Name: measuring oxidative stress resistance of caenorhabditis elegans in 96-well microtiter plates
Uploaded: 2015-05-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates at JoVE.com

हम सी के लिए Caenorhabditis जेनेटिक्स केंद्र स्वीकार करते हैं एलिगेंस उपभेदों। धन का समर्थन टेरी फॉक्स अनुसंधान संस्थान द्वारा प्रदान किया गया। हम यह भी Rolande और मार्सेल Gosselin ग्रेजुएट छात्रवृत्ति और मैकगिल एकीकृत कैंसर रिसर्च ट्रेनिंग प्रोग्राम के कैंसर रिसर्च FRN53888 में CIHR / FRSQ प्रशिक्षण अनुदान से ईपी के लिए दी समर्थन स्वीकार करते हैं।

अभिकर्मकों के 1. तैयारी <ol><li> सी के लिए मीडिया की तैयारी (इस मामले में, जंगली प्रकार के जानवरों और flcn -1 (ok975) उत्परिवर्ती पशुओं में) एलिगेंस विकास। <ol><li> Tris एचसीएल की 5.5 ग्राम, Tris बेस के 2.4 ग्राम, Bactopetone के 31 ग्?...

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	<li>Schieber, M., Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS+function+in+redox+signaling+and+oxidative+stress.">ROS function in redox signaling and oxidative stress.</a> Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).</li><li>Alfadda, A. A., Sallam, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+in+health+and+disease.">Reactive oxygen species in health and disease.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 936486 (2012).</li><li>Finkel, T., Holbrook, N. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+restriction+extends+Caenorhabditis+elegans+life+span+by+inducing+mitochondrial+respiration+and+increasing+oxidative+stress.">Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress.</a> Cell Metab. 6, 280-293 (2007).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Timmons, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+methods+for+RNA+interference+in.">Delivery methods for RNA interference in.</a> C. elegans. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+AMPK-FOXO+pathway+mediates+longevity+induced+by+a+novel+method+of+dietary+restriction+in.">An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in.</a> C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).</li><li>Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brivanib,+a+dual+FGF/VEGF+inhibitor,+is+active+both+first+and+second+line+against+mouse+pancreatic+neuroendocrine+tumors+developing+adaptive/evasive+resistance+to+VEGF+inhibition.">Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition.</a> Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).</li><li>Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. 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सी.एलेगन्स यह आसानी से संवर्धित किया जा सकता है के बाद से vivo में आनुवंशिक रूप से ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिरोध का अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक मॉडल जीव है, और तेजी से आनुवंशिक रूप से समान संतानों की एक ?...

A reference was corrected in the publication of <a href="http://www.jove.com/video/52746">Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates</a>. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:
Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).
to:
Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., &#38; Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

