Name: using cell-substrate impedance and live cell imaging to measure real-time changes in cellular adhesion and de-adhesion induced by matrix modification
Uploaded: 2015-02-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification at JoVE.

This work was funded by a National Health and Medical Research Council (NHMRC) Project Grant 568721 (SRT) and, in part, by a UNSW Faculty of Medicine Faculty Research Grant (MDR).

1. عامة غشائي خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة الخلايا البطانية الأبقار الأبهر (الممرات 4-9) في قوارير زراعة الأنسجة المغلفة الجيلاتين (معطف سطح زراعة الأنسجة مع 0.1٪ ث / ت الجيلاتين في برنامج تلفزيوني في RT لمدة 15 دقيقة) في EGM-2 وسائل الإعل?...

<ol>
	<li>Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+focal+adhesions+and+barrier+function.">Endothelial focal adhesions and barrier function.</a> J Physiol. 569, 359-366 (2005).</li><li>Geiger, B., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+architecture+and+function+of+matrix+adhesions.">Molecular architecture and function of matrix adhesions.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 3, (2011).</li><li>Rees, M. D., Kennett, E. C., Whitelock, J. M., Davies, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+damage+to+extracellular+matrix+and+its+role+in+human+pathologies.">Oxidative damage to extracellular matrix and its role in human pathologies.</a> Free Radic Biol Med. 44, 1973-2001 (2008).</li><li>Cox, T. R., Erler, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+and+homeostasis+of+the+extracellular+matrix:+implications+for+fibrotic+diseases+and+cancer.">Remodeling and homeostasis of the extracellular matrix: implications for fibrotic diseases and cancer.</a> Dis Model Mech. 4, 165-178 (2011).</li><li>Baldus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+transcytosis+of+myeloperoxidase+confers+specificity+to+vascular+ECM+proteins+as+targets+of+tyrosine+nitration.">Endothelial transcytosis of myeloperoxidase confers specificity to vascular ECM proteins as targets of tyrosine nitration.</a> J Clin Invest. 108, 1759-1770 (2001).</li><li>Baldus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+mapping+of+pulmonary+and+vascular+nitrotyrosine+reveals+the+pivotal+role+of+myeloperoxidase+as+a+catalyst+for+tyrosine+nitration+in+inflammatory+diseases.">Spatial mapping of pulmonary and vascular nitrotyrosine reveals the pivotal role of myeloperoxidase as a catalyst for tyrosine nitration in inflammatory diseases.</a> Free Radic Biol Med. 33, 1010-1019 (2002).</li><li>Thomas, S. R., Witting, P. K., Drummond, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redox+control+of+endothelial+function+and+dysfunction:+molecular+mechanisms+and+therapeutic+opportunities.">Redox control of endothelial function and dysfunction: molecular mechanisms and therapeutic opportunities.</a> Antioxid Redox Signal. 10, 1713-1765 (2008).</li><li>Rees, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloperoxidase-derived+oxidants+selectively+disrupt+the+protein+core+of+the+heparan+sulfate+proteoglycan+perlecan.">Myeloperoxidase-derived oxidants selectively disrupt the protein core of the heparan sulfate proteoglycan perlecan.</a> Matrix Biol. 29, 63-73 (2010).</li><li>Rees, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+subendothelial+matrix+oxidation+by+myeloperoxidase+triggers+myosin+II-dependent+de-adhesion+and+alters+signaling+in+endothelial+cells.">Targeted subendothelial matrix oxidation by myeloperoxidase triggers myosin II-dependent de-adhesion and alters signaling in endothelial cells.</a> Free Radic Biol Med. 53, 2344-2356 (2012).</li><li>Solly, K., Wang, X., Xu, X., Strulovici, B., Zheng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+real-time+cell+electronic+sensing+(RT-CES)+technology+to+cell-based+assays.">Application of real-time cell electronic sensing (RT-CES) technology to cell-based assays.</a> Assay Drug Dev Technol. 2, 363-372 (2004).</li><li>Giaever, I., Keese, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromotion+of+mammalian+cells+measured+electrically.">Micromotion of mammalian cells measured electrically.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 7896-7900 (1991).</li><li>Vissers, M. C., Thomas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypochlorous+acid+disrupts+the+adhesive+properties+of+subendothelial+matrix.">Hypochlorous acid disrupts the adhesive properties of subendothelial matrix.</a> Free Radic Biol Med. 23, 401-411 (1997).</li><li>Ziv, N. E., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Interference+Contrast+(DIC)+Imaging+of+Living+Cells.">Differential Interference Contrast (DIC) Imaging of Living Cells.</a> CSH Protoc. 2007, (2007).</li><li>Kennett, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxynitrite+modifies+the+structure+and+function+of+the+extracellular+matrix+proteoglycan+perlecan+by+reaction+with+both+the+protein+core+and+the+heparan+sulfate+chains.">Peroxynitrite modifies the structure and function of the extracellular matrix proteoglycan perlecan by reaction with both the protein core and the heparan sulfate chains.</a> Free Radic Biol Med. 49, 282-293 (2010).</li><li>Sen, S., Ng, W. P., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractility+dominates+adhesive+ligand+density+in+regulating+cellular+de-adhesion+and+retraction+kinetics.">Contractility dominates adhesive ligand density in regulating cellular de-adhesion and retraction kinetics.</a> Ann Biomed Eng. 39, 1163-1173 (2011).</li><li>Wildt, B., Wirtz, D., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+subcellular+release+for+studying+the+dynamics+of+cell+detachment.">Programmed subcellular release for studying the dynamics of cell detachment.</a> Nat Methods. 6, 211-213 (2009).</li></ol>

