Name: localization, identification, and excision of murine adipose depots
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00
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HINWEIS: Alle Tierversuche wurden mit Zustimmung des Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) von der University of Cincinnati und in Übereinstimmung mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch die National Institutes of Health (NIH-Veröffentlichung durchgeführt . 85-23, Revised 1996). 1. Euthanize und Sterilisieren der Maus <ol><li> Platzieren Sie die Maus in eine Dropbox gemacht, die einen supratheraputic Dosis von Isofluran und lassen Sie d...

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. 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Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

Übergewicht kann zu einer großen Vielzahl von Begleiterkrankungen und dem vollen Verständnis der Rolle, die adipöse spielt ist nicht vollständig geklärt führen; daher die weitere Forschung auf dem Gebiet der adipösen notwendig. Tiermodelle, insbesondere murine Modelle sind ideal für Vorlaufforschung in der Progression von Krankheiten und das Testen von potentiellen pharmazeutischen Behandlungen. Bei der Verwendung dieser Modelle ist eine genaue Trennung und Entfernung von Fettgewebedepots ein äußerst wichtige...

Adipöse einen bemerkenswerten Auftritt im Scheinwerferlicht der Medien, durch dramatische Zunahme Adipositas ist in den letzten Jahrzehnten des 20. Jahrhunderts. Übergewicht wirkt sich auf derzeit mehr als ein Drittel der Erwachsenen und 17% der Kinder und Jugendlichen in den Vereinigten Staaten (US) 1. Quer durch alle ethnischen Gruppen hat statistische Untersuchungen rund um die Adipositas-Epidemie gezeigt, dass nicht-hispanischen Schwarzen haben die höchste altersbereinigte Rate von Übergewicht (49,5%) im Vergleich zu Mexico-Amerikaner (40,4%) aller Hispanics (39,1%), und nicht- hispanischen Weißen (34,3%) 2. Die wirtschaftlichen Auswirkungen von Übergewicht ist auch ein wachsendes Interesse für das Gesundheitssystem. Im Jahr 2012 wurde geschätzt, dass die jährlichen medizinischen Kosten für die Betreuung von Fettleibigkeit in den USA im Jahr 2005 190.200.000.000 $, fast 21% der gesamten medizinischen Ausgaben Budget. Leider wurde die Fettleibigkeit bei Kindern geschätzt 14 Milliarden Dollar im direkten medizinischen Kosten allein verantwortlich zu sein. Statistisch gesehen, war es, dass die durchschnittliche medizinische Kosten ermitteltPersonen mit Übergewicht war 2741 $ pro Jahr höher als die ohne diese Morbidität 3-5. Übergewicht ist ein wichtiger Risikofaktor für eine Vielzahl von Erkrankungen wie: Typ 2-Diabetes, Fettstoffwechselstörungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Krebs, Muskel-Skelett-Erkrankungen und chronischen Entzündungen. Adipositas ist tief mit der Pathogenese von metabolischen Syndrom und anderen chronischen Erkrankungen 6-8 gebunden. Mit solch drastische und negative Zusammenhänge zwischen Adipositas und anderen Begleiterkrankungen, hat die wissenschaftliche Forschung konzentrierte sich die Aufmerksamkeit auf die aktuelle Epidemie und die vielfältigen und eine entscheidende Rolle gespielt von Fettgewebe besser zu verstehen. Historisch wurde Fettgewebe als belanglos und wurde nur als eine einfache Befüllung Gewebe angesehen. Derzeit Fettgewebe wurde gezeigt, dass viele wichtige Rollen in der Körper die Funktion spielen: Stoffwechsel, Hormonhaushalt, Entzündungen, Schutz und Isolierung 9. Fettgewebe ist in erster Linie ausAdipocyten enthält aber auch Perizyten, Endothelzellen, Monozyten, Makrophagen und pluripotenten Stammzellen 8. Fettgewebe wird durch den Körper in unterschiedlichen Depots verteilt. Die Hauptdepots können subdermal gefunden werden, subkutan, intramuskulär und viscerally 10. Adipose Depots gezeigt worden, Depot spezifische Stoffprofile, die eine Depot spezifische Anfälligkeit für Fettleibigkeit gezeigt und verwandten Störungen 8 haben. Traditionell wurde Fettgewebe in zwei Haupttypen klassifiziert: weißes Fettgewebe (WAT) und braunem Fettgewebe (BAT); obwohl neuere Literatur zeigt die Präsenz einer dritten Gruppe getauft brite oder beige Fettgewebe 11. Fettgewebe ist gezeigt worden, um verschiedene Farben zu Morphologien, die Stoffwechselfunktionen, biochemischen Eigenschaften und die genetische Expressionsmuster 10 aufweisen. Adipozyten in WAT ein einziges, großes Fetttröpfchen und variable Mengen von Mitochondrien. WATdominant im subkutanen und viszeralen Ortschaften des Körpers gefunden. WAT wirkt in erster Linie als Ort der Energiespeicherung und Organprotektion. Adipozyten in BAT eine multilokuläre Morphologie und reichlich Mitochondrien. BAT ist in erster Linie in den Hals und großen Blutgefäße des Thorax, sowie die Schulterblätter 12 angeordnet. BAT vor allem Funktionen in energie aufwendet Verhaltensweisen, die Thermogenese 7 regulieren. Brite oder beige Fettgewebe wurde gezeigt, dass eine analoge Morphologie und Expression BAT teilen, aber hat sich herausgestellt, von weißen Fettzellen 11 entstanden ist. Die beschriebene Operationsmethode in diesem Manuskript bietet Forschern mit der Fähigkeit, verschiedene Effekte, dass Faktoren wie zu analysieren: Umwelt, Pharmazie und Genetik, haben am Fettgewebe; sowie die vorteilhafte oder nachteilige Rolle spielt in adipose Erkrankungen und allgemeine Gesundheit. Auch bietet eine Möglichkeit zur Identifizierung und Isolierung verschiedener Arten von Fettgewebeermöglichen ein besseres Verständnis der biochemischen Zusammenhänge und Unterschiede zwischen Depots. Dies kann bei der Bestimmung der Beziehung zwischen der Lage, die Funktion und Arten von Fett im Körper zu unterstützen. Das beschriebene Verfahren erreicht dies, indem sie die Einrichtung zum Brutto Visualisierung, Genexpressionsanalyse, Analyse der Proteinexpression, die histologische Untersuchung und Isolierung von primären Zelllinien für die in vitro-Studien. Momentan gibt es viele Artikel, die einen Einblick in die metabolischen Verhalten verschiedener adipose Depots sowie ihre anatomischen Orten bereitzustellen; aber nicht bieten eine gründliche Methode, wie man gezielt zu lokalisieren, identifizieren und isolieren diese Depots. Dieses chirurgische Verfahren liefert eine genaue Technik, die für die Isolierung von mehreren Depots mit einer minimalen Menge an Präparation und Verunreinigungen im Vergleich zu anderen Methoden zur Isolat von einem oder zwei Depots 13-14 gestaltet ermöglicht. Das Ziel des Protokolls ist es,ein präzises Verfahren zur Identifizierung und Isolierung von verschiedenen Arten von Fettdepots von mehreren anatomischen Stellen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="730">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:125px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Med-Vet International&#160;</td>
			<td>#RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:125px;">07-678-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEF-12</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D-6421</td>
			<td>Warm in waterbath before putting on tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">2 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Midsci</td>
			<td style="width:125px;">MCT-200-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P5368-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

