Name: utilizing the antigen capsid-incorporation strategy for the development of adenovirus serotype 5-vectored vaccine approaches
Uploaded: 2015-05-06T14:00:00
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건강 5T32AI7493-20과 5R01AI089337-03 부여의이 작품은 국립 연구소에 의해 부분적으로 지원되었다. 자금 제공자는 연구 설계, 자료 수집 및 분석, 게시하는 결정, 또는 원고의 준비를 전혀 역할을 없었다.

승인 된 프로토콜 번호 101109272에서 본원에 기재된 버밍엄 기관 동물 사용 및 관리위원회에서 알라바마 대학은 마우스의 사용을 승인했다. 1. 유전 건설 수정 된 플라스미드 pAd5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5-그의 6 항원 캡시드-설립 전략 <ol><li> 셔틀 플라스미드의 건설 HVR1-KWAS-HVR5-그의 6 / pH5S <ol><li> hexon5 유전자의 AccI로 제한 효소 부위 사이 AgeI 합성 DNA 서열 HVR1-KWAS을 함?...

<ol>
	<li>Cheng, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coexpression+of+the+simian+immunodeficiency+virus+Env+and+Rev+proteins+by+a+recombinant+human+adenovirus+host+range+mutant.">Coexpression of the simian immunodeficiency virus Env and Rev proteins by a recombinant human adenovirus host range mutant.</a> Journal of virology. 66, 6721-6727 (1992).</li><li>Matthews, Q. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+antigen+incorporation+within+adenovirus+hexon+hypervariable+2+for+a+novel+HIV+vaccine+approach.">HIV antigen incorporation within adenovirus hexon hypervariable 2 for a novel HIV vaccine approach.</a> PloS one. 5, e11815 (2010).</li><li>DeMatteo, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lasting+adenovirus+transgene+expression+in+mice+through+neonatal+intrathymic+tolerance+induction+without+the+use+of+immunosuppression.">Long-lasting adenovirus transgene expression in mice through neonatal intrathymic tolerance induction without the use of immunosuppression.</a> Journal of virology. 71, 5330-5335 (1997).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+recombinant+adenovirus-based+vector+elicits+a+specific+humoral+immune+response+against+the+V3+loop+of+HIV-1+gp120+in+mice+through+the+'Antigen+Capsid-Incorporation'+strategy.">A recombinant adenovirus-based vector elicits a specific humoral immune response against the V3 loop of HIV-1 gp120 in mice through the 'Antigen Capsid-Incorporation' strategy.</a> Virology journal. 11, 112 (2014).</li><li>Matthews, Q. L., Krendelchtchikov, A. L. G., Li, Z. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+Vectors+for+Vaccine+Development.">Viral Vectors for Vaccine Development.</a> INTECH. , (2013).</li><li>Tang, D. C., Zhang, J., Toro, H., Shi, Z., Van Kampen, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+as+a+carrier+for+the+development+of+influenza+virus-free+avian+influenza+vaccines.">Adenovirus as a carrier for the development of influenza virus-free avian influenza vaccines.</a> Expert review of vaccines. 8, 469-481 (2009).</li><li>Flatt, J. W., Kim, R., Smith, J. G., Nemerow, G. R., Stewart, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intrinsically+disordered+region+of+the+adenovirus+capsid+is+implicated+in+neutralization+by+human+alpha+defensin+5.">An intrinsically disordered region of the adenovirus capsid is implicated in neutralization by human alpha defensin 5.</a> PloS one. 8, e61571 (2013).</li><li>Bradley, R. R., Lynch, D. M., Iampietro, M. J., Borducchi, E. N., Barouch, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+serotype+5+neutralizing+antibodies+target+both+hexon+and+fiber+following+vaccination+and+natural+infection.">Adenovirus serotype 5 neutralizing antibodies target both hexon and fiber following vaccination and natural infection.</a> Journal of virology. 86, 625-629 (2012).</li><li>Zaiss, A. K., Machado, H. B., Herschman, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+innate+and+pre-existing+immunity+on+adenovirus+therapy.">The influence of innate and pre-existing immunity on adenovirus therapy.</a> Journal of cellular biochemistry. 108, 778-790 (2009).</li><li>Sumida, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+antibodies+and+CD8++T+lymphocytes+both+contribute+to+immunity+to+adenovirus+serotype+5+vaccine+vectors.">Neutralizing antibodies and CD8+ T lymphocytes both contribute to immunity to adenovirus serotype 5 vaccine vectors.</a> Journal of virology. 78, 2666-2673 (2004).</li><li>Sumida, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralizing+antibodies+to+adenovirus+serotype+5+vaccine+vectors+are+directed+primarily+against+the+adenovirus+hexon+protein.">Neutralizing antibodies to adenovirus serotype 5 vaccine vectors are directed primarily against the adenovirus hexon protein.</a> Journal of immunology. 174, 7179-7185 (2005).</li><li>Bradley, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+serotype+5-specific+neutralizing+antibodies+target+multiple+hexon+hypervariable+regions.">Adenovirus serotype 5-specific neutralizing antibodies target multiple hexon hypervariable regions.</a> Journal of virology. 86, 1267-1272 (2012).</li><li>Gahery-Segard, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+to+recombinant+capsid+proteins+of+adenovirus+in+humans:+antifiber+and+anti-penton+base+antibodies+have+a+synergistic+effect+on+neutralizing+activity.">Immune response to recombinant capsid proteins of adenovirus in humans: antifiber and anti-penton base antibodies have a synergistic effect on neutralizing activity.