Name: isolation of primary human colon tumor cells from surgical tissues and culturing them directly on soft elastic substrates for traction cytometry
Uploaded: 2015-06-04T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry at JoVE.com

This project was funded by the National Science Foundation ECCS grant 10-02165, and the Interdisciplinary Innovation Initiative Program, University of Illinois grant 12035. M.Y. A. was funded at UIUC from NIH National Cancer Institute Alliance for Nanotechnology in Cancer &#8216;Midwest Cancer Nanotechnology Training Center&#8217; Grant R25 CA154015A. Immnunostaining and confocal microscopy imaging were carried out at the Institute for Genomic Biology (IGB), UIUC. M.Y.A. acknowledges the discussions with B. J. Williams of UIUC regarding the isolation experiments. M.Y.A. acknowledges C. Nemeh and Abdul Bhuiya of UIUC for assistance in schematic and materials list preparation.

Aşağıda açıklanan protokol UIUC insan araştırma etik komitesinin kuralları izler. 1. Toplama ve Cerrahi Doku Örneği sindirimi <ol><li> Sağ kolon rezeksiyonu (Şekil 1A ve 1B) sonra tümör dokusu örneği toplayın. Hem de bitişik sağlıklı sitesinden doku toplayın. </li><li> 12 mi HBSS çözeltisi ihtiva eden 15 ml&#39;lik bir şişeye, hemen doku aktarın. Yalıtılmış bir köpük kutu içinde buz üzerinde şişe tutun. </li><li> 45 dakika içinde daha fazl...

