Name: a standardized method for the analysis of liver sinusoidal endothelial cells and their fenestrations by scanning electron microscopy
Uploaded: 2015-04-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy at JoVE.com

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नोट: जानवरों के उपयोग से जुड़े सभी प्रक्रियाओं स्थानीय कानून के अनुसार किया जाता है। हमारा काम सिडनी स्थानीय स्वास्थ्य जिला पशु कल्याण समिति ने मंजूरी दे दी है। अनुमति दी प्रक्रियाओं परियोजना लाइसे?...

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	<li>Cogger, V. C., Le Couteur, D. G., Arias, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Liver: Biology and Pathobiology. , 387-404 (2009).</li><li>Fraser, R., Dobbs, B. R., Rogers, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipoproteins+and+the+liver+sieve:+the+role+of+fenestrated+sinusoidal+endothelium+in+lipoprotein+metabolism,+atherosclerosis,+and+cirrhosis.">Lipoproteins and the liver sieve: the role of fenestrated sinusoidal endothelium in lipoprotein metabolism, atherosclerosis, and cirrhosis.</a> Hepatology. 21, 863-874 (1995).</li><li>Wisse, W., De Zanger, R. B., Charels, K., Van Der Smissen, P., McCuskey, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+liver+sieve:+considerations+concerning+the+structure+and+function+of+endothelial+fenestrae,+the+sinusoidal+wall+and+the+space+of+Disse.">The liver sieve: considerations concerning the structure and function of endothelial fenestrae, the sinusoidal wall and the space of Disse.</a> Hepatology. 5 (4), 683-692 (1985).</li><li>Reilly, J. N., Cogger, V. C., Fraser, R., Le Couteur, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+feeding+and+fasting+on+fenestrations+in+the+liver+sinusoidal+endothelial+cell.">The effect of feeding and fasting on fenestrations in the liver sinusoidal endothelial cell.</a> Pathology. 42 (3), 255-258 (2010).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+serotonin+receptor-2B+rescues+small-for-size+liver+graft+failure+in+mice.">Activation of serotonin receptor-2B rescues small-for-size liver graft failure in mice.</a> Hepatology. 53 (1), 253-262 (2011).</li><li>Cogger, V. C., Mitchell, S. J., Warren, A., de Cabo, R., Le Couteur, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-Related+Loss+of+Responsiveness+to+2,5-Dimethoxy-4-Iodoamphetamine+in+Liver+Sinusoidal+Endothelial+Cells.">Age-Related Loss of Responsiveness to 2,5-Dimethoxy-4-Iodoamphetamine in Liver Sinusoidal Endothelial Cells.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 69 (5), 514-518 (2013).</li><li>Reilly, J. N., Cogger, V. C., Le Couteur, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Old+age+is+associated+with+ultrastructural+changes+in+isolated+rat+liver+sinusoidal+endothelial+cells.">Old age is associated with ultrastructural changes in isolated rat liver sinusoidal endothelial cells.</a> J Electron Microsc. 59 (1), 65-69 (2010).</li><li>Le Couteur, D. G., Rattan, A. E., Le Couteur, D. G., de Cabo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Calorie Restriction, Aging and Longevity. , 191-216 (2010).</li><li>McLean, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+pseudocapillarization+of+the+human+liver.">Age-related pseudocapillarization of the human liver.</a> J Pathol. 200 (1), 112-117 (2003).</li><li>Le Couteur, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudocapillarization+and+associated+energy+limitation+in+the+aged+rat+liver.">Pseudocapillarization and associated energy limitation in the aged rat liver.</a> Hepatology. 33 (3), 537-543 (2001).</li><li>Cogger, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+acute+oxidative+stress+on+the+ultrastructure+of+the+perfused+rat+liver.">The effect of acute oxidative stress on the ultrastructure of the perfused rat liver.