Name: evaluation of zebrafish kidney function using a fluorescent clearance assay
Uploaded: 2015-02-20T13:00:00
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Assistance technique fournie par Jaipreet Bharj. Ce travail a été financé par des subventions du FP7-UE (SYSCILIA -241 955) et le rein Fondation néerlandaise (CP11.18).

Déclaration éthique: animaux, l&#39;élevage, l&#39;entretien et les procédures sont définies et contrôlées par la Loi 1986. Tous expérimentation animale a été réalisée sous licences accordées par le ministre de l&#39;Intérieur (PIL n ° 70/7892) en conformité avec biologique Animaux (Scientific Procedures) Services de Groupe de gestion et le comité d&#39;éthique services biologique, SGUL, Londres, Royaume-Uni. Tous les efforts ont été faits pour réduire le nombre d&#39;animaux utilisés et d&#39;affi...

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	<li>Hentschel, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure+in+zebrafish:+a+novel+system+to+study+a+complex+disease.">Acute renal failure in zebrafish: a novel system to study a complex disease.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 288 (5), 923-929 (2005).</li><li>Drummond, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+zebrafish+kidney:+a+tale+of+two+tubes.">Making a zebrafish kidney: a tale of two tubes.</a> Trends Cell Biol. 13 (7), 357-365 (2003).</li><li>Ma, M., Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jagged2a-notch+signaling+mediates+cell+fate+choice+in+the+zebrafish+pronephric+duct.">Jagged2a-notch signaling mediates cell fate choice in the zebrafish pronephric duct.</a> PLoS Genet. 3 (1), e18 (2007).</li><li>Liu, Y., Pathak, N., Kramer-Zucker, A., Drummond, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+controls+the+differentiation+of+transporting+epithelia+and+multiciliated+cells+in+the+zebrafish+pronephros.">Notch signaling controls the differentiation of transporting epithelia and multiciliated cells in the zebrafish pronephros.</a> Development. 134 (6), 1111-1122 (2007).</li><li>Drummond, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+development+and+disease+in+the+zebrafish.">Kidney development and disease in the zebrafish.</a> J Am Soc Nephrol. 16 (2), 299-304 (2005).</li><li>Cardenas-Rodriguez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+CCDC28B+reveals+its+role+in+ciliogenesis+and+provides+insight+to+understand+its+modifier+effect+on+Bardet-Biedl+syndrome.">Characterization of CCDC28B reveals its role in ciliogenesis and provides insight to understand its modifier effect on Bardet-Biedl syndrome.</a> Hum Genet. 132 (1), 91-105 (2013).</li><li>Osborn, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+FTO+antagonises+Wnt+signaling+and+leads+to+developmental+defects+associated+with+ciliopathies.">Loss of FTO antagonises Wnt signaling and leads to developmental defects associated with ciliopathies.</a> PLoS One. 9 (2), e87662 (2014).</li><li>Pearson, C. G., Osborn, D. P., Giddings, T. H., Beales, P. L., Winey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basal+body+stability+and+ciliogenesis+requires+the+conserved+component+Poc1.">Basal body stability and ciliogenesis requires the conserved component Poc1.</a> J Cell Biol. 187 (6), 905-920 (2009).</li><li>Tobin, J. L., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+renal+function+in+zebrafish+models+of+ciliopathies.">Restoration of renal function in zebrafish models of ciliopathies.</a> Pediatr Nephrol. 23 (11), 2095-2099 (2008).</li><li>Torres, V. E., Harris, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autosomal+dominant+polycystic+kidney+disease:+the+last+3+years.">Autosomal dominant polycystic kidney disease: the last 3 years.</a> Kidney Int. 76 (2), 149-168 (2009).</li><li>Bogdanova, N., Markoff, A., Horst, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autosomal+dominant+polycystic+kidney+disease+-+clinical+and+genetic+aspects.">Autosomal dominant polycystic kidney disease - clinical and genetic aspects.</a> Kidney Blood Press Res. 25 (5), 265-283 (2002).</li><li>Harris, P. C., Ward, C. J., Peral, B., Hughes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystic+kidney+disease.+1:+Identification+and+analysis+of+the+primary+defect.">Polycystic kidney disease. 1: Identification and analysis of the primary defect.</a> J Am Soc Nephrol. 6 (4), 1125-1133 (1995).</li><li>Reynolds, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+splicing+in+the+PKD2+gene+as+a+cause+of+polycystic+kidney+disease.">Aberrant splicing in the PKD2 gene as a cause of polycystic kidney disease.