Name: human dupuytren's ex vivo culture for the study of myofibroblasts and extracellular matrix interactions
Uploaded: 2015-04-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions at JoVE.com

The authors are thankful to the nurses at the AMC that have facilitated the tissue collection. We would also like to acknowledge A.M.A. van der Laan for excellent technical support with the SHG and the two-photon imaging.

פרוטוקול זה כדלקמן הנחיות LUMC וAMC של ועדת אתיקה מחקר אנושית. 1. הליך כירורגי ואוסף רקמות הערה: למרות שטכניקות שונות לכריתה כירורגית של ההתכווצות של Dupuytren קיימות, תקן הזהב הנוכחי הוא fasciectomy החלקי <s...

<ol>
	<li>Shih, B., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scientific+understanding+and+clinical+management+of+Dupuytren+disease.">Scientific understanding and clinical management of Dupuytren disease.</a> Nat Rev Rheumatol. 6 (12), 715-726 (2010).</li><li>Bisson, M. A., McGrouther, D. A., Mudera, V., Grobbelaar, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+different+characteristics+of+Dupuytren's+disease+fibroblasts+derived+from+either+nodule+or+cord:+expression+of+&#945;-smooth+muscle+actin+and+the+response+to+stimulation+by+TGF-&#946;1.">The different characteristics of Dupuytren's disease fibroblasts derived from either nodule or cord: expression of &#945;-smooth muscle actin and the response to stimulation by TGF-&#946;1.</a> The Journal of Hand Surgery. 28 (4), 351-356 (2003).</li><li>Brickley-Parsons, D., Glimcher, M. J., Smith, R. J., Albin, R., Adams, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+changes+in+the+collagen+of+the+palmar+fascia+in+patients+with+Dupuytren's+disease.">Biochemical changes in the collagen of the palmar fascia in patients with Dupuytren's disease.</a> The Journal of Bone &amp; Joint Surgery. 63 (5), 787-797 (1981).</li><li>Berndt, A., Kosmehl, H., Katenkamp, D., Tauchmann, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+of+the+myofibroblastic+phenotype+in+Dupuytren's+disease+is+associated+with+a+fibronectin,+laminin,+collagen+type+IV+and+tenascin+extracellular+matrix.">Appearance of the myofibroblastic phenotype in Dupuytren's disease is associated with a fibronectin, laminin, collagen type IV and tenascin extracellular matrix.</a> Pathobiology. 62 (2), 55-58 (1994).</li><li>Karkampouna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+ex+vivo+culture+method+for+the+study+of+Dupuytren's+disease:+effects+of+TGF&#946;+type+1+receptor+modulation+by+antisense+oligonucleotides.">Novel ex vivo culture method for the study of Dupuytren's disease: effects of TGF&#946; type 1 receptor modulation by antisense oligonucleotides.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 3, e142 (2014).</li><li>Kruithof-de Julio, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canonical+Wnt+signaling+regulates+Nkx3.1+expression+and+luminal+epithelial+differentiation+during+prostate+organogenesis.">Canonical Wnt signaling regulates Nkx3.1 expression and luminal epithelial differentiation during prostate organogenesis.</a> Developmental Dynamics. 242 (10), 1160-1171 (2013).</li><li>Krause, C., Kloen, P., ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+transforming+growth+factor+&#946;+and+mitogen-activated+protein+kinase+pathways+mediate+fibrotic+traits+of+Dupuytren's+disease+fibroblasts.">Elevated transforming growth factor &#946; and mitogen-activated protein kinase pathways mediate fibrotic traits of Dupuytren's disease fibroblasts.</a> Fibrogenesis &amp; Tissue Repair. 4 (1), 14 (2011).</li><li>Gorman, D. B., Wu, Y., Seney, S., Zhu, R. D., Gan, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+expression+is+not+correlated+with+beta-catenin+dysregulation+in+Dupuytren's+Disease.">Wnt expression is not correlated with beta-catenin dysregulation in Dupuytren's Disease.</a> J Negat Results Biomed. 5, 13 (2006).</li><li>Streuli, C. H., Schmidhauser, C., Kobrin, M., Bissell, M. J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+regulates+expression+of+the+TGF-beta+1+gene.">Extracellular matrix regulates expression of the TGF-beta 1 gene.</a> The Journal of Cell Biology. 120 (1), 253-260 (1993).</li><li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions.">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 7 (4), 265-275 (2006).</li><li>Gottrup, F., &#197;gren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+A+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue.">Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair and Regeneration. 8 (2), 83-96 (2000).</li><li>Gudjonsson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+and+tumor-derived+myoepithelial+cells+differ+in+their+ability+to+interact+with+luminal+breast+epithelial+cells+for+polarity+and+basement+membrane+deposition.">Normal and tumor-derived myoepithelial cells differ in their ability to interact with luminal breast epithelial cells for polarity and basement membrane deposition.</a> Journal of Cell Science. 115 (1), 39-50 (2002).