يمكن قياسها كميا التصاق خلايا المصفوفة وعمليات نزع التصاق بدقة في الوقت الحقيقي لقرار زمنية عالية باستخدام مقاومة الخلايا الركيزة والتصوير الخلية الحية يحلل. وتوفر هذه النهج في الوقت الحقيقي ميزة كبيرة على تحليلات نقطة النهاية من التصاق الخلية، والتي توفر ضعف القر...

ويلزم الاتصالات لاصقة مستقرة بين الخلايا والمحيطة مصفوفة من خارج الخلية لصيانة توازن الأنسجة. على سبيل المثال، التصاق الخلايا البطانية لمصفوفة تحت البطانة في الأوعية الدموية تلعب دورا حاسما في الحفاظ على سلامة طبقة بطانة الأوعية الدموية وظيفة التماثل الساكن بوصفها التنظيمي، شبه منفذ الأوعية الدموية حاجز 1. ويقترن الهيكل الخلوي الأكتين ميكانيكيا لاصقة جزيئات المصفوفة في مواقع التصاق خلايا المصفوفة والاتصالات لاصقة في واجهة خلية مصفوفة تلعب دورا هاما في تحديد موقف من غشاء الخلية عن طريق مقاومة الموجهة مركزيا القوات الشد أكتوميوزين. المحفزات خارج الخلية التي تغير خلية مصفوفة التصاق يغير بالضرورة ميزان القوى في واجهة خلية مصفوفة، وهو الحدث الذي غير وجه السرعة &quot;لمست من خلال البروتينات مما يشير الحساسة للوالميكانيكية، مما أدى إلى تنبيغ&quot; خارج في الإشارات &quot;. هذا الرهان عبر الحديثخلايا وين والمحيطة المصفوفة خارج الخلية التي تلعب دورا رئيسيا في التحكم في شكل الخلية، حركية، وظيفة، والانتشار والبقاء على قيد الحياة 2. وتتميز عمليات patho الفسيولوجية المختلفة (التطور الجنيني، والتهاب، الجروح إصلاح والانبثاث سرطان) من خلال إعادة عرض ديناميكية من ركائز مصفوفة لاصقة من قبل تأكسد مصفوفة المهينة و / أو الإنزيمات 3،4. على سبيل المثال، لاصق البروتينات مصفوفة تحت البطانة في الأوعية الدموية (على سبيل المثال، فبرونيكتين) وتورط كأهداف رئيسية للتعديل أو تدهور في الأمراض الالتهابية الإنسان بسبب إنتاج المترجمة من تأكسد رد الفعل (على سبيل المثال، حمض تحت الكلور، HOCL) بواسطة انزيم المستمدة من الكريات البيض الميلوبيروكسيديز (MPO)، الذي يتراكم داخل تحت البطانة أثناء أمراض الأوعية الدموية التهابات (الشكل 1) 5-9. التغيرات في خلايا مصفوفة التصاق الناجم عن الأكسدة MPO المشتقة وغيرها من المحفزات-تعديل المصفوفة هي شابهاعل للعب أدوارا هامة في تغيير التوازن الأوعية الدموية خلال مجموعة متنوعة من العمليات المرضية؛ على سبيل المثال، عن طريق تغيير إشارات الخلية البطانية، مورفولوجيا وقدرتها على البقاء، وهذا بدوره يشوش ظيفة بطانة الأوعية الدموية وسلامة الحاجز. ومع ذلك، فإن الاستجابات يشير المورفولوجية وخلية من الخلايا الملتصقة على التعديلات المصفوفة خارج الخلية يست سوى بداية ليكون مفهوما. لفهم كيفية تعديلات مصفوفة بالسيارة التغيرات في ديناميكية التصاق الخلية والخلية مسارات الإشارات التي تعتمد على الالتصاق، يطلب من التقنيات التي قياس بدقة التغيرات في خلايا مصفوفة التصاق في الوقت الحقيقي، مع القرار الزماني عالية. هنا، نحن تصف تكميلية مقاومة الخلايا الركيزة وتقنيات التصوير الخلية الحية التي تلبي هذه المعايير وتوفير منصة لتحديد التصاق الخلايا والعمليات دي التصاق بطريقة غير الغازية. وتبين لنا كيف أن هذه مقاومة الخلايا الركيزة الحية وAPPRO التصوير الخليةآلام يمكن استخدامها بسهولة إلى (ط) مراقبة ديناميات مرفق الخلية ونشر (أي دي نوفو خلية التصاق) على ركائز مصفوفة الأم وتعديلها و (ثانيا) لقياس ديناميكية خلية مصفوفة مفرزة (أي دي-التصاق ) عن طريق الخلايا الملتصقة يتعرض للمؤثرات-تعديل مصفوفة. ويوفر النظام xCELLigence خلية الركيزة مقاومة جهاز الاستشعار البيولوجي والقياس المستمر من مساحة خلية مصفوفة الاتصال عن طريق قياس مقاومة الكهربائية على سطح 96-جيدا صفائف مسرى مكروي الذهب ويعبر عن هذه القياسات معاوقة باسم &#39;مؤشر الخلية &quot;، وهي القيمة التي أبعاد غير متناسبة إلى حد كبير في مجال الخلايا الركيزة اتصال 10 (الشكل 2)، في حين يجري أيضا حساسة للتغيرات في متوسط ​​المسافة بين (العازلة) غشاء الخلية وسطح القطب 11. وتحققت زيادة أخرى في قيم مؤشر الخلية أيضا على تشكيل ضيق الاتصالات خلية خلية ثار تقييد التدفقات الحالية paracellular، 11 الظروف التي لا تسود داخل التجارب الموضحة في هذه الدراسة. قياس مجال المتوقعة من الخلايا الفردية على مر الزمن من خلال تحليل الصور من الوقت الفاصل بين تدخل الفرق النقيض (DIC) الأفلام توفر تدبير مكمل للتغيرات في مجال الخلايا الركيزة الاتصال ويوفر معلومات إضافية بشأن طبيعة ودينامية الدقيقة لل التغيرات المورفولوجية كميا من قبل نهج مقاومة الخلايا الركيزة. على وجه التحديد، وصفنا تطبيق هذه المناهج لمراقبة كيفية أكسدة البروتينات مصفوفة لاصقة تحت البطانة (على سبيل المثال، فبرونيكتين) (ط) MPO بوساطة يقلل من التصاق دي نوفو من الخلايا البطانية علقت على فبرونيكتين تنقيته و (ثانيا) يطلق خلية مصفوفة دي -adhesion في الخلايا البطانية مع التصاق أنشئت في فبرونيكتين. عن طريق أداء الخلايا مما يشير الى موازية يحلل بمرور الوقت باستخدام الكيميائية الحيوية ذات الصلةيمكن تحديد المقايسات كال (على سبيل المثال، النشاف الغربي)، والعلاقات الزمانية والسببية بين العمليات التصاق / دي التصاق والتغيرات المرتبطة بها في الخلية إشارات الأحداث التي تعتمد على الالتصاق. وقد استخدمت هذه النهج في الآونة الأخيرة لإثبات أن الأكسدة المصفوفة خارج الخلية يحفزه الودائع تحت البطانة من MPO يتسبب في فقدان سريع في خلايا مصفوفة التصاق الخلايا البطانية التي يقودها قوات أكتوميوزين مقلص الموجودة من قبل 9. الأهم من ذلك، من خلال تمكين العلاقة الزمنية بين التغيرات في كل من التصاق الخلية والخلية التصاق التي تعتمد يشير إلى أن تحدد، هذه النهج حددت أن MPO التي يسببها تعديل مصفوفة والخلوية دي التصاق يؤدي تغيرات في الخلايا مسارات إشارات تعتمد على الالتصاق الهامة بما في ذلك SRC كيناز معتمد على الفسفرة paxillin والضوء ميوسين سلسلة II الفسفرة (الشكل 1) 9. هذا النمط من الأكسدة التي تعتمد على الإشارات، الجردolving تفعيل الأحداث الإشارات بين الخلايا من خلال ردود الفعل الأكسدة خارج الخلية التي تعطل خلية مصفوفة التصاق، يمثل وضع رواية من خلية اشارة صفتهم &quot;خارج في الأكسدة الإشارات&quot; (الشكل 1) 9. بشكل عام، يجب أن تكون هذه مكملة جهاز الاستشعار البيولوجي مقاومة الخلايا الركيزة والنهج التصوير الخلية الحية قيمة في الكشف عن مدى اختلاف المحفزات-تعديل مصفوفة أو وكلاء بالسيارة التغيرات في ديناميكية التصاق الخلية، مورفولوجيا ويشير في مختلف ملتصقة الخلية أنواع تخضع لمجموعة واسعة من إعدادات التجريبية. يصف بروتوكول التالية كيفية قياس أثر MPO بوساطة الأكسدة مصفوفة على دي نوفو التصاق بطانة الخلية (تجربة 1) والبطانية خلية دي التصاق (تجربة 2) العمليات. MPO يربط بشوق إلى فبرونيكتين وغيرها تحت البطانة البروتينات المصفوفة خارج الخلية لاصقة ولناوفاق بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) لتحويل أيونات الكلوريد (الكلور -) إلى شديدة التفاعل الكلورة أكسدة حمض تحت الكلور (HOCL)، الذي يتفاعل محليا مع هذه البروتينات المصفوفة ويعطل ممتلكاتهم لاصقة الخلية (الشكل 1) 8،9، 12.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1328">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:223px;">Company</td>
			<td style="width:151px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:551px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">96 well gold cell-substrate impedance microelectrode array</td>
