Name: normal and malignant muscle cell transplantation into immune compromised adult zebrafish
Uploaded: 2014-12-26T15:00:00
Duration: 9 min 39 s
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इस काम फाउंडेशन (DML), अमेरिकन कैंसर सोसायटी (DML), MGH हावर्ड गुडमैन फैलोशिप (DML), और अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान अनुदान स्टैंड एलेक्स नींबू पानी के द्वारा समर्थित है R24OD016761 और 1R01CA154923 (DML)। CNY फ्लो कोर और फ्लो छवि विश्लेषण, साझा इंस्ट्रूमेंटेशन अनुदान संख्या 1S10RR023440-01A1। आईएमटी विज्ञान और प्रौद्योगिकी के लिए पुर्तगाली फाउंडेशन (- एफसीटी Fundação पैरा एक Ciencia ई Tecnologia) से एक फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है। क्यूटी चीन छात्रवृत्ति परिषद द्वारा वित्त पोषित है। हम उसे उपयोगी टिप्पणी और सलाह के लिए एंजेला Volorio धन्यवाद।

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	<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration.">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in genetics TIG. 29 (11), (2013).</li><li>Boatman, S., Barrett, F., Satishchandran, S., Jing, L., Shestopalov, I., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assaying+hematopoiesis+using+zebrafish.">Assaying hematopoiesis using zebrafish.</a> Blood cells, molecule., &amp; diseases. 51 (4), 271-276 (2013).</li><li>Langenau, D. M., Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myc-induced+T+cell+leukemia+in+transgenic+zebrafish.">Myc-induced T cell leukemia in transgenic zebrafish.</a> Science. 299 (5608), 887-890 (2003).</li><li>Yang, H. W., Kutok, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Expression+of+Human+MYCN+Selectively+Causes+Pancreatic+Neuroendocrine+Tumors+in+Transgenic+Zebrafish+Targeted+Expression+of+Human+MYCN+Selectively+Causes+Pancreatic+Neuroendocrine+Tumors+in+Transgenic+Zebrafish.">Targeted Expression of Human MYCN Selectively Causes Pancreatic Neuroendocrine Tumors in Transgenic Zebrafish Targeted Expression of Human MYCN Selectively Causes Pancreatic Neuroendocrine Tumors in Transgenic Zebrafish.</a> Cancer Research. , 7256-7262 (2004).</li><li>Patton, E. E., Widlund, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+mutations+are+sufficient+to+promote+nevi+formation+and+cooperate+with+p53+in+the+genesis+of+melanoma.">BRAF mutations are sufficient to promote nevi formation and cooperate with p53 in the genesis of melanoma.</a> Current Biology. 15 (3), 249-254 (2005).</li><li>Sabaawy, H. E., Azuma, M., Embree, L. J., Tsai, H. -. J., Starost, M. F., Hickstein, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TEL-AML1+transgenic+zebrafish+model+of+precursor+B+cell+acute+lymphoblastic+leukemia.">TEL-AML1 transgenic zebrafish model of precursor B cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (41), 15166-15171 (2006).</li><li>Langenau, D. M., Keefe, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Effects of RAS on the genesis of embryonal rhabdomyosarcoma. Gene. 21 (11), 1382-1395 (2007).</li><li>Le, X., Langenau, D. M., Keefe, M. D., Kutok, J. L., Neuberg, D. S., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock-inducible+Cre/Lox+approaches+to+induce+diverse+types+of+tumors+and+hyperplasia+in+transgenic+zebrafish.">Heat shock-inducible Cre/Lox approaches to induce diverse types of tumors and hyperplasia in transgenic zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (22), 9410-9415 (2007).</li><li>Park, S. W., Davison, J. M., Rhee, J., Hruban, R. H., Maitra, A., Leach, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+KRAS+induces+progenitor+cell+expansion+and+malignant+transformation+in+zebrafish+exocrine+pancreas.">Oncogenic KRAS induces progenitor cell expansion and malignant transformation in zebrafish exocrine pancreas.</a> Gastroenterology. 134 (7), 2080-2090 (2008).</li><li>Zhuravleva, J., Paggetti, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MOZ/TIF2-induced+acute+myeloid+leukaemia+in+transgenic+fish.">MOZ/TIF2-induced acute myeloid leukaemia in transgenic fish.</a> British journal of haematology. 143 (3), 378-382 (2008).</li><li>Ignatius, M. S., Chen, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tumor-propagating+cells,+regional+tumor+heterogeneity,+and+dynamic+cell+movements+in+embryonal+rhabdomyosarcoma.