Name: human dupuytren's ex vivo culture for the study of myofibroblasts and extracellular matrix interactions
Uploaded: 2015-04-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions at JoVE.com

The authors are thankful to the nurses at the AMC that have facilitated the tissue collection. We would also like to acknowledge A.M.A. van der Laan for excellent technical support with the SHG and the two-photon imaging.

هذا البروتوكول يتبع LUMC وAMC المبادئ التوجيهية من الإنسان لجنة أخلاقيات البحث. 1. إجراء العمليات الجراحية والأنسجة مجموعة ملاحظة: على الرغم من أن تقنيات مختلفة لالاستئصال الجراحي للانكماش دوبوت...

<ol>
	<li>Shih, B., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+understanding+and+clinical+management+of+Dupuytren+disease.">Scientific understanding and clinical management of Dupuytren disease.</a> Nat Rev Rheumatol. 6 (12), 715-726 (2010).</li><li>Bisson, M. A., McGrouther, D. A., Mudera, V., Grobbelaar, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+different+characteristics+of+Dupuytren's+disease+fibroblasts+derived+from+either+nodule+or+cord:+expression+of+&#945;-smooth+muscle+actin+and+the+response+to+stimulation+by+TGF-&#946;1.">The different characteristics of Dupuytren's disease fibroblasts derived from either nodule or cord: expression of &#945;-smooth muscle actin and the response to stimulation by TGF-&#946;1.</a> The Journal of Hand Surgery. 28 (4), 351-356 (2003).</li><li>Brickley-Parsons, D., Glimcher, M. J., Smith, R. J., Albin, R., Adams, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+changes+in+the+collagen+of+the+palmar+fascia+in+patients+with+Dupuytren's+disease.">Biochemical changes in the collagen of the palmar fascia in patients with Dupuytren's disease.</a> The Journal of Bone &amp; Joint Surgery. 63 (5), 787-797 (1981).</li><li>Berndt, A., Kosmehl, H., Katenkamp, D., Tauchmann, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+of+the+myofibroblastic+phenotype+in+Dupuytren's+disease+is+associated+with+a+fibronectin,+laminin,+collagen+type+IV+and+tenascin+extracellular+matrix.">Appearance of the myofibroblastic phenotype in Dupuytren's disease is associated with a fibronectin, laminin, collagen type IV and tenascin extracellular matrix.</a> Pathobiology. 62 (2), 55-58 (1994).</li><li>Karkampouna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+ex+vivo+culture+method+for+the+study+of+Dupuytren's+disease:+effects+of+TGF&#946;+type+1+receptor+modulation+by+antisense+oligonucleotides.">Novel ex vivo culture method for the study of Dupuytren's disease: effects of TGF&#946; type 1 receptor modulation by antisense oligonucleotides.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 3, e142 (2014).</li><li>Kruithof-de Julio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canonical+Wnt+signaling+regulates+Nkx3.1+expression+and+luminal+epithelial+differentiation+during+prostate+organogenesis.">Canonical Wnt signaling regulates Nkx3.1 expression and luminal epithelial differentiation during prostate organogenesis.</a> Developmental Dynamics. 242 (10), 1160-1171 (2013).</li><li>Krause, C., Kloen, P., ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+transforming+growth+factor+&#946;+and+mitogen-activated+protein+kinase+pathways+mediate+fibrotic+traits+of+Dupuytren's+disease+fibroblasts.">Elevated transforming growth factor &#946; and mitogen-activated protein kinase pathways mediate fibrotic traits of Dupuytren's disease fibroblasts.</a> Fibrogenesis &amp; Tissue Repair. 4 (1), 14 (2011).</li><li>Gorman, D. B., Wu, Y., Seney, S., Zhu, R. D., Gan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+expression+is+not+correlated+with+beta-catenin+dysregulation+in+Dupuytren's+Disease.">Wnt expression is not correlated with beta-catenin dysregulation in Dupuytren's Disease.</a> J Negat Results Biomed. 5, 13 (2006).</li><li>Streuli, C. H., Schmidhauser, C., Kobrin, M., Bissell, M. J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+regulates+expression+of+the+TGF-beta+1+gene.">Extracellular matrix regulates expression of the TGF-beta 1 gene.</a> The Journal of Cell Biology. 120 (1), 253-260 (1993).</li><li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions.">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 7 (4), 265-275 (2006).</li><li>Gottrup, F., &#197;gren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+A+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue.">Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair and Regeneration. 8 (2), 83-96 (2000).</li><li>Gudjonsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+tumor-derived+myoepithelial+cells+differ+in+their+ability+to+interact+with+luminal+breast+epithelial+cells+for+polarity+and+basement+membrane+deposition.">Normal and tumor-derived myoepithelial cells differ in their ability to interact with luminal breast epithelial cells for polarity and basement membrane deposition.