			<td style="width:223px;">ACEA Biosciences / Roche</td>
			<td style="width:151px;">E-Plate 96</td>
			<td>single-use plate used for performing cell-based assays on the xCELLigence system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">blebbistatin</td>
			<td style="width:223px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">B0560</td>
			<td>selective inhibitor of non-muscle myosin-II</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Bovine Aortic Endothelial Cells, cryopreserved&#160;</td>
			<td style="width:223px;">Lonza</td>
			<td style="width:151px;">BW-6001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:223px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">05470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EGM-2 BulletKit</td>
			<td style="width:223px;">Lonza</td>
			<td style="width:151px;">CC-3162</td>
			<td>endothelial cell growth media kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Fibronectin, lyophilized powder</td>
			<td style="width:223px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">F-4759</td>
			<td>from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Fluorodish 35 mm glass-bottomed cell culture dish</td>
			<td style="width:223px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:151px;">FD35-100</td>
			<td>Cell cuture dish with optical quality glass bottom for imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Gelatin from bovine skin</td>
			<td style="width:223px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">G9391</td>
			<td>cell culture substratum</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Hank&#39;s Balanced Salt Solution</td>
			<td style="width:223px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:151px;">14025076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Hydrogen peroxide</td>
			<td style="width:223px;">Merck</td>
			<td style="width:151px;">107298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Medium-199</td>
			<td style="width:223px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:151px;">11150-059</td>
			<td>serum-free cell media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Methionine</td>
			<td style="width:223px;">Sigma</td>
			<td style="width:151px;">M9500</td>
			<td>quenches chlorinating oxidants generated by myeloperoxidase</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Myeloperoxidase, Human Polymorphonuclear Leukocytes</td>
			<td style="width:223px;">Millipore</td>
			<td style="width:151px;">475911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:405px;">RTCA MP Instrument / xCELLigence cell substrate impedance system</td>
			<td style="width:223px;">ACEA Biosciences / Roche</td>
			<td style="width:151px;">-</td>
			<td>Consists of RTCA Analyzer, RTCA (Multiple Plate) MP Station and RTCA Control Unit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:405px;">Trypsin-EDTA (0.5%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15400-054&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using cell-substrate impedance and live cell imaging to measure real-time changes in cellular adhesion and de-adhesion induced by matrix modification

