Name: intravital microscopy imaging of the liver following leishmania infection: an assessment of hepatic hemodynamics
Uploaded: 2015-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics at JoVE.com

وأيد هذا البحث من قبل INSERM، جامعة إيكس مرسيليا وجائزة التطوير المهني من HFSPO التي حصلت عليها CL فوريستير.

بيان الأخلاق: تم تنفيذ جميع الدراسات على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية والبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من إيكس مرسيليا جامعة، فرنسا. الإناث C57BL / 6 الفئران في 8-10 أسابيع من العمر تم الحصول عليها تجاريا والتعامل معها وفقا لقواعد Dé...

<ol>
	<li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hepatic+microcirculation:+mechanistic+contributions+and+therapeutic+targets+in+liver+injury+and+repair.">The hepatic microcirculation: mechanistic contributions and therapeutic targets in liver injury and repair.</a> Physiol. Rev. 89, 1269-1339 (2009).</li><li>Srinivasan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absolute+blood+flow+measured+by+optical+methods.">Absolute blood flow measured by optical methods.</a> SPIE Newsroom. , (2011).</li><li>Seifalian, A. M., Stansby, G. P., Hobbs, K. E., Hawkes, D. J., Colchester, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+liver+blood+flow:+a+review.">Measurement of liver blood flow: a review.</a> HPB. Surg. 4, 171-186 (1991).</li><li>Engwerda, C. R., Ato, M., Kaye, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages,+pathology+and+parasite+persistence+in+experimental+visceral+leishmaniasis.">Macrophages, pathology and parasite persistence in experimental visceral leishmaniasis.</a> Trends Parasitol. 20, 524-530 (2004).</li><li>Beattie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+experimental+Leishmania+donovani-induced+hepatic+granulomas+detects+Kupffer+cell-restricted+antigen+presentation+to+antigen-specific+CD8+T+cells.">Dynamic imaging of experimental Leishmania donovani-induced hepatic granulomas detects Kupffer cell-restricted antigen presentation to antigen-specific CD8 T cells.</a> PLoS Pathog. 6, e1000805 (2010).</li><li>Lee, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intravascular+immune+response+to+Borrelia+burgdorferi+involves+Kupffer+cells+and+iNKT+cells.">An intravascular immune response to Borrelia burgdorferi involves Kupffer cells and iNKT cells.</a> Nat. Immunol. 11, 295-302 (2010).</li><li>Geissmann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+immune+surveillance+by+CXCR6++NKT+cells+patrolling+liver+sinusoids.">Intravascular immune surveillance by CXCR6+ NKT cells patrolling liver sinusoids.</a> PLoS Biol. 3, e113 (2005).</li><li>Marques, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+liver+biology+in+vivo+using+conventional+confocal+microscopy.">Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy.</a> Nat. protocols. 10, 258-268 (2015).</li><li>Thiberge, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+malaria+parasites+in+the+murine+liver.">In vivo imaging of malaria parasites in the murine liver.</a> Nat. protocols. 2, 1811-1818 (2007).</li><li>Vacchina, P., Morales, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+screening+test+using+Leishmania+promastigotes+stably+expressing+mCherry+protein.">In vitro screening test using Leishmania promastigotes stably expressing mCherry protein.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 58, 1825-1828 (2014).</li><li>Ferrer, M., Martin-Jaular, L., Calvo, M., del Portillo, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+spleen:+quantitative+analysis+of+parasite+mobility+and+blood.">Intravital microscopy of the spleen: quantitative analysis of parasite mobility and blood.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li><li>Kamoun, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+measurement+of+RBC+velocity,+flux,+hematocrit+and+shear+rate+in+vascular+networks.">Simultaneous measurement of RBC velocity, flux, hematocrit and shear rate in vascular networks.</a> Nat. Methods. 7, 655-660 (2010).</li><li>MacPhee, P. J., Schmidt, E. E., Groom, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittence+of+blood+flow+in+liver+sinusoids,+studied+by+high-resolution+in+vivo+microscopy.">Intermittence of blood flow in liver sinusoids, studied by high-resolution in vivo microscopy.</a> Am. J. Phys. 269, G692-G698 (1995).</li></ol>

التطورات الأخيرة في intravital المجهري للكبد الفأر تفتح آفاقا جديدة للتحقيق في الاستجابة الفسيولوجية للإصابة في الجسم الحي في الوقت الحقيقي 5،9،10. تدفق الدم الجهاز هو المعلمة الفسيولوجية الحرجة التي غالبا ما تتغير في كثير من الأمراض. ومع ذلك، فإن وضع ديناميكا ?...