</a> Pharmacol Toxicol. 89 (6), 306-311 (2001).</li><li>Horn, T., Christoffersen, P., Henriksen, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcoholic+liver+injury:+defenestration+in+noncirrhotic+livers-a+scanning+electron+microscopic+study.">Alcoholic liver injury: defenestration in noncirrhotic livers-a scanning electron microscopic study.</a> Hepatology. 7 (1), 77-82 (1987).</li><li>Jamieson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+liver+sinusoidal+endothelium+in+a+baboon+model+of+type+1+diabetes.">Alterations in liver sinusoidal endothelium in a baboon model of type 1 diabetes.</a> Diabetologia. 50 (9), 1969-1976 (2007).</li><li>Fraser, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+perfusion+pressure+damages+the+sieving+ability+of+sinusoidal+endothelium+in+rat+livers.">High perfusion pressure damages the sieving ability of sinusoidal endothelium in rat livers.</a> Br J Exp Pathol. 61 (2), 222-228 (1980).</li><li>Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+electron+microscopic+study+of+the+fenestrated+endothelial+lining+of+rat+liver+sinusoids.">An electron microscopic study of the fenestrated endothelial lining of rat liver sinusoids.</a> J Ultrastruct Res. 31 (1), 125-150 (1970).</li><li>Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ultrastructural+characterization+of+the+endothelial+cell+in+the+rat+liver+sinusoid+under+normal+and+various+experimental+conditions,+as+a+contribution+to+the+distinction+between+endothelial+and+Kupffer+cells.">An ultrastructural characterization of the endothelial cell in the rat liver sinusoid under normal and various experimental conditions, as a contribution to the distinction between endothelial and Kupffer cells.</a> J Ultrastruct Res. 38 (5), 528-562 (1972).</li><li>Fahimi, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+and+immersion+fixation+of+rat+liver+with+glutaraldehyde.">Perfusion and immersion fixation of rat liver with glutaraldehyde.</a> Lab Invest. 16 (5), 736-750 (1967).</li><li>Wisse, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+methods+for+electron+microscopy+of+human+and+other+liver.">Fixation methods for electron microscopy of human and other liver.</a> World J Gastroenterol. 16 (23), 2851-2866 (2010).</li><li>Vreuls, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jet-fixation:+a+novel+method+to+improve+microscopy+of+human+liver+needle+biopsies.">Jet-fixation: a novel method to improve microscopy of human liver needle biopsies.</a> Hepatology. 59 (2), 737-739 (2014).</li><li>Furrer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+reverts+age-related+capillarization+and+failure+of+regeneration+in+the+liver+through+a+VEGF-dependent+pathway.">Serotonin reverts age-related capillarization and failure of regeneration in the liver through a VEGF-dependent pathway.</a> Proc Natl Acad Sci U. S. A. 108 (7), 2945-2950 (2011).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OxLDL+induced+injury+and+defenestration+of+HLSECs+via+LOX-1.">OxLDL induced injury and defenestration of HLSECs via LOX-1.</a> J Mol Endocrinol. , (2014).</li><li>May, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+conditional+induction+and+rescue+of+portal+hypertension+reveals+a+role+of+VEGF-mediated+regulation+of+sinusoidal+fenestrations.">A transgenic model for conditional induction and rescue of portal hypertension reveals a role of VEGF-mediated regulation of sinusoidal fenestrations.</a> PLoS One. 6 (7), e21478 (2011).