+Suppl+Data.">In vivo imaging of tumor-propagating cells, regional tumor heterogeneity, and dynamic cell movements in embryonal rhabdomyosarcoma. Suppl Data.</a> Cancer cell. 21 (5), 680-693 (2012).</li><li>Blackburn, J. S., Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+Evolution+Enhances+Leukemia-Propagating+Cell+Frequency.">Clonal Evolution Enhances Leukemia-Propagating Cell Frequency.</a> Cancer cell. 25 (3), 366-378 (2014).</li><li>Blackburn, J. S., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+to+assess+cancer+heterogeneity,+progression+and+relapse.">Zebrafish as a model to assess cancer heterogeneity, progression and relapse.</a> Disease model. 7 (7), 755-762 (2014).</li><li>Zhao, C., Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+xenograft+model+in+zebrafish+for+high-resolution+investigating+dynamics+of+neovascularization+in+tumors.">A novel xenograft model in zebrafish for high-resolution investigating dynamics of neovascularization in tumors.</a> PloS one. 6 (7), e21768 (2011).</li><li>Chen, E. Y., DeRan, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycogen+synthase+kinase+3+inhibitors+induce+the+canonical+WNT/&#946;-catenin+pathway+to+suppress+growth+and+self-renewal+in+embryonal+rhabdomyosarcoma.">Glycogen synthase kinase 3 inhibitors induce the canonical WNT/&#946;-catenin pathway to suppress growth and self-renewal in embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (14), 5349-5354 (2014).</li><li>Yang, X. -. J., Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+zebrafish+xenotransplantation+model+for+study+of+glioma+stem+cell+invasion.">A novel zebrafish xenotransplantation model for study of glioma stem cell invasion.</a> PloS one. 8 (4), e61801 (2013).</li><li>Chapman, A., Fernandez del Ama, L., Ferguson, J., Kamarashev, J., Wellbrock, C., Hurlstone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+Tumor+Subpopulations+Cooperate+to+Drive+Invasion.">Heterogeneous Tumor Subpopulations Cooperate to Drive Invasion.</a> Cell Reports. 8 (8), 1-8 (2014).</li><li>Smith, A. C. H., Raimondi, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+cell+transplantation+establishes+that+tumor-initiating+cells+are+abundant+in+zebrafish+T-cell+acute+lymphoblastic+leukemia.">High-throughput cell transplantation establishes that tumor-initiating cells are abundant in zebrafish T-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 115 (16), 3296-3303 (2010).</li><li>Iyengar, S., Houvras, Y., Ceol, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+melanoma+modifiers+using+a+zebrafish+autochthonous+tumor+model.">Screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (69), e50086 (2012).</li><li>Mizgireuv, I., Revskoy, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantable+tumor+lines+generated+in+clonal+zebrafish.">Transplantable tumor lines generated in clonal zebrafish.</a> Cancer research. 66 (6), 3120-3125 (2006).</li><li>Streisinger, G., Walker, C., Dower, N., Knauber, D., Singer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+clones+of+homozygous+diploid+zebra+fish+(Brachydanio+rerio).">Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio).</a> Nature. 291, 293-296 (1981).</li><li>Blackburn, J. S., Liu, S., Langenau, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+the+frequency+of+tumor-propagating+cells+using+limiting+dilution+cell+transplantation+in+syngeneic+zebrafish.">Quantifying the frequency of tumor-propagating cells using limiting dilution cell transplantation in syngeneic zebrafish.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (53), e2790 (2011).</li><li>Tang, Q., Abdelfattah, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+cell+transplantation+using+adult+rag2+mutant+zebrafish.">Optimized cell transplantation using adult rag2 mutant zebrafish.</a> Nature methods. 11, 821-824 (2014).</li><li>Zhou, Q., Facciponte, J., Jin, M., Shen, Q., Lin, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+NOD-SCID+IL2rg&#8211;/&#8211;+mice+as+a+preclinical+model+for+cancer+research+and+its+potential+use+for+individualized+cancer+therapies.">Humanized NOD-SCID IL2rg&#8211;/&#8211; mice as a preclinical model for cancer research and its potential use for individualized cancer therapies.