The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

Etik uttalande: Protokollet följer riktlinjerna för djurskötsel av University of Sydney, AEC # 5657. Anestesi godkändes av djuretik kommitté (University of Sydney, AEC # 5657). 1. Förberedelse av utrustning <ol><li> Använd realtid spårning hudtemperatur. Slå på datorn, och datainsamling hårdvara. </li><li> Öppna temperatur inspelningsprogram och justera temperaturinställning till mellan 30-35 ° C och provtagningsfrekvens till 100 msek. </li><li> Tillval: Sätt rektal termomet...

Gnagare bakbens ischemi framgångsrikt induceras med en manuell blodtrycksmätare och manschett leverera neuroprotektion till fotoreceptorer i näthinnan. Ett konstaterande överensstämmer med ischemisk konditionering inducerad skydd av fotoreceptorer från ljus skada 9,28. I huvudsak orsakar fjärr ischemi kort syrebrist till vävnader. Följaktligen, har fjärr ischemisk prekonditionering många likheter med ischemisk konditionering eller alternativt benämnd ischemisk tolerans...

Överlevnaden för de flesta, kanske alla, kan vävnader i ansiktet av metabolisk stress förbättras genom tidigare konditionering med en period av subletal ischemi 1,2. Ischemisk prekonditionering (IP) i praktiken är exponeringen av vävnad till subletal ischemi, innan vävnads erfarenheter mer allvarliga stressfaktorer, såsom en efterföljande ischemisk skada. I djurmodeller tillhandahåller IP-slående skydd till hjärnan, näthinnan, hjärtat och lungorna 3-6. På motsvarande observationer i strokepatienter visade ett samband mellan tidigare övergående ischemiska attacker och bättre kliniska utfall 7,8. IP skyddar också retinala fotoreceptorer från icke-ischemiska skador 9. Effektiviteten av IP i olika vävnader och skador tyder på att den aktiverar en medfödd mekanism för cellöverlevnad närvarande i all vävnad. Ischemisk prekonditionering av hjärtmuskeln har föreslagits att ha skyddande effekter genom uppregleringhypoxi inducerbara faktor (HIF), känd för att reglera många metaboliska vägar genom frisättning av adenosin eller genom öppnandet av mitokondriella ATP kaliumkanaler 10,11. Adenosinfrigivning och ATP kaliumkanaler är inblandade i cerebral ischemi, men undersökningar av neuroprotektiva mekanismer ischemisk konditione hittills har fokuserat på ändringar av anti-excitotoxicity, anti-apoptotiska och anti-inflammatoriska vägar 12,13. Totalt sett är begränsad förståelse för den molekylära processen för ischemisk konditionering för att skydda neuroner. Fjärr ischemiska prekonditionerande försök att konditionera avlägsna kritiskt viktiga organ (hjärta, hjärna, lunga) genom att generera ischemi i mindre kritiska vävnader. Fjärr ischemisk prekonditionering (RIP) med användning av bakbenet har visats vara neuroskyddande i gnagarmodeller av stroke 14-17. Den metod som beskrivs av oss ger en enkel, tillförlitlig och icke-invasiv protocol för att inducera RIP. De allra flesta av RIP protokoll involverar bakbenet, förmodligen på grund av lårbensartären ligger i den övre bakbenen lätt kan identifieras och nås för kirurgisk kläm och blodtomsmanschett. I invasiv lem ischemiska studier för att studera hjärnan och hudskydd är ischemiinducerad genom att separera lårbensartären från ljumsk ligament och spännlårbensartären 2,15,18. Den ischemi till följd av antingen lem ansamling av inflammatoriska celler eller lårbensartären kläm har bekräftats av förändringar på benet, inklusive en förlust av puls, minskad syresättning och en nedgång i hudtemperatur. Fjärr ischemi kan bekräftas av förlusten av pulsen med hjälp av laser Doppler eller ultraljud Doppler 17-19. Hudtemperatur kan användas som alternativ till Doppler även om förhållandet ej är linjärt 20,21. Korrekta temperatur inspelningar är vanliga i laboratorier och burklätt införlivas i avlägsna ischemiska studier. Ett alternativ till femoral kläm kirurgi är induktion av ischemi med hjälp av en kompressor. Tourniquet ansökan ger jämförbar ischemi som uppnås med fartyg kläm; Kutchner et al., jämfört invasiv lårbensartären kläm till en icke-invasiv tryckförband och fann båda metoderna stoppas blodflödet till extremiteterna och minskade skador huden på ett plastikkirurgi modell av hudfliken ischemi 18. Ansamling av inflammatoriska celler antingen benet eller armen och höjning av manschettrycket till över systoliskt blodtryck har visat sig vara skyddande mot ischemisk skada i svin och människor 17,19,22. Olika tryckförband metoder för inducering fjärr ischemisk inkludera användningen av en blodtrycksmanschett eller ett elastiskt band 17,22,23. Emellertid är användningen av ett elastiskt band för att inducera ischemi en osäker metod, potentiellt ger upphov till en oreglerad mängd tryck ilem, med trycket stiger över 500 mmHg registreras hos människor 24. Vidare, ischemi med användning av ett elastiskt band leder till muskelskador i råttor efter avlägsnandet av bandet 23, enligt bedömning av Evans Blue Dye, en in vivo-markör för myofiber permeabilitet 25. I motsats härtill kan uppnås avgivning av ett reglerat tryck till stasen användning av en blodtrycksmanschett ansluten till en sfygmomanometer 17,19,22,26. I denna studie var en lätt modell skada ljusmätare degeneration som används för att visa den neuroprotektiva effekten av fjärr ischemisk prekonditionering. Fjärr ischemi framkallades omedelbart före lätt skada, och förhindrade efterföljande ljusmätare degeneration vilket bekräftas av retinal funktionstest. Den medföljande videon kommer att visa tillämpningen av icke-invasiv fjärr ischemi.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

