا بإنشاء منحنى ملزم على أساستخطيط لوحة المقدمة خلال الإعداد التجريبية. ملاحظة: إذا لم باستخدام برنامج الماسح الضوئي الأحيائي للتحليل، اتبع الخطوات 3،2-3،4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طرح خط الأساس ومراقبة سلبية من كل نقطة البيانات اللاحقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب المتوسط ​​والانحراف المعياري للآبار تكرار في كل نقطة زمنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد الرسم البياني لمنحنى ملزم أو تحديد بيانات نقطة النهاية لشريط الرسوم البيانية. </li></ol>

<ol>
	<li>Shastri, N., Schwab, S., Serwold, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Producing+nature's+gene-chips:+the+generation+of+peptides+for+display+by+MHC+class+I+molecules.">Producing nature's gene-chips: the generation of peptides for display by MHC class I molecules.</a> Annu Rev Immunol. 20, 463-493 (2002).</li><li>Peaper, D. R., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+MHC+class+I+assembly+and+peptide+binding.">Regulation of MHC class I assembly and peptide binding.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 343-368 (2008).</li><li>Hawkins, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+HLA-presented+fragment+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+is+a+therapeutic+target+for+invasive+breast+cancer.">An HLA-presented fragment of macrophage migration inhibitory factor is a therapeutic target for invasive breast cancer.</a> J Immunol. 186 (11), 6607-6616 (2011).</li><li>Verma, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TCR+mimic+monoclonal+antibody+targets+a+specific+peptide/HLA+class+I+complex+and+significantly+impedes+tumor+growth+in+vivo+using+breast+cancer+models.">TCR mimic monoclonal antibody targets a specific peptide/HLA class I complex and significantly impedes tumor growth in vivo using breast cancer models.</a> J Immunol. 184 (4), 2156-2165 (2010).</li><li>Verma, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TCR+mimic+monoclonal+antibodies+induce+apoptosis+of+tumor+cells+via+immune+effector-independent+mechanisms.">TCR mimic monoclonal antibodies induce apoptosis of tumor cells via immune effector-independent mechanisms.</a> J Immunol. 186 (5), 3265-3276 (2011).</li><li>Bassani-Sternberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+plasma+HLA+peptidome+as+a+potential+source+for+cancer+biomarkers.">Soluble plasma HLA peptidome as a potential source for cancer biomarkers.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (44), 18769-18776 (2010).</li><li>Hickman, H. D., Yewdell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mining+the+plasma+immunopeptidome+for+cancer+peptides+as+biomarkers+and+beyond.">Mining the plasma immunopeptidome for cancer peptides as biomarkers and beyond.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (44), 18747-18748 (2010).</li><li>Neethling, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+vaccine+potency+using+TCRmimic+antibodies.">Assessing vaccine potency using TCRmimic antibodies.</a> Vaccine. 26 (25), 3092-3102 (2008).</li><li>Mittendorf, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+trial+results+of+the+HER-2/neu+(E75)+vaccine+to+prevent+breast+cancer+recurrence+in+high-risk+patients:+from.">Clinical trial results of the HER-2/neu (E75) vaccine to prevent breast cancer recurrence in high-risk patients: from.</a> US Military Cancer Institute Clinical Trials Group Study I-01 and I-02. Cancer. 118 (10), 2594-2602 (2012).</li><li>Winter, H., Fox, B. A., Ruttinger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Future+of+cancer+vaccines.">Future of cancer vaccines.</a> Methods Mol Biol. 1139, 555-564 (2014).</li><li>Magnusson, R., Wawro, D., Zimmerman, S., Ding, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resonant+photonic+biosensors+with+polarization-based+multiparametric+discrimination+in+each+channel.">Resonant photonic biosensors with polarization-based multiparametric discrimination in each channel.</a> Sensors. 11 (2), 1476-1488 (2011).</li><li>Kaja, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+novel+biomarkers+for+ovarian+cancer+with+an+optical+nanotechnology+detection+system+enabling+label-free+diagnostics.">Detection of novel biomarkers for ovarian cancer with an optical nanotechnology detection system enabling label-free diagnostics.</a> J Biomed Opt. 17 (8), 081412-081411 (2012).</li><li>Magnusson, R., Wang, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+principle+for+optical+filters.">New principle for optical filters.</a> Appl. Phys. Lett. 61, 1022-1024 (1992).</li><li>Wawro, D., Tibuleac, S., Magnusson, R., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+fiber+endface+biosensor+based+on+resonances+in+dielectric+waveguide+gratings.">Optical fiber endface biosensor based on resonances in dielectric waveguide gratings.</a> Proc. SPIE. 3911, 86-94 (2000).</li><li>Altman, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+analysis+of+antigen-specific+T+lymphocytes.">Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes.</a> Science. 274 (5284), 94-96 (1996).</li></ol>