</li><li>Funyu, J., Mochida, S., Inao, M., Matsui, A., Fujiwara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF+can+act+as+vascular+permeability+factor+in+the+hepatic+sinusoids+through+upregulation+of+porosity+of+endothelial+cells.">VEGF can act as vascular permeability factor in the hepatic sinusoids through upregulation of porosity of endothelial cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 280 (2), 481-485 (2001).</li><li>Venkatraman, L., Tucker-Kellogg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD47-binding+peptide+of+thrombospondin-1+induces+defenestration+of+liver+sinusoidal+endothelial+cells.">The CD47-binding peptide of thrombospondin-1 induces defenestration of liver sinusoidal endothelial cells.</a> Liver Int. 33 (9), 1386-1397 (2013).</li><li>Wack, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sinusoidal+ultrastructure+evaluated+during+the+revascularization+of+regenerating+rat+liver.">Sinusoidal ultrastructure evaluated during the revascularization of regenerating rat liver.</a> Hepatology. 33 (9), 363-378 (2001).</li><li>Morsiani, E., Mazzoni, M., Aleotti, A., Gorini, P., Ricci, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+sinusoidal+wall+permeability+and+liver+fatty+change+after+two-thirds+hepatectomy:+An+ultrastructural+study+in+the+rat.">Increased sinusoidal wall permeability and liver fatty change after two-thirds hepatectomy: An ultrastructural study in the rat.</a> Hepatology. 21 (2), 539-544 (1995).</li><li>Straub, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic-stimulated+liver+sinusoidal+capillarization+in+mice+requires+NADPH+oxidase&#8211;generated+superoxide.">Arsenic-stimulated liver sinusoidal capillarization in mice requires NADPH oxidase&#8211;generated superoxide.</a> J Clin Invest. 118 (12), 3980-3989 (2008).</li><li>Barber&#225;-Guillem, E., Arrue, J. M., Ballesteros, J., Vidal-Vanaclocha, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+endothelial+cells+of+developing+rat+liver+in+the+transition+from+fetal+to+postnatal+life.">Structural changes in endothelial cells of developing rat liver in the transition from fetal to postnatal life.</a> JJ Ultrastruct Mol Struct Res. 97 (1-3), 197-206 (1986).</li><li>Jamieson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caloric+restriction+reduces+age-related+pseudocapillarization+of+the+hepatic+sinusoid.">Caloric restriction reduces age-related pseudocapillarization of the hepatic sinusoid.</a> Exp Gerontol. 42 (4), 374-378 (2007).</li><li>Cogger, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperlipidemia+and+surfactants:+the+liver+sieve+is+a+link.">Hyperlipidemia and surfactants: the liver sieve is a link.</a> Atherosclerosis. 189 (2), 273-281 (2006).</li><li>Cogger, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+oxidative+stress+on+the+liver+sieve.">The effects of oxidative stress on the liver sieve.</a> J Hepatol. 41 (3), 370-376 (2004).</li><li>Cogger, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+structured+illumination+microscopy+of+liver+sinusoidal+endothelial+cell+fenestrations.">Three-dimensional structured illumination microscopy of liver sinusoidal endothelial cell fenestrations.</a> J Struct Biol. 171 (3), 382-388 (2010).</li><li>Braet, F., de Zanger, R., Seynaeve, C., Baekeland, M., Wisse, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+atomic+force+microscopy+study+on+living+skin+fibroblasts+and+liver+endothelial+cells.">A comparative atomic force microscopy study on living skin fibroblasts and liver endothelial cells.</a> J Electron Microsc. 50 (4), 283-290 (2001).</li><li>Monkemoller, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+fenestrations+in+liver+sinusoidal+endothelial+cells+by+optical+localization+microscopy.">Imaging fenestrations in liver sinusoidal endothelial cells by optical localization microscopy.</a> Phys Chem Chem Phys. 16 (24), 12576-12581 (2014).</li></ol>

