Name: dried blood spots - preparing and processing for use in immunoassays and in molecular techniques
Uploaded: 2015-03-13T13:00:00
Duration: 11 min 28 s
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इस संचार के परिणामों के आधार पर पहले वायरोलॉजी जर्नल17 में ओपन एक्सेस मोड में क्रिएटिव कॉमंस रोपण लाइसेंस (<a href="http://creativecommons.org/licenses/by/2.0">http://creativecommons.org/licenses/by/2.0</a>) के रूप में BioMed केंद्रीय के साथ एक के रूप में प्रकाशित लाइसेंसधारी. लेखक कृतज्ञता अध्ययन "दवाओं और जीर्ण संक्रामक रोगों" ("DRUCK अध्ययन") यू. के. मार्कस, डब्ल्यू कै, डब्ल्यू जांग, और आर Zimmermann के साथ रॉबर्ट कोच-संस्थान (बर्लिन, जर्मनी) के साथ विमान का संचालन करने के ढांचे में उपयोगी सहयोग स्वीकार करते है और चित्रा 1 में इकट्ठे के रूप में अच्छी तरह से डी. एफ Whybrew, पीएच, (गौटिंगेन, जर्मनी) के लिए पांडुलिपि को सही करने के लिए तस्वीरें लेने के लिए एस Moyrer के लिए आभारी हैं । वे भी जे को कुशल तकनीकी सहायता के लिए अपनी प्रशंसा व्यक्त करते हैं । Ackermann, ई. Bayrambasi, यू. Büttner, एस. Dziubek, आई. Jakobsche, बी. Krellenberg, एच. Krohn, पी. Kusimski, ए. Metcalf, जे. Piejek, एस. साेऽ, एम. Schröter और के. Seidel. इस अध्ययन के हिस्से में स्वास्थ्य के जर्मन मंत्रालय के एक अनुदान द्वारा समर्थित था हेपेटाइटिस सी के लिए राष्ट्रीय संदर्भ केंद्र ।

पूर्व में RSR को एबॉट डायग्नोस्टिक्स से अपने वैज्ञानिक कार्य के लिए व्याख्यान और वित्तीय सहायता वितरित करने के लिए मानदेय मिला था । एनजी और ओम की घोषणा है कि वे कोई विरोधी हितों की है ।