المؤلفين، ديبرا Wawro Weidanz وروبرت ماجنوسون، هي على التوالي الرئيس التنفيذي والرئيس التنفيذي للتكنولوجيا في الرنين مجسات للإعلام، التي تنتج لوحة الأحيائي القارئ وفحص لوحات المستخدمة في هذه المقالة.

الطريقة الموصوفة هنا يدخل نظام فحص العلامات البيولوجية لتشخيص السرطان الذي من شأنه أن يمكن الكشف السريع عن ذوبان المجمعات الببتيد / HLA في مصل الدم والبلازما والبول أو اللعاب عينات من المرضى في إنتاجية عالية 96- أو شكل 384 بئرا. هذا النظام الفحص باستخدام الخلايا التائية مستقبلات محاكاة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ونظام الكشف خالية من التسمية يقطع الوقت التحليل إلى أقل من 1 ساعة مقارنة مع 3.5 ساعة بواسطة ELISA التقليدية. هذا النهج الإنتاجية العالية تمكن الطبقات السريع للمرضى إلى التجارب السريرية للقاحات السرطان العلاجية أو المستحضرات الصيدلانية البيولوجية. الأساليب الحالية للكشف عن هذه الأهداف المرض تتطلب تنقية تقارب وHPLC-MS / MS عينات المريض الفردية، وهي عملية تستغرق ومرهقة والوقت. على الرغم من أن هذه الطريقة هو قابل للتقنيات ELISA التقليدية، هناك قلق من أن الكواشف كشف الثانوية مثل مكافحة β2 المكروغلوبولين الأجسام المضادة يمكن أن يغير هيكل HL الوليدجزيء وتمنع ملزمة للكشف عن الحد TCRm. كشف خالية من التسمية يخفف من هذه المخاوف. يمكن تعديل هذا الإجراء للاستخدام على أنظمة خالية من التسمية الأخرى مثل نظام سطح مأكل الرنين. ومع ذلك، فإن هذا يقلل كثيرا من قدرات إنتاجية أعلى بالمقارنة مع النظام الأحيائي المستخدمة في هذه الدراسة. هذا البروتوكول يمكن تعديلها على نحو فعال للكشف عن المؤشرات الحيوية غير HLA-في مصل المريض والبلازما مع الالتزام بضع خطوات حاسمة. ويوصى رصد عملية طلاء الأجسام المضادة الأولية لتعظيم الاستفادة من السطح، باعتباره &lt;200 مساء التحول سوف يؤدي على الأرجح في إشارة منخفضة للخطوة الكشف اللاحقة. خط الأساس وبعد غسل-يقرأ مفيدة لتحليل نقطة النهاية حيث وفرة للبروتينات المصل قد يخفي ملزم من انخفاض تركيز تحليلها. وأخيرا، والتباين في درجة الحرارة من العينات يمكن أن يؤدي بشكل جيد لاختلاف الآبار. فمن المستحسن أن جميع العينات تكون مرحلة ما قبل المحتضنة لد يتم تعيين التسمية biosassay مجانا تحكم في درجة الحرارة وحدة في 2-3 درجة مئوية فوق درجة حرارة الغرفة. وينبغي أن يسمح عينات المبردة وقتا كافيا للوصول إلى درجة حرارة التشغيل. وسوف تشمل التعديلات المستقبلية من هذا البروتوكول مضاعفة من TCRm على سطح اللوحة. النظام الأحيائي هو الانقياد حاليا لاكتشاف آبار في مناطق ذات كثافة ما لا يقل عن 8 الصفيف. عن طريق إدخال 4-8 TCRm إلى كل بئر، في حجم عينة الاختبار يتم تخفيض وتمكين مجموعة من البيانات التي تزداد تعقيدا لكل مريض. يمكن لهذه القدرة مزيد من إبلاغ المرضى فيما يتعلق الخيارات العلاجية.