<ol>
	<li>Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+cancer+be+reversed+by+engineering+the+tumor+microenvironment.">Can cancer be reversed by engineering the tumor microenvironment.</a> Semin. Cancer Biol. 18, 356-364 (2008).</li><li>Kumar, S., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanics,+malignancy,+metastasis:+the+force+journey+of+a+tumor+cell.">Mechanics, malignancy, metastasis: the force journey of a tumor cell.</a> Cancer Metastasis Rev. 28, 113-127 (2009).</li><li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification.">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126, 677-689 (2006).</li><li>Yeung, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+substrate+stiffness+on+cell+morphology,+cytoskeletal+structure,+and+adhesion.">Effects of substrate stiffness on cell morphology, cytoskeletal structure, and adhesion.</a> Cell Motil. Cytoskeleton. 60, 24-34 (2005).</li><li>Pelham, R. J., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+locomotion+and+focal+adhesions+are+regulated+by+substrate+&#64258;exibility.">Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate &#64258;exibility.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94 (25), 3661-3665 (1997).</li><li>Solon, J., Levental, I., Sengupta, K., Georges, P. C., Janmey, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+adaptation+and+stiffness+matching+to+soft+elastic+substrates.">Fibroblast adaptation and stiffness matching to soft elastic substrates.</a> Biophys. J. 93, 4453-4461 (2007).</li><li>Wang, H. B., Dembo, M., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+flexibility+regulates+growth+and+apoptosis+of+normal+but+not+transformed+cells.">Substrate flexibility regulates growth and apoptosis of normal but not transformed cells.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 279, 1345-1350 (2000).</li><li>Paszek, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tensional+homeostasis+and+the+malignant+phenotype.">Tensional homeostasis and the malignant phenotype.</a> Cancer Cell. 8, 241-254 (2005).</li><li>Levental, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+crosslinking+forces+tumor+progression+by+enhancing+integrin+signaling.">Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling.</a> Cell. 139, 891-906 (2009).</li><li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+force+affects+expression+of+an+in+vitro+metastasis-like+phenotype+in+HCT-8+cells.">Mechanical force affects expression of an in vitro metastasis-like phenotype in HCT-8 cells.</a> Biophys. J. 99, 2460-2469 (2010).</li><li>Ali, M. Y., Saif, M. T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+Stiffness+Mediated+Metastasis+Like+Phenotype+of+Colon+Cancer+Cells+is+Independent+of+Cell+to+Gel+Adhesion.">Substrate Stiffness Mediated Metastasis Like Phenotype of Colon Cancer Cells is Independent of Cell to Gel Adhesion.</a> Cell. Mol. Bioeng. , (2014).</li><li>Ali, M. Y., Chuang, C. Y., Saif, M. T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+cellular+phenotype+by+soft+collagen+gels.">Reprogramming cellular phenotype by soft collagen gels.</a> Soft Matter. , (2014).</li><li>Kraning-Rush, C. M., Califano, J. P., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+traction+stresses+increase+with+increasing+metastatic+potential.">Cellular traction stresses increase with increasing metastatic potential.</a> PLoS ONE. 7 (2), e32572 (2012).</li><li>Indra, I., Undyala, V., Kandow, C., Thirumurthi, U., Dembo, M., Beningo, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+correlation+of+mechanical+forces+and+metastatic+capacity.">An in vitro correlation of mechanical forces and metastatic capacity.</a> Phys. Biol. 8 (1), (2011).</li><li>Alge, C. S., Hauck, S. M., Priglinger, S. G., Kampik, A., Ueffing, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+protein+profiling+of+primary+versus+immortalized+human+RPE+cells+identifies+expression+patterns+associated+with+cytoskeletal+remodeling+and+cell+survival.">Differential protein profiling of primary versus immortalized human RPE cells identifies expression patterns associated with cytoskeletal remodeling and cell survival.</a> J. Proteome Res. 5 (4), 862-878 (2006).</li><li>Oikonomou, E., Kothonidis, K., Zografos, G., Nasioulas, G., Andera, L., Pintzas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newly+established+tumourigenic+primary+human+colon+cancer+cell+lines+are+sensitive+to+TRAIL-induced+apoptosis+in+vitro+and+in+vivo.">Newly established tumourigenic primary human colon cancer cell lines are sensitive to TRAIL-induced apoptosis in vitro and in vivo.</a> Br. J. Cancer. 97 (1), 73-84 (2007).</li><li>Knoll, S. G., Ali, M. Y., Saif, M. T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+localizing+reporter+fluorescent+beads+near+the+cell+culture+surface+for+traction+force+microscopy.">A novel method for localizing reporter fluorescent beads near the cell culture surface for traction force microscopy.</a> J. Vis. Exp. (91), (2014).</li><li>Wang, Y. L., Pelham, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+a+flexible,+porous+polyacrylamide+substrate+for+mechanical+studies+of+cultured+cells.">Preparation of a flexible, porous polyacrylamide substrate for mechanical studies of cultured cells.</a> Methods in Enzymology. 298, 489-496 (1998).</li><li>Tang, X., Ali, M. Y., Saif, M. T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+for+micro-patterning+proteins+and+cells+on+polyacrylamide+gels.">A novel technique for micro-patterning proteins and cells on polyacrylamide gels.</a> Soft Matter. 8, 3197-3206 (2012).</li><li>Tse, J. R., Engler, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+hydrogel+substrates+with+tunable+mechanical+properties.">Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties.</a> Current Protocols in Cell Biology. , 10-16 (2010).</li><li>Tseng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+organization+of+the+extracellular+matrix+regulates+cell&#8211;cell+junction+positioning.">Spatial organization of the extracellular matrix regulates cell&#8211;cell junction positioning.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109 (5), 1506-1511 (2012).</li><li>Chopra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+integrin-mediated+mechanotransduction+by+hyaluronic+acid.">Augmentation of integrin-mediated mechanotransduction by hyaluronic acid.</a> Biomaterials. 35 (1), 71-82 (2014).</li><li>Damljanovic, V., Lagerholm, B. C., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+and+micropatterned+conjugation+of+extracellular+matrix+proteins+to+characterized+polyacrylamide+substrates+for+cell+mechanotransduction+assays.">Bulk and micropatterned conjugation of extracellular matrix proteins to characterized polyacrylamide substrates for cell mechanotransduction assays.</a> Biotechniques. 39 (6), 847-851 (2005).</li><li>Tilghman, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+rigidity+regulates+cancer+cell+growth+and+cellular+phenotype.">Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype.</a> PLoS ONE. 5 (9), e12905 (2010).</li><li>Ulrich, T. A., de Juan Pardo, E. M., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanical+rigidity+of+the+extracellular+matrix+regulates+the+structure,+motility,+and+proliferation+of+glioma+cells.">The mechanical rigidity of the extracellular matrix regulates the structure, motility, and proliferation of glioma cells.</a> Cancer Res. 69, 4167-4174 (2009).</li><li>Williams, B. J., Anand, S. V., Rajagopalan, J., Saif, M. T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+self-propelled+biohybrid+swimmer+at+low+Reynolds+number.">A self-propelled biohybrid swimmer at low Reynolds number.</a> Nat. Commun. 5, (2014).</li></ol>

Hücresel çekiş stres geçenlerde metastatik devletinin 13 potansiyel biyofiziksel göstergesi olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, primer tümör hücreleri ile deneysel çekiş verileri güncel literatürde bulunmaktadır. Ayrıca, farklı sertlik poliakrilamid jeller doğrudan kültüre izole primer kolon hücreleri henüz bildirilmemiştir. Dolayısıyla, jeller ve polistiren (Şekil 2) bir optimize edilmiş primer kolon hücre kültürü şartlarını da belirlemektedir. Yum...

