Name: cultivation of heligmosomoides polygyrus: an immunomodulatory nematode parasite and its secreted products
Uploaded: 2015-04-06T13:00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products at JoVE.com

The authors are funded by the Wellcome Trust through the Edinburgh Clinical Academic Track (C.J.C.J.) and Programme Grant (Y.H., and R.M.M.) and Fellowship (J.R.G) funding, the BBSRC (G.C.), the American Asthma Foundation (E.R., H.J.McS. and R.M.M.), Asthma UK (H.J.McS.) and the Rainin Foundation (D.J.S. and R.M.M.).

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры в этом протоколе осуществляется в соответствии с принципами, изложенными в Соединенном Королевстве внутренних дел и Университета Эдинбурга Ветеринарных служб. 1. Заражение мышей через желудочный зонд <ol><li> Магазин Heligmosomoides polygyrus L3 личинки в дистиллированной воде в течение шести месяцев при 4 ° С. </li><li> Перед использованием, вымойте L3 личинки три раза в дистиллированной воде: центрифуги при 300 мкг в течение 10 мин (с тормозом), удалить все, кроме 500 мкл воды (чтобы не потревожить гранулированную личинок L3) и ресуспендируют осадок каждый раз. </li><li> Для третьей промывки, добавить воду к точному объема (обычно 40 мл) и аспирации 20 мкл с 200 мкл разреза наконечника, чтобы расширить свой отверстие. Поместите два 20 мкл образцов на поверхности 60 мм чашки для культивирования и подсчета личинок L3 (обычно мобильный, и лучше всего рассматривать в соответствии с 50-кратном увеличении с препаративным микроскопом). Ресуспендируют осадок в окончательный дистиллированной водой до concentratioп 2000 L3 личинок на мл. </li><li> Для жизненного цикла продукции, заразить 8-недельных F1 (C57BL / 6xCBA) мышей с 400 H. polygyrus L3 личинки в 200 мкл дистиллированной воды через желудочный зонд (сдерживать мышей в вертикальном положении на загривок и аккуратно пройти тупой через зонд иглу через рот и пищевод в желудок). Перемешивайте тщательно перед каждой инфекции (личинки быстро оседают в воде) и аспирации 200 мкл в 1 мл шприц; использовать выделенный через зонд иглу с закругленным концом. Для экспериментального заражения молодых мышей (6-8 недель), или других инбредных линий (например, C57BL / 6 или BALBc), заразить мышей с 200 L3 личинок. </li></ol> 2. Распространение и обслуживание H. polygyrus <ol><li> Поместите уголь в центре большого пластиковой тубе и позволяют холодной водопроводной воды для запуска над ним в течение как минимум 30 минут (немытые активированный уголь является токсичным для L3 личинок). Слейте воду из ванны и разместить уголь на Т-WO слоев впитывающей бумаги, оставляя его не подвергается воздуха в помещении до полного высыхания. </li><li> Если яйца не требуется, очистить фекалии First Out толстой кишки с щипцами (и ножницы при необходимости). Если большое количество личинок L3 необходимо, поместить мышей на проволочной сетке и сбора фекальных гранул в течение нескольких дней. </li><li> Смешайте фекалии гранулированным древесным углем в соотношении по меньшей мере 1: 1, чтобы достигнуть консистенции просто влажной достаточно, чтобы присоединиться к фильтровальной бумагой. Намажьте тонким слоем на центре некоторой влажной фильтровальной бумаге в чашках Петри и разместить во влажной камере (добавить влажное полотенце бумаги и блюдо воды) в темноте в течение 12-14 дней. </li><li> Удалить L3 личинок из 7 день года, и собрать их, по крайней мере в двух случаях, прежде чем бумага удаляется. Личинки образуют кольцо вокруг края фильтровальной бумаги; поднять фильтровальную бумагу из чашки Петри и промойте личинки, которые остались от пластины (с помощью пипетки и 5 мл стерильной воды в тарелке) в 50 мл пробирку. </li><li> Лифтот фильтровальную бумагу и собрать оставшиеся личинки оставляют на пластины с дистиллированной водой в 50 мл пробирку. Центрифуга вытекающего раствора при 300 х г в течение 10 мин. Промыть личинок три раза дистиллированной водой, а затем хранить при температуре 4 ° С в срок до 50 мл дистиллированной водой до тех пор, пока требуется. ПРИМЕЧАНИЕ: Личинки остаются жизнеспособными и инфекционный, по крайней мере, 6 месяцев. </li></ol> 3. Сбор взрослых H. polygyrus черви <ol><li> Подготовка модифицированный Baermann Аппарат заранее, как показано на рисунке 1. </li><li> Cull мышей четырнадцать дней после заражения. </li><li> Вымойте живота с 70% этанола. Разрежьте кожу на животе и отступить, чтобы показать переднюю брюшную стенку. Сделайте срединный разрез, чтобы войти в брюшную полость. </li><li> Удалить всю тонкой и толстой кишки (от проксимального двенадцатиперстной кишки дистальной кишки). Поместите в сухое чашке Петри. </li><li> Выпрямите кишки по всей длине; акцизного кала, содержащего толстой кишки; разместить это в отдельную посуду для яиц препаратов более поздних. </li><li> Акцизный проксимальных 20 см тонкой кишки, который содержит взрослых червей -identified на относительно толстой стенкой двенадцатиперстной кишки и часто красный цвет, из-за внутри-просвета червей. Поместите в (диаметр 100 мм) чашки Петри с 5 мл раствора Хенкса, нагревают до 37 ° C (два образца на чашку). </li><li> Откройте червями заполнено проксимального кишечника часть в продольном направлении с ножницами (круглые состава ножницы лучше для этого), и отчищать внутри оболочки кишечника с двумя стеклами, чтобы удалить червей. Тогда отказаться от чистой стенки кишечника. </li><li> Совет черви в небольших муслин сумки, продуктом закрыты и закрепите скрепки по краям стеклянной воронки (рис 1). </li><li> Заполните воронку с раствором Хэнкса и добавить около 4 чашек Петри червей в каждой воронке. </li><li> Место аппарат в 37 ° C инкубаторе в течение 1-2 часов, мягко агитировать на полпути через, чтобы сместитьмусор от подготовки кишечника, которые могут закупоривать марли фильтр. Будьте осторожны, чтобы не высыпался мусора за пределами марли мешок - это может привести к загрязнению конечного препарата ГЭК. Взрослых червей следует медленно мигрировали через ткани марли и решен в нижней части стеклянной пробирке. Осторожно снимите пробирку с соединительной резинового шланга над раковиной (заботясь, чтобы избежать потери червей в этой точке). </li><li> Использование пластиковой пипетки передачи червей в 50 мл трубки и мыть шесть раз Хэнкса Решение (плюс червей урегулировать под действием силы тяжести, извлекайте носитель с stripette, добавить 40 мл Хэнкса Решение и повторите пять раз). ПРИМЕЧАНИЕ: червь культура должна быть стерильной С этого момента. <ol><li> Перемещение в ламинарном боксе и мыть еще шесть раз в стерильного раствора Хэнкса, дополненной 100 Е / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина, готовый к культуре в пробирке. </li></ol></li><li> ГрафВзрослые черви восстанавливается путем два образца 20 мкл, принятых с желтым разреза наконечника, чтобы расширить свою диафрагму; ожидать примерно 50% от количества засеянных личинками. </li></ol> 4. Настройка культур для ГЭК: средний подготовки, стиральная взрослых червей <ol><li> Замачивание червей 3,11 примерно 10 мл RPMI с добавкой 10% гентамицина в течение 20 мин, в результате чего труба отдыхает под углом, чтобы обеспечить черви полностью покрыты. </li><li> Выполнение этого в ламинарном боксе: мыть раз в шесть раз