الطبقة I الكريات البيض البشرية مستضد (HLA) عينات الببتيدات من 8-11 الأحماض الأمينية في الطول المستمدة من تدهور proteasomal من البروتين داخل الخلايا ذخيرة وتقدم هذه الببتيدات على سطح كل خلية الأنوية 1،2. مجمع HLA هو &quot;العلامات البيولوجية الطبيعة&quot;، مما يدل على صحة كل خلية (الشكل 1) لتعميم الخلايا الليمفاوية التائية السامة (CTL). الاعتراف المرض المرتبطة الببتيدات النتائج في القضاء على الخلايا المخالف من قبل CTL. وهكذا، فإن الاستجابة المناعية التكيفية فعالة للغاية في القضاء على العدوى الفيروسية والأورام. ومع ذلك، فإن الجهاز المناعي يمارس الضغط والتي غالبا ما يعزز اختيار بحثا عن الفيروسات أو ورم قادرة على التهرب من الاستجابة الفعالة CTL. مستقبلات الخلايا T-محاكاة (TCRm) الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (MABS) التي تعترف محدد الببتيد / HLA-A * 02: 01 المجمعات مثل تلك المستمدة من سرطان الثدي البروتينات المرتبطة بها، عامل بلعم المثبطة الهجرة (MIF19-27) 3 وNY-ESO-1 157-165، وتمكين كشف وتدمير خلايا سرطان الثدي في حال عدم وجود المضادة للورم فعال CTL استجابة 4،5. ويركز هذا العمل التمثيلي على HLA-A * 0201 جزيء، وهو ما يعبر عنه بنسبة تصل إلى 30٪ من السكان. ومع ذلك، فإن تحديد غيرها من المجمعات HLA / الببتيد ذات الصلة، تليها إنتاج TCRm ويمكن من تطوير المناعية المستهدفة وتشخيص الأمراض رفيق، وتوسيع فائدة هذا العمل إلى السكان أوسع من ذلك بكثير. يتم تحرير جزء من المجمعات الببتيد / HLA متجهة إلى سطح الخلية في البلازما. ونظرا لطبيعة معقدة للغاية من الببتيد / حمامات HLA، الأساليب الحالية للتعدين وimmunopeptidome عن المؤشرات الحيوية المرتبطة HLA هي مضيعة للوقت. وتتطلب هذه العملية تنقية تقارب من HLA القابلة للذوبان من البلازما، والفصل بين HLA الببتيدات ذات الصلة عن طريق عكس المرحلة ارتفاع ضغط اللوني السائل(RP-HPLC) والببتيد تسلسل التي كتبها جنبا إلى جنب مطياف الكتلة (MS / MS) 6،7. على الرغم من أن هذه العملية هي خيارا قابلا للتطبيق لاكتشاف أهداف علاجية جديدة، بل هو عملية مرهقة كأداة تشخيصية رفيق للأهداف المرتبطة HLA بالفعل في لقاح علاجي أو خط أنابيب الصيدلانية البيولوجية 8-10. TCRm الموجهة ضد هذه الأهداف توفر الأدوات اللازمة لتطوير التشخيص رفيق السريعة التي تهدف إلى تقسيمها المرضى في التجارب السريرية ذات الصلة وتوفير خيارات علاجية أكثر استنارة. في هذا العمل، يتم تقديم نظام فحص اختراق العلامات البيولوجية لتشخيص مرض السرطان الذي يستخدم TCRm ونظام الأحيائي خالية من التسمية التي تراقب التفاعلات البيولوجية مع خطوات معالجة الحد الأدنى. ويستند هذا النظام الأحيائي خالية من التسمية على الطريقة التي يستخدم الموجهة وضع الرنين (GMR) التأثير الذي يحدث في حواجز شبكية الدليل الموجي عازلة 11-14. عندما الاتصالات ذات النطاق العريض في ضوء إنحرافيصريف في لوحات المطلوبة لهذا النظام، وتنعكس اثنين من موجات محددة. ويتم رصد التفاعل بين مستقبلات ملزمة يجمد ويجند في الوقت الحقيقي من خلال تتبع الطول الموجي تحول الرنين مع محلل الطيف 12. تحدث قمم الرنين منفصلة عن الحادث TE (ناقلات الكهربائي الطبيعي لطائرة من الإصابة) وTM (ناقلات المغناطيسي الطبيعي أن الطائرة من الإصابة) الدول الاستقطاب توفير نقاط البيانات المتعددة التي يمكن أن يحتمل زيادة دقة الكشف 11،14. باستخدام الأجسام المضادة لوحات ما قبل توعيتهم في هذا النظام الفحص خالية من التسمية، ووقت التشغيل مقايسة مع تحليل البيانات ما يقرب من 45 دقيقة. وبالإضافة إلى ذلك، عينات المرضى متعددة يمكن استجوابه في شكل 96- أو 384-جيدا، وميزة واضحة على شكل أساس HPLC-MS / MS.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1191">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:521px;"><a name="RANGE!A1:D29">Name of the Material/Equipment</a></td>
			<td style="width:195px;">Company</td>
			<td style="width:120px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ResoSens Label-free Bioassay Detection System</td>
			<td>Resonant Sensors Incorporated</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Avidin Sensitized Bionetic 96-well Plates</td>
