Name: localization, identification, and excision of murine adipose depots
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots at JoVE.com

The authors have no acknowledgements.

MERK: Alle dyr prosedyrer ble utført med godkjenning av Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC) ved University of Cincinnati og i samsvar med Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr fra National Institutes of Health (NIH Publication Ingen . 85-23, revidert 1996). 1. Avlive og Steriliser Mouse <ol><li> Plasser musen i en dropbox inneholder en supratheraputic dose av isofluran og tillate å inhalere til effekt. Når musen avlives, fjerne fra boksen. </li><li> Cervically forrykke...

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults,+1999-2010.">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li><li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+medical+care+costs+of+obesity:+an+instrumental+variables+approach.">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li><li>Marder, W., Chang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Childhood+Obesity:+Costs,+Treatment+Patterns,+Disparities+in+Care,+and+Prevalent+Medical+Conditions.">Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions.</a> Thomson Medstat Research Brief. , (2006).</li><li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors.">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li><li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thematic+review+series:+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation.">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li><li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding.">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li><li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+of+white,+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells.">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

Fedme kan føre til en stor mengde tilleggslidelser og full forståelse av rollen som adipose spiller er ikke fullt ut forstått; derfor fortsatt forskning på feltet adipose er nødvendig. Dyremodeller, spesielt murine modeller er ideelle for innledende forskning i utviklingen av sykdommer og testing av potensielle farmasøytiske behandlinger. Ved bruk av disse modellene, nøyaktig isolering og fjerning av fettdepoter er en ekstremt viktig og nødvendig verktøy i studiet av patologien til adipose påvirket sykdommer. ...

Adipose gjort en bemerkelsesverdig opptreden i medienes søkelys på grunn av fedme dramatiske økning i løpet av de siste tiårene i det 20. århundre. Fedme påvirker i dag mer enn en tredjedel av voksne og 17% av barn og unge i en USA (US). Spenner over alle etniske grupper, har statistisk forskning rundt fedme-epidemien vist at ikke-spanske svarte har den høyeste aldersjustert rate av fedme (49,5%) sammenlignet med meksikanske amerikanere (40.4%), alle latinamerikanere (39,1%), og ikke- Hispanic hvite (34,3%) 2. Den økonomiske effekten av fedme er også en økende bekymring for helsevesenet. I 2012 ble det anslått at den årlige medisinske kostnadene for omsorg for fedme i USA i 2005 var $ 190 200 000 000, nesten 21% av den totale medisinske utgifter budsjett. Dessverre ble barndommen fedme anslått til å være ansvarlig for $ 14 milliarder i direkte medisinske kostnader alene. Statistisk sett, ble det fastslått at den gjennomsnittlige medisinsk kostnadenepersoner med fedme var $ 2741 høyere i året enn de uten denne sykelighet 3-5. Fedme er en viktig risikofaktor for en rekke forhold som: type 2 diabetes, dyslipidemi, hjerte- og karsykdommer, kreft, muskel- og skjelettlidelser og kroniske betennelser. Fedme er dypt knyttet til patogenesen av metabolsk syndrom og andre kroniske sykdommer 6-8. Med slike drastiske og negative sammenhenger mellom fedme og andre samtidige sykdommer, vitenskapelig forskning har fokusert oppmerksomhet for å bedre forstå den nåværende epidemien og de varierte og sentrale rollene spilles av adipose. Historisk ble fettvev anses ubetydelig, og ble vist bare som en enkel fylling vev. Foreløpig har adipose vist seg å spille mange viktige roller i kroppens funksjon i: stoffskifte, hormonregulering, betennelse, beskyttelse og isolasjon 9. Fettvev består hovedsakelig avadipocytes men inneholder også pericytes, endotelceller, monocytter, makrofager og pluripotente stamceller 8. Fettvev er fordelt over hele kroppen i forskjellige depoter. De viktigste depoter kan bli funnet subdermalt, subkutant, intramuskulært, og viscerally 10. Adipose depoter har vist seg å ha depot spesifikke metabolske profiler, som har vist et depot spesifikk følsomhet overfor fedme og relaterte forstyrrelser 8. Tradisjonelt har fettvev blitt klassifisert i to hovedtyper: hvit fettvev (WAT) og brunt fettvev (BAT); selv om nyere litteratur indikerer tilstedeværelsen av en tredje gruppe døpt brite eller beige adipose 11. Fettvev har vist seg å ha forskjellige farger, morfologi, metabolske funksjoner, biokjemiske og genetiske egenskaper mønstre av uttrykket 10. Adipocytter i WAT har en enkelt, stor oljedråpe, og variable mengder av mitokondrier. WATer dominant funnet i subkutane og viscerale lokaliteter av kroppen. WAT fungerer primært som et åsted for energilagring og orgel beskyttelse. Adipocytter i BAT har en multilokulær morfologi og rikelig mitokondrier. BAT ligger hovedsakelig i halsen og store blodkar av thorax, samt scapulae 12. BAT primært funksjoner i energiKrevende atferd som regulerer thermogenesis 7. Brite eller beige adipose har vist seg å dele en analog morfologi og uttrykk til BAT, men har blitt funnet å være stammer fra hvite adipocytter 11. Den beskrevne kirurgiske metoden i dette manuskriptet gir forskere med kapasitet til å analysere ulike effekter som faktorer som: miljø, legemidler, og genetikk, har på adipose; samt gunstig eller ugunstig rolle adipose spiller i sykdom og generell helse. Også, som gir en måte for å identifisere og isolere forskjellige typer av fettvev itillate for bedre å forstå av de biokjemiske relasjoner og forskjeller mellom depoter. Dette kan hjelpe til å bestemme forholdet mellom plasseringen, funksjon og typer av fett i kroppen. Denne beskrevne fremgangsmåte oppnår dette ved å tilveiebringe midler for grov visualisering, genekspresjonsanalyser, proteinekspresjon analyse, histologisk undersøkelse, og isolering av primære cellelinjer for in vitro studier. For tiden er det mange artikler som gir innsikt i den metabolske oppførsel av forskjellige adipose depoter, samt deres anatomiske steder; men gir ikke en grundig metoden på hvordan du spesifikt lokalisere, identifisere og isolere disse depoter. Denne kirurgiske metoden gir en teknikk som gjør det mulig nøyaktig for isolasjon av multiple depoter med en minimal mengde av disseksjon og kontaminering sammenlignet med andre metoder utviklet for isolatet av en eller to depoter 13-14. Målet med denne protokollen er å gien nøyaktig metode for identifisering og isolering av forskjellige typer fettdepoter fra flere anatomiske steder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="730">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:125px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Med-Vet International&#160;</td>
			<td>#RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:125px;">07-678-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEF-12</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D-6421</td>
			<td>Warm in waterbath before putting on tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">2 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Midsci</td>
			<td style="width:125px;">MCT-200-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P5368-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