</a> Journal of Cell Science. 115 (1), 39-50 (2002).</li><li>Xu, R., Boudreau, A., Bissell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture+and+function:+dynamic+reciprocity+via+extra-+and+intra-cellular+matrices.">Tissue architecture and function: dynamic reciprocity via extra- and intra-cellular matrices.</a> Cancer and Metastasis Reviews. 28 (1-2), 167-176 (2009).</li><li>Jokinen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-mediated+cell+adhesion+to+type+I+collagen+fibrils.">Integrin-mediated cell adhesion to type I collagen fibrils.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (30), 31956-31963 (2004).</li><li>Au-Yong, I. T. H., Wildin, C. J., Dias, J. J., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+common+practice+in+Dupuytren+surgery.">A review of common practice in Dupuytren surgery.</a> Techniques in Hand &amp; Upper Extremity Surgery. 9 (4), 178-187 (2005).</li><li>Deries, M., Collins, J. J. P., Duxson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+myotome:+a+muscle+with+no+innervation.">The mammalian myotome: a muscle with no innervation.</a> Evolution &amp; Development. 10 (6), 746-755 (2008).</li><li>Deries, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+remodeling+accompanies+axial+muscle+development+and+morphogenesis+in+the+mouse.">Extracellular matrix remodeling accompanies axial muscle development and morphogenesis in the mouse.</a> Developmental Dynamics. 241 (2), 350-364 (2012).</li><li>Martins, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+3D+Cell+Rearrangements+Guided+by+a+Fibronectin+Matrix+Underlie+Somitogenesis.">Dynamic 3D Cell Rearrangements Guided by a Fibronectin Matrix Underlie Somitogenesis.</a> PLoS ONE. 4 (10), e7429 (2009).</li><li>Yokomizo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+three-dimensional+imaging+of+internally+localized+immunostained+cells+within+mouse+embryos.">Whole-mount three-dimensional imaging of internally localized immunostained cells within mouse embryos.</a> Nat. Protocols. 7 (3), 421-431 (2012).</li><li>Karkampouna, S., de Julio, M. K. r. u. i. t. h. o. f. -. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis:+a+novel+approach+for+an+old+problem.">Fibrosis: a novel approach for an old problem.</a> Receptors &amp; Clinical Investigation. 1 (5), (2014).</li><li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-based+cell+migration+models+in+vitro+and+in+vivo.">Collagen-based cell migration models in vitro and in vivo.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 20 (8), 931-941 (2009).</li><li>Freund, I., Deutsch, M., Sprecher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connective+tissue+polarity.+Optical+second-harmonic+microscopy,+crossed-beam+summation,+and+small-angle+scattering+in+rat-tail+tendon.">Connective tissue polarity. Optical second-harmonic microscopy, crossed-beam summation, and small-angle scattering in rat-tail tendon.</a> Biophysical Journal. 50 (4), 693-712 (1986).</li><li>Mohler, W., Millard, A. C., Campagnola, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+harmonic+generation+imaging+of+endogenous+structural+proteins.">Second harmonic generation imaging of endogenous structural proteins.</a> Methods. 29 (1), 97-109 (2003).</li><li>Boulesteix, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micrometer+scale+ex+vivo+multiphoton+imaging+of+unstained+arterial+wall+structure.">Micrometer scale ex vivo multiphoton imaging of unstained arterial wall structure.</a> Cytometry Part A. 69A (1), 20-26 (2006).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Hinz, B., Mastrangelo, D., Iselin, C. E., Chaponnier, C., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+tension+controls+granulation+tissue+contractile+activity+and+myofibroblast+differentiation.">Mechanical tension controls granulation tissue contractile activity and myofibroblast differentiation.</a> The American Journal of Pathology. 159 (3), 1009-1020 (2001).</li><li>Eastwood, M., McGrouther, D. A., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+culture+force+monitor+for+measurement+of+contraction+forces+generated+in+human+dermal+fibroblast+cultures:+evidence+for+cell-matrix+mechanical+signalling.">A culture force monitor for measurement of contraction forces generated in human dermal fibroblast cultures: evidence for cell-matrix mechanical signalling.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1201 (2), 186-192 (1994).</li><li>Verjee, L. S., Midwood, K., Davidson, D., Eastwood, M., Nanchahal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-transcriptional+regulation+of+&#945;-smooth+muscle+actin+determines+the+contractile+phenotype+of+Dupuytren's+nodular+cells.">Post-transcriptional regulation of &#945;-smooth muscle actin determines the contractile phenotype of Dupuytren's nodular cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 224 (3), 681-690 (2010).</li></ol>