خلية مصفوفة التصاق يلعب دورا رئيسيا في السيطرة على مورفولوجيا الخلايا والإشارة. وتورط المحفزات التي تعطل التصاق خلايا المصفوفة (على سبيل المثال، الميلوبيروكسيداز وغيرها من تأكسد-تعديل مصفوفة / الإنزيمات صدر خلال الالتهاب) في إحداث تغيرات مرضية في وظيفة الخلوي، والنمط الظاهري وقدرتها على البقاء في عدد من الأمراض. هنا، نحن تصف كيفية مقاومة خلايا الركيزة والنهج التصوير الخلية الحية يمكن استخدامه بسهولة للقياس بدقة التغييرات في الوقت الحقيقي في التصاق الخلايا وإزالة التصاق الناجمة عن تعديل المصفوفة (باستخدام الخلايا البطانية والميلوبيروكسيداز باعتباره المرضية في جسم المريض، تعديل مصفوفة الحوافز) مع القرار الزماني عالية وبطريقة غير الغازية. الخلية الركيزة نظام مقاومة xCELLigence الكمي بشكل مستمر مجال خلية مصفوفة التصاق عن طريق قياس مقاومة الكهربائية في واجهة خلية الركيزة في الخلايا المزروعة في صفائف مسرى مكروي الذهب. تحليل الصور من الوقت الفاصل بين مختلفاللمحاكمة الأفلام التدخل النقيض الكمي التغييرات في المنطقة المعروضة من الخلايا الفردية على مر الزمن، تمثل التغيرات في مجال خلايا مصفوفة للإتصال به. كلا تقنيات قياس بدقة التغيرات السريعة لعمليات التصاق الخلايا وإزالة الالتصاق. مقاومة الخلايا الركيزة على صفائف مسرى مكروي جهاز الاستشعار البيولوجي توفر منبرا للقياسات قوية، عالية الإنتاجية. يحلل تصوير الخلايا الحية تقديم تفاصيل إضافية بشأن طبيعة وديناميات التغيرات المورفولوجية كميا بواسطة القياسات مقاومة الخلايا الركيزة. وتوفر هذه المناهج التكميلية رؤى جديدة قيمة حول كيفية المحفز الميلوبيروكسيداز تعديل الأكسدة من التحت خلوية مكونات المصفوفة خارج الخلية يؤدي التغيرات السريعة في التصاق الخلية، مورفولوجيا ويشير في الخلايا البطانية. هذه الأساليب قابلة للتطبيق لدراسة ديناميات التصاق الخلوية ردا على غيرها من المحفزات-تعديل مصفوفة وخلايا ملتصقة ذات الصلة (مثل الخلايا الظهارية) أيضا.

