The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

Etik erklæring: Protokollen følger retningslinjerne dyr pleje af University of Sydney, AEC # 5657. Anæstesi blev godkendt af dyreetik komité (University of Sydney, AEC # 5657). 1. Udstyr Forberedelse <ol><li> Bruge realtid hudtemperatur tracking. Tænd computeren, og datafangst hardware. </li><li> Åben temperatur optagelse software og justere temperaturindstilling til mellem 30-35 ° C, og hyppigheden af ​​prøveudtagningen til hver 100 ms. </li><li> Valgfrit: Indsæt rektal termo...

Gnaver bagben iskæmi blev induceret med succes med en manuel blodtryksmåler og manchet leverer neurobeskyttelse til fotoreceptorerne i nethinden. Et fund i overensstemmelse med iskæmisk konditionering induceret beskyttelse af fotoreceptorer mod lys skade 9,28. Væsentlige, remote iskæmi forårsager korte ilt afsavn til væv. Derfor remote iskæmisk prækonditionering har mange ligheder med iskæmisk konditionering eller alternativt betegnet iskæmisk tolerance, hypoksisk forko...

Overlevelsen af de fleste, måske alle, kan væv i lyset af metabolisk stress forbedres ved forudgående konditionering med en periode med subletal iskæmi 1,2. Iskæmisk prækonditionering (IP) i praksis er eksponeringen af ​​væv til subletal iskæmi, før vævet oplevelser mere alvorlige stressfaktorer, såsom en efterfølgende iskæmiske skade. I dyremodeller, IP giver slående beskyttelse til hjernen, retina, hjerte og lunger 3-6. Tilsvarende observationer i patienter med slagtilfælde viste en sammenhæng mellem tidligere forbigående iskæmiske anfald og bedre kliniske resultater 7,8. IP beskytter også retinale fotoreceptorer fra ikke-iskæmiske skader 9. Effektiviteten af ​​IP i forskellige væv og skader foreslår, at det aktiverer en medfødt mekanisme for celleoverlevelse stede i alle væv. Iskæmisk prækonditionering af myokardiet er blevet foreslået at have beskyttende virkninger gennem opreguleringenaf hypoxi inducerbare faktor (HIF), kendt for at regulere mange metaboliske veje gennem frigivelse af adenosin eller gennem åbningen af mitokondrie ATP kaliumkanaler 10,11. Adenosin frigivelse og ATP kaliumkanaler er impliceret i cerebral iskæmi, men undersøgelser af neurobeskyttende mekanismer iskæmisk konditionering til dato har været fokuseret på ændringer anti-excitotoksicitet, antiapoptotiske og anti-inflammatoriske veje 12,13. Samlet, forståelse af den molekylære proces med iskæmisk condition for at beskytte neuroner er begrænset. Fjerntliggende iskæmisk prækonditionering forsøg på at konditionere fjerntliggende kritisk vigtige organer (hjerte, hjerne, lunge) ved at generere iskæmi i mindre kritiske væv. Remote iskæmisk prækonditionering (RIP) under anvendelse bagbenet har vist sig at være neurobeskyttende i gnavermodeller for slagtilfælde 14-17. Beskrevet af os fremgangsmåde tilvejebringer en enkel, pålidelig og ikke-invasiv protocol til induktion RIP. Langt størstedelen af ​​RIP protokollerne omfatter bagbenet, formentlig fordi den femorale arterie beliggende i den øvre bagben kan let identificeres og tilgås til kirurgisk fastspænding og årepresse ansøgning. Ved invasiv lemmer iskæmiske studier til undersøgelse af hjernen og hudbeskyttelse, er iskæmi induceres ved at adskille den femorale arterie fra lysken ledbånd og fastspænde femorale arterie 2,15,18. Den iskæmi er resultatet af enten lemmer infiltration eller femoral arterie fastspænding er blevet bekræftet af ændringer på lemmet, herunder tab af puls, nedsat iltning og et fald i hudtemperatur. Fjernbetjening iskæmi kan bekræftes ved tabet af puls ved hjælp af laser Doppler eller ultralyd Doppler 17-19. Hudtemperatur kan anvendes som alternativ til Doppler selvom forholdet er ikke-lineær 20,21. Nøjagtige temperaturmålinger optagelser er almindelige i laboratorier og dåselet inkorporeres i fjerntliggende iskæmiske studier. Et alternativ til femoral fastspænding kirurgi er induktionen af ​​iskæmi under anvendelse af en tourniquet. Årepresse ansøgning producerer sammenlignelig iskæmi til der opnås med skib fastspænding; Kutchner et al. sammenlignet invasiv femoral arterie fastspænding til en ikke-invasiv årepresse og fundet begge metoder standset blodtilførslen til lemmet og reduceret skade huden i en plastikkirurgi model af hudlap iskæmi 18. Cuffing enten benet eller armen og hæve manchettrykket til over systolisk blodtryk har vist sig at være beskyttende mod iskæmisk skade hos svin og mennesker 17,19,22. Forskellige årepresse tilgange til at inducere remote iskæmisk indbefatter anvendelsen af en blodtryksmanchet eller et elastisk bånd 17,22,23. Men brugen af ​​et elastisk bånd til at inducere iskæmi er en usikker metode, potentielt giver anledning til en ureguleret mængde tryk ilemmer, med tryk stiger over 500 mmHg bliver optaget i mennesker 24. Yderligere, iskæmi i lemmerne under anvendelse af et elastisk bånd medfører muskelskader hos rotter efter fjernelse af båndet 23, som vurderet af Evans blå farve, en in vivo markør for myofiber permeabilitet 25. I modsætning hertil kan levering af et kontrolleret tryk til årepresse opnås ved anvendelse af en blodtryksmanchet forbundet med en blodtryksmåler 17,19,22,26. I denne undersøgelse blev en lys skade model af fotoreceptordegenerering anvendes til at demonstrere den neurobeskyttende virkningsfuldhed af fjernstyret iskæmisk prækonditionering. Remote iskæmi blev induceret umiddelbart før lys skade, og forhindrede efterfølgende fotoreceptordegenerering som bekræftet ved retinal funktion test. Den ledsagende video vil demonstrere anvendelsen af ​​non-invasiv remote iskæmi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