раствором Хэнкса (с добавлением 5 ед / мл пенициллина и 5 мкг / мл стрептомицина). </li><li> Подготовка H. polygrus массовой информации. </li><li> Поддержание стерильности в ламинарном проточном боксе, 500 мл RPMI 1640, добавить 11,1 мл 45% глюкозы (конечная концентрация 1,2%, как RPMI1640, содержит 0,2% глюкозы), 5 мл 100x Peniclllin-стрептомицина (конечная концентрация 5 ед / мл пенициллина, 5 мкг / мл стрептомицина), 5 мл L-глутамина (конечная концентрация 2 мМ), и5 мл гентамицина (конечная концентрация 1%). Не добавляйте FCS. </li><li> Кратные черви в вентилируемых колбы Т25, ок. 1000 червей в 15 мл H. polygyrus средствах массовой информации в колбе, и место в вертикальном положении в 37 ° C инкубатор (5% СО 2) в течение 3 недель. </li></ol> 5. Получение HES <ol><li> Сбор ГЭС, содержащие питательные среды из культур с интервалом не более чем в два раза в неделю, отложив в сторону свою первую коллекцию после 24 часов культуры (из-за высоких уровней загрязнения ЛПС и белков хозяина - может быть обработана отдельно или отбрасываются). Держите каждую коллекцию отдельным и четко обозначена цифрой даты и партии. Заменить с равным объемом H. polygyrus СМИ в каждом случае. </li><li> Центрифуга HES-носитель, содержащий по 400 г в течение 5 мин. Затем процедить стерилизации через 0,2 мкм с низким содержанием белка-связывающих фильтров в 50 мл пробирки. Хранить в -20 ° C морозильнике четко обозначены с указанием даты сбора урожая червя и даты ГЭС сollection. </li><li> После 21 дней сбора ГЭС от культуры, отбросить червей. </li><li> Бассейн 500-1000 мл ГЭК супернатанта (как правило, из замороженных складе, а не в том числе сбор первых 24 ч) и сосредоточиться над 3000 MWCO фильтр ультрафильтрации устройства под давлением азота. ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте очень осторожны, чтобы не позволить фильтр всухую. <ol><li> Чтобы настроить устройство фильтра, в первую мыть 3 кДа мембраны блестящей стороной вниз в 1 л стакан с дистиллированной водой в течение 3 х 20 мин при перемешивании. Соберите устройства для ультрафильтрации в соответствии с инструкциями изготовителя с мембранного фильтра блестящей стороной вверх. Место в шкафу при 4 ° С и передать 50 мл дистиллированной воды через перед началом сконцентрировать объединенные HES. </li><li> Добавить каждую пробирку ГЭК в устройство фильтрации в соответствии с требованиями (100-140 мл в день), до тех пор, пока объем концентрируют до 2-5 мл. </li></ol></li><li> Для удаления загрязнений из HES-культуральной среде, содержащей, добавить 50 мл Pyrоген свободной PBS, к устройству фильтрации и затем концентрируют до примерно 2 мл. Повторите этот шаг дважды (150 мл PBS в общей сложности). Передача HES в 15 мл пробирку, фильтр стерилизуют (с 0,2 мкм фильтр) в ламинарном боксе и измерения концентрации белка с использованием спектрофотометра (E 280 = 10) или с помощью анализа Брэдфорда. </li><li> Аликвоты, этикетка с номером партии и датой, и замерзает при температуре -80 ° С. </li><li> Выполните хромогенную LAL анализа в соответствии с протоколами производителя на каждую партию ГЭС до использования. Если уровни LPS больше, чем 1 U ЛПС на 1 мкг белка, рассматривать не с помощью этой партии для естественных условиях экспериментов в или в культурах пробирке. </li><li> Процесс ГЭК, собранные через 24 часа по отдельности таким же образом; он будет содержать LPS и некоторые белки и хост, в то время как не подходит для функциональных экспериментов, он является полезным источником индивидуальных молекул, которые могут быть выделены с помощью моноклонального антитела аффинной очистки. </li></ol&gt;