</a> Journal of virology. 72, 2388-2397 (1998).</li><li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+multivalent+adenoviral+vectors+for+HIV+vaccination.">Using multivalent adenoviral vectors for HIV vaccination.</a> PloS one. 8, e60347 (2013).</li><li>Tian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+enterovirus+71+with+neutralizing+epitope+incorporation+within+adenovirus+type+3+hexon.">Protection against enterovirus 71 with neutralizing epitope incorporation within adenovirus type 3 hexon.</a> PloS one. 7, e41381 (2012).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+characterization+of+adenovirus+serotype+5+packaged+by+serotype+3+hexon.">Construction and characterization of adenovirus serotype 5 packaged by serotype 3 hexon.</a> Journal of virology. 76, 12775-12782 (2002).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+sites+in+adenovirus+hexon+for+foreign+peptide+incorporation.">Identification of sites in adenovirus hexon for foreign peptide incorporation.</a> Journal of virology. 79, 3382-3390 (2005).</li><li>Qiu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype-specific+neutralizing+antibody+epitopes+of+human+adenovirus+type+3+(HAdV-3)+and+HAdV-7+reside+in+multiple+hexon+hypervariable+regions.">Serotype-specific neutralizing antibody epitopes of human adenovirus type 3 (HAdV-3) and HAdV-7 reside in multiple hexon hypervariable regions.</a> Journal of. 86, 7964-7975 (2012).</li><li>Parker, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+definition+of+the+epitope+on+the+gp41+glycoprotein+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+for+the+neutralizing+monoclonal+antibody+2F5.">Fine definition of the epitope on the gp41 glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1 for the neutralizing monoclonal antibody 2F5.</a> Journal of virology. 75, 10906-10911 (2001).</li><li>Farrow, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+Hexon+Modified+Adenoviral+Vectors+Integrated+with+gp83+Epitope+Provides+Protection+against+Trypanosoma+cruzi+Infection.">Immunization with Hexon Modified Adenoviral Vectors Integrated with gp83 Epitope Provides Protection against Trypanosoma cruzi Infection.</a> PLoS neglected tropical diseases. 8, e3089 (2014).</li><li>Krause, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitopes+expressed+in+different+adenovirus+capsid+proteins+induce+different+levels+of+epitope-specific+immunity.">Epitopes expressed in different adenovirus capsid proteins induce different levels of epitope-specific immunity.</a> Journal of virology. 80, 5523-5530 (2006).</li><li>Omori, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+a+fiber+protein+in+an+adenovirus+vector+improves+in+vitro+gene+transfer+efficiency+to+the+mouse+microglial+cell+line.">Modification of a fiber protein in an adenovirus vector improves in vitro gene transfer efficiency to the mouse microglial cell line.</a> Neuroscience letters. 324, 145-148 (2002).</li><li>Dmitriev, I. P., Kashentseva, E. A., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+of+adenovirus+vectors+containing+heterologous+peptide+sequences+in+the+C+terminus+of+capsid+protein+IX.">Engineering of adenovirus vectors containing heterologous peptide sequences in the C terminus of capsid protein IX.</a> Journal of virology. 76, 6893-6899 (2002).</li><li>Xue, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+characterization+of+a+recombinant+human+adenovirus+type+3+vector+containing+two+foreign+neutralizing+epitopes+in+hexon.">Construction and characterization of a recombinant human adenovirus type 3 vector containing two foreign neutralizing epitopes in hexon.</a> Virus research. 183, 67-74 (2014).</li><li>Tian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+characterization+of+human+adenovirus+serotype+3+packaged+by+serotype+7+hexon.">Construction and characterization of human adenovirus serotype 3 packaged by serotype 7 hexon.</a> Virus research. 160, 214-220 (2011).</li><li>Kim, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adenovirus+vector+incorporating+carbohydrate+binding+domains+utilizes+glycans+for+gene+transfer.">An adenovirus vector incorporating carbohydrate binding domains utilizes glycans for gene transfer.</a> PloS one. 8, e55533 (2013).</li><li>Vasconcelos, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogen-induced+proapoptotic+phenotype+and+high+CD95+(Fas)+expression+accompany+a+suboptimal+CD8++T-cell+response:+reversal+by+adenoviral+vaccine.">Pathogen-induced proapoptotic phenotype and high CD95 (Fas) expression accompany a suboptimal CD8+ T-cell response: reversal by adenoviral vaccine.</a> PLoS pathogens. 8, e1002699 (2012).</li><li>Matthews, Q. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+incorporation+of+a+herpes+simplex+virus+type+1+thymidine+kinase+and+firefly+luciferase+fusion+into+the+adenovirus+protein+IX+for+functional+display+on+the+virion.">Genetic incorporation of a herpes simplex virus type 1 thymidine kinase and firefly luciferase fusion into the adenovirus protein IX for functional display on the virion.</a> Molecular imaging. 5, 510-519 (2006).</li></ol>