</a> Cancer letters. 344 (1), 13-19 (2014).</li><li>Higashijima, S., Okamoto, H., Ueno, N., Hotta, Y., Eguchi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+generation+of+transgenic+zebrafish+which+reliably+express+GFP+in+whole+muscles+or+the+whole+body+by+using+promoters+of+zebrafish+origin.">High-frequency generation of transgenic zebrafish which reliably express GFP in whole muscles or the whole body by using promoters of zebrafish origin.</a> Developmental biology. 192 (2), 289-299 (1997).</li><li>Langenau, D. M., Keefe, M. D. D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-injection+strategies+to+modify+radiation+sensitivity+and+tumor+initiation+in+transgenic+Zebrafish.">Co-injection strategies to modify radiation sensitivity and tumor initiation in transgenic Zebrafish.</a> Oncogene. 27 (30), 4242-4248 (2008).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J Vis Exp. (25), 1-5 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Alexander, M. S., Kawahara, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+transcriptome+analysis+of+adult+zebrafish+cells+enriched+for+skeletal+muscle+progenitors).">Isolation and transcriptome analysis of adult zebrafish cells enriched for skeletal muscle progenitors).</a> Muscl, &amp; nerve. 43 (5), 741-750 (2011).</li><li>Motohashi, N., Asakura, Y., Asakura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+transplantation+of+muscle+satellite+cells.">Isolation, culture, and transplantation of muscle satellite cells.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (86), 1-7 (2014).</li><li>Gerli, M. F. M., Maffioletti, S. M., Millet, Q., Tedesco, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+mesoangioblast-like+myogenic+progenitors+in+mouse+models+of+muscle+regeneration.">Transplantation of induced pluripotent stem cell-derived mesoangioblast-like myogenic progenitors in mouse models of muscle regeneration.</a> J Vis Exp. (83), e50532 (2014).</li><li>Siegel, A. L., Gurevich, D. B., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myogenic+precursor+cell+that+could+contribute+to+regeneration+in+zebrafish+and+its+similarity+to+the+satellite+cell.">A myogenic precursor cell that could contribute to regeneration in zebrafish and its similarity to the satellite cell.</a> The FEBS journal. 280 (17), 4074-4088 (2013).</li><li>Rowlerson, a., Radaelli, G., Mascarello, F., Veggetti, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+skeletal+muscle+in+two+teleost+fish:+Sparus+aurata+and+Brachydanio+rerio.">Regeneration of skeletal muscle in two teleost fish: Sparus aurata and Brachydanio rerio.</a> Cell Tissue Res. 289 (2), 311-322 (1997).</li><li>White, R. M., Sessa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell stem cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

वयस्क पृष्ठीय कंकाल की मांसपेशी के कुशल और मजबूत engraftment rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली के पृष्ठीय मांसलता में कोशिकाओं के इंजेक्शन द्वारा पीछा एक बहुत ही साधारण सेल तैयारी विधि के साथ प्राप्त किया गया था। कुछ जुड़े मौत तुरंत 10% से 35% प्रयोग के आधार पर करने के लिए लेकर आरोपण प्रक्रिया के बाद से सामान्य में, इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन प्रक्रियाओं, बहुत मजबूत थे। अतिरिक्त अनुकूलन की संभावना कोशिकाओं दाखिल की आसानी सुविधा होगी जो इंजेक्शन और एक माइक्रोस्कोप और micromanipulator का उपयोग स्थिर इंजेक्शन तंत्र के विकास के लिए छोटे गेज सुई, के उपयोग पर केंद्र होगा। हमारा दृष्टिकोण भी दाता जानवरों से unsorted मांसपेशियों की कोशिकाओं का इस्तेमाल किया और केवल लगभग 30% की मांसपेशी पूर्वज कोशिकाओं निहित। संभावना प्राप्तकर्ता मछली में वृद्धि हुई engraftment के लिए नेतृत्व कि समृद्ध सेल निलंबन प्रदान करेगा स्टेम कोशिकाओं और FACS अलगाव लेबल कि ट्रांसजेनिक संवाददाता लाइनों का प्रयोग करें। कंकाल की मांसपेशी गपहले से 29 के रूप में वर्णित एल भी, समृद्ध और प्रत्यारोपण के लिए सुसंस्कृत पूर्व किया जा सकता है। उल्लेखनीय है, हमारे परिणाम भी 10 दिनों पेशी engraftment और उत्थान का आकलन करने के लिए एक मजबूत और