The authors have no conflicts of interest.

Жизненный цикл Н. polygyrus протекает в надежно последовательным образом. После приема природного или перорально через зонд из L3 личинок на день 0, кисты начинают формировать под двенадцатиперстной серозной по 5-й день, продвигается в личиночной линьки, а затем превращается в взрослых червей в просвете кишечника от 10 день, яйца можно увидеть в кале из 14 день и гранулемы видны на двенадцатиперстной серозной поверхности от 21-й день протоколу, описанному выше (и представлены на Рисунке 6) позволяет с высокой пропускной способностью производства H. polygyrus выделительной секреторная продукты (HES), в дополнение к надежной восстановление жизнеспособных личинок L3 для будущих экспериментальных и жизни инфекций цикла. H. polygyrus инфекция была показано, что защищает в моделях астмы в зависимости от OVA или Der р 1 (Дом пылевого клеща аллерген) 14. Кроме того, подавление воспаления дыхательных путей могут быть переданы с CD4 + CD25 + </suP&gt; регуляторные Т-клетки 14 или CD19 + CD23 привет нормативные В-клетки 24 от не-сенсибилизированные, H. polygyrus -infected мышей. В моделях аутоиммунных заболеваний, H. polygyrus инфекции было показано, что подавляющее в экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) модели множественного склероза 9, и подавление могут быть переданы либо с CD4 + Т-клеток или CD19 + В-клеток от мышей, зараженных 24. Heligmosomoides polygyrus выделительной секреторная продукты (HES) модулировать иммунный ответ и подавить Th2-опосредованного воспаление целого ряда механизмов (указаны на рисунке 7), в том числе: а) ингибирование дендритных отзывчивости клеток к стимуляции 25, б) индукцию CD4 + FOXP3 + регуляторные Т-клетки 18. и в) блокада IL-33 производства 20. ГЭК было показано, что при введении защитнойт сенсибилизация или вызов в OVA-квасцов модели астмы 19, а также при интраназальном с экстрактом Alternaria аллергена 20, через подавление ранней IL-33 выпуска. Избежание LPS загрязнения ГЭС зачастую имеет решающее значение для успеха будущих иммунологических экспериментов. В протоколе, изложенной здесь, критические шаги в достижении этой цели являются: обеспечение того, чтобы мусор, содержащийся в муслин мешки аппарата Baermann не войти в окончательный препарат ГЭК (см 2,10) и отложить решение ES с первого 24 ч культуры (см 5.1). За последние годы, ГЭС была полностью характеризуется в протеомного уровне с более чем 370 различных белков, выявленных 26,27. Кроме того, ES с 4-го этапа личинок был подвергнут протеомного анализа 28. Текущая работа включает в себя, характеризующие основные гликана компоненты ГЭК, как известно, сильно иммуногенной 3 и спрятали микро-РНКак, которые заключены в 50-100 нм пузырьков или экзосом (Buck и др., Представленных для публикации). С созданием воспроизводимых протоколов для сбора ES от этого очень иммуномодулирующим паразита, и с обширными протеомных данных, указывающих на молекулярные компоненты ГЭС, настоящее время созданы для выявления и терапевтического испытания отдельных молекул из H. polygyrus, которые могут опосредовать действие на основные иммунной системы хозяина.