</li><li>Xu, R., Boudreau, A., Bissell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture+and+function:+dynamic+reciprocity+via+extra-+and+intra-cellular+matrices.">Tissue architecture and function: dynamic reciprocity via extra- and intra-cellular matrices.</a> Cancer and Metastasis Reviews. 28 (1-2), 167-176 (2009).</li><li>Jokinen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-mediated+cell+adhesion+to+type+I+collagen+fibrils.">Integrin-mediated cell adhesion to type I collagen fibrils.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (30), 31956-31963 (2004).</li><li>Au-Yong, I. T. H., Wildin, C. J., Dias, J. J., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+common+practice+in+Dupuytren+surgery.">A review of common practice in Dupuytren surgery.</a> Techniques in Hand &amp; Upper Extremity Surgery. 9 (4), 178-187 (2005).</li><li>Deries, M., Collins, J. J. P., Duxson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mammalian+myotome:+a+muscle+with+no+innervation.">The mammalian myotome: a muscle with no innervation.</a> Evolution &amp; Development. 10 (6), 746-755 (2008).</li><li>Deries, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+remodeling+accompanies+axial+muscle+development+and+morphogenesis+in+the+mouse.">Extracellular matrix remodeling accompanies axial muscle development and morphogenesis in the mouse.</a> Developmental Dynamics. 241 (2), 350-364 (2012).</li><li>Martins, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+3D+Cell+Rearrangements+Guided+by+a+Fibronectin+Matrix+Underlie+Somitogenesis.">Dynamic 3D Cell Rearrangements Guided by a Fibronectin Matrix Underlie Somitogenesis.</a> PLoS ONE. 4 (10), e7429 (2009).</li><li>Yokomizo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-mount+three-dimensional+imaging+of+internally+localized+immunostained+cells+within+mouse+embryos.">Whole-mount three-dimensional imaging of internally localized immunostained cells within mouse embryos.</a> Nat. Protocols. 7 (3), 421-431 (2012).</li><li>Karkampouna, S., de Julio, M. K. r. u. i. t. h. o. f. -. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrosis:+a+novel+approach+for+an+old+problem.">Fibrosis: a novel approach for an old problem.</a> Receptors &amp; Clinical Investigation. 1 (5), (2014).</li><li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-based+cell+migration+models+in+vitro+and+in+vivo.">Collagen-based cell migration models in vitro and in vivo.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 20 (8), 931-941 (2009).</li><li>Freund, I., Deutsch, M., Sprecher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Connective+tissue+polarity.+Optical+second-harmonic+microscopy,+crossed-beam+summation,+and+small-angle+scattering+in+rat-tail+tendon.">Connective tissue polarity. Optical second-harmonic microscopy, crossed-beam summation, and small-angle scattering in rat-tail tendon.</a> Biophysical Journal. 50 (4), 693-712 (1986).</li><li>Mohler, W., Millard, A. C., Campagnola, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Second+harmonic+generation+imaging+of+endogenous+structural+proteins.">Second harmonic generation imaging of endogenous structural proteins.</a> Methods. 29 (1), 97-109 (2003).</li><li>Boulesteix, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micrometer+scale+ex+vivo+multiphoton+imaging+of+unstained+arterial+wall+structure.">Micrometer scale ex vivo multiphoton imaging of unstained arterial wall structure.</a> Cytometry Part A. 69A (1), 20-26 (2006).</li><li>Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Hinz, B., Chaponnier, C., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibroblasts+and+mechano-regulation+of+connective+tissue+remodelling.">Myofibroblasts and mechano-regulation of connective tissue remodelling.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 3 (5), 349-363 (2002).</li><li>Hinz, B., Mastrangelo, D., Iselin, C. E., Chaponnier, C., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+tension+controls+granulation+tissue+contractile+activity+and+myofibroblast+differentiation.">Mechanical tension controls granulation tissue contractile activity and myofibroblast differentiation.</a> The American Journal of Pathology. 159 (3), 1009-1020 (2001).</li><li>Eastwood, M., McGrouther, D. A., Brown, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+culture+force+monitor+for+measurement+of+contraction+forces+generated+in+human+dermal+fibroblast+cultures:+evidence+for+cell-matrix+mechanical+signalling.">A culture force monitor for measurement of contraction forces generated in human dermal fibroblast cultures: evidence for cell-matrix mechanical signalling.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects. 1201 (2), 186-192 (1994).</li><li>Verjee, L. S., Midwood, K., Davidson, D., Eastwood, M., Nanchahal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-transcriptional+regulation+of+&#945;-smooth+muscle+actin+determines+the+contractile+phenotype+of+Dupuytren's+nodular+cells.">Post-transcriptional regulation of &#945;-smooth muscle actin determines the contractile phenotype of Dupuytren's nodular cells.</a> Journal of Cellular Physiology. 224 (3), 681-690 (2010).</li></ol>