तेजी से प्रयोगात्मक मंच के रूप में इस मॉडल की स्थापना, प्रत्यारोपण पोस्ट करने से पहले आला स्थापना और दाता मांसपेशियों के ऊतकों के भेदभाव के इस कदम होती है कि संकेत मिलता है। इसके अलावा, इन प्रयोगों के परस्पर विरोधी cardiotoxin या बेरियम क्लोराइड के साथ पेशी के पूर्व चोट 30,31 engraftment करने से पहले दो दिनों के लिए आवश्यक है, जहां चूहों, में पूरा उन के साथ इसके विपरीत। यह प्रत्यारोपण प्रक्रिया के दौरान उत्पादन सुई चोट प्राप्तकर्ता पशु 32,33 के भीतर एक पुनर्योजी पर्यावरण के उत्पादन प्रेरक द्वारा engraftment potentiates कि संभावना है। हम भी जल्दी कंकाल की मांसपेशी विकास को प्रभावित करने वाले आनुवंशिक परिवर्तन के आकलन के लिए अनुमति देता है, हमारे विधि आसानी से युवा zebrafish से कंकाल की मांसपेशियों के ऊतकों के प्रत्यारोपण के लिए अनुकूलित किया जाएगा कि कल्पनालेकिन लार्वा चरणों में मारक पैदा होती हैं। हम भी गैर-वातानुकूलित, rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली में intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा zebrafish erms के engraftment के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान की है। यह दृष्टिकोण एक syngeneic ट्रांसजेनिक लाइन के भीतर ट्यूमर पैदा करने के लिए आवश्यकता के बिना डबल ट्रांसजेनिक प्राथमिक ट्यूमर के विस्तार के लिए उपयोगी था। हमारे हाल ही में काम कोशिका प्रत्यारोपण दृष्टिकोण एक ही ट्यूमर जानवरों के हजारों में विस्तार और विकास, आत्म नवीकरण, और neovascularization 15 पर प्रभाव के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है, जहां इन विवो में erms दवा संवेदनशीलता का आकलन करने के उपन्यास प्रयोगात्मक मॉडल उपलब्ध कराते दिखाया है। इसके अलावा, हम सफलतापूर्वक टी सेल तीव्र लिम्फोब्लासटिक ल्यूकेमिया, मेलेनोमा, और erms 23 सहित rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली में ट्यूमर की एक विस्तृत श्रृंखला engrafted है। भविष्य की ओर देख रहे हैं, हम इन पंक्तियों में कैंसर के महत्वपूर्ण कार्यात्मक संपत्तियों का आकलन करने के लिए उपयोगी हो जाएगा कल्पनाइंट्रा-tumoral विविधता, आक्रमण, मेटास्टेसिस, एंजियोजिनेसिस, और चिकित्सा प्रतिरोध का आकलन करने सहित vivo। इसके अलावा, ऑप्टिकली स्पष्ट कैस्पर तनाव zebrafish 34 में rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली की पीढ़ी की संभावना कैंसर के इन पहचान के कई के प्रत्यक्ष इमेजिंग सुविधा होगी। कुल में, हम में वयस्क rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती प्रतिरक्षा समझौता किया zebrafish करने के लिए सामान्य से लेबल-fluorescently और घातक कंकाल की मांसपेशी के सफल engraftment के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।

वे amputated पंख, साथ ही एक क्षतिग्रस्त मस्तिष्क, रेटिना, रीढ़ की हड्डी, हृदय, कंकाल की मांसपेशी और अन्य ऊतकों एक पुनर्जीवित कर सकते हैं क्योंकि zebrafish पुनर्योजी के अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल हैं। कोशिका प्रत्यारोपण द्वारा विभिन्न ऊतकों से स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की पहचान केवल हाल ही में दो पता लगाया गया है, जबकि वयस्क zebrafish में सेल और पुनर्योजी पढ़ाई काफी हद तक चोट के जवाब में उत्थान के लक्षण वर्णन पर ध्यान केंद्रित किया है स्टेम। - 10 zebrafish भी मानव रोग 3 नकल कि ट्रांसजेनिक कैंसर मॉडल की पीढ़ी के माध्यम से कैंसर के अध्ययन के लिए तेजी से आदी हो गए हैं। कैंसर की सेटिंग में, कोशिका प्रत्यारोपण दृष्टिकोण व्यापक रूप से अपनाया और आत्म नवीकरण 11, कार्यात्मक विविधता 12,13, neovascularization 14, प्रसार सहित महत्वपूर्ण कैंसर प्रक्रियाओं के गतिशील मूल्यांकन की अनुमति हो गए हैं,चिकित्सा प्रतिक्रियाओं 15, और आक्रमण 16,17। हालांकि, engrafted कोशिकाओं अक्सर हमला करते हैं और भ्रष्टाचार के 18 को मारने कि प्रतिरक्षा सुरक्षा की मेजबानी की वजह से प्राप्तकर्ता मछली से खारिज कर रहे हैं। कई तरीकों engrafted कोशिकाओं की अस्वीकृति से उबरने के लिए इस्तेमाल किया गया है। उदाहरण के लिए, प्राप्तकर्ता जानवरों प्रतिरक्षा प्रणाली क्षणिक पहले प्रत्यारोपण 18,19 करने के लिए कम खुराक गामा विकिरण द्वारा ablated जा सकता है। हालांकि, प्राप्तकर्ता प्रतिरक्षा प्रणाली को 20 दिन से बाद के विकिरण की वसूली और दाता कोशिकाओं 18 को मार देंगे। वैकल्पिक रूप से, dexamethasone उपचार अब प्रतिरक्षा दमनकारी कंडीशनिंग प्रदान करने और अप करने के लिए 30 दिनों के लिए 14 मानव ट्यूमर की एक विस्तृत श्रृंखला के engraftment को सुविधाजनक बनाने, टी और बी सेल समारोह को दबाने के लिए इस्तेमाल किया गया है। इन प्रयोगों निरंतर दवा खुराक की आवश्यकता होती है और ठोस ट्यूमर का अध्ययन करने के लिए सीमित कर रहे हैं। 