			<td>Resonant Sensors Incorporated</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ResoVu software</td>
			<td>Resonant Sensors Incorporated</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RL21A Biotinylated TCRm mAb&#160;</td>
			<td>PureMHC, LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RL9A Biotinylated TCRm mAb&#160;</td>
			<td>PureMHC, LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FLSL HLA-A*02:01 Monomer&#160;</td>
			<td>Experimmune</td>
			<td></td>
			<td>full peptide sequence: FLSELTQQL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SLLV HLA-A*02:01 Monomer&#160;</td>
			<td>Experimmune</td>
			<td></td>
			<td>full peptide sequence: SLLMWITQV</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">YLEV HLA-A*02:01 Monomer&#160;</td>
			<td>Experimmune</td>
			<td></td>
			<td>full peptide sequence: YLEPGPVTV</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">KVL HLA-A*02:01 Monomer&#160;</td>
			<td>Experimmune</td>
			<td></td>
			<td>full peptide sequence: KVLEYVIKV</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pooled Normal Human Serum&#160;</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BP2657100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MDA-MB-231 Cell Supernatant</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td style="width:355px;">Cells grown in IMDM , 10% FBS and 1% penn/strep. Supernatants harvested from 3 day confluent cultures.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Iscove&#39;s Modification of Dulbecco&#39;s Medium (IMDM)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12440-053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10082-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin/Streptomycin&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15070-63</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>5318-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BP665-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Phosphate Buffered Saline + 0.05% Tween 20 (PBST)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>BP337-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2,2&#8217;-Azinobis [3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]-diammonium salt (ABTS)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>37615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">rabbit anti-human &#946;2 microglobulin&#160;</td>
			<td>Dako</td>
			<td>A0072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Peroxidase conjugated goat anti-rabbit IgG&#160;</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>111-035-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nunc&#160; microplates</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td align="right">439454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Synergy 2 microplate reader</td>
			<td>Biotek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immpress Reagent Kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immpact DAB</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxylin QS</td>
			<td>Vector</td>
			<td>H3403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IgG2a</td>
			<td>MP BioMedicals</td>
			<td>50328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IgG2b</td>
			<td>MP BioMedicals</td>
			<td>50330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-HLA-A2 (BB7.2)</td>
			<td>Experimmune</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Prism 5</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of human leukocyte antigen biomarkers in breast cancer utilizing label-free biosensor technology