</a> J Am Soc Nephrol. 10 (11), 2342-2351 (1999).</li><li>Pazour, G. J., San Agustin, a. j. t., Follit, J. A., Rosenbaum, J. L., Witman, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystin-2+localizes+to+kidney+cilia+and+the+ciliary+level+is+elevated+in+orpk+mice+with+polycystic+kidney+disease.">Polycystin-2 localizes to kidney cilia and the ciliary level is elevated in orpk mice with polycystic kidney disease.</a> Curr Biol. 12 (11), R378-R380 (2002).</li><li>Yoder, B. K., Hou, X., Guay-Woodford, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polycystic+kidney+disease+proteins,+polycystin-1,+polycystin-2,+polaris,+and+cystin,+are+co-localized+in+renal+cilia.">The polycystic kidney disease proteins, polycystin-1, polycystin-2, polaris, and cystin, are co-localized in renal cilia.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (10), 2508-2516 (2002).</li><li>Baker, K., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+sense+of+cilia+in+disease:+the+human+ciliopathies.">Making sense of cilia in disease: the human ciliopathies.</a> Am J Med Genet C Semin Med Genet. 151C (4), 281-295 (2009).</li><li>Veland, I. R., Awan, A., Pedersen, L. B., Yoder, B. K., Christensen, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+cilia+and+signaling+pathways+in+mammalian+development,+health+and+disease.">Primary cilia and signaling pathways in mammalian development, health and disease.</a> Nephron Physiol. 111 (3), 39-53 (2009).</li><li>Hruscha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+CRISPR/Cas9+genome+editing+with+low+off-target+effects+in+zebrafish.">Efficient CRISPR/Cas9 genome editing with low off-target effects in zebrafish.</a> Development. 140 (24), 4982-4987 (2013).</li><li>Bedell, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+genome+editing+using+a+high-efficiency+TALEN+system.">In vivo genome editing using a high-efficiency TALEN system.</a> Nature. 491 (7422), 114-118 (2012).</li><li>Eisen, J. S., Smith, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlling+morpholino+experiments:+don't+stop+making+antisense.">Controlling morpholino experiments: don't stop making antisense.</a> Development. 135 (10), 1735-1743 (2008).</li><li>Gerlach, G. F., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+organogenesis+in+the+zebrafish:+insights+into+vertebrate+nephrogenesis+and+regeneration.">Kidney organogenesis in the zebrafish: insights into vertebrate nephrogenesis and regeneration.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (5), 559-585 (2013).</li><li>Wingert, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cdx+genes+and+retinoic+acid+control+the+positioning+and+segmentation+of+the+zebrafish+pronephros.">The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros.</a> PLoS Genet. 3 (10), 1922-1938 (2007).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio Rerio). , (2000).</li><li>Forsythe, E., Beales, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bardet-Biedl+syndrome).">Bardet-Biedl syndrome).</a> Eur J Hum Genet. 21 (1), 8-13 (2013).</li><li>Corbetta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prevalence+of+simple+kidney+cysts+in+patients+with+primary+hyperparathyroidism.">High prevalence of simple kidney cysts in patients with primary hyperparathyroidism.</a> J Endocrinol Invest. 32 (8), 690-694 (2009).</li><li>Veleri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+Bardet-Biedl+syndrome+gene+BBS9/PTHB1+leads+to+cilia+defects.">Knockdown of Bardet-Biedl syndrome gene BBS9/PTHB1 leads to cilia defects.</a> PLoS One. 7 (3), e34389 (2012).</li><li>Vize, P., Woolf, A. S., Bard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Kidney: From Normal Development to Congenital Disease. , (2003).</li><li>Chang, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permselectivity+of+the+glomerular+capillary+wall+to+macromolecules.+II.+Experimental+studies+in+rats+using+neutral+dextran.">Permselectivity of the glomerular capillary wall to macromolecules. II. Experimental studies in rats using neutral dextran.</a> Biophys J. 15 (9), 887-906 (1975).</li></ol>

Poisson zèbre offre un outil précieux pour modéliser les maladies génétiques humaines, leur utilisation comme un instrument scientifique pour la recherche in vivo ont permis des études détaillées de la répartition génétique de nombreux systèmes biologiques, y compris le rein. Une grande partie est maintenant compris comment le rein poisson zèbre se développe et fonctionne. Les similitudes frappantes avec néphrogenèse humaine et d&#39;homologie avec la maladie causant des gènes 21 a m...