Heligmosomoides polygyrus является естественным мышиный желудочно-кишечного тракта гельминтов, которые тесно связаны с высоко распространенных нематод паразитов человека 1. В отличие от других моделей, таких как нематоды Nippostrongylus Brasiliensis, H. polygyrus последовательно устанавливает хроническую инфекцию у мышей, как прямой результат множественных механизмов мощный иммуномодулирующих он использует для подавления иммунного ответа 2. H. polygyrus имеет прямое жизненный цикл: инфекционные личинки L3 поглощаются Feco-оральным передачи (или вводить через желудочный зонд в лабораторных условиях), после чего они мигрируют в subserosal слоя двенадцатиперстной кишки и инкапсулировать перед возвращением в просвете кишечника, как Взрослые черви примерно через восемь дней после первичного инфицирования. Спаривание и производство яиц происходит на 10 день, и это можно собрать взрослых червей для культуры и сбора выделительной-секреторных продуктов дау 14 года 3. H. polygyrus также взаимодействует с комменсальной микрофлоры, с повышенной лактобацилл присутствуют в зараженных восприимчивых мышей 4-6, и повышения уровня H. polygyrus инфекции после воздействия на мышей к лактобацилл 6. Активный инфекция H. polygyrus было показано для защиты от иммунопатологии во многих животных моделях аутоиммунных заболеваний 7-10, колит 11,12 и аллергии 13-16. Там Следовательно, имело большой интерес в потенциал Экскреторная секреторной молекул из этого паразита («HES») вниз модулировать патологии в естественных условиях 17,18. Действительно, защитные эффекты проявляются после лечения мышей с продуктами ГЭК 19 через пути, которые в настоящее время определены 18,20. Здесь мы опишем протокол для надежного производства Heligmosomoides polygyrus и восстановления его секретируемых продуктов, которые могут быть дополнительно использованы для диапазона функциональных биохимических и иммунологических исследований.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1183">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Material Name</td>
			<td style="width:83px;">Company</td>
			<td style="width:143px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:157px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:209px;">Amicon concentrator</td>
			<td style="width:83px;">Millipore</td>
			<td style="width:143px;">5112</td>
			<td style="width:157px;">Model 8050 50 ml 
			http://www.emdmillipore.com/INTL/en/product/Stirred-Cell-Model-8050,-50%C2%A0mL,MM 
			_NF-5122</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Hanks&#8217; buffered salt solution</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">H9394</td>
			<td style="width:157px;">500 ml 
			http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h9394?lang=en&#38;region=GB</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Penicillin streptomycin</td>
			<td style="width:83px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:143px;">15070-063</td>
			<td style="width:157px;">100 ml 
			http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15070063</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:209px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:83px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:143px;">25030-081</td>
			<td style="width:157px;">200 MM 100ml 
			https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/25030081?ICID=search-25030081</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:209px;">Activated charcoal</td>
			<td style="width:83px;">Merck</td>
			<td style="width:143px;">1.09624.0500</td>
			<td style="width:157px;">18-35 mesh 
			http://www.merckmillipore.com/GB/en/product/Charcoal-activated,MDA_CHEM-109624</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Glucose solution</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">G8769</td>
			<td style="width:157px;">100 ml 45% solution 
			http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g8769?lang=en&#38;region=GB</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Falcon tubes</td>
			<td style="width:83px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:143px;">62.547.254</td>
			<td style="width:157px;">50 ml 
			http://www.scribd.com/doc/124320105/Sarstedt-Falcon</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">T25 Flasks</td>
			<td style="width:83px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">CLS430639&#160;</td>
			<td style="width:157px;">25cm vented flask 
			http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/cls430639?lang=en&#38;region=GB</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:209px;">Chromogenic LAL assay</td>
			<td style="width:83px;">Lonza</td>
			<td style="width:143px;">50-647U</td>
			<td style="width:157px;">QCL-1000 assay 
			http://www.lonza.com/products-services/pharma-biotech/endotoxin-detection/endotoxin-detection-assays/endpoint-chromogenic-lal-assay.aspx</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:209px;">Gentamicin</td>
			<td style="width:83px;">Gibco</td>
			<td style="width:143px;">15710-049</td>
			<td style="width:157px;">100 ml 
			http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/15710072</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:209px;">Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640</td>
			<td style="width:83px;">Gibco</td>
			<td align="right">11875093</td>
			<td style="width:157px;">500 ml; without L-glutamine 
			http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/11875093</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cultivation of heligmosomoides polygyrus: an immunomodulatory nematode parasite and its secreted products