وفقا لجمعية السرطان الأمريكية، وسيتم تشخيص أكثر من 200،000 النساء المصابات بسرطان الثدي كل عام، وحوالي 40،000 سيموت من المرض. مستضد الكريات البيض البشرية (HLA) فئة I عينات الببتيدات المستمدة من تدهور proteasomal من البروتينات الخلوية وتقدم هذه الشظايا على سطح الخلية للتحقيق معهم من خلال تعميم الخلايا الليمفاوية التائية السامة (CTL). جيل من مستقبلات الخلايا T-تقليد (TCRm) الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (MABS) التي تعترف سرطان الثدي محددة الببتيد / HLA-A * 02: 01 المجمعات مثل تلك المشتقة من هجرة البلاعم المثبطة عامل (MIF 19-27) وNY-ESO- 1 157-165 تمكين كشف وتدمير خلايا سرطان الثدي في حال عدم وجود المضادة للورم استجابة فعالة CTL. يتم تسليط سليمة الصف الأول المجمعات HLA / الببتيد من قبل خلايا سرطان الثدي وسرطان تمثل المؤشرات الحيوية ذات الصلة المحتملة. في هذا العمل، ونظام فحص اختراق العلامات البيولوجية لسرطان التشخيصويرد ق دمج مستقبلات الخلايا T-الاجسام المضادة تقليد جنبا إلى جنب مع الرواية، خالية من التسمية جهاز الاستشعار البيولوجي باستخدام الموجهة وضع الرنين (GMR) تكنولوجيا الاستشعار. الكشف عن سقيفة MIF / HLA-A * 02: 01 المجمعات في supernatants خلية MDA-MB-231، ارتفعت المصل البشري، ويتجلى بلازما المريض. تأثير هذا العمل يمكن أن تحدث ثورة الطب الشخصي من خلال تطوير وسائل التشخيص مرض مصاحب لالمناعية المستهدفة.