यूकेरियोट्स में माइटोकॉन्ड्रिया के इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला में जगह ले जा ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण एटीपी के रूप में ऊर्जा उत्पादन का मुख्य चालक है। रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) इस प्रक्रिया का एक स्वाभाविक प्रतिफल हैं। संकेतन अणुओं के रूप में उनकी महत्वपूर्ण भूमिका के बावजूद, अत्यधिक आरओएस डीएनए की क्षति, प्रोटीन कार्बोनाइलीकरण, और लिपिड ऑक्सीकरण के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। आरओएस उत्पादन और detoxification के बीच एक असंतुलन ऊर्जा की कमी, सेलुलर क्षति की ओर जाता है जो oxidative तनाव का कारण बनता है, और कोशिका मृत्यु 1,2 हो सके। ऑक्सीडेटिव तनाव उम्र बढ़ने के लिए और कैंसर, मधुमेह, हृदय और neurodegenerative रोगों 3-9 सहित कई जानलेवा बीमारियों के विकास के लिए योगदान देता है। सेल उचित आरओएस के स्तर को बनाए रखने के लिए और oxidative नुकसान 1,2 के खिलाफ अपने समर्थकों की रक्षा के लिए एंजाइमी और गैर एंजाइमी रक्षा रणनीतियों विकसित किया है। Superoxide dismutase (वतन) एंजाइमों conve के लिए पहला अधिनियमबाद में Catalase या peroxidase एंजाइमों द्वारा पानी में बदल जाती है जो एच 2 ओ 2, आरटी सुपरऑक्साइड। गैर एंजाइमी रक्षा रणनीतियों ज्यादातर आवश्यक सेलुलर घटकों की रक्षा सेलुलर अणुओं की तुलना में आरओएस के साथ तेजी से प्रतिक्रिया अणुओं है कि शामिल हैं। आरओएस एंजाइमों detoxifying के सुरक्षात्मक भूमिका के बावजूद, कुछ आरओएस अणुओं एंटीऑक्सीडेंट रक्षा तंत्र से बचने और oxidative नुकसान हो। जांच, मरम्मत, और क्षतिग्रस्त सेलुलर घटकों की गिरावट ऑक्सीडेटिव तनाव 1,2 के दौरान आवश्यक रक्षा रणनीतियों रहे हैं। तनाव प्रतिरोध और विशेष रूप से ऑक्सीडेटिव तनाव में शामिल रास्ते संकेतन अत्यधिक evolutionarily 10,11 संरक्षित कर रहे हैं। जीवधारी शर्तों केवल आंशिक रूप से reproduced हैं जहां सेल संस्कृति प्रयोगों, 12,13 बड़ा महत्व है मॉडल जीवों में oxidative तनाव के अध्ययन के विपरीत सी। एलिगेंस संस्कृति को आसानी से और सस्ते में हो सकता है कि एक मुक्त रहने वाले निमेटोड हैअगर मीडिया पर एक जीवाणु लॉन पर खंडित। यह आकार में छोटा है, आम तौर पर (लगभग 1 लंबाई में मिमी) और आनुवंशिक जोड़तोड़ की सुविधा है, जो एक आत्म fertilizing उभयलिंगी, के रूप में बढ़ता है। यह एक तेजी से जीवन चक्र और एक उच्च प्रजनन क्षमता, पीढ़ी के बारे में प्रति 300 संतानों के उत्पादन में यह बड़े पैमाने पर आनुवंशिक स्क्रीन 14 प्रदर्शन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बना रही है। सी. एलिगेंस जीनोम अनुक्रम पूरी तरह से किया जाता है और जीन का 40-50% मानव रोग जुड़े जीन 15-18 की homologues होने की भविष्यवाणी कर रहे हैं। आरएनएआई का उपयोग कर ब्याज की जीन की पछाड़ना तेजी से और सी में आसान है एलिगेंस। जीन नीचे विनियमन ई जानवरों को खिलाने के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है ब्याज 19 की mRNA लक्ष्य है कि डबल असहाय शाही सेना व्यक्त प्लाज्मिड बंदरगाह कि कोलाई बैक्टीरिया। इसलिए, बड़े पैमाने पर आरएनएआई स्क्रीन का उपयोग जीन समारोह के निर्धारण के कैंसर 20,21 सहित मानव रोगों को समझने पर काफी प्रभाव पड़ता है। ओ के अध्ययनसी में xidative तनाव प्रतिरोध एलिगेंस ऑक्सीडेटिव तनाव 13,22 करने के लिए प्रतिरोध का संरक्षित तंत्र की पहचान करने के लिए नेतृत्व किया है। पहचान कुछ रास्ते हाइपोक्सिया, गर्मी, और आसमाटिक तनाव के रूप में अन्य तनाव के रूप में अच्छी तरह से इस तरह के दीर्घायु और प्रतिरोध मिलाना है कि आम रास्ते हैं। इन रास्ते इंसुलिन संकेतन, टो संकेतन, और भोजी शामिल हैं। अन्य प्रमुख रास्ते में इस तरह के, या नुकसान की मरम्मत में ऐसी गर्मी सदमे और निगरानी प्रोटीन 11,13,22 के रूप में superoxide dismutase एंजाइम और Catalase एंजाइमों के रूप में आरओएस के detoxification शामिल है। इस प्रोटोकॉल सी के oxidative तनाव के लिए प्रतिरोध का निर्धारण करने के लिए बताता है कि कैसे तरल में एलिगेंस। हम पहले सी में के नुकसान पर flcn -1 (ok975) oxidative तनाव के लिए एक बढ़ा प्रतिरोध से पता चला है के बाद से हम प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करने के लिए flcn -1 (ok975) और जंगली प्रकार के जानवरों का इस्तेमाल किया एलिगेंस 23। हम भी इस वृद्धि प्रतिरोध निर्भर करता है कि पता चला हैAMPK और भोजी, सेलुलर बायोइनरजेटिक्स में सुधार और तनाव प्रतिरोध 23 बढ़ावा देता है एक संकेतन धुरी पर। पीक्यू प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के 24 निर्माण करने के लिए इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के साथ हस्तक्षेप है कि एक oxidative तनाव है। एक ही परख अनुकूलित किया जा सकता है और अन्य आरओएस स्रोतों या आरओएस पैदा करने यौगिकों एच 2 ओ 2 और rotenone रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इसी प्रकार assays के पीक्यू की कम सांद्रता 25,26 उपयोग किया जाता है, जहां प्लेटों पर विकसित किया गया है। इस परख का लाभ यह बहुत तेजी से है, और परिणाम एक ही दिन में प्राप्त किया जा सकता है। साथ ही, 96 अच्छी तरह से प्लेट में oxidative तनाव प्रतिरोध परख करने के लिए इस्तेमाल तरल की कुल मात्रा पीक्यू युक्त प्लेटें तैयार करने के लिए इस्तेमाल की मात्रा की तुलना में कम है। इसलिए, इस्तेमाल किया पीक्यू की राशि तरल परख में है सस्ती परख renders और जहरीले कचरे के उत्पादन को सीमित करता है, जो कम है। हालांकि, थाली assays के रूप में की तुलना में इस परख की सीमाओं ला शामिलतरल परख में भोजन और तरल में ऑक्सीजन की कम एकाग्रता की सी हवा की तुलना में। ये कुछ मामलों में, परिणाम प्रभावित हो सकता है कि महत्वपूर्ण कारक हैं। इसलिए, इस परख में प्राप्त परिणामों का समर्थन करने की सिफारिश की है oxidative तनाव प्रतिरोध के अन्य तरीकों का उपयोग कर reproducibility की पुष्टि।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar bacteriological grade</td>
			<td>Multicell</td>
			<td>800-010-LG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological peptone</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>LP0037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride biotechnology grade</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure tris hydrochloride</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15506-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris aminomethane</td>
			<td>Bio Basic Canada Inc</td>
			<td>77-86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-202185A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>69-52-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>8013-01-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl viologen dichloride hydrate</td>
			<td>Aldrich chemistry</td>
			<td>856177-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 60x15mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet 10ml</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1367520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>G-Biosciences</td>
			<td>RC-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-5921</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Bioshop</td>
			<td>7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Discovery v8 stereo zeiss microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well clear microtiter plate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flcn-1 RNAi source</td>
			<td colspan="2">Ahringer Library</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring oxidative stress resistance of caenorhabditis elegans in 96-well microtiter plates

