Name: analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice
Uploaded: 2015-05-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice at JoVE.com

N.G. هو المستفيد من الزمالات من الفرنسية "مؤسسة من أجل Recherche Médicale FRM" ومؤسسة فيليب; R.S. تدعمها مؤسسة لوسيل باكارد لصحة الطفل وجائزة ستانفورد NIH/NCRR CTSA رقم UL1 RR025744; 20- وتحظى شهادة البكالوريوس بدعم من زمالة ماكس كادي من مؤسسة ماكس كادي والأكاديمية النمساوية للعلوم وزمالة شرودينغر من الصندوق النمساوي للعلوم: J3399-B21؛ وزمالة شرودينغر من صندوق العلوم النمساوي( FWF): J3399-B21؛ S.J.G. تعترف بدعم المعاهد الوطنية للصحة منح U19 AI104209, NS 080062 ومن برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ في جامعة كاليفورنيا; L.L.R. يعترف بدعم من مؤسسة البحوث الوطنية لالتهاب المفاصل (ANRF) والمعاهد الوطنية للصحة منحة K99AI110645.

وقد أجريت جميع عمليات العناية بالحيوانات وتجريبه وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة وبموافقة محددة من اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لجامعة ستانفورد.
1. توليد وتوصيف خلايا الصاري المستزرعة المشتقة من نخاع العظم (BMCMCs).
ملاحظة: ?...

ما يقرب من 30 عاما بعد وصفها الأولي38،'الصاري خلية طرق في'النهج لا يزال يقدم معلومات قيمة حول ما يمكن أن تفعله الشركات متعددة الشخصيات أو لا يمكن القيام به في الجسم الحي. كان يعتقد منذ فترة طويلة أن وظائف MCs تقتصر على دورها في الحساسية. البيانات التي تم إنشاؤها باستخدام'الصار...