सही ढंग से और reproducibly जिगर sinusoidal अन्तःचूचुक की स्थिति को मापने की क्षमता इन अति विशिष्ट कोशिकाओं के जीव विज्ञान को समझने में एक महत्वपूर्ण कदम है। ऐसे संरचित रोशनी माइक्रोस्कोपी 32, परमाणु शक्ति माइक्र?...

जिगर sinusoidal endothelial कोशिकाओं (LSECs) अत्यधिक यकृत sinusoid की दीवार है कि रेखा विभेदित endothelial कोशिकाओं रहे हैं। LSECs गैर diaphragmed हैं कि fenestrations के साथ छिद्रित कर रहे हैं, transcellular व्यास में 50-250 एनएम pores। LSECs की सतह का 20% तक चलनी प्लेटें 1-3 (चित्रा 1) कहा जाता सैकड़ों करने के लिए दसियों के समूह में आम तौर पर कर रहे हैं, जो fenestrations, द्वारा कवर किया जाता है। Fenestrations एक अत्यधिक कुशल ultrafiltration प्रणाली बनाने, प्लाज्मा और रक्त और hepatocytes के बीच nanosubstrates के हस्तांतरण की अनुमति है। Fenestrations गतिशील संरचनाओं हैं - उनके आकार और / या संख्या दोनों विभिन्न शारीरिक राज्यों, दवाओं, और रोग के जवाब में बदला जा सकता है। उदाहरण के लिए, fenestrations फेड राज्य में 4 से अधिक का उपवास में बड़े होते हैं; सेल उम्र बढ़ने और कई रोग राज्यों 7-13 में होता प्रति 5,6 और आकार में कमी और fenestrations की संख्या, 2-डि-iodoamphetamine गवाक्षीकरण संख्या बढ़ जाती है </sup&gt;। Fenestrations की संख्या और आकार की सही माप LSEC आकृति विज्ञान विभिन्न रोग, जहरीले, और शारीरिक राज्यों से प्रभावित है कि कैसे को समझने के लिए महत्वपूर्ण है; जिगर समारोह पर उनके प्रभाव; और विकसित करने के लिए उपचारात्मक उपायों 1 गवाक्षीकरण-modulating। fenestrations के अध्ययन के लिए मुश्किल है। बरकरार जिगर ऊतक या सुसंस्कृत LSECs में दोनों पहले से ही अवलोकन का उपयोग कर इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी संभव हो गया है इसलिए fenestrations के व्यास, पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोपी के संकल्प के नीचे स्थित है। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (SEM) सबसे अधिक बार, SEM के हजारों के endothelial सतह और माप के बड़े क्षेत्रों के अवलोकन के लिए अनुमति देता है क्योंकि गवाक्षीकरण आकार, आवृत्ति और porosity (fenestrations द्वारा छिद्रित है कि LSEC झिल्ली का प्रतिशत) का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है नहीं दसियों fenestrations के हजारों की है। इसकी उपयोगिता के बावजूद, से रिपोर्ट कर रहे हैं, जो परिणामों के लिए पढ़ाई में SEM आधारितऐसे गवाक्षीकरण आकार, संख्या, आवृत्ति और porosity के रूप में LSEC मापदंडों साहित्य (1 टेबल) में व्यापक रूप से भिन्न हो। Fenestrations और चलनी प्लेटें अनुबंध, तोड़ चौड़ा करना या नमूना तैयार करने के दौरान संगठित होना है कि कमजोर संरचनाओं हैं, इस प्रकार सावधान प्रसंस्करण उनके अखंडता की रक्षा करने की जरूरत है। ऊंचा छिड़काव दबाव 14; लगानेवाला और buffers 15 की गलत परासारिता; अपर्याप्त निर्धारण या निर्धारण समय; और बाद के निर्धारण के निर्जलीकरण और सुखाने की गति फैटी के संरक्षण के साथ हस्तक्षेप है कि कलाकृतियों (चित्रा 2) का उत्पादन हो सकता है कि SEM के लिए प्रसंस्करण के सभी क्षेत्रों रहे हैं। Fenestrations की हानि (&#39;defenestration&#39;) और गवाक्षीकरण दबाव कम गवाक्षीकरण व्यास और सेल सरंध्रता, जिसके परिणामस्वरूप गरीब निर्धारण का एक परिणाम के रूप में हो सकता है। SEM के विश्लेषण के लिए नमूनों के संरक्षण में सुधार करने के तरीके में पहले 15-17 वर्णित किया गया है और चर्चा की जाएगीयहाँ नमूना संरक्षण को सुधारने के लिए अतिरिक्त सुझावों के साथ। नमूना संरक्षण के मुख्य लक्ष्यों LSEC की सतह से देखे जा सकते हैं ताकि sinusoids से खून निकालने के लिए और उच्च दबाव में देरी या नियतन से या तो LSEC क्षति से बचने के लिए कर रहे हैं। पोर्टल शिरा के माध्यम से लगानेवाला के पूरे जिगर छिड़काव जिगर निर्धारण के लिए पसंदीदा तरीका है। विस्तार में वर्णित के रूप में कहीं 16,18 छिड़काव कम दबाव पर किया जाना चाहिए (उदाहरण के लिए एच 2 0 से 10 सेमी) LSEC करने के लिए दबाव से संबंधित छिड़काव कलाकृतियों और नुकसान से बचने के लिए, आम तौर पर कोशिका झिल्ली में भीतर के रूप में बड़े अंतराल प्रकट। कहीं और 19 विस्तार से वर्णित के रूप में हालांकि, उचित निर्धारण अक्सर, मनुष्यों और पशुओं से जिगर बायोप्सी की सुई छिड़काव का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है। रक्त के नमूने से बाहर प्लावित है जब तक इस तकनीक को सीधे ऊतक में लगानेवाला इंजेक्शन शामिल है और ऊतक फर्म और तय है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए नमूने के फिक्सेशन perf होने की जरूरत हैयकृत बहुत तेजी से autolytic प्रक्रियाओं का एक परिणाम के रूप में होने वाली ultrastructural परिवर्तन को रोकने के लिए रक्त के प्रवाह की समाप्ति के निम्नलिखित के रूप में संभव के रूप में जल्दी ormed। हम यह भी कलाकृतियों को शामिल किए जाने को कम करता है, और fenestrations की माप के मानकीकरण कि छवि विश्लेषण का एक तरीका मौजूद है। Porosity और गवाक्षीकरण आवृत्ति के लिए micrographs के लिए sinusoids के चयन में भिन्नता है, कलाकृतियों की छवि विश्लेषण, और सेल क्षेत्र की माप प्रकाशित परिणामों में प्रमुख विसंगतियों के लिए नेतृत्व किया। मूल्यांकन और fenestrations और डेटा प्रस्तुति के लिए न्यूनतम आवश्यकताओं की माप के लिए एक मानकीकृत दृष्टिकोण स्पष्ट रूप से पहले से 4,10,20-31 साहित्य में संबोधित नहीं किया गया है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:155px;">Name of material</td>