Heligmosomoides polygyrus (ранее известный как Nematospiroides камбалы, а также рассказал о некоторых, как Х. Bakeri) является желудочно гельминтов, которая использует несколько иммуномодулирующих механизмов по обеспечению хронической инфекции у мышей и напоминает распространенные инфекции человека гельминтами. H. polygyrus был хорошо изучен в области гельминтов, полученных иммунной регуляции и было установлено, мощно подавить экспериментальные модели аллергии и аутоиммунных заболеваний (как с активной инфекцией и изолированных секретируемых продуктов). Протокол, описанный в этом документе излагаются управление H. polygyrus жизненный цикл для последовательного производства L3 личинок, восстановление взрослых паразитов и сбор их выводных-секреторных продуктов (ГЭК).

Восприимчивость к инфекции H. polygyrus управляется в значительной степени генетического фона штамма мыши (Таблица 1); C57BL / 6 и мышах линии СВА являются весьма чувствительными 21,22. Для поддержания жизненного цикла паразита, гибридный F1 между этими двумя штаммов был выбран за его способность выдерживать значительно более высокие нагрузки червь без чрезмерного заболеваемости (кишечной эпителиальной повреждений) по сравнению с родительским штаммом либо. Желудочный зонд 400 личинок L3 используется для поддержания жизненного цикла в F1 мышей (в результате чего взрослых червей бремени, показанных на фиг.2), в то время как в дозе 200 L3 личинок обычно используется для экспериментов в гомозиготных инбредных линий (например, линии C57BL / 6 или BALBc). Тем не менее, эта доза может потребоваться уменьшить в зависимости от окружающей среды сопутствующих факторов, которые могут отличаться между объектами животного, такого как различия в кишечной флоре. Партии ГЭК доказали воспроизводимый склада иадвокатирования в функциональных анализов и белкового состава; Кроме того, при анализе супернатанты из каждой последующей недели культуры, до в общей сложности 4 недели, профили белков оказались очень похожи (фиг.3). При концентрации ГЭК измеряется Бредфорда (см 5.5), общее белка обычно около 1 мг / мл (рис 4). Альтернативный способ концентрирования HES является центробежным концентратором (например Vivaspin 3-кДа отсечки мембраны), в котором образцы центрифугировали при до 4000 г в поворотно-откидной ротор центрифуги, удаление буферные соли и низкомолекул рные компоненты. Центробежный концентрации лучше всего подходят для малых объемов переработки (1-10 мл) и ограничены до максимального коэффициента концентрации приблизительно 30x. При сборе ГЭС, отказ от загрязнения является критическим. Чтобы избежать загрязнения с молекулами хозяина, отбросить HES-продолжениеAining питательных сред из первых 24 ч после взрослого урожая червя в кишечнике мыши. Мы также количественной оценки уровня загрязнения LPS в каждой партии ГЭС с анализом Chromogenic LAL (см 5.7). 1 U ЛПС приравнивается к ~ 100 пг LPS и уровни ниже этого считаются пренебрежимо мало 23. В наших руках, большинство партий ГЭК значительно ниже этого предела, средняя концентрация ЛПС ГЭК быть 0,23 U / мг (Рисунок 5). Эффекты ЛПС в модели в естественных условиях патологии (например, подавление астматических ответов) требует по меньшей мере 10 нг LPS 23. Таким образом, в естественных условиях введения 5 мкг ГЭС из партии с 100 пг LPS / мкг ГЭС будет включать в себя 500 пг LPS, что значительно ниже эффективной концентрации, где LPS становится проблемой. <img alt="Фигура 1" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig1highres.jpg" /> Рисунок 1: Baermann Аппарат BaerМанн установки Аппараты для сбора взрослых H. polygyrus (как описано в разделе 2). <img alt="Фиг.2" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig2highres.jpg" /> Рисунок 2: Средняя Worm Бремя 14 дней после заражения с 400 L3 личинки среднего червя обременяет 14 дней после заражения 400 L3 личинок. Точки данных Указаны от 19 отдельных выстрелов инфекции мышей C57BL / 6xCBA. Средняя ± SEM показано на