ديناميكا الدم الجهاز محددة هي السمات الفسيولوجية الهامة من أي جهاز الثدييات. شذوذ في تدفق الدم قد يكون نتيجة للالتهاب، وعلامة على ضعف الجهاز 1. وهكذا، وتدفق الدم التنظيم والبنية والوظيفة تظهر المعلمات الحرجة بالنسبة للتحليل في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية. التقنيات التي استخدمت عادة لتحليل تدفق الدم في جهاز معين تحتوي على العديد من القيود، بما في ذلك الحد حل هذه التقنية نفسها (مثل التصوير دوبلر من تدفق الدم)، والقدرة على قياس المطلق تدفق الدم فقط (حجم الدم في وحدة خدمة جهازا) (على سبيل المثال التماسك البصري التصوير المقطعي) وقياس متوسط ​​التغير في السرعة في عدد كبير من السكان وغير متجانسة من الأوعية الدموية 2،3. ويربط نظام الدورة الدموية والكبد فرعية سفينة المختلفة التي هي غير متجانسة في حجمها، البنية والوظيفة. فييتم تطبيق هذه الدراسة، intravital المجهري (IVM) تكنولوجيا التصوير لتقييم ديناميكا الدم الكبد في الجسم الحي، في الوقت الحقيقي، وبدقة عالية وبالتوازي للكشف عن خصائص الأوعية الدموية الفردية التي تشكل الجهاز الكبدي. التطورات الأخيرة في هذه التقنية التصوير الضوئي قوية تسمح للباحث لجمع البيانات الديناميكية على الحيوانات التي تعيش في القرار المكانية والزمانية عالية. من خلال السماح للرؤية مباشرة ومراقبة الوقت الحقيقي من العمليات البيولوجية محددة وسريعة في الجسم الحي، ويوفر IVM فرصة فريدة للباحث للسفن صورة الدم الفردية، وقياس وتحديد سرعة خلايا الدم الحمراء واحدة (RBC) ضمن مختارة خصيصا سفينة الكبدية. في هذه الدراسة، قمنا بتنفيذ تقنية IVM في كبد الفأر لدراسة تأثير الإصابة الماوس عن طريق طفيل الليشمانيا كبدي التوجه على ديناميكا الدم في الكبد. L. اللشمانيا الحشويةهو العامل المسؤول عن داء الليشمانيات الحشوي، وهو مرض شديد يتميز الاستجابات الالتهابية الحادة على اساس المزمنة وأمراض موجودة في أجهزة متعددة، بما في ذلك الطحال والكبد. في نموذج الفأر تجريبية من داء الليشمانيات الحشوي، وإصابة الكبد في حين أن العدوى الطحال هو التدريجي 4-حل ذاتيا. هذه النتائج من العدوى الليشمانيا فيما يتعلق الأجهزة الفردية لا تزال غير مفهومة تماما. والتحقيق في الكبد والطحال ديناميكا الدم في ظل الظروف المرضية تسليط الضوء من جديد على التفاعلات المضيف الطفيلي والتسبب بالمرض. ويستند نظامنا النموذج التجريبي على كشف وتصوير الكبد من الماوس تخدير التي تلقت حقن في الوريد من الأصباغ الفلورية محددة لوضع العلامات على intravasculature الكبدي. الكبد هو عضو مواتية للفحص المجهري داخل الحيوي. بعد إجراء incisio صغيرن في البطن، وتخريجها بلطف الكبد ويوضع على شاش مبللة، ثم على ساترة بهدف الحد من أي الحركة الفنية بسبب ضربات القلب والتنفس. ثم يتم وضع الكبد في ضوء عدسة المجهر. بالمقارنة مع العقدة الليمفاوية والطحال والتي تتطلب استخدام اثنين من الفوتون المجهري للدراسات IVM، والاستفادة من الكبد تكمن في هندسته المعمارية 3D متجانسة / التشريح التي تسمح لاستخدام المجهر متحد البؤر التقليدية، مع عمق الاختراق الحد الأقصى ل ما يقرب من 50 ميكرون، لحيوي داخلي المجهري التصوير 5-8. توضح هذه الدراسة طريقتين التصوير مستقلة لقياس كمي لRBC السرعة وسرعة تدفق الدم في الأوعية الدموية الفردية. في الطريقة الأولى، يتم الحصول على تدفق الدم في الكبد باستخدام وضع ثنائية الأبعاد س ص على مر الزمن. ويتم تحليل البيانات XYT الناتجة باستخدام البرنامج المساعد MtrackJ في برنامج يماغيج مجانا، والذي يسمح لتتبع individالسياقية كرات الدم الحمراء مع مرور الوقت. في الطريقة الثانية، يتم تحديد وعاء دموي واحدة ويتم تحليل المقابلة تدفق الدم وذلك باستخدام خط المسح وضع الاستحواذ السريع للمتحد البؤر المجهر الليزر المسح الضوئي. يتم فحص السفينة من الاهتمام في وتيرة عالية على طول المحور المركزي من خلال خط محوري. ثم يتم كميا سرعة تدفق الدم على أساس الفرق في التباين بين كريات الدم الحمراء الداكنة غير المسماة والبلازما fluorescently المسمى. يتم رسم شدة مضان من كرات الدم الحمراء والبلازما المكتسبة على طول خط المسح الضوئي مع الزمن للحصول على الشرائط، وزوايا وهي يتناسب مع سرعات لRBC الفردية. والهدف من هذه المقالة هو توفير طريقة بسيطة وقابلة للتكرار للتصوير وقياس سرعة تدفق الدم داخل الأوعية الدموية الفردية الكبد وإتاحة الأدوات الأساسية لنجاح أداء جراحة الماوس، IVM والتحليلات الكمية للسرعة كرات الدم الحمراء الفردية. تيسوف نهجه تسمح للباحثين لاكتساب رؤى جديدة في سرعة الدم في ظل ظروف مرضية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B2261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-Alexa 647</td>
			<td>lifetechnologies</td>
			<td>A34785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-FITC 500 mol wt</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>46947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>PanPharma</td>
			<td>20434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>KP07KEU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetedine</td>
			<td>Pharma Animal</td>
			<td>6869029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate liquid</td>
			<td>Cyanolit</td>
			<td>5833300005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip frame: Membrane slide for microdissection part N&#176;: 5013</td>
			<td>Molecular machines</td>
			<td>50103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip DiaPath 24x60 ep: 1.6 mm</td>
			<td>DiaPath</td>
			<td>61061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>TCS-SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS-AF viewer&#160;</td>
			<td>Leica software</td>
			<td>Version 3.1.0 buid 8587</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy imaging of the liver following leishmania infection: an assessment of hepatic hemodynamics