			<td style="width:100px;">Company</td>
			<td style="width:93px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:311px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:155px;">EM grade Glutaraldehyde</td>
			<td style="width:100px;">ProSciTech</td>
			<td style="width:93px;">C001</td>
			<td style="width:311px;">Store stock at -20 C until needed, avoid refreeze</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:155px;">Paraformaldehyde powder</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td style="width:311px;">Always prepare Paraformaldehyde fresh</td>
		</tr>
		<tr height="73">
			<td height="73" style="height:73px;width:155px;">Sodium Cacodylate powder</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">C0250</td>
			<td style="width:311px;">Prepare 0.2 M stock, pH 7.4 by dissolving powder in dH2O, used mostly at 0.1 M by preparing 1:2 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:155px;">Calcium Chloride</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">C1016</td>
			<td style="width:311px;">Prepare 1 M CaCl2by dissolving powder in dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:155px;">Osmium tretroxide</td>
			<td style="width:100px;">ProSciTech</td>
			<td style="width:93px;">C011</td>
			<td style="width:311px;">Wash ampoules in weak acid prior to use to avoid contamination. Prepare 2 % stock in glass bottle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:155px;">Ethanol- Absolute</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>459836&#160;</td>
			<td style="width:311px;">100 % Ethanol must be high grade and stored with Molecular Sieve</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:155px;">Other grades of Ethanol</td>
			<td style="width:100px;">Labtech</td>
			<td style="width:93px;">EL5</td>
			<td style="width:311px;">Prepare graded Ethanols with dH2O</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:155px;">Hexamethyldisilazane</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>52619&#160;</td>
			<td style="width:311px;">Allow to reach room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:155px;">Cannulas</td>
			<td style="width:100px;">Terumo</td>
			<td style="width:93px;">TSROX1832C, TSROX2225C, TSROX2419C</td>
			<td style="width:311px;">18 G is suitable for most rats, 22 G is suitable for most mice, but it is good to have a few 24 G on hand in case of very small mice</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:155px;">Conductive Carbon tape</td>
			<td style="width:100px;">ProSciTech</td>
			<td>IA0201</td>
			<td style="width:311px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:155px;">Carbon Paint</td>
			<td style="width:100px;">ProSciTech</td>
			<td>I003</td>
			<td style="width:311px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:155px;">Ketamine</td>
			<td style="width:100px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:311px;">Must be optained under licence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:155px;">Xylazine</td>
			<td style="width:100px;"></td>
			<td style="width:93px;"></td>
			<td style="width:311px;">Must be obtained under licence</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:155px;">Molecular Sieve</td>
			<td style="width:100px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:93px;">208647</td>
			<td style="width:311px;">Removes water from the 100 % Ethanol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a standardized method for the analysis of liver sinusoidal endothelial cells and their fenestrations by scanning electron microscopy