22, जहां दाता और recipi - लंबी अवधि के engraftment assays के आनुवंशिक रूप से समान syngeneic लाइनों 20 का इस्तेमाल किया हैईएनटी कोशिकाओं का मिलान नहीं हुआ प्रतिरक्षा हैं। हालांकि, इन मॉडलों के हित के ट्रांसजेनिक लाइनें पूरी तरह syngeneic लाइनों का निर्माण करने के लिए और अधिक से अधिक चार पीढ़ियों के लिए syngeneic पृष्ठभूमि में पार किए जाने की आवश्यकता है। प्राप्तकर्ता मछली में प्रतिरक्षा अस्वीकृति के मुद्दों का निराकरण करने के लिए, हमारे समूह ने हाल ही में एक प्रतिरक्षा टी और बी सेल समारोह को कम कर दिया है कि और ऊतकों 23 की एक विस्तृत श्रृंखला के engraftment की अनुमति जो समझौता किया rag2 E450fs समयुग्मक उत्परिवर्ती (ZFIN एलील पदनाम rag2 fb101) लाइन विकसित की है। इसी प्रकार प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ माउस मॉडल माउस और मानव ऊतकों 24 की कोशिका प्रत्यारोपण के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है। यहाँ, हम कंकाल की मांसपेशी और भ्रूणीय rhabdomyosarcoma (erms), नव वर्णित rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish में, कंकाल की मांसपेशी के साथ सुविधाओं है कि शेयर एक बाल चिकित्सा सार्कोमा के प्रत्यारोपण के लिए तरीके प्रस्तुत करते हैं। एक प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ की वयस्क zebrafish की उपलब्धतासीधे कल्पना और सामान्य और घातक ऊतकों के भीतर स्टेम सेल आत्म नवीकरण का आकलन करने के लिए बड़े पैमाने पर सेल प्रत्यारोपण पढ़ाई प्रदर्शन करने की हमारी क्षमता बढ़ती है। इस विधि के साथ, fluorescently 25 ट्रांसजेनिक zebrafish विवेकशीलतापूर्वक rag2 में टीका लगाना α-actin-आरएफपी वयस्क से पेशी सेल की तैयारी में लेबल पृष्ठीय मांसलता में इंजेक्शन के बाद समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish। इसके अलावा, हम engraftment और प्राथमिक myf5 -GFP के विस्तार का प्रदर्शन, rag2 E450fs समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish में intraperitoneal इंजेक्शन निम्नलिखित mylpfa- mCherry ट्रांसजेनिक erms। इन प्रोटोकॉल की उपयोगिता दिखाया उदाहरणों से परे चला जाता है और आसानी से अतिरिक्त zebrafish पुनर्योजी ऊतकों और कैंसर के लिए लागू किया जा सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1077">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-EDTA buffer solution 1x</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93283-100ML</td>
			<td>microinjection. Injection mix.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Science Education</td>
			<td>S77375-1</td>
			<td>microinjection. Injection mix.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XhoI Restriction Enzyme</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0146S</td>
			<td>microinjection. Plasmid linearization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28104 (50) or 28106 (250)</td>
			<td>Microinjection. For purification of linearized plasmid up to 10 kb.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1753I-100</td>
			<td>Microinjection. For purification of linearized plasmid.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Agarose, 500 g</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16500-500</td>
			<td>microinjection. Linearized plasmid quantification.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop 2000 Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>http://www.nanodrop.com/Productnd2000overview.aspx</td>
			<td>microinjection. Linearized plasmid quantification.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI(4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D1306</td>
			<td>flow cytometry/FACS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml polystyrene round bottom tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td>flow cytometry collection tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria II</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Special Order Research Products (SORP) program</td>
			<td>FACS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml polypropylene round bottom tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352063</td>
			<td>FACS collection tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR II</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Special Order Research Products (SORP) program</td>
			<td>flow cytometry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Omega Scientific</td>