Identifikasjon og lokalisering av lyske subkutan adipose, interscapular brun adipose, visceral epididymal adipose (figur 1), samt aortabuen perivaskulær adipose, thorax aortic adipose, suprarenal aortic adipose og infrarenale aorta adipose (figur 2) ble oppnådd med hell bruker den beskrevne kirurgiske metoden. Histologisk undersøkelse og differensiering mellom BAT og WAT prøver ble positivt evaluert ved hjelp Hematoxylin og eosin (H &amp; E) farging (figur 3). Analy...

Watch this Scientific Journal Video about Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots at JoVE.com

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

På grunn av den drastiske og negativ sammenheng mellom fedme og andre samtidige sykdommer, forskning på rollen adipose spiller i sykdom og generell helse er berettiget. Vi presenterer en protokoll for isolering og fjerning av fettdepoter som åpner for studiet av adipose ved hjelp av in situ og in vitro metoder.

Lokalisering, Identifikasjon, og Eksisjon av murine adipose depoter

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

En forenklet Teknikk for<em&gt; In situ</em&gt; Eksisjon av hornhinnen og Evisceration av Retinal vev fra Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminescence Imaging av interscapular brunt fettvev

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Isolasjon og Eksisjon av murine Aorta; En allsidig teknikk i Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Menneskelig brunt fettvev depoter automatisk segmentert etter Positron Emission Tomography / Datatomografiscanning og Registrert magnetisk resonans Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Innkapsling Thermogenic preadipocytes for Transplantasjon inn fettvev depoter

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Vurdering av menneskelig fettvev mikrovaskulær funksjon med Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Fartøyet-sparing Excision og primære anastomose

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

Elektromagnetisk navigasjon Transthoracic Nodule Lokalisering for minimalt invasiv thoraxkirurgi

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

Murine Appendektomi modell av kronisk kolitt assosiert tykktarmskreft ved presis lokalisering av Caecal patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

Inguinal Subkutan hvit fettvev (ISWAT) Transplantasjon Modell av Murine Holmer

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...