उत्पादन और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की detoxification के बीच असंतुलन का परिणाम है जो ऑक्सीडेटिव तनाव, हृदय और neurodegenerative रोगों, मधुमेह, उम्र बढ़ने, और कैंसर सहित पुराने मानव विकारों के लिए एक प्रमुख योगदान है। इसलिए, यह सेल प्रणाली में ही नहीं बल्कि पूरी जीवों का उपयोग कर न केवल oxidative तनाव का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण है। सी एलिगेंस अत्यधिक evolutionarily संरक्षित कर रहे हैं जो oxidative तनाव संकेत पारगमन रास्ते, की आनुवंशिकी के अध्ययन के लिए एक आकर्षक मॉडल जीव है। यहाँ, हम सी में oxidative तनाव प्रतिरोध को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान तरल में एलिगेंस। ऐसे Paraquat (पीक्यू) और एच 2 ओ 2 के रूप में संक्षेप में, आरओएस उत्प्रेरण अभिकर्मकों M9 बफर में भंग कर रहे हैं, और समाधान एक साथ 96 microtiter प्लेट के कुओं में aliquoted कर रहे हैं। सिंक्रनाइज़ L4 / युवा वयस्क सी एलिगेंस जानवरों के कुओं के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं (5-8 पशु / अच्छी तरह से) और अस्तित्व मापा जाता हैहर घंटे के सबसे कीड़े मर रहे हैं जब तक। डेटा के एक गलत व्याख्या करने के लिए ले जा सकता है, जो oxidative तनाव पर जानवरों के व्यवहार को प्रभावित कर सकता है, उम्र बढ़ने प्लेटों में तनाव की एक कम एकाग्रता का उपयोग कर एक oxidative तनाव प्रतिरोध परख प्रदर्शन करते हैं। हालांकि, इस के साथ साथ वर्णित परख में, इस समस्या को केवल L4 / युवा वयस्क जानवरों का इस्तेमाल किया जा रहा है के बाद से होने की संभावना नहीं है। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल सस्ती है और परिणाम आनुवंशिक स्क्रीन के लिए आकर्षक इस तकनीक renders जो एक दिन में प्राप्त कर रहे हैं। कुल मिलाकर, इस oxidative तनाव से जुड़े मानवीय विकारों के बेहतर लक्षण वर्णन में अनुवाद किया जा सकता है जो oxidative तनाव संकेत पारगमन रास्ते, समझने में मदद मिलेगी।