			<td>FB-01</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulphonate (MS-222)</td>
			<td>Western Chemical Inc.</td>
			<td>http://www.wchemical.com/tricaine-s-ms-222.html</td>
			<td>Transportation. Anesthetic. Caution: Irritant. Irritating to eyes, respiratory system, and skin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Absorbent Bench Underpads</td>
			<td>VWR</td>
			<td>56616-018</td>
			<td>Transportation. Regular paper towels or sponge can be used as an alternative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Singe Edge Industrial Razor Blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish, Polystryrene Disposable Sterile</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-302</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer, 40 &#181;m Nylon</td>
			<td>Falcon-Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430828</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer Set&#160;</td>
			<td>Hausser Scientific</td>
			<td>1483</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe, fixed needle, volume 10 &#181;L, needle size 26s ga (bevel tip)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80366</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Austin&#39;s A-1 Bleach, Commercial</td>
			<td>James Austin Company</td>
			<td></td>
			<td>Transportation. Any commercial&#160; solution can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 190 Proof</td>
			<td>Decon Labs, Inc.</td>
			<td>DSP-MD.43</td>
			<td>Microinjection (linearized plasmid purification) and Transportation. Any commercial&#160; solution can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Speed Microcentrifuge, 300D Digital Microcentrifuge</td>
			<td>Denville Scientific Inc.</td>
			<td>C0265-24</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend XFR Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004539&#160;</td>
			<td>Transportation. Catalog number for 120V, 60Hz (US)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml serological pipets</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>357529</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Stripettor Plus Pipetting Controller</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>4090</td>
			<td>Transportation. Any automatic pipetting controller can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powder free examination gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>All steps. Any commercial brand can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter pipet tips and micropipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>All steps. Any commercial brand can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11205-20</td>
			<td>Transportation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>MVX10</td>
			<td>Scoring. Any appropriate fluorescent stereomicroscope can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus DP72 microscope digital camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>DP72</td>
			<td>Scoring. Multiple adequate cameras for the selected imaging system can be used.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normal and malignant muscle cell transplantation into immune compromised adult zebrafish

Zebrafish विकास, उत्थान, और कैंसर का आकलन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बन गए हैं। हाल ही में, allograft कोशिका प्रत्यारोपण प्रोटोकॉल किरणित, syngeneic, और प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ की वयस्क zebrafish में सामान्य और घातक कोशिकाओं की है कि परमिट engraftment विकसित किया गया है। अनुकूलित कोशिका प्रत्यारोपण प्रोटोकॉल के साथ युग्मित जब इन मॉडलों को स्टेम सेल समारोह, उत्थान निम्नलिखित चोट, और कैंसर के तेजी से मूल्यांकन के लिए अनुमति देते हैं। यहाँ, हम प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ की वयस्क rag2 E450fs समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish में zebrafish वयस्क कंकाल की मांसपेशी और भ्रूणीय rhabdomyosarcoma (erms), भ्रूण मांसपेशियों के साथ सुविधाओं है कि शेयर एक बाल चिकित्सा सार्कोमा, की कोशिका प्रत्यारोपण के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं। महत्वपूर्ण बात है, इन जानवरों टी कोशिकाओं की कमी है और