השלבים הקריטיים ביותר של culturing רקמות חיבור אנושיים vivo לשעבר הם השימוש המיידי של הרקמות לאחר ניתוח להסרת על מנת להבטיח יכולת קיום; הרקמה צריכה להישאר בפתרון בינוני או מלוח בכל העת; לשמור על תרבות סטרילי; חלקים רוחביים של רקמה צריכים להיות עובי 200 מיקרומטר מרבי; להג...

מחלת Dupuytren (DD), מחלה fibroproliferative שפירה גורמת כיפוף קבוע של האצבעות עקב היווצרות של גושים וחוטים בכף היד. למרות התפשטות המחלה היא גבוהה במיוחד בקרב לבנים של צפון אירופה, אטיולוגיה הגנטית הבסיסית של המחלה אינה ידועה 1. המאפיין העיקרי של DD הוא הייצור העודף של מטריצה ​​תאית חלבונים (ECM) (למשל, קולגן), המהווים רקמה סיבית קשה כובשת את המרחב בין הגידים והעור של כף היד והאצבעות, באופן קבוע משבש את התנועות העדינות של היד 2, 3. ההישנות של המחלה מצביעה על שינויים גנטיים בסיסי כגורם לסיסטיק 1, 4. טיפול יעיל יכול להיות למקד ישירות מנגנוני fibrotic בלתי נשלט ברמה התאית ומולקולרית. העבודה האחרונה שלנו על סיסטיק הובילה אותנו לפיתוחמערכת חדשנית 3D תרבות המאפשרת תרבות לטווח הקצר של רקמת fibrotic אדם עם הפוטנציאל של בדיקות סמים. מערכת זו סייעה להתגבר על הגישה המגבילה של תרבויות פיברובלסטים 2D ולהגדיר תפקיד עבור מטה הרגולציה החלקית, שהושג על ידי דילוג על אקסון, של הפעלת מסלול TGFβ בתיווך סיסטיק 5. אנחנו פיתחנו שיטה לתרבות לשעבר vivo דגימות כריתה אנושית מחולי DD ללמוד את האינטראקציה בין myofibroblasts וECM 5 שמסביב, 6. המחקר של סיסטיק רקמת חיבור DD כמו גם המחלות fibrotic אחרות מסתמכת על ניתוח histopathological של נכרת כירורגית דגימות, בידוד של fibroblasts מהרקמה והקמת תרבויות עיקריות או נהלי מיון תא. גישות אלה הן די סטטית שכן הם אינם מאפשרים מניפולציה אקסוגני של נכסי מחלה או התערבות טיפולית על ידי הנסיין. בנוסף, ce העיקריתרבויות ll נוטות להסתגל לתנאי התרבות ומאפייני ביטוי הגנים שלהם שונים במהותה מהמצב בvivo על כל מעבר, גם בקטעים מוקדמים (בין קטע 3 ו -6) 7, 8. יש לנו הצלחנו לשמור על החומר כירורגית הפסולת ב תנאי vivo לשעבר תרבות לתקופת זמן המאפשרת לימוד של מאפייני המטופל ספציפי והקרנה של תרכובות תרופה אנטי-fibrotic או אנטי-דלקתיות. המערכת מבוססת על קרום nitrocellulose המאפשר מגע של הרקמות עם המדיום אבל לא עם הפלסטיק, ובכך, מונע את השינוי של הרקמה על קובץ מצורף, כפי שנצפה בעבר כאשר culturing fibroblasts DD כמו גם סוגי תאים אחרים 9. לא ג&#39;ל קולגן או מצע חלבון ECM אחר נדרש, שכן רקמת DD עצמו מייצרת כמויות גדולות של החלבונים האלה. זהו יתרון לשמירה על מייקרו-סביבת ECM ילידים וחטא מחזורמצעי מטריצת ce הם רגולטור חשוב של אדריכלות ותפקוד 10, 11 רקמות. לדוגמא, חלבוני ECM כגון פיברונקטין, laminin וקולגן, עשויים להשפיע על קוטביות קדמית אחורית של fibroblasts כדומה מוצג לקוטביות הפסגה-בסיס בתאי האפיתל 12, 13 . יש לי תאים מקוטב הפצת א-סימטרית של מולקולות תאיים הקובעת נדידת תאים וביטוי גנים, למשל, נגישות integrin α1β1 על הקרום משפיעה הידבקות תא להקליד אני קולגן 14. מאז מטרתו העיקרית של מודל זה 3D הייתה לשמר את המיקרו-הסביבה המקומית, שימש לא מצע מטריצת ECM מלאכותי. בקצרה: דגימות כריתה נחתכות באותה מידה בסביבת סטרילית והניחו על קרומי nitrocellular. אם נדרש טיפול מנוהל באמצעות הזרקת הרקמות מוזרקות לאחר שהונחו על הקרום. אם טיפול אינו דורש להיות מנוהל באמצעות injection אז המתחם מתווסף לתקשורת והתרבות (בינוני של הנשר (DMEM) השתנה Dulbecco, עם 1% בסרום עגל עוברי (FCS), 1% פניצילין, סטרפטומיצין (P / S)). התרבויות נשמרות לתקופה מקסימלית של עשרה ימים לאחר שהרקמה קבועה בparaformaldehyde 4% (PFA), מעובד באמצעות פתרון סוכרוז 30%, משובץ במתחם OCT ומאוחסן ב -80 ° C, כפי שתוארו בעבר 5.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal calf serum (FCS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td></td>
			<td>high glucose, heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin-streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture inserts</td>
			<td>Millicell</td>
			<td>PIHA01250</td>
			<td>0.45um pore size, 12mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-collagen type I</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1310-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- &#945; smooth muscle actin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-collagen type III</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>1330-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor555 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-31570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Donkey Anti-Goat IgG (H+L) Antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TOPRO-3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T3605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylsalicylate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsccope glass coverslips</td>
			<td>Menzel-Glaser</td>
			<td>BB024060A1</td>
			<td>24x60mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope SuperFrost slides</td>
			<td>Menzel-Glaser</td>
			<td>AA00000102E</td>
			<td>76x26mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD HardSet Mounting Medium</td>
			<td>Vector laboratories</td>
			<td>H-1400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP5 II confocal microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Argon-488, 514 nm and HeNe-633 nm laser lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss 710 NLO upright confocal microscope</td>
			<td>Jena, Germany</td>
			<td></td>
			<td>equipped with femtosecond Spectra - Physics Deep See MP laser (Santa Clara, United States) using a Plan -Apochromat 20x/1.0 NA 
			water-immersion objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human dupuytren's ex vivo culture for the study of myofibroblasts and extracellular matrix interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