Mekanik mikro-ortamında, biyo-kimyasal faktörlerin yanı sıra, hücre fonksiyonlarını düzenlemede önemli bir rol oynadığını Son yıllarda giderek daha belirgin hale gelmiştir. Hücreler duyu ve 3-7 (2D kültüründe olduğu gibi) uyulması ya da (3D kültür gibi) çevrili olan substrat sertlik yanıt verebilir. Böyle yaparak, hücreler farklılaşma 3, morfolojisi 4, göç / motilite 5, biyo-fiziksel özelliklerini 6, büyümeyi 7 ve diğer işlemler modüle. Kanser hücreleri aynı zamanda bir yapışma reseptörlerinin koordine, hiyerarşik mekano kimyasal bileşimini ve ilgili sinyal iletim membran proteinleri, hücre iskeleti mimarisi ve moleküler motorlar 1, 2 kullanarak 2D ve 3D matris sertliği cevap. Örneğin, meme epitel hücreleri (MECs) 150 Pa yüzeylere kültüre zaman sertlik benzer normal asiner parankimi formuSağlıklı meme dokusunun. İlginç bir şekilde, bir tümör stromasında 8 sertliğini taklit katı substratlar (&gt; 5000 Pa) üzerinde kültürlenmiştir, yapısal ve transkripsiyonel hem gelişen tümör diğerlerinden ayıran, arzetmektedir. Buna ek olarak, başka bir deney, meme tümör oluşumu kolajen çapraz bağlama ECM 9 sertleştirme ile birlikte göstermektedir. Son deneyler onlar fizyolojik ilgili sertliği (20-47 kPa) olan 2B yüzeylerde kültürlü, ama (3.6 GPa) yüzeylerde çok sert değil, insan kolon karsinoma (HCT-8) hücreleri fenotip (MLP) gibi metastazı görüntüler olduğunu göstermektedir 10- 12 .Bu hücreler ilk bir şekilde tümör-benzeri hücre kümeleri ve daha sonra çevre başlayarak birbirinden ayırmak. Değişim onlar hücre-hücre ve hücre-ECM yapışma azaltmak ve göçmen olmak, çoğalırlar, meydana (R geçiş E) yuvarlak morfolojik bu epitel gibi. Bu sergilemeyen çok sert polistren yüzeylere HCT-8 hücre kültürlerindemalign özellikleri. Böylece HCT-8 hücre nedeniyle uygun mikro-çevre maruz kaldıkları metastatik hale öne sürülmüştür. Bu deneylerin primer insan kanser hücrelerinin ölümsüzleştirilmiş kanser hücresi çizgileri veya murin türetilmiş birincil hücreler, ile gerçekleştirilmektedir kayda değerdir. Yeni bir çalışmada, arttırılmış hücre bir gerilim metastatik hücreler 13 .The çalışma poliakrilamid jeller farklı insan kanser hücre çizgileri için çekme kuvveti ölçme içerir için potansiyel biyofiziksel imza olarak kullanılabilir önermektedir. Bu metastatik kanser hücrelerinin her durumda 13 metastatik olmayan hücreler ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha yüksek bir gerilim meydana getirebilmektedir bulunmuştur. Ancak, bu sonuçlar direkt olarak fare kaynaklı meme kanseri hücre hatlarında 14 daha önce yayınlanmış bulgularını çelişmektedir. Ayrıca, yeni bir çalışma onların iskelet remodeling pro içinde immortal ve birincil insan hücreleri arasındaki dikkat çekici farklılıkları vurgulamaktadırtein profil ve hücre sağkalım protein ifadesi 15. Bu nedenle, birincil insan kanser hücreleri için çekiş dahil olmak üzere biyo-fiziksel deneyler birçok yeniden önemlidir. Birincil hücreler immortal kanser hücre hatları çekiş trendi özetlemek ister bu soruyu ele alacak. Burada açıklanan protokol ve yumuşak yüzeylerde (poliakrilamid hidrojeller) yanı sıra ilgili Petri kutularına bunları kültürlenmesi için (sağlıklı ve hem kanserli hem de): Primer insan kolon hücrelerin izolasyonu için optimize edilmiştir. Protokol sindirim ve tek bir hücre süspansiyonu 16 içine cerrahi doku örneğinin sonucu enzimatik ayrılma dayanmaktadır. Bildiğimiz kadarıyla, bu doğrudan sitometri çekiş için gömülü floresan mikro yumuşak hidrojel yüzeylerde izole primer kolon tümörü ve normal hücreleri kültür ilk göstergesidir. Şeffaf jel yüzeyler de immün izin verir. Bu deney ortaya F-aktin organizasyon ve farklılıklarYüzey sertliği değişiklikleri gibi birincil insan kolon hücrelerinde fokal yapışıklıklar. Bu hücre kültürü platformu kanser prognoz maddeleri için parametre olarak hücre sertliği ve çekiş olarak birincil insan hücrelerinin çeşitli biyofiziksel özelliklerini keşfetmek olasılığını açılır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td ></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Reagents</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HBSS</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>14175-095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PBS</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-516F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trypsin</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Collagenese</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3- Aminopropyltrymethoxysilane (ATS)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td >281778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glutaraldehyde</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>01201-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acrylamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >N- methylenebisacrylamide (bis)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M1533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HEPES buffer solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td >83264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ammonium persulfate</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >N&#714;-tetramethylethylenediamine (TEMED)</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Human fibronectin</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td >354008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hydrazine hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td >18412</td>
			<td>Hazardous</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>RT15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Signal enhancer</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>I36933</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Monoclonal anti vinculin antibody&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>V9131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa fluor 488 goat anti-mouse IgG</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>A11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >TRITC phalloidin conjugates&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.1 &#181;m fluroscent beads</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>F8801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >0.25% Trypsin-EDTA</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
	