الخطوات الأكثر أهمية من زراعة الأنسجة الضامة الإنسان خارج الحي هي استخدام الفوري من الأنسجة بعد الاستئصال الجراحي لضمان جدوى. ينبغي أن يظل النسيج في محلول ملحي أو متوسطة في جميع الأوقات؛ الحفاظ على الثقافة العقيمة. يجب المقاطع العرضية من الأنسجة يكون الحد الأق?...

مرض دوبوترين (DD)، وهو مرض يسبب انثناء fibroproliferative حميدة دائمة العضوية في الأصابع بسبب تشكيل عقيدات والحبال في كف اليد. على الرغم من أن انتشار المرض مرتفع بشكل خاص بين القوقازيين من شمال أوروبا، والمسببات الوراثية الكامنة وراء هذا المرض ما زال مجهولا 1. السمة الرئيسية للDD هو إنتاج فائض من المصفوفة خارج الخلية (ECM) البروتينات (مثل الكولاجين)، والتي تشكل النسيج الليفي الصعبة التي تحتل مساحة بين الأوتار والجلد من كف اليد والأصابع، وتعطيل حركات غرامة بشكل دائم من جهة 2، 3، وتكرار المرض تشير التعديلات الوراثية الكامنة كسبب للتليف 1، 4. علاج فعال يمكن أن يكون لاستهداف مباشرة الآليات تليفي لا يمكن السيطرة عليها على المستوى الخلوي والجزيئي. وقد أدى عملنا مؤخرا على التليف بنا إلى تطويررواية نظام الثقافة 3D التي تسمح الثقافة على المدى القصير من أنسجة متليفة الإنسان مع إمكانية اختبار المخدرات. وقد ساعد هذا النظام على التغلب على نهج الحد من الثقافات الليفية 2D و تحديد دور لتنظيم أسفل جزئي، من خلال اكسون تخطي يتحقق، تفعيل مسار TGFβ في التوسط التليف 5. لقد قمنا بتطوير طريقة لثقافة فيفو السابقين العينات استئصال الإنسان من المرضى DD لدراسة التفاعل بين myofibroblasts وECM المحيطة 5 و 6. وتعتمد دراسة DD تليف الأنسجة الضامة وكذلك الأمراض تليفي أخرى على تحليل الأنسجة من رفعه الجراحية العينات وعزل الخلايا الليفية من الأنسجة وإنشاء الثقافات الأولية أو إجراءات خلية الفرز. هذه المناهج هي ثابتة تماما لأنها لا تسمح التلاعب خارجي من خصائص مرض أو التدخل العلاجي من قبل المجرب. وبالإضافة إلى ذلك، CE الأساسيالثقافات ليرة لبنانية تميل إلى التكيف مع الظروف الثقافة والجينات خصائص التعبير عنها تختلف أساسا عن الوضع في الجسم الحي على كل مرور، حتى خلال الممرات الأولى (من بين مرور 3 و 6) 7، 8. لقد نجحنا في الحفاظ على المواد الجراحية النفايات في السابق الظروف الثقافة الجسم الحي لفترة زمنية تسمح دراسة خصائص المريض محددة وفحص المركبات عقار مضاد للمتليفة أو المضادة للالتهابات. ويستند هذا النظام على غشاء النيتروسليلوز الذي يسمح اتصال من النسيج مع المتوسط ​​ولكن ليس مع البلاستيك، وبالتالي، ومنع تغيير النسيج على المرفق، كما لوحظ سابقا عند زراعة الخلايا الليفية DD وكذلك أنواع الخلايا الأخرى 9. لا يلزم جل الكولاجين أو غيرها من ECM البروتين الركيزة، منذ الأنسجة DD نفسها تنتج كميات كبيرة من هذه البروتينات. هذا هو مفيد لصيانة المكروية ECM الأم ودوران الخطيئةركائز م المصفوفة هي المنظم المهم العمارة الأنسجة وظيفة 10 و 11 على سبيل المثال، والبروتينات ECM مثل فبرونيكتين، laminin والكولاجين، قد تؤثر قطبية الأمامي الخلفي من الخلايا الليفية كما هو موضح بالمثل لقطبية قمية-القاعدية في الخلايا الظهارية 12، 13 . خلايا الاستقطاب لها توزيع غير متوازن من جزيئات الخلية والذي يحدد الهجرة الخلية والتعبير الجيني، على سبيل المثال، α1β1 الوصول إنتغرين على الغشاء يؤثر التصاق الخلية إلى النوع الأول من الكولاجين 14. منذ كان الهدف الأساسي من هذا النموذج 3D للحفاظ على المكروية الأم، تم استخدام أي مصطنعة ECM مصفوفة الركيزة. في سطور: يتم قطع العينات بتر قدم المساواة في بيئة معقمة ووضعها على الأغشية nitrocellular. إذا كان مطلوبا العلاج تدار عن طريق الحقن يتم حقن الأنسجة بعد أن يكونوا قد وضعت على الغشاء. إذا لا تتطلب العلاج إلى أن تدار عن طريق حقنةection ثم يضاف المركب إلى وسائل الإعلام الثقافة (Dulbecco لتعديل متوسطة النسر (DMEM)، مع 1٪ مصل العجل الجنين (FCS)، 1٪ البنسلين، الستربتومايسين (P / S)). يتم الحفاظ على الثقافات لمدة أقصاها عشرة أيام وبعد ذلك يتم إصلاح الأنسجة في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA)، معالجتها من خلال 30٪ من محلول السكروز، جزءا لا يتجزأ في أكتوبر مركب وتخزينها في -80 ° C، كما هو موضح سابقا 5.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal calf serum (FCS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
			<td>high glucose, heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture inserts</td>
			<td>Millicell</td>
			<td>PIHA01250</td>
			<td>0.45um pore size, 12mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-collagen type I</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1310-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- &#945; smooth muscle actin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-collagen type III</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1330-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor555 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Goat IgG (H+L) Antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TOPRO-3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylsalicylate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsccope glass coverslips</td>
			<td>Menzel-Glaser</td>
			<td>BB024060A1</td>
			<td>24x60mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope SuperFrost slides</td>
			<td>Menzel-Glaser</td>
			<td>AA00000102E</td>
			<td>76x26mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD HardSet Mounting Medium</td>
			<td>Vector laboratories</td>
			<td>H-1400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP5 II confocal microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Argon-488, 514 nm and HeNe-633 nm laser lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss 710 NLO upright confocal microscope</td>
			<td>Jena, Germany</td>
			<td></td>
			<td>equipped with femtosecond Spectra - Physics Deep See MP laser (Santa Clara, United States) using a Plan -Apochromat 20x/1.0 NA 
			water-immersion objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human dupuytren's ex vivo culture for the study of myofibroblasts and extracellular matrix interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