рисунке. <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig3highres.jpg" /> Рисунок 3: Белки Профили ГЭК с последовательных недель культивирования профиль SDS-ПААГ ГЭК белков, собранных в последовательных недель культуры. <img alt="Рисунок 4" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig4highres.jpg" /> Рисунок 4: </sЧонг&gt; Финал Количество ГЭС с 500 мл ES средах, содержащих Доходность ГЭС белка из 11 различных партий, полученных из примерно 500 мл супернатанта культуры. Средняя ± SEM показано на рисунке. <img alt="Рисунок 5" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig5highres.jpg" /> Рисунок 5: LPS Загрязнение ГЭК уровни загрязнения ЛПС в 41 партиях ГЭС, измеренных ameobocyte анализа Limulus. Средняя концентрация ЛПС = 86 U на мг ГЭС. <img alt="Рисунок 6" src="/files/ftp_upload/52412/52412fig6highres.jpg" /> Рисунок 6: Анимированные Схема H. polygyrus жизненного цикла Краткое изложение основных этапов жизненного цикла от орального введения через зонд L3 личинок, через восстановление личинок и взрослых гельминтов к выделению ГЭС. Рисунок 7: Анимированные Схема ГЭС и ее функции Основные иммуномодулирующим действием растворимых медиаторов и экзосом, содержащихся в ГЭК. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always"><tbody><tr><td> Генотип (и фон деформации) </td><td> Первичная инфекция фенотип </td><td> Ссылка </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Инбредных линий </td><td></td><td></td></tr><tr><td> / J, CBA, C3H </td><td> Очень восприимчивы </td><td> 22,29 </td></tr><tr><td> C57BL / 6 и C57BL / 10 </td><td> Восприимчивый </td><td> 22,30 </td></tr><tr><td> BALB / C, DBA / 2, 129 / J </td><td> Промежуточный </td><td> 22,31 </td></tr><tr><td> NIH, SJL, КСВ </TD&gt; <td> Низкая чувствительность </td><td> 22,32 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> Трансгенные цитокинов или рецепторов цитокинов </td><td></td></tr><tr><td> IL-1β - / - </td><td> Более восприимчивы </td><td> 33 </td></tr><tr><td rowspan="2"> IL-1R - / - </td><td rowspan="2"> Менее подвержены (а); никаких изменений в восприимчивости, но увеличение гранулемы (б) </td><td> () 33 </td></tr><tr><td> (Б) 34 </td></tr><tr><td> ИЛ-2Rβ Трансгенные (C57BL / 6) </td><td> Стойкий </td><td> 35 </td></tr><tr><td> IL-4 - / - </td><td> Высшее плодовитость </td><td> 36 </td></tr><tr><td> IL-4R - / - (C57BL / 6 или BALB / C) </td><td> Очень восприимчивы </td><td> 22 </td></tr><tr><td> ИЛ-6 - / - (линии BALB / C или C57BL / 6) </td><td> Высокой устойчивостью </td><td> 37 </td></tr><tr><td> IL-9 Трансгенные(FVB) </td><td> Стойкий </td><td> 38 </td></tr><tr><td> IL-21R - / - (C57BL / 6) </td><td> Недостаточное Th2, снижение гранулемы gormation </td><td> 39,40 </td></tr><tr><td> ИЛ-25 - / - (линии BALB / C) </td><td> Более восприимчивы </td><td> 33 </td></tr><tr><td> ИЛ-33R (Т1 / ST2) - / - (линии BALB / C) </td><td> Никаких изменений в восприимчивости </td><td> 33 </td></tr><tr><td> TGFβRIIdn (C57BL / 6) </td><td> Высокая Th1, повышенная восприимчивость </td><td> 41,42 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> Трансгенные для Т-клеточных маркеров </td><td></td></tr><tr><td> CD28 - / - (линии BALB / C) </td><td> Незначительно выше плодовитость </td><td> 43 </td></tr><tr><td> CD86 (В7-2) - / - (линии BALB / C) </td><td> Высшее плодовитость </td><td> 44 </td></tr><tr><td> OX40L - / - (линии BALB / C) </td><td> Высшее плодовитость и# 160; </td><td> 45 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="2"> Трансгенные для врожденной иммунной локусов </td><td></td></tr><tr><td> Тип 1 рецептора интерферона (IFNAR) - / - (C57BL / 6) </td><td> Высшее плодовитость, более гранулемы </td><td> 34 </td></tr><tr><td> MyD88 - / - (C57BL / 6) </td><td> Более стойкие, больше гранулемы </td><td> 34 </td></tr><tr><td> C-KitW / Wv (WBB6) </td><td> Более восприимчивы </td><td> 46,47 </td></tr></tbody></table> Таблица 1: Основные инфекции с H. polygyrus генетически различных и генно-целенаправленные линий мышей.