Le rein humain joue un rôle crucial dans le filtrage des déchets métaboliques du sang et la récupération de solutés nécessaires pour maintenir l&#39;homéostasie cellulaire. Il existe un certain nombre de maladies génétiques humaines qui provoquent un dysfonctionnement rénal. La maladie rénale héréditaire la plus fréquente est autosomique polykystose rénale dominante (PKD) caractérisé par le développement des sacs remplis de fluide dans les tubules néphrétiques; les dommages causés par la cystogénèse est préjudiciable à la fonction rénale 10. ADPKD a une occurrence de 1: 800-1: 1000 et représente 8 à 10% des patients en insuffisance rénale au stade terminal (ESRF) 11. Plusieurs gènes ont été impliqués pour provoquer ADPKD y compris polycystine-1 (PKD1) et -2 (PKD2), représentant environ 85% et 15% des cas respectivement 12,13. En outre, les produits de gènes pour PKD1 et -2 localiser le cil et sont fondamentales pour ciliogenèse 14,15. Il ya maintenant une famille reconnue de troubles génétiques humains, connus sous le nomles ciliopathies, qui affectent la fonction des cils et se traduisent par CKD 16. Le nombre croissant de maladies génétiques humaines qui affectent le développement et la fonction ciliaire suscite l&#39;intérêt mondial dans cet organite résiduelle autrefois considéré. Le cil, une saillie cellulaire ressemblant à des cheveux, est enrichi avec les récepteurs et les canaux nécessaires à la transduction des événements de signalisation cellulaire clés d&#39;ions. Le cil est constitué d&#39;une base de axoneme microtubules, typiquement structuré en neuf doublets de microtubules disposés radialement, avec ou sans une paire centrale de microtubules de singulet. La structure de axonémale définit le type et le mode d&#39;action ciliaire. L&#39;arrangement des microtubules 9 + 2 confère à la motilité du cil où il est utilisé dans le déplacement des fluides à travers les surfaces epitheliales. La configuration 9 + 0 est non mobiles, mais est considéré principalement fonction des événements de signalisation cellulaire 17. En dehors de CKD, les conséquences de la dysfonction ciliaire sont un ensemble de caractéristiquescaractéristiques de ciliopathie qui comprennent, l&#39;obésité, la dégénérescence rétinienne, une polydactylie, et la déficience cognitive 16. Cependant, CKD est parmi les plus préjudiciables à la qualité de vie du patient et donc une force motrice majeure derrière le développement de appropriée dans des modèles in vivo pour ciliaire liés CKD. Le poisson zèbre est un excellent modèle pour comprendre l&#39;étiologie de la maladie génétique humaine. Leur développement rapide, la production d&#39;un grand nombre d&#39;œufs, tissu transparent, et la croissance ex utero permet processus de développement de poisson zèbre pour être visualisées et événements biologiques manipulés avec beaucoup d&#39;aisance. Les gènes peuvent être génétiquement modifiés en utilisant le récent succès d&#39;outils d&#39;édition de génome (CRISPR 18 et 19 TALENS), renversé en utilisant la technologie antisens morpholino 20, ou pharmacologiquement réglementés par l&#39;addition de composés à leur environnement aquatique. En effet, le poisson zèbre offre une plate-forme pour entreprendre eXperiments qui ne sont pas permissives dans d&#39;autres modèles animaux. Alors que le poisson-zèbre sont des vertébrés relativement simples (par rapport à l&#39;homme), ils partagent de nombreux organes fonctionnellement conservés, des gènes et des processus de signalisation en commun avec les humains. Par exemple, le rein poisson zèbre est remarquablement similaire en structure et la fonction par rapport à l&#39;homme 21,22. Cependant, contrairement au rein de mammifère qui se développe à travers une succession de phases, chacune marquée par un rein plus développé (pronéphros, mésonéphros métanéphros), et, le poisson zèbre embryonnaire ne se développe un pronéphros, la forme la plus immature d&#39;un rein. Alors que des millions de néphrons peuvent être trouvés formant les blocs de construction de rein de mammifère, l&#39;embryon de poisson zèbre possède seulement deux. Le glomérules, qui permettent pour le filtrat sanguin initial, sont fusionnés à la ligne médiane ventrale juste à l&#39;aorte. filtres de sang dans les glomérules dans les tubules pronephrique qui se exécutent caudale long de l&#39;axe, la fusion avant la sortie via le cloaque. Le pronephrique tubules sont fortement ciliés de cils motiles qui sont permissives pour l&#39;écoulement du filtrat vers la sortie caudale 3,4. Cette structure pronephrique simples maintient l&#39;homéostasie poisson zèbre par plusieurs semaines de croissance larvaire où ils finissent par se transformer en une structure plus complexe mésonéphros 21. Cependant, le poisson zèbre ne se développe jamais un métanéphros 21. Malgré les particularités de poisson zèbre, le néphron poisson zèbre est segmenté avec des profils d&#39;expression génique égal à celui observé chez les mammifères et offre ainsi un incomparable modèle in vivo pour néphrogenèse 3,22. Régulièrement patients sont testés pour la fonction rénale par une série de tests sanguins et urinaires. Typiquement, le sang est analysé pour les sels dissous, l&#39;urée et la créatinine. Des niveaux élevés de l&#39;urée, la créatinine et les concentrations de sel anormales sont révélateurs de problèmes avec la fonction rénale. L&#39;analyse d&#39;urine en utilisant une jauge colorimétrique détecte des niveaux anormaux de protéines, blood, du pus, de bactéries et de sucre présente dans les échantillons d&#39;urine. Ces essais nécessitent normalement environ 30 ml d&#39;urine ou de 5 à 10 ml de sang. Il a été difficile de traduire ces types d&#39;essais à petite dans des organismes modèles in vivo, tels que le poisson-zèbre, principalement en raison de la nature impossible de collecter le sang ou l&#39;urine suffisante pour réaliser le dosage. Ici, nous abordons l&#39;absence de tests de la fonction rénale poisson zèbre appropriées et décrivons une technique innovante pour son étude. En injectant un colorant fluorescent dans le sang nous sommes en mesure de suivre et de quantifier individuellement dans le temps de la filtration et de l&#39;excrétion de l&#39;activité de fluorescence à partir du sang par les reins. Cette méthode peut être utilisée pour étudier des dommages aux reins causée par la maladie, ce qui nous fournissons un exemple de.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="708">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:136px;">Company</td>
			<td style="width:136px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">P-97 SUTTER Flaming/Brown type micropipette puller</td>
			<td style="width:136px;">Intracel</td>
			<td style="width:136px;">P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">borosilicate standard wall capillaries</td>
			<td style="width:136px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:136px;">30-0017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Glass microscope slides</td>
			<td style="width:136px;">VWR International</td>
			<td>631-0109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Epoxy Resin Glue</td>
			<td style="width:136px;">Evo-Stik</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:269px;">Rhodamine B 10,000 MW labeled Dextran</td>
			<td>Life technologies&#160;</td>
			<td>D-1824</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-Phenylthiourea&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">methylcellulose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">air compressor&#160;</td>
			<td>Jun-Air</td>
			<td>OF302-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Picospritzer III&#160;</td>
			<td>Parker Instruments&#160;</td>
			<td>051-0500-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">compact 3-axis control micromanipulator&#160;</td>
			<td>Marzhauser</td>
			<td>MM33&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">Dissecting stereo microscope</td>
			<td style="width:136px;">Nikon</td>
			<td>SMZ1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:269px;">microloader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td align="right">5242956003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont #5 forceps&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">stage micrometer&#160;</td>
			<td>Pyser- SGI</td>
			<td>02A00404</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of zebrafish kidney function using a fluorescent clearance assay