השיטה של vivo לשעבר, תרבות 3D של רקמת חיבור היא מערכת להגדיר קלה וחזקה כדי להבין את הקשר בין ECM ומרכיבי תא אחרים המהווים את רקמת DD וסוגים אחרים של פוטנציאל סיסטיק גם כן. יתר על כן מערכת זו מאפשרת שיטה אמינה כדי לבחון את ההשפעה של תרכובות בסוגי תאים שונים והשפעתם על עומ...

Watch this Scientific Journal Video about Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions at JoVE.com

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

מחלת Dupuytren (DD) היא מחלה fibroproliferative של כף היד. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדגימות כריתת התרבות מDD במערכת תלת-ממדי (3D) תרבות. מערכת תרבות לטווח קצר כזה מאפשרת שימור של מבנה 3D ותכונות מולקולריות של רקמת fibrotic.

אדם Dupuytren של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבות לחקר myofibroblasts והתאי מטריקס האינטראקציות

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Ex Vivo Culture of Patient Tissue &amp; Examination of Gene Delivery

Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery

אקס תרבות Vivo של רקמות החולה &amp; בחינת משלוח ג&#39;ין

This video describes the use of patient tissue as an ex vivo model for the study of gene delivery.  Fresh patient tissue obtained at the time of surgery ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

האדם תאים סרטניים נוירואנדוקריניים קווים כמו מודל תלת ממדי לחקר הטיפול האנושי גידול נוירואנדוקריניים

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

אדם<em&gt; Ex Vivo</em&gt; טרשת רובד מודל ללמוד ביולוגיה נגע

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

צעדים לעצמיים ב<em&gt; Ex vivo</emניסוי כבד וכליה&gt; perfused בשר חזירים

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

נוהל saphenous אדם הוורידים<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף וחיצוני חיזוק

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם לחקר הורמוני פעולה בשד האדם

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Strategic Endothelial Cell Tube Formation Assay: Comparing Extracellular Matrix and Growth Factor Reduced Extracellular Matrix

Assay גיבוש האנדותל תא Tube אסטרטגי: השוואת מטריקס ו- Growth Factor מופחתת מטריקס

Malignant tumors require a blood supply in order to survive and spread. These tumors obtain their needed blood from the patient's blood stream by ...