		<tr >
			<td ></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Materials</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >12 mm2 glass cover slips</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2865-12</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary human colon tumor cells from surgical tissues and culturing them directly on soft elastic substrates for traction cytometry

Kanser hücreleri, bir adezyon reseptörlerinin oluşan koordine, hiyerarşik bir mekano-kimyasal sistem ve ilişkili sinyal transdüksiyon zar proteinleri, hücre iskeleti mimarisini, ve moleküler motorlar, 1, 2 ile karmaşık bir şekilde, mekanik sertliği matris yanıt. Mechanosensitivity farklı kanser hücrelerinin in vitro olarak olmayan primer insan kanser hücrelerinin ölümsüzleştirilmiş hücre çizgileri veya murin türetilmiş birincil hücreler, öncelikle incelenmiştir. Bu nedenle, çok az, in vitro olarak, birincil insan kolon kanseri hücrelerinin mechanosensitivity şey bilinmektedir. Burada, optimize edilmiş bir protokol, sağlıklı ve kanserli cerrahi insan doku örnekleri primer insan kolon hücrelerinin izolasyonu açıklayan geliştirilmiştir. İzole kolon hücreleri daha sonra fibronektin (hücre dışı matris tarafından fonksiyonlandırılmış yüzeylerde poliakrilamid hidrojeller ve sert polistiren (~ 3.6 GPa sertlik) (10 kPa sertliği) (2 kPa sertliği), yumuşak ve sert başarıyla kültürebu durumda). Floresan mikro-hücre kültürü yüzeye yakın yumuşak jeller gömülür, ve çekiş tahlil özgür açık erişim yazılımı kullanarak hücresel kasılma stresleri değerlendirmek için yapılır. Buna ek olarak, farklı sertlik yüzeylerde immunofloresan mikroskopi substrat sertlik bir fonksiyonu olarak odak yapışıklıkların içeren birincil hücre morfolojisi, sitoskeleton organizasyon ve vinkülin hakkında yararlı bilgiler sağlar.