एक कागज फाइबर से बने कार्ड पर एकत्र रक्त का उपयोग करने का विचार िवार क्रिश्चियन बैंग (१८६९-१९१८), आधुनिक नैदानिक microanalysis के पिता के लिए जिंमेदार है1, 2। १९१३ में, बैंग सूखे रक्त के धब्बे (डीबीएस) के eluates से ग्लूकोज निर्धारित3 और, बाद में, यह भी नाइट्रोजन माप इस फिल्टर कागज तकनीक2के साथ Kjeldahl विधि का उपयोग कर प्रदर्शन किया । इसके बाद, कई जांचकर्ताओं सीरम परीक्षण के लिए डीबीएस के उपयोग पर सूचना दी उपदंश के निदान के लिए2। के रूप में १९२४ में जल्दी के रूप में, फेरीवाला डीबीएस परीक्षण के लाभ संक्षेप में जब वह विशेष रूप से चार मदों, जो आज भी मांय है पर जोर दिया: (1) पारंपरिक venipuncture की तुलना में, कम रक्त की मात्रा की आवश्यकता है और इस तथ्य बाल चिकित्सा में सबसे महत्वपूर्ण था निदान; (2) रक्त संग्रह सरल, गैर इनवेसिव, और सस्ती है; (३) जीवाणु संदूषण या hemolysis का जोखिम न्यूनतम होता है; और (4) डीबीएस analytes2, 4की लगभग कोई गिरावट के साथ लंबी अवधि के लिए संरक्षित किया जा सकता है । उपदंश के लिए परीक्षण में इसके उपयोग के अलावा, डीबीएस तकनीक के आगे जल्दी आवेदन शामिल हैं, जैसे, खसरा के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने, कण्ठमाला, पोलियो, parainfluenza वायरस, और श्वसन syncytial वायरस (RSV) में १९५३2, मल में शिगेला की पहचान फिल्टर पेपर पर सूख गई और इंडोनेशिया से नियमित रूप से मेल द्वारा भेज दिया नीदरलैंड में Leiden के रूप में के रूप में अच्छी तरह से Schistosoma के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए डीबीएस में स्थानिकमारी वाले क्षेत्रों में ले लिया और अधिक से अधिक तीन महीने बाद विश्लेषण किया5 . १९६३ में, बैंग के मूल संचार2, 6के बाद ५० साल, Guthrie अंत में डीबीएस से धमनियों के निदान के लिए अपनी प्रसिद्ध विधि प्रकाशित नवजात शिशुओं7, 8से एक एड़ी चुभन द्वारा प्राप्त की ।
हालांकि उस समय के बाद से, डीबीएस इकट्ठा, भंडारण, परिवहन, और मानव शरीर के तरल पदार्थ की एक किस्म का विश्लेषण के लिए एक सामांय रूप से लागू विधि के रूप में माना गया5, निदान में उनके उपयोग अभी भी मुख्य रूप से के निदान पर ध्यान केंद्रित रह गया विशेष रूप से संसाधन सीमित सेटिंग्स में संक्रमण और दशकों के लिए विरासत में मिला चयापचय विकारों के लिए नवजात शिशुओं की व्यवस्थित स्क्रीनिंग9, 10. २००५ के बाद से, तथापि, नए और अभिनव डीबीएस आवेदनों की एक किस्म के लिए उभरने शुरू कर दिया है । इस बारे में ५० से डीबीएस पर संबंधित वैज्ञानिक प्रकाशनों की संख्या में लगभग घातीय वृद्धि के परिणामस्वरूप वर्तमान में लगभग ४५० सालाना । उभरते अनुप्रयोगों के अलावा toxico-और pharmacokinetic अध्ययन, चयापचय की रूपरेखा, चिकित्सकीय दवा की निगरानी, फोरेंसिक विषविज्ञान, या पर्यावरण संदूषण नियंत्रण10, 11के रूप में इस तरह के विविध क्षेत्रों रहे हैं ।
डीबीएस परीक्षण है, इस प्रकार, पिछले १०० साल के दौरान नैदानिक प्रयोगशाला निदान के माध्यम से एक विजयी मार्च किया2। नैदानिक रसायन विज्ञान में12के रूप में, तथापि, इस मार्च के दौरान पूर्व विश्लेषणात्मक चर पर्याप्त रूप से कई वर्षों के लिए विचार नहीं किया गया । दरअसल, आज भी सीडीसी के फिल्टर कागज मूल्यांकन परियोजना13 या नवजात स्क्रीनिंग14, पूर्व विश्लेषणात्मक चरण के ढांचे में फिल्टर कागज पर रक्त संग्रह के लिए एक राष्ट्रीय मानक के निर्माण के रूप में ऐसी प्रख्यात गतिविधियों के बाद अभी भी काफी हद तक अंय क्षेत्रों, जिसमें डीबीएस परीक्षण लागू किया जाता है के अधिकांश में मूल्यांकन किया है5, 10।
इस पृष्ठभूमि को देखते हुए, immunoassays में उपयोग के लिए एक व्यापक कदम दर कदम प्रोटोकॉल14 -16 और आणविक तकनीकों में, जो आवश्यक कदम के सभी शामिल हैं, की तैयारी और निंनलिखित संचार में डीबीएस प्रसंस्करण के लिए सुझाव दिया है: (1) रक्त का संग्रह; (२) रक्त के धब्बे तैयार करना; (३) रक्त के धब्बे सूख जाना; (4) भण्डारण और पिरवहन; (5) डीबीएस का रेफरेंस; और अंत में (6) डीबीएस eluates का विश्लेषण । प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता पहले हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) सतह प्रतिजन (HBsAg), एंटीबॉडी एचबीवी कोर प्रतिजन (एंटी HBc), एंटीबॉडी एचबीवी सतह प्रतिजन (विरोधी एचबीएस), एचबीवी डीएनए, एंटीबॉडी के लिए का पता लगाने के लिए युग्मित सीरम/ हेपेटाइटिस सी वायरस (HCV) (anti-HCV), HCV आरएनए, और मानव इम्यूनो वायरस (एचआईवी) 1-p24-प्रतिजन/विरोधी एचआईवी 1/2 या तो एक पूरी तरह से स्वचालित मंच या संवेदनशील गुणात्मक न्यूक्लिक एसिड परीक्षण का उपयोग कर । 17. एक दूसरे चरण में, प्रोटोकॉल पायलट अध्ययन में उपयोग किया गया था "दवाओं और जीर्ण संक्रामक रोगों" ("DRUCK अध्ययन") जो रॉबर्ट कोच द्वारा आयोजित किया गया था-निकट सहयोग में राष्ट्रीय संदर्भ केंद्र हेपेटाइटिस सी के लिए सक्रिय पर संस्थान बर्लिन और एस्सेन के जर्मन शहरों में दवा उपयोगकर्ताओं को18.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Latex rubber gloves</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>#4049500041515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% isopropyl alcohol</td>
			<td>Bode Chemie</td>
			<td>#9768050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mulifly safety cannula</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>#85.1638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA blood collection tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>#02.1066.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive bandage</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>#2994163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry gauze pad</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>#143213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Singel-use safety lancet</td>
			<td>Owen Mumford</td>
			<td>#3802421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test Card</td>
			<td>Whatman/sigmaaldrich</td>
			<td>#10534612</td>
			<td>Filter paper card Grade 903</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pipette tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>#S1126-7810, #S1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zipper bag</td>
			<td>Flexico</td>
			<td>#20219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini desiccant bag</td>
			<td>Tropack</td>
			<td>#-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Punch</td>
			<td>pfmmedical</td>
			<td>#48601</td>
			<td>6.0 mm Disposable Biopsy Punch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Forceps</td>
			<td>Servoprax</td>
			<td>#H7301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>#665180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>#A1389.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Merck</td>
			<td>#66880250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>#30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ARCHITECT HBsAg (Qunatitative)</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>#6C3642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ARCHITECT anti-HBc II</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>#8L4425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ARCHITECT anti-HBs</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>#7C1825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ARCHITECT anti-HCV</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>#6C3725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>#4J2727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagNA Pure 96 DNA and Viral NA Large Volume Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>#6374891001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>artus HBV LC PCR Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>#4506063 (24 tests), #4506065 (96 tests)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VERSANT HCV TMA Assay IVD</td>
			<td>Siemens Healthcare</td>
			<td>#2554311</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood spots - preparing and processing for use in immunoassays and in molecular techniques