Watch this Scientific Journal Video about Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products at JoVE.com

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Heligmosomoides polygyrus является мышиный нематода с мощными иммуномодулирующими возможностей, которые напоминают те, высококвалифицированных распространенной инфекции человека гельминтами. Здесь мы опишем протокол для долгосрочного поддержания H. polygyrus жизненным циклом.

Выращивание<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus:</em&gt; Иммуномодулирующая нематода Паразит и его секретируемые продукты

Heligmosomoides polygyrus (formerly known as Nematospiroides dubius, and also referred to by some as H. bakeri) is a gastrointestinal helminth that ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Cultivation of Heligmosomoides Polygyrus: An Immunomodulatory Nematode Parasite and its Secreted Products

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Трансформация и церкарий В пробирке Выращивание Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

Паразита индуцированные генетически Руководствуясь аутоиммунные болезни Шагаса сердца в куриный модели

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

A Parasite Rescue and Transformation Assay for Antileishmanial Screening Against Intracellular Leishmania donovani Amastigotes in THP1 Human Acute Monocytic Leukemia Cell Line

Анализ паразитов спасению и преобразованию Antileishmanial для скрининга против внутриклеточных<em&gt; Leishmania donovani</em&gt; Amastigotes в THP1 человека Острые линии моноцитов клеточной лейкемии

Leishmaniasis is  one of the world's most neglected diseases, largely affecting the  poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million ...

Monitoring the Assembly of a Secreted Bacterial Virulence Factor Using Site-specific Crosslinking

Мониторинг Ассамблею секретируемым бактериального вирулентности фактор Использование сайт-специфической сшивания

This article describes a method to detect and analyze dynamic interactions between a protein of interest and other factors in vivo. Our method is based on ...

Assessment of the Immunomodulatory Properties of Human Mesenchymal Stem Cells (MSCs)

Assessment of the Immunomodulatory Properties of Human Mesenchymal Stem Cells MSCs

Оценка иммуномодулирующими свойствами человеческой мезенхимальных стволовых клеток (МСК)

The immunomodulatory properties of multilineage human mesenchymal stem cells (MSCs) appear to be highly relevant for clinical use towards a wide-range of ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Создание установки с высокой пропускной способностью для скрининга малых молекул, которые модулируют с-ди-GMP Передача сигналов в<em&gt; Синегнойной</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

Разработка системы доставки Экономичный ДНК по «Acufection» и его применение к исследованию кожи

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

Быстрое Количественное митоген-индуцированной бластогенеза в Т-лимфоцитах для идентификации иммуномодулирующих препаратов

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products

Поколение моноклональных антител против натуральных продуктов

The analysis of the bioactive components present in foods and natural products has become a popular area of study in many fields, including traditional ...

Multicolor Flow Cytometry-based Quantification of Mitochondria and Lysosomes in T Cells

Многоцветная потока на основе цитометрии количественная оценка митохондрии и лизосом в Т-клеток

T cells utilize different metabolic programs to match their functional needs during differentiation and proliferation. Mitochondria are crucial cellular ...