intravital المجهري (IVM) هو تقنية التصوير البصرية القوية التي جعلت من الممكن التصور، ورصد وتقدير من الأحداث البيولوجية المختلفة في الوقت الحقيقي والحيوانات الحية. هذه التكنولوجيا قد تقدمت بشكل كبير من فهمنا للعمليات الفسيولوجية والظواهر بوساطة العوامل المسببة للأمراض في أجهزة معينة. في هذه الدراسة، يتم تطبيق IVM للكبد الفأر وصممت بروتوكولات الصورة في الجسم الحي الدورة الدموية للكبد وقياس خلايا الدم الحمراء (RBC) سرعة في الأوعية الكبدية الفردية. لتصور أنواع فرعية مختلفة السفينة التي تميز الجهاز الكبدي وإجراء قياسات سرعة تدفق الدم، ويتم حقن C57BL / 6 الفئران عن طريق الوريد مع كاشف البلازما الفلورسنت التي تصف الأوعية الدموية المرتبطة الكبد. IVM تمكن في الجسم الحي، في الوقت الحقيقي، وقياس سرعة RBC في وعاء محددة من الفائدة. ووضع هذه المنهجية تجعل من الممكن لالتحقيق في ديناميكا الدم في الكبد في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية. في نهاية المطاف، وهذا المنهج القائم على التصوير سيكون مهما لدراسة تأثير L. عدوى اللشمانيا الحشوية على ديناميكا الدم الكبدية. هذه الطريقة يمكن تطبيقها على نماذج المعدية الأخرى وأجهزة الماوس ويمكن أن تمتد أيضا إلى ما قبل السريرية اختبار تأثير المخدرات على الالتهاب عن طريق قياس تأثيرها على تدفق الدم.

تنظيم المعمارية محددة من الجيوب في الكبد يمكن تصور يستند إلى خاصية autofluorescent هذا الجهاز (الشكل 1، لوحة B و C والأخضر)، وحقن داخل الصفاق من هويشت لوضع العلامات على الكبدية النوى (1B الشكل، اللون الأزرق) والحقن في الوريد من BSA الفلورسنت لتلطيخ الدورة الدمو...

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics at JoVE.com

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

This article reports on a detailed method for the dynamic measurement and quantification of blood flow velocity within individual blood vessels of the mouse liver vasculature using intravital microscopy imaging in combination with a specific methodology for image acquisition and analysis.

حيوي داخلي المجهري التصوير الكبد التالية<em&gt; الليشمانيا</em&gt; العدوى: تقييم كبدي ديناميكا الدم

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

في الجسم الحي التصوير الطفيليات الليشمانية المعدلة وراثيا في مضيف لايف

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Intravital الميكروسكوب من العقدة الليمفاوية الأربي

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Intravital تصوير الغدة الصعترية باستخدام الماوس 2 فوتون الميكروسكوب

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Intravital الميكروسكوب في الطحال : التحليل الكمي للتنقل الطفيلي وتدفق الدم

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Intravital التصوير من العقدة اللمفية الفأر المأبضية

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

حل غاية intravital المجهري مخطط في الإضاءة مراكز جرمينال

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

تدفق التصاق الفحص لدراسة توظيف الكرية البيضاء لالكبدي الإنسان جيبية البطانة Endothelium تحت ظروف إجهاد القص

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

المدى الطويل حيوي داخلي Multiphoton المجهر التصوير من الخلايا المناعية في السليمة والمريضة الكبد عن طريق الفئران CXCR6.Gfp مراسل

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

اثنين-فوتون تصوير إينترافيتال من الكريات البيضاء خلال الاستجابة المناعية في الكبد تعامل Lipopolysaccharide الماوس

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

تصوير تفاعل الخلية في الغشاء المخاطي الرغامى أثناء عدوى فيروس الإنفلونزا باستخدام الفحص المجهري إينترافيتال اثنين-فوتون

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...