एक कागज कार्ड पर रक्त इकट्ठा करने और बाद में निदान प्रयोजनों के लिए सूखे रक्त धब्बे (डीबीएस) का उपयोग करने का विचार एक सदी पहले की उत्पत्ति । तब से, दशकों के लिए डीबीएस परीक्षण मुख्य रूप से संसाधन में विशेष रूप से संक्रामक रोगों के निदान पर ध्यान केंद्रित-सीमित सेटिंग्स या विरासत में मिला चयापचय विकारों के लिए नवजात शिशुओं की व्यवस्थित स्क्रीनिंग और केवल हाल ही में एक किस्म है रह गया है नए और नवीन डीबीएस के आवेदन उभरने शुरू हो गए । कई वर्षों के लिए, पूर्व विश्लेषणात्मक चर ही अनुपयुक्त डीबीएस परीक्षण के क्षेत्र में माना जाता है और आज भी थे, नवजात स्क्रीनिंग के अपवाद के साथ, पूरे पूर्व विश्लेषणात्मक चरण है, जो तैयारी और डीबीएस के प्रसंस्करण के लिए उनके शामिल अंतिम विश्लेषण मानकीकृत नहीं किया गया है । इस पृष्ठभूमि को देखते हुए, एक व्यापक कदम दर कदम प्रोटोकॉल, जो अल आवश्यक चरणों को शामिल किया गया है, प्रस्तावित है, यानी, रक्त का संग्रह; खून के धब्बे तैयार करना; खून के धब्बे सुखाने; डीबीएस का भण्डारण और परिवहन; डीबीएस का रेफरेंस, और अंत में डीबीएस eluates का विश्लेषण । इस प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता पहले हेपेटाइटिस बी वायरस, हेपेटाइटिस सी वायरस के मार्कर का पता लगाने के लिए १,७६२ युग्मित सीरम/डीबीएस जोड़े के साथ मूल्यांकन किया गया था, और एक स्वचालित विश्लेषणात्मक मंच पर मानव इम्यूनो वायरस संक्रमण । एक दूसरे चरण में, प्रोटोकॉल एक पायलट अध्ययन है, जो बर्लिन और एस्सेन के जर्मन शहरों में सक्रिय दवा उपयोगकर्ताओं पर आयोजित किया गया था के दौरान उपयोग किया गया था ।

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Dried Blood Spots - Preparing and Processing for Use in Immunoassays and in Molecular Techniques

तैयारी और उनके अंतिम विश्लेषण के लिए सूखे रक्त धब्बे (डीबीएस) के प्रसंस्करण अभी भी खराब सबसे नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए मानकीकृत कर रहे हैं । इस कमी को दूर करने के लिए, एक व्यापक कदम दर कदम प्रोटोकॉल का सुझाव दिया है और बाद में वायरल संक्रमण के मार्कर का पता लगाने के लिए अपनी प्रभावशीलता के संबंध में मूल्यांकन किया है ।

सूखे रक्त धब्बे-तैयारी और Immunoassays में और आणविक तकनीकों में उपयोग के लिए प्रसंस्करण

The idea of collecting blood on a paper card and subsequently using the dried blood spots (DBS) for diagnostic purposes originated a century ago. Since ...

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