Subletal ischemi skyddar vävnader mot efterföljande allvarligare ischemi genom uppreglering av endogena mekanismer i den drabbade vävnaden. Subletal ischemi har också visat sig uppreglera skyddsmekanismer i avlägsna vävnader. En kort period av ischemi (5-10 min) i den bakre delen av däggdjur inducerar själv skyddande svar i hjärnan, lunga, hjärta och näthinnan. Effekten är känd som fjärr ischemisk prekonditionering (RIP). Det är ett terapeutiskt lovande sätt att skydda vitala organ, och är redan i kliniska prövningar för hjärt- och hjärnskador. Denna publikation visar en kontrollerad, minimalt invasiv metod för att tillverka en lem - specifikt bakbenet hos en råtta - ischemisk. En blodtrycksmanschett utvecklats för användning i humana nyfödda är ansluten till en manuell blodtrycksmätare och används för att applicera 160 mmHg tryck runt den övre delen av bakbenet. En sond utformad för att detektera hud temperatur används för att verifiera ischemien, genom registrering av minskningen av hudens temperatur orsakad av tryckinducerad ocklusion av benens artärer, och ökningen i temperatur som följer frisättning av manschetten. Denna metod för RIP ger skydd för råtta näthinnan mot starkt ljus-inducerad skada och degeneration.

En blodtrycksmanschett höjs till över 160 mmHg stoppar blodflödet till bakbenet som ses tydligt i figur 1B. Avsaknaden av vävnadssyresättning resulterade i en minskning av djurets fot temperatur under en ischemi-reperfusion protokollet (Figur 2). Foten temperatur (33 ° C) var lägre än kärntemperatur och tillförlitligt reduceras under manschettryck höjd (31 ° C) stiger när manschetten var tömd (32 ° C). En enda 1.000 lux ljus skada levererades till dim höjas albinoråttor...

Watch this Scientific Journal Video about Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents at JoVE.com

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Fjärr Limb Ischemisk Förkonditionering: neuroprotektiv Teknik Gnagare

Fjärr ischemisk prekonditionering (RIP) är en metod för konditionering vävnader mot skadlig stress. Vi har etablerat en metod för fjärr ischemi på bakbenet, genom att blåsa en blodtrycksmätare manschetten under 5-10 min. De neuroskyddande kapacitet RIP har visats i en modell av näthinnedegeneration hos gnagare.

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Genöverföring för ischemisk hjärtsvikt I en preklinisk modell

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

En förenklad teknik för framställning av en ischemisk sårmodell

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Remote magnetnavigering för exakt, realtid kateter Positionering och Ablation i hjärtats elektrofysiologi Procedures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Användning av cystometri i smågnagare: En studie av urinblåsan Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateralt gemensamma halspulsådern Ocklusion som en fullgod Konditioneringscykel Stimulus att framkalla tidig ischemisk tolerans till Focal cerebral ischemi

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

Angiogenes i Ischemisk råttlunga

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Utföra subretinal injektioner i Gnagare att leverera pigmentepitelet celler i suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

En Piglet Modell av neonatal hypoxisk-ischemisk encefalopati

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic bakbenen Transplantation i musen

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metod för att kvantifiera Upper Limb Performance i det dagliga livet som använder accelerometrar

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...