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved substances from the blood into the liver parenchyma for metabolism and processing. Fenestrations are dynamic structures - both their size and/or number can be altered in response to various physiological states, drugs, and disease, making them an important target for modulation. An understanding of how LSEC morphology is influenced by various disease, toxic, and physiological states and how these changes impact on liver function requires accurate measurement of the size and number of fenestrations. In this paper, we describe scanning electron microscopy fixation and processing techniques used in our laboratory to ensure reproducible specimen preparation and accurate interpretation. The methods include perfusion fixation, secondary fixation and dehydration, preparation for the scanning electron microscope and analysis. Finally, we provide a step by step method for standardized image analysis which will benefit all researchers in the field.

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग द्वारा कम बढ़ाई प्रारंभिक दृश्य कई बड़े जिगर वाहिकाओं और sinusoids (चित्रा 1 ए) के निरीक्षण करने के लिए काफी बड़े एक उजागर क्षेत्र के साथ जिगर नमूना के एक फ्लैट सतह क?...

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A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

The fenestrated liver sinusoidal endothelial cell is a biologically important filter system that is highly influenced by various diseases, toxins, and physiological states. These changes significantly impact on liver function. We describe methods for the standardisation of the measurement of the size and number of fenestrations in these cells.

स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा जिगर Sinusoidal endothelial कोशिकाओं का विश्लेषण और उनकी Fenestrations के लिए एक मानकीकृत विधि

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Murine वाल्व endothelial कोशिकाओं का अलगाव

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Macerated ऊतक की स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी बाह्य मैट्रिक्स कल्पना करने के लिए

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Studying the Supramolecular Organization of Photosynthetic Membranes within Freeze-fractured Leaf Tissues by Cryo-scanning Electron Microscopy

क्रायो स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा रुक-खंडित पत्ता ऊतकों के भीतर संश्लेषक झिल्ली के Supramolecular संगठन का अध्ययन

Cryo-scanning electron microscopy (SEM) of freeze-fractured samples allows investigation of biological structures at near native conditions. Here, we ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

समस्याग्रस्त प्लांट, Oomycete, और फफूंद नमूने के लिए इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) प्रोटोकॉल स्कैन

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Signaling

Endothelial-mesenchymal संक्रमण के आणविक विश्लेषण विकास कारक बदलने से प्रेरित-β संकेतन

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM)

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM

स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) में रूपात्मक विश्लेषण के लिए रासायनिक सुखाने का उपयोग Prokaryotic और Eukaryotic जीवों की तैयारी

Scanning electron microscopy (SEM) is a widely available technique that has been applied to study biological specimens ranging from individual proteins to ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

उच्च दबाव ठंड, माइक्रोवेव की सहायता के विपरीत वृद्धि, और मात्रा इमेजिंग के लिए ंयूनतम राल Embedding द्वारा जैविक नमूना तैयारी

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

The CryoAPEX Method for Electron Microscopy Analysis of Membrane Protein Localization Within Ultrastructurally-Preserved Cells

अल्ट्रास्ट्रक्चरल-संरक्षित कोशिकाओं के भीतर झिल्ली प्रोटीन स्थानीयकरण के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विश्लेषण के लिए क्रायोएपेक्स विधि

Key cellular events like signal transduction and membrane trafficking rely on proper protein location within cellular compartments. Understanding precise ...

Array Tomography Workflow for the Targeted Acquisition of Volume Information using Scanning Electron Microscopy

स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके वॉल्यूम जानकारी के लक्षित अधिग्रहण के लिए सरणी टोमोग्राफी वर्कफ़्लो

Electron microscopy is applied in biology and medicine for imaging of cellular and structural details at nanometer resolution. Historically, Transmission ...