Identifizierung und Lokalisierung von Leisten subkutane Fettgewebe, interskapulären braunen Fettgewebe, viszerale Fettgewebe Nebenhoden (Abbildung 1) sowie den Aortenbogen perivaskulären Fettgewebe, thorakalen Aorta Fettgewebe, Neben Aorta Fettgewebe und der infrarenalen Fettgewebe (Abbildung 2) wurde erfolgreich mit Hilfe erreicht die beschriebene Operationsmethode. Die histologische Untersuchung und Differenzierung zwischen BAT und WAT Proben wurden positiv mit Hämatoxylin und Eosi...

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Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

Durch die drastische und negative Zusammenhang zwischen Fettleibigkeit und andere Begleiterkrankungen, Forschung über die Rolle Fettgewebe spielt in Krankheit und die allgemeine Gesundheit gerechtfertigt ist. Wir stellen ein Protokoll für die Isolierung und Entfernung von Fettgewebe Depots ermöglicht die Untersuchung von Fettgewebe unter Verwendung von in situ und in vitro-Verfahren.

Lokalisierung, Identifizierung und Exzision Murine Fettgewebe Depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Ein vereinfachtes Verfahren für<em&gt; In-situ</em&gt; Exzision der Hornhaut und der Netzhaut Ausweiden von Gewebe aus menschlichen Augapfel

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Forschung

Medizin

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Lumineszenz-Imaging von interskapulären braunes Fettgewebe

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolierung und Exzision Murine Aorta; Eine vielseitige Technik in das Studium der Herz-Kreislauf-Krankheit

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Menschen braunes Fettgewebe Depots automatisch durch Positronenemissionstomographie / Computertomographie Segmentierte und Registrierte Magnetic Resonance Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation Thermogenic Präadipozyten für die Transplantation in Fettgewebe Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Bewertung der menschlichen Fettgewebe mikrovaskuläre Funktion mit Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Schiff-schonende Exzision und primäre Anastomose

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

Elektromagnetische Navigation Transthorakale Knotenlokalisation für die minimalinvasive Thoraxchirurgie

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

Leisten-Subkutanes weißes Adiposeengewebe (ISWAT) Transplantationsmodell von Murine-Inseln

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...