असंबंधित दाता जानवरों से ऊतकों की एक विस्तृत श्रृंखला के engraftment को सुविधाजनक बनाने, बी सेल समारोह को कम कर दिया। हमारे अनुकूलित प्रोटोकॉल कि fluorescently पेशी सेल prepar लेबल वाले शोrag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली के पृष्ठीय मांसलता में प्रत्यारोपित जब α-actin-आरएफपी ट्रांसजेनिक zebrafish से ations मजबूती के साथ टीका लगाना। हम यह भी प्रतिदीप्ति भेदभाव की स्थिति के आधार पर कोशिकाओं तक ही सीमित है जहां फ्लोरोसेंट ट्रांसजेनिक erms के engraftment प्रदर्शित करता है। विशेष रूप से, erms अटल बिहारी तनाव myf5-GFP में बनाया गया था; mylpfa-mCherry डबल ट्रांसजेनिक जानवरों और ट्यूमर वयस्क प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ की मछली की पेरिटोनियम में इंजेक्ट किया। इन प्रोटोकॉल की उपयोगिता पृष्ठीय मांसलता या वयस्क zebrafish के पेरिटोनियम में प्रत्यारोपित किया जा सकता है कि सामान्य और घातक दाता कोशिकाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के engraftment तक फैली हुई है।

प्रतिरक्षा में तैयारी और α-actin-आरएफपी ट्रांसजेनिक दाताओं से कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं रोपाई के लिए एक प्रक्रिया समयुग्मक rag2 उत्परिवर्ती zebrafish से समझौता (प्रोटोकॉल धारा 1, चित्रा 1 ए और चित्रा 2) का प्रदर्शन किया गया है। कंकाल की मांसपेशियों के ऊतकों α-actin-आरएफपी ट्रांसजेनिक दाताओं से तैयार किया गया था और फ्लो विश्लेषण (चित्रा 2B) निम्नलिखित DAPI के बहिष्कार द्वारा मूल्यांकन के रूप में उत्पन्न होने वाली एकल कोशिका निलंबन 84.3% व्यवहार्य कोशिकाओं निहित। आरएफपी पॉजिटिव कोशिकाओं इस एकल कक्ष निलंबन (चित्रा -2) की 35.3% शामिल थे। (मछली प्रति इंजेक्शन के 1 एक्स 10 6 कोशिकाओं, 1 टेबल, चित्रा 2 डी-आई) multinucleated तंतुओं में एकल कक्षों का भेदभाव द्वारा मूल्यांकन के रूप में rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती प्राप्तकर्ता मछली के पृष्ठीय कंकाल की मांसपेशी में कोशिकाओं के प्रत्यारोपण सुसंगत और मजबूत engraftment के लिए नेतृत्व किया। वन्य प्रकारप्राप्तकर्ता मछली 30 दिन प्रयोग (एन = 13) के ऊपर मांसपेशी फाइबर टीका लगाना करने में विफल रहा। 10 दिनों के बाद प्रत्यारोपण करके, 14 rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish के बाहर 9 इंजेक्शन (64.3%, चित्रा 2 ई, एफ) के स्थल के निकट आरएफपी पॉजिटिव मांसपेशी फाइबर होता है। महत्वपूर्ण बात है, engrafted आरएफपी पॉजिटिव पेशी के बाद engraftment और प्रदर्शन मजबूत और लगातार पेशी engraftment (नहीं दिखाया डेटा) 115 दिनों के लिए पीछा किया जा रहा जानवरों की एक सबसेट के साथ, बाद प्रत्यारोपण 30 दिनों (चित्रा 2 जी-आई) के लिए बनाए। इन परिणामों के एक ही प्रोटोकॉल (तालिका 1) का उपयोग हमारे समूह में 23 से पहले की रिपोर्ट उन लोगों के लिए समान हैं। हम यह भी rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती प्राप्तकर्ता मछली (प्रोटोकॉल धारा 2, चित्रा 1 बी और चित्रा 3) के पेरिटोनियल गुहा में erms ट्यूमर कोशिकाओं के उत्पादन, तैयारी और प्रत्यारोपण के लिए एक विधि प्रस्तुत किया है। Erms doubl में उत्पन्न किया गयाई ट्रांसजेनिक myf5-GFP; mylpfa-mCherry मछली अंतर tumoral विविधता और प्रत्यारोपण के 11 निम्नलिखित ट्यूमर सेल उप-जनसंख्या का कार्य विश्लेषण के दृश्य की अनुमति देने के लिए दिखाया गया है कि। वे 10 से 30 जीवन के दिनों और ट्यूमर कोशिकाओं की संख्या बहाव के अनुप्रयोगों के लिए सीमित कर रहे हैं के बीच erms विकसित जब मछली छोटे हैं क्योंकि हालांकि, प्रत्येक उप-जनसंख्या के आगे आणविक लक्षण वर्णन मुश्किल है। एक समाधान वयस्क प्राप्तकर्ता zebrafish में erms engrafting द्वारा ट्यूमर सेल नंबर का विस्तार है। तिथि करने के लिए, इसी तरह के प्रयोगों CG1 तनाव syngeneic मछली का उपयोग कर पूरा हो चुका है और myf5-GFP के लिए ट्रांसजेनिक थे कि syngeneic लाइनों को विकसित करने के backcrossing की चार पीढ़ियों से अधिक की आवश्यकता; mylpfa-mCherry। इन मुद्दों को दरकिनार करने के लिए, हम एक बिहारी तनाव zebrafish से प्राथमिक erms टीका लगाना करने के लिए प्रतिरक्षा के साथ छेड़छाड़ की rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती प्राप्तकर्ता zebrafish के उपयोगिता का प्रदर्शन किया। सभी प्राथमिक erms आरए में engraftedG2 ट्यूमर (तालिका 1) के विस्तार की सुविधा के समयुग्मक उत्परिवर्ती पशुओं,। 