L&#39;embryon de poisson zèbre offre un modèle souple pour étudier l&#39;organogenèse et modéliser les maladies génétiques humaines. Malgré sa simplicité relative, le rein et le poisson zèbre développe fonctions dans presque la même manière que les humains. Une différence importante dans la construction du rein humain est la présence de millions de néphrons par rapport au poisson-zèbre ne possède que deux. Cependant, la simplification d&#39;un système aussi complexe en unités fonctionnelles de base a aidé notre compréhension de la façon dont le rein développe et exploite. Chez le poisson zèbre, la ligne médiane située glomérule est responsable de la filtration du sang initial en deux tubules pronephrique qui divergent afin de fonctionner bilatéralement long de l&#39;axe embryonnaire avant de fusionner les uns aux autres au cloaque. Les tubules pronephrique sont fortement peuplées par des cils mobiles qui facilitent le mouvement de filtrat le long du tubule segmenté, permettant l&#39;échange de différents solutés avant de finalement sortir via le cloaque 2-4. De nombreux gènes responsables de la maladie rénale chronique, incLUDING ceux liés à ciliogenèse, ont été étudiés chez le poisson zèbre 5. Cependant, une attraction majeure de retour a été la difficulté d&#39;évaluer la fonction rénale poisson zèbre après manipulation génétique. Essais traditionnels pour mesurer le dysfonctionnement du rein chez l&#39;homme ont prouvé non translationnelle poisson zèbre, principalement en raison de leur environnement aquatique et de petite taille. Par exemple, il ne est pas physiquement possible d&#39;extraire le sang de l&#39;embryon organisé poissons pour l&#39;analyse de l&#39;urée et de la créatinine contenu, car ils sont trop petits. En outre, le poisson zèbre ne produisent pas suffisamment d&#39;urine pour tester sur une simple protéinurie &#39;jauge&#39;, qui est souvent effectuée lors des examens initiaux des patients. Nous décrivons un dosage par fluorescence qui utilise la transparence optique du poisson zèbre pour contrôler quantitativement le dégagement d&#39;un colorant fluorescent, au fil du temps, du système vasculaire et en sortie par le rein, pour donner une lecture de la fonction rénale 1,6-9.