मुकाबले जंगली प्रकार सी एलिगेंस flcn -1 (ok975) उत्परिवर्ती जानवरों यहाँ हम जंगली प्रकार सी के विरोध को निर्धारित करने के लिए 100 मिमी पीक्यू इस्तेमाल किया oxidative तनाव, गर्मी, और अनॉक्सिता 23 का...

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Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

C. elegans is an attractive model organism to study signal transduction pathways involved in oxidative stress resistance. Here we provide a protocol to measure oxidative stress resistance of C. elegans animals in liquid phase, using several oxidizing agents in 96 well plates.

के oxidative तनाव प्रतिरोध को मापने<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; 96 अच्छी तरह से microtiter प्लेट्स में

Oxidative stress, which is the result of an imbalance between production and detoxification of reactive oxygen species, is a major contributor to chronic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span on Solid Media

माप Caenorhabditis एलिगेंस ठोस मीडिया पर लाइफ स्पैन

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The nematode ...

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

अलगाव और इन विट्रो में सक्रियकरण Caenorhabditis एलिगेंस शुक्राणु

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

Measuring Caenorhabditis elegans Life Span in 96 Well Microtiter Plates

माप Caenorhabditis एलिगेंस 96 खैर microtiter प्लेट्स में लाइफ स्पैन

Lifespan is a biological process regulated by several genetic pathways. One strategy to investigate the biology of aging is to study animals that harbor ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

समय चूक प्रारंभिक Embryogenesis में माइक्रोस्कोपी Caenorhabditis एलिगेंस

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

आइस कैप: बढ़ते के लिए एक विधि Arabidopsis और उच्च throughput जीनोटाइपिंग के लिए 96 अच्छी तरह से प्लेट्स में टमाटर संयंत्रों

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

बुनियादी<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; तरीके तुल्यकालन और निरीक्षण:

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

में प्रोस्टाग्लैंडीन निष्कर्षण और विश्लेषण<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Zebrafish भ्रूण में oxidative तनाव का विश्लेषण

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

की खेती<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</emप्रयोगशाला में तीन आयामों में&gt;

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

अक्षुण्ण केनोहाब्दितिस एलीगेंस में ऑक्सीजन उपभोग दरों का मापन

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...