Subletale iskæmi beskytter væv mod efterfølgende, mere alvorlig iskæmi gennem opregulering af endogene mekanismer i det påvirkede væv. Subletale iskæmi er også blevet vist at opregulere beskyttelsesmekanismer i fjerntliggende væv. En kort periode med iskæmi (5-10 min) i bagbenet af pattedyr inducerer selvbeskyttende reaktioner i hjernen, lunger, hjerte og retina. Effekten er kendt som remote iskæmisk prækonditionering (RIP). Det er en terapeutisk lovende måde at beskytte vitale organer, og er allerede under kliniske forsøg for hjerte- og hjerneskader. Denne publikation viser en kontrolleret, minimalt invasiv fremgangsmåde til fremstilling af et lem - specifikt bagbenet af en rotte - iskæmisk. En blodtryksmanchet udviklet til anvendelse i humane nyfødte er forbundet til en manuel blodtryksmåler og anvendes til at påføre 160 mmHg tryk omkring den øverste del af bagbenet. En probe designet til at detektere hudtemperatur anvendes til at verificere ischemia, ved at registrere fald i hudens temperatur forårsaget af tryk-induceret okklusion af benet arterier, og stigningen i temperatur, der følger frigivelsen af ​​manchetten. Denne metode til RIP yder beskyttelse til rotten nethinden mod stærkt lys-induceret skade og degeneration.

En blodtryksmanchet hævet til over 160 mmHg stopper blodtilførslen til bagben, som det ses tydeligt i figur 1B. Den manglende vævsoxygenering resulterede i en reduktion af dyrets mund temperatur i en iskæmi-reperfusion protokol (figur 2). Foden temperatur (33 ° C) var lavere end kernetemperatur og pålideligt reduceret under manchettrykket elevation (31 ° C) stiger, når manchetten blev tømt for luft (32 ° C). Et enkelt 1.000 lux lys skade blev leveret til dim rejst albinorotter...

Watch this Scientific Journal Video about Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents at JoVE.com

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Fjernbetjening Limb iskæmisk konditionering: En neuroprotektiv Teknik i Gnavere

Remote iskæmisk prækonditionering (RIP) er en metode til konditionering væv mod skadelig stress. Vi har etableret en metode til remote iskæmi på bagbenet, ved at puste en sphygmomanometer manchet i 5-10 min. De neurobeskyttende evner RIP er blevet påvist i en model for retinal degeneration hos gnavere.

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

En forenklet teknik til at producere et iskæmisk sår model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Fjernbetjening Magnetic Navigation til præcis, Real-time Kateter Positionering og ablation i Cardiac Elektrofysiologi Procedures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateral carotis communis Occlusion som en passende Konditioneringskørsel Stimulus for at tilskynde til iskæmisk Tolerance til Focal cerebral iskæmi

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Angiogenese i den iskæmiske rottelunge

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Udførelse subretinale Injektioner i Gnavere at levere retinale pigmentepitel celler i suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

En Grisling Model for Neonatal Hypoksisk-iskæmisk encephalopati

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Ortotopisk Hind Limb Transplantation i Mus

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metode til kvantificering Upper Limb Performance i min hverdag anvender accelerometre

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...