백신의 개발을위한 변형 된 Ad5에 전통적인 유전자 전략의 애플리케이션은 주로 기인 된 Ad5 PEI 4,6-와 연관된 병목 감소되었다. 이 병목 현상은 부분적으로이 전략의 Ad5 NABS에 의해 중화을 회피 할 수 있기 때문에 항원 - 중 - 관심의 Ad5의 중화 에피토프를 대체하여, 다른 항원 캡시드-설립 전략 (그림 1A)의 응용 프로그램에 의해 감소하고, 강력한 면역의 생성을 촉진 할 수있다 ?...

인간 아데노 바이러스 (AD)는 이중 가닥 DNA 게놈을 포함하는 뉴 클레오 캡시드 면체와 중형, 비 - 외피 바이러스이다. 광고는 일곱 그룹으로 분류 (G 통해)와, 아데노 바이러스 제품군에 속한다. 각 그룹은 다른 혈청 형의 바이러스가 포함되어 있습니다. 그룹 C에서, 아데노 바이러스, 이는 혈청 형 5의 (의 Ad5)의 가장 광범위하게 연구되어 왔으며 가장 널리 유전자 치료 백신과 같은 벡터화에 대한 적용 방법. 전통적인 유전자 전략 개발 및 유전자의 관심을 가진 바이러스 초기 유전자의 변위 특징으로 된 Ad5 변형, 적용, 및 유전자의 관심 숙주에서의 발현 집중되었다. 예를 들면 유인원 면역 결핍 바이러스 1 회전 유전자 초기 유전자 3 (E3)을 대체하여 pENV9 / Ad5hrΔE3의 건설이다, 인간 면역 결핍의 개그 유전자 초기 유전자 1 (E1)을 대체하여 AdCMVGag의 건설바이러스 (HIV) 2, 락 Z 유전자 3 (E1)를 교체하여 광고 락 Z의 건설. 의 Ad5에 전통적인 유전자 전략의 광범위한 애플리케이션은 다음의 장점에 의존의 Ad5, 바이러스 및 바이러스 증식에 가능한 유전자 공학, 외래 유전자 삽입의 대형 숙박 시설과의 Ad5 4,5의 안전을 위해 호스트 다양한. 그러나,이 전략을 이용하여 벡터화 된 Ad5-임상 치료의 감소는 효능의 Ad5 어린이와 어른의 4,6- 중 대다수 만연해 때문에, 주로의 Ad5 PEI과 연관 매핑 된 주요 병목왔다. 의 Ad5의 주요 병목 현상을 극복하기 위해, 주요 목적은 PEI의 Ad5를 우회 대체 전략을 개발하는 것이다. 이러한 중화 항체 (NABS) 8-10 및 CD8 + T 세포 반응 등의 선천성 면역 7, 적응 면역이의 Ad5에 대하여 (10)는 공동 것으로 나타났다의 Ad5 NABS가의 Ad5 PEI 10, 11에 기여에서 지배적 인 역할을 할 것으로 나타나는으로의 Ad5 PEI에 ntribute. 또한,의 Ad5의 주요 단백질 hexon, 섬유 및 펜톤 기본 포함 캡시드 단백질에있는 대상 에피토프를, NABS. 그중 hexon는의 Ad5 NABS 8,11-13의 주요 대상입니다. 이러한 발견에 기초하여, 혁신적인 캡시드 항원 혼입 전략이 도입되었다. 이 새로운 전략은 NABS하고 효율적인의 Ad5 벡터 행정에 의해 감소​​ 된 인식으로 이어지는, 단백질-의 관심의 Ad5 중화 에피토프를 이동 또는 마스크의 Ad5 캡시드 단백질에의 교체 또는 통합을 강조한다. 그것은 또한 호스트가 직접 면역 시스템 4,14,15 항원에 관심 - 제시하여 강력한 체액 성 면역 및 세포 면역 효능을 유도 할 수 있기 때문에 도움이 전략이 경쟁력 있음을 주목할 만하다. 이러한 전략에 기초하여, 분자 클로닝 및 재조합 바이러스 벡터 광고 구조는 구조적으로 분할 될 수있다네 가지 주요 단계로, (a) 중 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 또는 합성에 의해 유전자의 관심 단편의 제조; (b) 아데노 백본 유전자 단편의 관심과 상 동성 암을 포함하는 셔틀 플라스미드 내로 유전자 단편의 라이 게이션; (c)에 의한 상동 재조합 공동 바뀌는 선형화 된 플라스미드 백본 pAd5 / ΔH5 (GL) 16 유전자의 관심 단편을 포함하는 셔틀 플라스미드; (D) 선형화 재조합 아데노 바이러스 플라스미드의 형질은 항원 - 중 - 관심 통합 재조합 광고 벡터를 구출한다. 우리 그룹과 일부 다른 사람은 다른 감염성 병원균에 대한 광고 벡터화 백신 개발이 대안 광고의 통합 전략을 드리고 있습니다. 우리는 재조합 광고 벡터의 생성을보고 광고 - HVR1-LGS-자신의 Ad5의 hexon (hexon5)의 HVR1 로케일로 그의 태그가 HIV-1 항원 (V3)을 통합하여 6 -V3. 이 생성 된 벡터는 STR 트리거V3 에피토프 4 특정 옹 체액 성 면역 반응. 우리는 또한 hexon5 2의 HVR2 로케일로 HIV-1 막 인접 ectodomain 영역 (MPER)를 통합하여의 Ad5 / HVR2-MPER-L15ΔE1의 개발을보고했다. 또한, 닥터 서주의 그룹 애드 혈청 형 3 (AD3) 벡터화 백신, 즉. 개발이 광고 혼입 전략의 장점을 사용한, AD3의 HVR1으로 엔테로 바이러스 71의 중화 에피토프 SP70을 통합하여 바이러스 벡터 R1SP70A3의 세대 hexon (hexon3). R1SP70A3은 엔테로 바이러스 (71) 도전 (15)에 대한 보호의 높은 비율로 이어질 에피토프 SP70에 특정 강한 NABS 및 IFN-γ 생산을 생성. 기술 참조의 목적을 위해, 우리의 연구는 HVR1에 HIV-1 항원을 통합하여 가의의 Ad5 벡터의 Ad5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5-그의 6의 생성에 초점을 질적 항원 캡시드-설립 전략을 이용했다다 hexon5의 HVR5에 자신의 태그입니다. 생성 된 바이러스 벡터는 또한 면역 학적으로 평가 하였다. 항원 캡시드-설립 전략은 다른 감염성 질병에 대한의 Ad5-벡터화 예방 접종 방법의 발전으로 활용 될 수있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x DPBS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td>for cell spliting&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x DPBS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30378.02</td>
			<td>for dialysis buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G5516-1L</td>
			<td>for dialysis buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-0301</td>
			<td>for virus lysis buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>component of culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X Non-Essential Amino Acids&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30238.01</td>