Syndrome de Bardet-Biedl (BBS) est une ciliopathie hétérogène rare qui affecte environ 1: 160 000 personnes dans le monde 16. Les patients présentent un certain nombre de problèmes liés notamment reins polykystiques, suite patients ont souvent besoin de dialyse rénale ou une transplantation 24. ESRF est la cause la plus fréquente de décès chez BBS, avec environ 30% des patients CKD en développement 16. Actuellement, 20 gènes non liés ont été impliqués dans BBS sans associ...

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Evaluation of Zebrafish Kidney Function Using a Fluorescent Clearance Assay

Le poisson zèbre est un outil populaire pour modéliser la maladie rénale chronique (CKD). Cependant, leur petite taille, il est impossible d&#39;évaluer la fonction rénale en utilisant des méthodes traditionnelles. Nous décrivons une fluorescente reins de colorant jeu dosage qui permet une analyse quantitative de la fonction rénale dans le poisson zèbre CKD.

Évaluation de poisson zèbre fonction rénale utilisant une habilitation immunofluorescence

The zebrafish embryo offers a tractable model to study organogenesis and model human genetic disease. Despite its relative simplicity, the zebrafish ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

La transplantation de moelle rein entier chez le poisson zèbre pour adultes

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Recherche

Biologie

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

Microinjection d&#39;embryons de poissons zèbres pour analyser la fonction génique

One of the advantages of studying zebrafish is the ease and speed of manipulating protein levels in the embryo.  Morpholinos, which are synthetic ...

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish entier Mont haute résolution double fluorescent In Situ Hybridation

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish

En utilisant la réponse optocinétique pour étudier la fonction visuelle du poisson zèbre

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the ...

Intravenous Microinjections of Zebrafish Larvae to Study Acute Kidney Injury

Microinjections intraveineuse de larves de poisson zèbre pour étudier lésions rénales aiguës

In this video article we describe a zebrafish model of AKI using gentamicin as the nephrotoxicant.  The technique consists of intravenous microinjections ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

La transplantation de cellules directement dans le rein de poisson zèbre adulte

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

Evaluation de développement des glandes mammaires et fonction dans des modèles murins

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissection du rein Zebrafish adultes

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

A Fluorescent Screening Assay for Identifying Modulators of GIRK Channels

Un test de dépistage fluorescent pour identifier des modulateurs de canaux Girk

G protein-gated inward rectifier K+ (GIRK) channels function as cellular mediators of a wide range of hormones and neurotransmitters and are expressed in ...

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

Analyse de néphron Composition et fonction du rein poisson zèbre adulte

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...