وأجريت مجموعة تمثيلية من التجارب باستخدام جيدا اتسم TCRm، RL21A، والفئران الأجسام المضادة وحيدة النسيلة IgG2a الذي يعترف تحديدا الببتيد (MIF 19-27 أو FLSL) ضمن سياق HLA-A * 02: 01 جزيء 3. لوما شابه ذلك مونومر الببتيد / HLA، وكذلك لا صلة لها بالموضوع HLA مونومر 15، وكان يستخدم للتدليل على الإجراء الموضح الشكل 3 يوضح الشكل الفحص. RL21A غير محددة لمونومر FLSL / HLA مع الصليب قليل التفاعل مع الببتيد الأخرى / HLA مجمعات 3. ولخص هذا التحديد باستخدام نظام الأحيائي خالية من التسمية (الشكل 4). حساسية النظام الأحيائي الحر التسمية لهذه التجربة هي في حدود nanomolar منخفض على النحو الذي يحدده المعايرة من الأجسام المضادة RL21A على FLSL يجمد / مونومر HLA (الشكل 5). على الرغم من أن إشارة الخلفية وزيادة كبيرة في عينات مصل، قويتحقق كشف pecific من مونومر FLSL / HLA في مصل الدم البشري قد تصاعد في الشكل (6) والتدرج التركيز هو بسهولة ملحوظ في هذه العينات. وأخيرا، supernatants من خط الخلية MDA-MB-231، أظهرت في وقت سابق لتقديم FLSL / HLA-A * 02: 01 جزيء، وتظهر لاحتواء ذوبان FLSL مونومر باستخدام هذه التسمية منصة فحص مجانية (الشكل 7). بالإضافة لاحقة من FLSL / HLA مونومر يزيد من إشارة على RL21A (الشكل 7). نظرا لحساسية النظام، وأيضا لاختلاف جيدا بما في ذلك التحولات بالرنين سلبية يمكن أن تحدث نتيجة التقلبات في درجات الحرارة كما رأينا بوصفها وظيفة من الانحرافات المعيارية في أرقام 4 و 5. ويمكن تخفيض هذه الاختلافات بشكل كبير لما قبل الحضانة من جميع العينات ولوحة القارئ الأحيائي في درجة حرارة تتجاوز طفيف في درجة حرارة الغرفة (أي 28 ° C). في الشكل 8، لفترة وجيزة، 96حسنا تم المغلفة لوحات البوليسترين مع [10 ميكروغرام / مل] من RL21A لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة، وغسلها مع PBST، ومنعت مع 0.5٪ الحليب منخفض الدهون، وغسلها مع PBST، وحضنت لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع التخفيفات المسلسل FLSL HLA مونومر في مصل الدم البشري الطبيعي المخفف 01:10 في برنامج تلفزيوني لتوليد منحنى القياسية أو تضعف بلازما المريض 01:10 في برنامج تلفزيوني. وجرفت لوحة مع PBST، حضنت 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع الأرنب مكافحة الإنسان β2 المكروغلوبولين [1: 5،000] للكشف عن HLA سليمة، وغسلها في PBST. ثم تم تحضين لوحات لمدة 30 دقيقة مع الماعز المضادة للأرنب مفتش [1: 10،000] وغسلها مع PBST. تم إجراء الكشف اللونية باستخدام ABTS (2،2&#39;-Azinobis [حامض 3-ethylbenzothiazoline-6-السلفونيك] الملح -diammonium) الركيزة مع فترة حضانة لمدة 15 دقيقة، ولاحظ في 405 نانومتر على قارئ صفيحة ميكروسكوبية. تم الكشف عن FLSL / HLA في ثلاث عينات من المرضى. في الشكل 8B، تم تخفيفه المريض RL.064 البلازما 01:20 في برنامج تلفزيوني ثم قم بإضافةed لوحة ورصدها على كاشف خالية من التسمية لمدة 60 دقيقة. تم انجازه كشف محدد من مجمع FLSL / HLA في مصل المريض. تم إجراء اختبار ر الطالب باستخدام الرسوم البيانية والإحصاءات البرمجيات (P &lt;0.05). في الشكل 8C، كانت ملطخة أقسام الأنسجة في 1 ميكروغرام / مل مع الماوس مكافحة HLA-A2 (BB7.2) كعنصر تحكم إيجابية، RL21A، IgG2b IgG2a على التوالي والضوابط سلبية. تم الكشف عن تلطيخ باستخدام عدة المضادة للماوس الكشف، DAB (diaminobenzadine)، وQS الهيماتوكسيلين لتلطيخ النووي وفقا لتوجيهات من قبل الشركة المصنعة. تلطيخ من الأنسجة الورم عن طريق RL21A يؤكد العرض المجمعات FLSL / HLA. <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig1highres.jpg" /> الشكل 1: ورم مستضد العرض من قبل الطبقة I مستضد الكريات البيض البشرية تحول سرطاني هو اضطراب داخل الخلايا. HLA عينة intracellulالبروتينات AR وتكشف التغيرات المرتبطة بسرطان على سطح الخلية. CTL وTCRm قادرا على التعرف على الخلايا السرطانية من خلال مجمعات للHLA الببتيد واضحة لتلك الخلايا. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig2highres.jpg" /> الشكل 2: لقطة من الحصول على البيانات في البرنامج الأحيائي الماسح الضوئي مثال على الحصول على البيانات التي تبين خط الأساس الأولي تفحص تليها RL21A الأجسام المضادة بالإضافة إلى لوحة المغلفة مع 10 ميكروغرام / مل من مجمع FLSL / HLA. تركيزات من الأجسام المضادة هي المشار إليها كما. يمثل كل سطر الفرد مراقبة بشكل جيد مع مرور الوقت. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig3highres.jpg" /> الرقم 3: شكل الفحص توضيحات من الأجسام المضادة يجمد على سطح صريف إنحرافي من يختلط لوحة فحص التقاطإيفانت، تكساس الببتيد / المجمعات HLA في الحل. <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig4highres.jpg" /> الشكل 4: خصوصية RL21A لFLSL / HLA مجمع مظاهرة لخصوصية المعقدة البيروكسيديز RL21A TCRm للذات الصلة (FLSL) HLA مونومر لها مقارنة مع غير ذي صلة مونومر HLA (YLEV، SLLV، وKVL). المعقدة البيروكسيديز RL21A TCRm [10 ميكروغرام / مل] وقد ثبتوا على أفيدين المغلفة لوحة فحص السطح وتم إجراء الكشف باستخدام الخالي من الملصقات مونومر HLA ذات الصلة أو غير ذي صلة [10 ميكروغرام / مل] في برنامج تلفزيوني. كان RL21A محددة لمجمع FLSL / HLA. وقد أجريت في اتجاهين ANOVA باستخدام الرسوم البيانية والإحصاءات البرمجيات (P &lt;0.001). <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig5highres.jpg" /> الشكل 5: ربط حساسية RL21A لوما شابه ذلك الببتيد / مجمع HLA لها توضيحات من detectiعلى حد وحساسية RL21A ملزمة لمجمع FLSL / HLA. وقد ثبتوا المعقدة البيروكسيديز HLA الأحادي FLSL [10 ميكروغرام / مل] على سطح لوحة فحص وأضيف RL21A ليس لها علامة لوحة في التخفيفات المسلسل في برنامج تلفزيوني كما هو مبين. وكان الكشف عن هذا النظام في نطاق nanomolar منخفضة. <img alt="الشكل (6)" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig6highres.jpg" /> الشكل (6): الكشف عن HLA مجمعات في مصل مسنبل الإنسان مظاهرة للكشف عن HLA في مصل الدم البشري. وقد ثبتوا المعقدة البيروكسيديز RL21A TCRm [10 ميكروغرام / مل] على أفيدين المغلفة لوحة فحص السطح. تم تخفيفه المجمعة المصل البشري العادي ارتفعت مع ذات الصلة (FLSL) أو غير ذي صلة (SLLV) HLA مونومر 01:20 في برنامج تلفزيوني ثم تضاف إلى لوحة ومراقبة على كاشف خالية من التسمية لمدة 60 دقيقة. تم انجازه كشف محدد من مجمع FLSL / HLA في مصل الدم البشري. بشكل عام، إشارة الخلفية (غير ذي صلة SLLV مونومر) عالية<html> إيه لعينات المصل المخفف مقارنة التحاليل تنقيته في برنامج تلفزيوني (انظر الشكل 4). وقد أجريت في اتجاهين ANOVA باستخدام الرسوم البيانية والإحصاءات البرمجيات (ع &lt;0.0001). <img alt="الرقم 7" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig7highres.jpg" /> ويتجلى تم الكشف عن المجمعات HLA القابلة للذوبان في سرطان الثدي supernatants ثقافة الخلية القدرة على كشف HLA في الثدي supernatants الخلايا السرطانية: الرقم 7. على الحركة المعقدة البيروكسيديز RL21A TCRm، RL9A TCRm (المراقبة السلبية)، وisotype السيطرة على سطح لوحة الفحص. أضيفت ارتفعت [5 ميكروغرام / مل] وunspiked MDA-231 supernatants ثقافة الخلية وملزمة تم رصد لمدة 60 دقيقة على كاشف خالية من التسمية. FLSL وSLLV HLA مونومر ارتفعت تمثل عينات الضوابط الإيجابية لRL9A وRL21A ملزمة. وقد أجريت في اتجاه واحد ANOVA باستخدام الرسوم البيانية والإحصاءات البرمجيات (P &lt;0.0001). ogether.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الرقم 8" src="/files/ftp_upload/52159/52159fig8highres.jpg" /> استخدمت الكشف النوعي المجمعات FLSL / HLA في عينات المرضى (A) انزيم مرتبط المناعي التقليدي الفحص (ELISA) للكشف عن المجمعات محددة FLSL / HLA في البلازما المريض: الرقم 8. (B) المعقدة البيروكسيديز RL21A TCRm أو IgG2a [10 ميكروغرام / مل] كان يجمد على لوحة فحص أفيدين. كان الملون (C) ورم الثدي الأنسجة من RL.064 المريض كما هو موضح سابقا 3 للتحقق من العرض الورم من المجمعات FLSL / HLA. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52159/52159fig8large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology at JoVE.com