			<td>component of culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200mM/L L-glutamine</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-005-CI</td>
			<td>component of culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>penicillin/streptomycin solution&#160;</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td>component of culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM with high glucose</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30081.01</td>
			<td>for HEK293 cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Medium Eagle</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>M5650</td>
			<td>for HeLa cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenol:chloroform:isoamyl alcohol&#160;</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P3803-100ML</td>
			<td>for large size of DNA purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cesium chloride&#160;</td>
			<td>Research Products International Corp.</td>
			<td>C68050</td>
			<td>for virus purificiation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>25-060-CI</td>
			<td>for CsCl solution preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>51-0036</td>
			<td>for virus rescue and upscale</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HeLa</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-2</td>
			<td>for neutralization assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-25 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>156367</td>
			<td>for cell culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 flask</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>430641</td>
			<td>for cell culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-175 flask</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>159910</td>
			<td>for cell culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>BECKMAN</td>
			<td>NA</td>
			<td>for virus purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tube</td>
			<td>BECKMAN</td>
			<td>344059</td>
			<td>for virus purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis cassette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>66380</td>
			<td>for virus dialysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>442404</td>
			<td>for ELISA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human anti-gp41 (2F5) mAb</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>1475</td>
			<td>for immunological assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse anti-His tag mAb</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>A00186</td>
			<td>for immunological assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOC medium</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>46-003-CR</td>
			<td>for transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR master mix solution</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>201445</td>
			<td>for PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal lancet (point length at 5mm)</td>
			<td>MEDIpoint</td>
			<td></td>
			<td>for mice bleeding&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biophotometer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>for virus physical titer titration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing the antigen capsid-incorporation strategy for the development of adenovirus serotype 5-vectored vaccine approaches