الخلايا الصارية (MCs) هي خلايا ما بين الهيماتوبوتية التي تنشأ من سلف نخاع العظم متعدد القدرات1-3. بعد خروج نخاع العظم، تهاجر السلف MCs إلى أنسجة مختلفة حيث تتطور إلى MCs ناضجة تحت تأثير عوامل النمو المحلية1-3. تقع MCs المقيمة في الأنسجة بشكل استراتيجي في واجهات البيئة المضيفة ، مثل الجلد والخطوط الجوية والجهاز الهضمي ، حيث تتصرف كخط دفاع أول ضد الإهانات الخارجية3-6. وغالبا ما تصنف الشركات متعددة الشخصيات على أساس خصائصها الظاهرية "الأساسية" ومواقعها التشريحية. في الفئران، تم وصف نوعين من MCs: "النسيج الضام من نوع" MCs (CTMCs) وMCs المخاطية (MMCs)1-3،7،8. غالبا ما تقع CTMCs حول النولس وبالقرب من الألياف العصبية ، وتقيم في تجاويف مصلية ، في حين تحتل MMCs مواقع داخل الظهارة في الأمعاء والغشاء المخاطي التنفسي1-3.
وقد طبقت منهجيات عديدة لدراسة الوظائف البيولوجية لمركبات الكربون المتعددة المركبات9-13. وقد ركزت مجموعات كثيرة على النهج في المختبر باستخدام خطوط الخلية إما (مثل خطوط MC الإنسان HMC114 أو LAD215,16), في المختبر MCs المستمدة (مثل الإنسان الطرفية المشتقة من الدم MCs17, أو نخاع العظام الماوس-MCs المستزرعة المشتقة [BMCMCs]18، MCs المستزرعة المشتقة من جلد الجنين [FSCMCs]19 و MCs المشتقة من الخلايا الصفاقية [PCMCs]20)أو MCs المعزولة من مواقع تشريحية مختلفة. وتستخدم جميع هذه النماذج على نطاق واسع لدراسة التفاصيل الجزيئية لبيولوجيا MC، مثل مسارات الإشارات المشاركة في تنشيط MC. ومع ذلك ، فإن جانبا هاما من بيولوجيا MCs هو أن خصائصها الظاهرية والوظيفية(على سبيل المثال، محتوى بروتياز الحبيبية السيتوبلازمية أو الاستجابة لمحفزات مختلفة) يمكن تحويرها حسب الموقع التشريحي والبيئة الدقيقة2،7. منذ الخليط الدقيق من هذه العوامل التي تواجهها في الجسم الحي قد يكون من الصعب إعادة إنتاج في المختبر، ونحن نفضل استخدام في نهج في الجسم الحي للحصول على رؤى في وظائف MCs9.
توجد عدة سلالات فأرة مع نقص MC الوراثي ، مثل WBB6F1المستخدم على نطاق واسع -كيت W / W-v أو C57BL /6 - كيت W-sh/W-sh الفئران. هذه الفئران تفتقر إلى التعبير و / أو نشاط KIT (CD117)، مستقبلات عامل نمو MC الرئيسي عامل الخلايا الجذعية (SCF)21،22. ونتيجة لذلك ، فإن هذه الفئران لديها نقص عميق MC ولكن لديها أيضا تشوهات إضافية فينوتيبيك تتعلق بطفراتهاc-kit (في WBB6F1-Kit W / W-v mice) أو بآثار الانعكاس الكروموسومي الكبير الذي يؤدي إلى انخفاض تعبيرc-kit (في C57BL/6 -Kit W-sh/W-sh mice)9,10,12,23. في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن عدة سلالات من الفئران مع جعدة- المستقلة نقص MC التأسيسية24-26. وقد استعرضت مؤخرا كل هذه الفئران وبعض أنواع جديدة إضافية من الفئران MC ناقص غير قابل للانتقاص بالتفصيل9,10,13.
هنا، نقوم بوصف طرق توليد MCs المستزرعة المشتقة من نخاع العظم الماوس (BMCMCs)، ونقلها بالتبني إلى الفئران MC ناقصة، وتحليل أعداد وتوزيع MCs المنقولة بالتبني في مواقع تشريحية مختلفة. يمكن استخدام هذه الطريقة المسماة "طرق الخلايا السارية" لتقييم وظائف MCs والمنتجات المشتقة من MC في الجسم الحي. ونناقش مزايا هذه الطريقة وحدودها، في ضوء النهج البديلة التي تم تطويرها في السنوات الأخيرة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>30-004-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml Syringe</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm x 10 mm Dish</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene Round Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid Glacial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A35-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue 8GX</td>
			<td>Rowley Biochemical Danver</td>
			<td>33864-99-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD16/32 (clone 93) Purified</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-0161-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 ml TB Syringe</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 22G x1 (0.7 mm x 25 mm) Needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>205155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25G 5/8 Needles</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 30G x1/2 Needles</td>
			<td>BD Precision Glide</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue MAX Jr, 15 ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60 Mounting Medium</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin3</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DakoCytomation pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>15-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E 7023-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Heat Inactivated</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F4135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Conjugated IgG2b K Rat Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-4031-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isotiocyanate (FITC) Conjugated Anti-mouse KIT (CD117; clone 2B8)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-1171-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>F79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giemsa Stain Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>GS-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>May-Grunwald Stain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>MG-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell 6 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35 3046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX60 Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus Tissue Embedding Medium</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>23-021-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Conjugated IgG Armenian Hamster Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-4888-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered-Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phycoerythrin (PE) Conjugated Anti-mouse FceRIa (clone MAR-1)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-5898-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide Staining Solution</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-6990-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-3</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>213-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranin-o Certified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T25 25 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T75 75 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue 1 % Aqueous</td>
			<td>LabChem-Inc</td>
			<td>LC26165-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse SCF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice

الخلايا الصارية (MCs) هي خلايا دموية موجودة في أنسجة مختلفة ، وهي وفيرة بشكل خاص في المواقع المعرضة للبيئة الخارجية ، مثل الجلد والمسالك الهوائية والجهاز الهضمي. اشتهر دورهم الضار في الحساسية التي تعتمد على IgE ، كما ظهرت MCs كلاعبين مهمين في الدفاع المضيف ضد السم والبكتيريا الغازية والطفيليات. يمكن أن يتأثر النمط الظاهري ووظيفة MC بالعوامل المحيطة الدقيقة التي قد تختلف وفقا للموقع التشريحي و / أو استنادا إلى نوع أو مرحلة تطور الاستجابات المناعية. لهذا السبب، ونحن وآخرون قد فضلت في نهج في الجسم الحي على أساليب في المختبر للحصول على نظرة ثاقبة وظائف MC. هنا، نقوم بوصف طرق توليد المركبات متعددة الثقافات المشتقة من نخاع العظم (BMCMCs)، ونقلها بالتبني إلى فئران ناقصة وراثيا MC، وتحليل أعداد وتوزيع MCs المنقولة بالتبني في مواقع تشريحية مختلفة. وقد استخدمت هذه الطريقة ، التي تسمى'الصاري خلية طرق في' النهج ، على نطاق واسع على مدى السنوات ال 30 الماضية لتقييم وظائف الشركات متعددة الأجهزة والمنتجات المشتقة من MC في الجسم الحي. ونناقش مزايا هذه الطريقة وحدودها، في ضوء النهج البديلة التي تم تطويرها في السنوات الأخيرة.

ويرد في الشكل 1نظرة عامة على نهج'طرق الخلايا السارية'ويشمل توليد مركبات بي إم سي إم سي، وعدد الخلايا التي ينبغي أن تكون محفورة في أي p.p. أو أي أي في الفئران MC-deficient (يمكن أن يختلف العدد إذا أشير إليها على أساس التصميم التجريبي) والفاصل الزمني بين الحرمان والتجربة اعتمادا على موق?...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice at JoVE.com

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

نحن نصف طريقة لتوليد الخلايا الصاري المشتقة في المختبر ، وغرغرتها في الفئران التي تعاني من نقص الخلايا الصاري ، وتحليل النمط الظاهري والأرقام وتوزيع الخلايا الصارية المحتقنة في مواقع تشريحية مختلفة. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتقييم وظائف الخلايا السارية في الجسم الحي.

تحليل وظائف الخلايا الصاري في فيفو باستخدام 'الصاري خلية طرق في' الفئران

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

بعد الخلوي في مصير<em&gt; E. القولونية</em&gt; بعد الإصابة التي كتبها لامدا بالعاثية

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

تحريض الطعم ضد المضيف المرض و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; مراقبة الخلايا T باستخدام نموذج MHC المطابقة الفئران

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

والفحص صفيحة ميكروسكوبية لتقييم تأثيرات المواد الكيماوية على RBL-2H3 الصاري تحبب الخلايا: آثار التريكلوسان بدون استخدام مذيب عضوي

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Investigating Mast Cell Secretory Granules; from Biosynthesis to Exocytosis

التحقيق ماست الخلية الإفرازية حبيبات. من البناء الحيوي لالإيماس

Mast Cells (MC) are secretory cells of the immune system that accomplish their physiological and pathological functions by releasing pre-formed and newly ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

تقييم الشبكية دبقية أكلة وظيفة<em&gt; في فيفو</em&gt; باستخدام الفحص القائمة على الخلوي التدفق

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

عزل خلايا ماست المستمدة من الغشاء البريتوني وعلى التوصيف الوظيفي مع Ca2 +-التصوير وفحوصات تحبب

Mast cells (MCs), as a part of the immune system, play a key role in defending the host against several pathogens and in the initiation of the allergic ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

وصف الاستجابات ايستب الغلوبولين المناعي تعتمد على الغدة الصعترية، والغدة الصعترية مستقلة في الفئران باستخدام مقايسة الممتز المرتبط بالانزيم

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Generation of Knock-out Primary and Expanded Human NK Cells Using Cas9 Ribonucleoproteins

جيل خلايا المغلوب الأساسية والموسعة ناغورني كاراباخ البشرية باستخدام ريبونوكليوبروتينس Cas9

CRISPR/Cas9 technology is accelerating genome engineering in many cell types, but so far, gene delivery and stable gene modification have been challenging ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT في الجلوكوز-6-الفوسفات Isomerase (G6PI) الناجمة عن الفئران RA

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

تقييم T الخلايا المساعدة الجريب و استجابة مركز Germinal أثناء عدوى فيروس الأنفلونزا A في الفئران

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...