طريقة فيفو السابقين، والثقافة 3D من النسيج الضام هو انشاء نظام سهل وقوي لفهم العلاقة بين ECM ومكونات الخلايا الأخرى المكونة للنسيج DD وأنواع أخرى من المحتمل أن التليف كذلك. وعلاوة على ذلك يسمح هذا النظام طريقة موثوقة لاختبار آثار المركبات على أنواع مختلفة من الخلا?...

Watch this Scientific Journal Video about Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions at JoVE.com

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

مرض دوبوترين (DD) هو مرض fibroproliferative من كف اليد. هنا، نقدم بروتوكول لعينات ثقافة الاستئصال الجزئي من DD في ثلاثي الأبعاد (3D) نظام الثقافة. مثل هذا النظام الثقافة على المدى القصير يسمح الحفاظ على هيكل 3D والخصائص الجزيئية للأنسجة متليفة.

الإنسان دوبوترين<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الثقافة لدراسة Myofibroblasts وخارج الخلية مصفوفة التفاعلات

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

فيفو السابقين الثقافة من الأنسجة للمريض وفحص الجينات التسليم

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

الإنسان الخلية السرطانية الهرموني العصبي خطوط بمثابة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الإنسان علاج ورم الغدد الصم العصبية

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

والإنسان<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; تصلب الشرايين البلاك نموذج لدراسة علم الأحياء الآفات

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

إجراءات الصافن عروق الإنسان<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء والتعزيز الخارجي

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

في فيفو وفيفو السابقين المداخل لدراسة سرطان المبيض النقيلي الاستعمار من الهياكل التبانة بقعة في البريتوني الدهنية

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...