아데노 바이러스 혈청 형 5 (의 Ad5)를 광범위하게 백신 개발을위한 기존의 형질 전환 방법으로 수정되었습니다. 임상 시험 전통적으로 이러한 변형 된 Ad5 벡터의 감소 효능은 주로 인구 중 대다수의 Ad5 기존 면역성 (PEI)과 상관 될 수있다. 의 Ad5 PEI의 우려를 해결하여의 Ad5-벡터화 백신 개발을 촉진하기 위해, 혁신적인 항원 캡시드-설립 전략은 사용되어왔다. 이 전략의 장점으로, 우리가 처음 hexon 셔틀 건설의 Ad5가-벡터화 플라스미드 HVR1-KWAS-HVR5 - 그 이전에 건설 셔틀 플라스미드 HVR5-그의 6 / pH5S에 가변 영역 (HVR) hexon의 1 서브 클로닝하여 6 / pH5S, 그의 6 태그 HVR5에 통합했다있다. HIV 에피토프를 함유 ELDKWAS HVR1이 DNA 단편을 합성 하였다. HVR1-KWAS-HVR5-그의 6 / pH5S 후 선형 및 선형 백본 플라스미드 pAd5 / ΔH5 (GL)와 공동으로 형질 전환상동 재조합합니다. pAd5가 / H5는-HVR1이-KWAS-HVR5이-그의 6 세포로 형질 전환 된이 재조합 플라스미드는 바이러스 벡터의 Ad5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5-그의 6을 생성합니다. 이 벡터는 실제 바이러스 역가 (VP / ㎖)로 표시 질적 니스 전염성 역가 (IP / ㎖) 및 대응 VP / IP 비율을 갖도록 검증 하였다. 모두 HIV 에피토프와 그의 6 태그는 표면에 노출 된 Ad5 캡시드에 있었고, 자신의 에피토프 특정 항원을 유지했다. 중화 분석은 시험 관내에서의 Ad5 양성 혈청에 의해 중화를 우회하기 위해이 가의 벡터의 능력을 나타내었다. 마우스 예방 접종은 HIV 에피토프 6 그분에 강력한 체액 성 면역 특정의 생성을 보여 주었다. 이 원리 증명 연구 캡시드 항원 혼입 전략과 연관된 프로토콜을 실행 가능하게 상이한 캡시드 단백질을 수정의 Ad5-벡터화 백신의 생성을 위해 이용 될 수 있다고 제안했다. 이 프로토콜은 심지어 수 f를urther 희토류 혈청 형 아데노 - 벡터화 백신의 생성을위한 개질.