0 7 के जंगली प्रकार भाई बहन की बीमारी 23 engrafted जबकि इसी तरह के परिणाम हाल ही में, जहां 24 से 27 rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish engrafted erms की सूचना मिली। एक engrafted erms का एक प्रतिनिधि उदाहरण चित्रा 3E में 30 दिनों के बाद प्रत्यारोपण में दिखाया गया है। Engrafted erms प्राथमिक ट्यूमर (3B चित्रा और 3F) में पाया है कि इसी तरह भ्रूणीय rhabdomyosarcoma, के histological सुविधाओं को साझा करें। FACS विश्लेषण कि myf5-GFP और / या mylpfa-mCherry व्यक्त कि कोशिकाओं और विभेदित कोशिकाओं प्रचार कार्यात्मक अलग ट्यूमर निहित erms की पुष्टि की। Intraperitoneal इंजेक्शन प्रक्रिया के बाद जीवित रहने की दरों में 95% से अधिक में थे। प्राप्तकर्ता zebrafish सामान्यतः 30 दिनों के बाद प्रत्यारोपण समय बिंदु के बाद ट्यूमर बोझ से मर जाना। (ए) सामान्य और (बी) rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती में घातक कंकाल की मांसपेशी कोशिका प्रत्यारोपण के लिए चित्रा 1. प्रोटोकॉल योजनाबद्ध zebrafish। वैकल्पिक कदम (*) से चिह्नित कर रहे हैं। <img alt="चित्रा 2" src="/files/ftp_upload/52597/52597fig2highres.jpg" width="700px" /> Rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish में चित्रा 2. कंकाल की मांसपेशी engraftment। (ए) α-actin-आरएफपी ट्रांसजेनिक दाता zebrafish। पृथक पेशी सेल निलंबन के (बी) सेल व्यवहार्यता DAPI डाई अपवर्जन द्वारा मूल्यांकन और प्रवाह cytometry के रूप में। एक जंगली प्रकार नियंत्रण की तुलना में (सी) α-actin-आरएफपी दाता (लाल) से पेशी सेल निलंबन के भीतर पाया आरएफपी पॉजिटिव कोशिकाओं का अनुपात,(ग्रे)। (डे) के 30 दिनों के बाद प्रत्यारोपण में उज्ज्वल क्षेत्र और जंगली प्रकार के पशुओं (डी) या rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती मछली (ई) के फ्लोरोसेंट छवियों विलय कर दिया। समय के साथ (एफ) engraftment दरों। ग्रे गैर engrafted मछली से पता चलता है, जबकि लाल engrafted पशुओं की संख्या को दर्शाता है। हर समय बिंदु पर विश्लेषण किया पशुओं की संख्या संकेत कर रहे हैं। समय (तीर) से अधिक विभेदित मांसपेशी फाइबर की अवधारण दिखा रहा है (सैनिक) 10 (जी) में दिखाया पैनल ई में बॉक्सिंग क्षेत्र के उच्च बढ़ाई छवियों, 20 (एच) और 30 (आई) दिनों के बाद प्रत्यारोपण,। स्केल सलाखों 2 मिमी के बराबर हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52597/52597fig2highres.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <img alt="चित्रा 3" src="/files/ftp_upload/52597/52597fig3highres.jpg" width="700px" /> Myf5-GFP की चित्रा 3. ट्रांसप्लांटेशन; rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती में mylpfa-mCherry erms । एबी तनाव myf5-GFP में उत्पन्न होने वाली zebrafish (एडी) rag2-kRASG12D प्रेरित प्राथमिक erms; जीवन के 30 दिनों में mylpfa-mCherry zebrafish। (एह) rag2 समयुग्मक उत्परिवर्ती zebrafish erms साथ engrafted और बाद प्रत्यारोपण 30 दिनों में विश्लेषण किया गया। (ए, ई) उज्ज्वल क्षेत्र और प्राथमिक और प्रतिरोपित erms की फ्लोरोसेंट छवियों विलय कर दिया। ट्यूमर क्षेत्र उल्लिखित है और नोक ई में इंजेक्शन साइट इंगित करता है। (बी, एफ) Hematoxylin- और कैंसर के साथ जुड़े वृद्धि हुई cellularity के क्षेत्रों दिखा प्राथमिक (बी) के eosin से सना हुआ आयल वर्गों और engrafted erms (एफ)। (सी,DAPI डाई अपवर्जन द्वारा मूल्यांकन और प्रवाह cytometry के रूप में जी) सेल व्यवहार्यता। (डी, एच) फ्लोरोसेंट ट्यूमर सेल उप आबादी, प्रवाह cytometry द्वारा मूल्यांकन के रूप में। स्केल सलाखों 2 मिमी (ए, ई) और 50 माइक्रोन (बी, एफ) के बराबर हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52597/52597fig3highres.jpg" target="_blank">यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <img alt="तालिका 1" src="/files/ftp_upload/52597/52597table1.jpg" width="700px" /> मांसपेशियों और erms सेल प्रत्यारोपण के लिए तालिका 1. engraftment का परिणाम है। (*) पहले से ही तकनीक 23 का उपयोग कर डेटा की सूचना दी अर्थ। डाटा तरीके प्रकृति से अनुमति के साथ reprinted है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52597/52597table1.jpg" target="_blank">इस तालिका का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें</a>।

Watch this Scientific Journal Video about Normal and Malignant Muscle Cell Transplantation into Immune Compromised Adult Zebrafish at JoVE.com

Normal and Malignant Muscle Cell Transplantation into Immune Compromised Adult Zebrafish

Here, we present a protocol for cell transplantation of zebrafish skeletal muscle and embryonal rhabdomyosarcoma (ERMS) into adult immune compromised rag2E450fs homozygous mutant zebrafish. This protocol allows for the efficient analysis of regeneration and malignant transformation of muscle cells.

इम्यून से समझौता वयस्क zebrafish में सामान्य और घातक मांसपेशी कोशिका प्रत्यारोपण

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