The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

Etikk uttalelse: Protokollen følger retningslinjene dyr vare på University of Sydney, AEC # 5657. Anestesi ble godkjent av dyreetiske komité (University of Sydney, AEC # 5657). 1. Utstyr Forberedelser <ol><li> Bruk sanntid hudtemperatur sporing. Slå på datamaskinen, og datainnsamling maskinvare. </li><li> Åpne temperatur innspillingen programvare og justere temperaturinnstillingen til mellom 30-35 ° C og prøvetakingsfrekvens til hver 100 ms. </li><li> Valgfritt: Sett rektal termome...

Gnager bakben iskemi ble vellykket indusert med en manuell sphygmomanometer og mansjett levere neuroprotection til fotoreseptorene i netthinnen. Et funn forenlig med iskemisk conditioning indusert beskyttelse av fotoreseptorene mot lys skade 9,28. I hovedsak fjern iskemi fører kort oksygenmangel til vev. Derfor har fjern ischemisk prekondisjonering mange likhetstrekk med iskemisk kondisjonering eller alternativt betegnet ischemisk toleranse, hypoksiske prekondisjonering, og til e...

Overlevelse av de fleste, kanskje alle, kan vev i ansiktet av metabolsk stress forbedres ved forhånds condition med en periode på sublethal iskemi 1,2. Ischemisk prekondisjonering (IP) i praksis er eksponering av vev for å subletal ischemi, før vevet erfaringer mer alvorlig stressfaktorer, som en etterfølgende ischemisk skade. I dyremodeller, IP gir slående beskyttelse til hjernen, retina, hjerte og lunger 3-6. Tilsvarende observasjoner i slagpasienter viste en sammenheng mellom tidligere forbigående iskemiske angrep og bedre kliniske utfall 7,8. IP beskytter også retinal fotoreseptorene fra ikke-iskemiske skader ni. Effektiviteten av IP i forskjellige vev og skader antyder at den aktiverer en medfødt mekanismen for celleoverlevelse er tilstede i alle vev. Ischemisk prekondisjonering av myokard er blitt foreslått å ha beskyttende virkninger gjennom oppreguleringav hypoksi induserbar faktor (HIF), som er kjent for å regulere mange metabolske baner gjennom frigivelse av adenosin, eller ved åpning av mitokondrielle ATP-kaliumkanaler 10,11. Adenosin utslipp og ATP kaliumkanaler er innblandet i cerebral iskemi, men etterforskning av nevro mekanismene for iskemisk conditioning hittil har vært fokusert på endringer av anti-eksitotoksisitet, anti-apoptotiske og anti-inflammatorisk pathways 12,13. Totalt sett er forståelse av molekylære prosessen med iskemisk condition for å beskytte nerveceller begrenset. Fjern iskemiske preconditioning forsøk på å pleie fjerne kritisk viktige organer (hjerte, hjerne, lunge) ved å generere iskemi i mindre kritiske vev. Remote iskemisk prekondisjonering (RIP) med bakbenet har vist seg å være nervecellene i gnagermodeller av hjerneslag 14-17. Fremgangsmåten beskrevet av oss er en enkel, pålitelig og ikke-invasiv Protocol for å indusere RIP. De aller fleste av RIP protokoller involvere bakben, antagelig fordi lårarterie ligger i den øvre bakben kan lett identifiseres og åpnes for kirurgiske klem og tourniquet søknad. I invasiv lem iskemiske studier for studiet av hjernen og hudbeskyttelse er iskemi indusert ved å skille lårarterie fra lysken leddbånd og klem lårarterie 2,15,18. Den iskemi som følge av enten lem cuffing eller femoralarterie klem har blitt bekreftet av endringer på lem, inkludert et tap av puls, redusert oksygenering og et fall i hudtemperatur. Remote iskemi kan bekreftes ved tap av puls ved hjelp av laser Doppler eller ultralyd Doppler 17-19. Hudtemperatur kan brukes som alternativ til Doppler selv om forholdet er ikke-lineær 20,21. Nøyaktige temperatur innspillinger er vanlig i laboratorier og kanlett tas med i eksterne iskemiske studier. Et alternativ til lår- klem kirurgi er induksjon av ischemi ved anvendelse av en tilstrammende. Tourniquet søknad produserer sammenlign iskemi det som oppnås med fartøy klem; Kutchner et al. sammenlignet invasiv femoralarterie klem til en ikke-invasiv tourniquet og fant begge metodene stoppet blodtilførselen til lem og redusert skade huden i en plastisk kirurgi modell av hud klaff iskemi 18. Cuffing enten benet eller armen og heve mansjettrykket til over systolisk blodtrykk har blitt funnet å være beskyttende mot ischemisk skade hos gris og menneske 17,19,22. Annerledes tourniquet tilnærminger til å indusere fjern iskemisk inkluderer bruk av en blodtrykksmansjett eller en strikk 17,22,23. Imidlertid er bruken av et elastisk bånd for å indusere iskemi en usikker metode, som potensielt kan gi opphav til en uregulert mengde av trykket ilem, med trykk stiger over 500 mmHg blir registrert hos mennesker 24. Videre, iskemi i bena ved hjelp av et elastisk bånd fører til muskelskader hos rotter etter fjerning av båndet 23, slik som bestemt ved Evans Blue-fargestoff, en in vivo markør for myofiber permeabilitet 25. I kontrast, kan levering av et kontrollert press på tourniquet oppnås ved hjelp av en blodtrykksmansjett koblet til en sphygmomanometer 17,19,22,26. I denne studien ble en lys skade modell av fotoreseptoren degenerasjon brukt for å demonstrere den nevrobeskyttende effekten av fjern ischemisk prekondisjonering. Remote iskemi ble fremkalt umiddelbart før lyset skade, og forhindret påfølgende fotoreseptoren degenerasjon som bekreftes av netthinnefunksjon testing. Den medfølgende video vil demonstrere anvendelsen av ikke-invasiv fjern iskemi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