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

يتم تسليط سليمة الصف الأول المجمعات HLA / الببتيد من قبل الخلايا السرطانية، وهو ما يمثل العلامات البيولوجية السرطان المحتملة ذات الصلة. استخدام تكنولوجيا الاستشعار خالية من التسمية ومستقبلات الخلايا T-محاكاة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة، والكشف عن سقيفة MIF / HLA-A * 02: 01 المجمعات في supernatants خلية MDA-MB-231، ارتفعت المصل البشري، ويتجلى بلازما المريض، مما يتيح تطوير سرطان رواية منصة التشخيص.

الكشف عن خلايا الدم البيضاء الإنسان مستضد المؤشرات الحيوية في سرطان الثدي الاستفادة تسمية خالية جهاز الاستشعار البيولوجي تقنية

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

الكشف عن الرشاشيات الرئوي الغازية في الخباثة المرضى باستخدام مكونات دم الاطراف تدفق التكنولوجيا

Invasive pulmonary aspergillosis (IPA) is a leading cause of morbidity and mortality in haematological malignancy patients and hematopoietic stem cell ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

القاتل مستضد تقديم الخلايا الاصطناعي (KaAPC) للكفاءة<em&gt; في المختبر</em&gt; استنفاد خلايا T الإنسان مستضد محددة

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Utilizing the Antigen Capsid-Incorporation Strategy for the Development of Adenovirus Serotype 5-Vectored Vaccine Approaches

استخدام استراتيجية قفيصة التأسيس Antigen ل تطوير المناهج اتش المصلي 5 تنقلها لقاح

Adenovirus serotype 5 (Ad5) has been extensively modified with traditional transgene methods for the vaccine development. The reduced efficacies of these ...

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

التفاعلات حيوي داخلي المجهري من خلايا الدم البيضاء-البطانية وصفائح الدم الكريات البيض في المساريقية الأوردة في الفئران

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

Generating De Novo Antigen-specific Human T Cell Receptors by Retroviral Transduction of Centric Hemichain

توليد<em&gt; دي نوفو</em&gt; محددة مستضد تي الإنسان مستقبلات الخلية من قبل فيروسات تنبيغ من مركزية Hemichain

T cell receptors (TCRs) are used clinically to direct the specificity of T cells to target tumors as a promising modality of immunotherapy. Therefore, ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

في فيفو الفحص للكشف عن وظيفة محددة مستضد تي خلية عن استخدام نموذج التطعيم

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Ultrasensitive Detection of Biomarkers by Using a Molecular Imprinting Based Capacitive Biosensor

الكشف عن أولتراسينسيتيفي للمؤشرات الحيوية باستخدام طابعة جزيئية أساس Biosensor سعوية

The ability to detect and quantitate biomolecules in complex solutions has always been highly sought-after within natural science; being used for the ...

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

مقايسة ميكرواري البروتين "تحديد المصلية" محددة مستضد "الضد الردود التالية" المطثيّة العسيرة الإصابة

We provide a detailed overview of a novel high-throughput protein microarray assay for the determination of anti-Clostridium difficile antibody levels in ...