Yukarıda açıklanan protokol başarıyla kurumsal inceleme kurulu kuralları uyarınca dört farklı hastalarda birden fazla doku örnekleri (n = 12) için kullanılır. Şekil 1A sağ hücre kültürleri için doku kesitleri elde edildiği ameliyat sonrası temsili kolorektal tümör göstermektedir. Daha sonraki işlemler için laminer başlık transfer edildikten sonra HBSS çözeltisi içinde tipik bir doku kesiti Şekil 1B &#39;de gösterilmiştir. Sindirim ve tek bir hücre süs...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry at JoVE.com

Isolation of Primary Human Colon Tumor Cells from Surgical Tissues and Culturing Them Directly on Soft Elastic Substrates for Traction Cytometry

A protocol is described to extract primary human cells from surgical colon tumor and normal tissues. The isolated cells are then cultured on soft elastic substrates (polyacrylamide hydrogels) functionalized by an extracellular matrix protein, and embedded with fluorescent microbeads. Traction cytometry is performed to assess cellular contractile stresses.

Cerrahi Dokular İlköğretim İnsan Kolon Tümör Hücreleri İzolasyon ve Çekiş Sitometrinin Yumuşak Elastik Yüzeyler Doğrudan onları Kültürleme

Cancer cells respond to matrix mechanical stiffness in a complex manner using a coordinated, hierarchical mechano-chemical system composed of adhesion ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Rapid Isolation of Viable Circulating Tumor Cells from Patient Blood Samples

Hasta Kan Örneklerinden Canlı Dolaşımdaki Tümör Hücreleri Rapid İzolasyonu

Circulating tumor cells (CTC) are cells that disseminate from a primary tumor throughout the circulatory system and that can ultimately form secondary ...

Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation

Elektrik Stimülasyonu murin myoblast Progenitör Hücreler ve Uygulama Mühendislik İskelet Kası Dokular

Engineered muscle tissues can be used for several different purposes, which include the production of tissues for use as a disease model in vitro, e.g. to ...

Mass Cytometry: Protocol for Daily Tuning and Running Cell Samples on a CyTOF Mass Cytometer

Kütle Sitometri: Bir CyTOF Kütle Sitometre Daily Tuning ve Koşu Hücre Örnekleri için protokol

In recent years, the rapid analysis of single cells has commonly been performed using flow cytometry and fluorescently-labeled antibodies. However, the ...

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Cerrahi Alma, İzolasyon ve<em&gt; In vitro</em&gt; Doku Mühendisliği Uygulamaları için İnsan Ön Çapraz Bağ-türevli Hücreleri Genişleme

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

Biomechanical Characterization of Human Soft Tissues Using Indentation and Tensile Testing

Girinti ve Çekme Test Kullanarak İnsan Yumuşak Doku biyomekanik Karakterizasyonu

Regenerative medicine aims to engineer materials to replace or restore damaged or diseased organs. The mechanical properties of such materials should ...

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells (RGCs) by Flow Cytometry

Isolation of Primary Murine Retinal Ganglion Cells RGCs by Flow Cytometry

Akış Sitometresi ile Primer Sıçan Retinalı Ganglion Hücrelerinin (RGC) İzolasyonu

Neurodegenerative diseases often have a devastating impact on those affected. Retinal ganglion cell (RGC) loss is implicated in an array of diseases, ...

Isolation of Mesenchymal Stem Cells from Human Alveolar Periosteum and Effects of Vitamin D on Osteogenic Activity of Periosteum-derived Cells

Yalıtım insan alveoler kapaklarini ve Osteojenik etkinlik kapaklarini türetilmiş hücre D vitamini etkileri Mezenkimal kök hücrelerin

Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in a variety of tissues and can be differentiated into numerous cell types, including osteoblasts. Among the ...

Stiffness Measurement of Soft Silicone Substrates for Mechanobiology Studies Using a Widefield Fluorescence Microscope

Yumuşak silikon yüzeylerde sertlik ölçüm Widefield floresan mikroskop kullanarak Mechanobiology çalışmaları için

Soft tissues in the human body typically have stiffness in the kilopascal (kPa) range. Accordingly, silicone and hydrogel flexible substrates have been ...

Patterning the Geometry of Human Embryonic Stem Cell Colonies on Compliant Substrates to Control Tissue-Level Mechanics

Doku Seviyesi Mekaniğinin Kontrol Altına Almak İçin Uyumlu Yüzeylerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kolonilerinin Geometrisinin Desenlemi

Human embryonic stem cells demonstrate a unique ability to respond to morphogens in vitro by self-organizing patterns of cell fate specification that ...