Sublethal iskemi beskytter vev mot etterfølgende, mer alvorlig iskemi gjennom oppregulering av endogene mekanismer i det berørte vevet. Subletal ischemia har også blitt vist å oppregulere beskyttende mekanismer i fjerntliggende vev. En kort periode med iskemi (5-10 min) i bakbenet av pattedyr induserer selvbeskyttende reaksjoner i hjernen, lungene, hjertet og netthinnen. Effekten er kjent som fjern iskemisk prekondisjonering (RIP). Det er en terapeutisk lovende måte å beskytte vitale organer, og er allerede i kliniske studier for hjerte- og hjerneskader. Denne publikasjonen demonstrerer en kontrollert, minimal invasiv metode for å lage en lem - spesielt bakbenet til en rotte - iskemisk. En blodtrykksmansjett utviklet for bruk i human nyfødte er forbundet med en manuell blodtrykksmåler og brukes til å anvende 160 mmHg trykk rundt den øvre del av bakbenet. En sonde konstruert for å detektere hudtemperatur blir brukt til å verifisere ischemien, ved å registrere nedgang i huden temperatur forårsaket av trykk-indusert okklusjon av bein arteriene, og økningen i temperatur som følger utgivelsen av mansjetten. Denne metoden for RIP gir beskyttelse til rotte hinnen mot sterkt lys-indusert skade og degenerasjon.

En blodtrykksmansjett hevet til over 160 mmHg stopper blodtilførselen til bakben som ses tydelig i figur 1B. Mangelen på vevsoksygenering resulterte i en reduksjon av dyrets fot temperatur i en iskemi-reperfusjon protokoll (figur 2). Foten temperatur (33 ° C) var lavere enn kjernetemperaturen og effektivt redusert i løpet av mansjettrykket høyde (31 ° C) stiger når mansjetten er tom for luft (32 ° C). En enkelt 1000 lux lys skade ble levert til dim hevet albinorotter med eller u...

Watch this Scientific Journal Video about Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents at JoVE.com

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Remote Limb iskemisk prekondisjonering: neuroprotective Technique i Gnagere

Remote iskemisk prekondisjonering (RIP) er en metode for condition vev mot skadelig stress. Vi har etablert en metode for fjern iskemi på bakben, ved å blåse en sphygmomanometer mansjett i 5-10 min. De nevroprotektive egenskapene RIP har blitt vist i en modell av retinal degenerasjon hos gnagere.

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

En Forenklet teknikk for produksjon av en iskemisk sår modell

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Remote Magnetic Navigation for nøyaktig, sanntid kateter Posisjonering og ablasjon i Cardiac Elektrofysiologi Prosedyrer

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateral Common Carotisar Okklusjon som en Tilstrekkelig preconditioning Stimulus å bevege Tidlig iskemisk Toleranse for Focal Cerebral iskemi

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Angiogenese i den ischemiske rottelunger

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Utføre subretinal injeksjoner i Gnagere å levere retinal pigment epitelet Cells i Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

En Nasse Nøff Model of Neonatal hypoksisk-iskemisk encefalopati

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic Hind Limb Transplantasjon i Mus

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metode for å kvantifisere Upper Limb Performance i dagliglivet Bruke Akselerometre

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...