في الوقت الحقيقي الكمي للخلية البطانية دي التصاق من فبرونيكتين في استجابة للأكسدة فبرونيكتين MPO بوساطة (تجربة 2)، والبذر من الايقاف الخلية البطانية على مواطن (MPO الحرة) فبرونيكتين أو MPO تحمل النتائج فبرونيكتين في مرفق الخلية القصوى ونشر في غضون 2 ساعة، ويحكم م...

Watch this Scientific Journal Video about Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification at JoVE.

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

هنا، نقدم بروتوكول لتحديد باستمرار عمليات التصاق الخلايا وإزالة الالتصاق مع القرار الزماني عالية بطريقة غير الغازية التي كتبها مقاومة الخلايا الركيزة والتصوير الخلية الحية تحلل. هذه المقاربات تكشف ديناميات العمليات التصاق الخلية / دي التصاق الناجمة عن تعديل مصفوفة وعلاقتها الزمنية للأحداث الإشارات التي تعتمد على الالتصاق.

باستخدام الممانعة الخلوي الركيزة ويعيش التصوير خلية قياس التغييرات في الوقت الحقيقي في التصاق الخلوية ودي التصاق المستحث بواسطة مصفوفة تعديل

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

تعيش خلية من خلايا التصوير تعرب عن ترحيل البروتينات Fluorescently الموسومة في مصفوفة ثلاثية الأبعاد

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Harvesting Murine Alveolar Macrophages and Evaluating Cellular Activation Induced by Polyanhydride Nanoparticles

الخلوي تنشيط حصاد الضامة السنخية الفئران وتقييم المستحث بواسطة النانوية Polyanhydride

Biodegradable nanoparticles have emerged as a  versatile platform for the design and implementation of new intranasal vaccines  against respiratory ...

Simultaneously Capturing Real-time Images in Two Emission Channels Using a Dual Camera Emission Splitting System: Applications to Cell Adhesion

القبض في وقت واحد في الوقت الحقيقي الصور في قناتين الانبعاثات باستخدام نظام تقسيم كاميرا مزدوجة الانبعاثات: تطبيقات لخلية التصاق

Multi-color immunofluorescence microscopy to detect specific molecules in the cell membrane can be coupled with parallel plate flow chamber assays to ...

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

Using Microfluidics Chips for Live Imaging and Study of Injury Responses in Drosophila Larvae

باستخدام رقائق الموائع الدقيقة للتصوير لايف ودراسة الردود الإصابات في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

Live imaging is an important technique for studying cell biological processes, however this can be challenging in live animals. The translucent cuticle of ...

Electric Cell-substrate Impedance Sensing for the Quantification of Endothelial Proliferation, Barrier Function, and Motility

الكهربائية الخلوي الركيزة مقاومة استشعار لتقدير حجم انتشار غشائي، الحاجز وظيفة، والحركة

Electric Cell-substrate Impedance Sensing (ECIS) is an in vitro impedance measuring system to quantify the behavior of cells within adherent cell layers. ...

Universal Hand-held Three-dimensional Optoacoustic Imaging Probe for Deep Tissue Human Angiography and Functional Preclinical Studies in Real Time

عالمية باليد ثلاثي الأبعاد بصري سمعي التصوير دقق في الأنسجة العميقة تصوير الأوعية الدموية الإنسان والدراسات ما قبل السريرية وظيفية في الوقت الحقيقي

The exclusive combination of high optical contrast and excellent spatial resolution makes optoacoustics (photoacoustics) ideal for simultaneously ...

Hand-held Clinical Photoacoustic Imaging System for Real-time Non-invasive Small Animal Imaging

اليد التنظير السريرية نظام تصوير للوقت الحقيقي تصوير الحيوانات الصغيرة غير الغازية

Translation of photoacoustic imaging into the clinic is a major challenge. Handheld real-time clinical photoacoustic imaging systems are very rare. Here, ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

تصور تشكيل الالتصاق في الخلايا من خلال متقدم الغزل مجهرية Fluorescence انعكاس الداخلية القرص--المجموع

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Measuring Global Cellular Matrix Metalloproteinase and Metabolic Activity in 3D Hydrogels

قياس أية مصفوفة الخلوية العالمية والنشاط الأيضي في الهلاميات المائية 3D

Three-dimensional (3D) cell culture systems often more closely recapitulate in vivo cellular responses and functions than traditional two-dimensional (2D) ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

A الإنسان 3D مصفوفة-الخلايا الشحمية نموذج ثقافة لدراسة مصفوفة خليه الأيض الأيضي

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...