캡시드 항원 혼입 전략 (도 1a)은 이가의 Ad5 바이러스 벡터의 Ad5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5 그의-6를 생성하는데 이용되었다. 첫째, 셔틀 플라스미드 HVR1-KWAS-HVR5-그의 6 / pH5S가 이전 건설 셔틀 플라스미드 HVR5-그의 6 / pH5S 17에 HVR1-KWAS 단편을 서브 클로닝에 의해 건설되었다. 둘째, 플라스미드 pAd5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5-그의 6 (14) &quot;를 EcoRI-HVR1-KWAS-HVR5-을 Hi...

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Utilizing the Antigen Capsid-Incorporation Strategy for the Development of Adenovirus Serotype 5-Vectored Vaccine Approaches

여기서는 원리 증명 가의 아데노 바이러스 타입 5 (의 Ad5) 벡터를 생성하는 프로토콜을 제시의 Ad5 / H5-HVR1-KWAS HVR5-6-그의 항원 캡시드 혼입 전략을 이용하여. 이 벡터는 성적 체력을 나타내는 것으로 입증되었다, 기능은 통합 항원의 Ad5 양성 시험관 내에서 혈청 및 항원뿐만 아니라 면역 원성을 탈출.

아데노 바이러스 혈청 형 5 된 벡터 백신 접근 방법의 개발을위한 항원 캡시드-설립 전략을 활용

Adenovirus serotype 5 (Ad5) has been extensively modified with traditional transgene methods for the vaccine development. The reduced efficacies of these ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Efficient Recombinant Parvovirus Production with the Help of Adenovirus-derived Systems

아데노 바이러스 파생 시스템의 도움으로 효율적인 재조합 파르 보 바이러스 생산

Rodent parvoviruses (PV) such as rat H-1PV and MVM, are small icosahedral, single stranded, DNA viruses. Their genome includes two promoters P4 and P38 ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

FDA 승인 베로 세포 백신 개발을위한 재조합 Arenavirus의 생성

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

호스트 세포 RN​​A의 합성에 바이러스 감염의 효과를 측정하는 클릭 화학을 사용하여

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

조혈 전구 세포의 입양 전송을 사용 Peyer의 패치에 쥐과 Plasmacytoid 수지상 세포의 개발을 평가

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

웨스트 나일 바이러스 돌연변이 균주의 감염에에서 MyD88 매개 세포 면역 반응의 생체 외 분석

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

라벨이없는 바이오 센서 기술을 활용 유방암 인간 백혈구 항원 바이오 마커의 검출

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcÃƒÅ½Ã‚ÂµRI

개발<em&gt; 체외</em의 상호 작용을 연구&gt; 모델 시스템<em&gt; 에쿠스</em&gt;<em&gt; caballus</em높은 친 화성 수용체 FcεRI에&gt;의 IgE

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

염증이 진피의 이미징 CD4 T 세포 간질 마이그레이션

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

자가 면역 대해 줄기 세포 유래의 항원 특이 적 조절 T 세포의 발달

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

B 형 간염 바이러스 리포터 시스템 개발은 복제주기의 초기 단계를 모니터링하기

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...