Name: analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice
Uploaded: 2015-05-27T15:00:00
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एनजी फ्रेंच "प्रियतम डालना ला Recherche Médicale FRM" और फिलिप फाउंडेशन से फैलोशिप के प्राप्तकर्ता है; आरएस बच्चों के स्वास्थ्य के लिए ल्यूसिले पैकार्ड फाउंडेशन और स्टैनफोर्ड NIH/NCRR CTSA पुरस्कार संख्या UL1 RR025744 द्वारा समर्थित है; पुनश्च मैक्स Kade फाउंडेशन और ऑस्ट्रिया के विज्ञान अकादमी और ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (FWF) के एक श्रोडिंगर फैलोशिप के एक मैक्स Kade फैलोशिप द्वारा समर्थित है: J3399-B21; S.J.G. स्वास्थ्य अनुदान के राष्ट्रीय संस्थानों से समर्थन स्वीकार U19 AI104209, एनएस ०८००६२ और तंबाकू से संबंधित रोग अनुसंधान कार्यक्रम से कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय में; L.L.R. गठिया राष्ट्रीय अनुसंधान फाउंडेशन (ANRF) और स्वास्थ्य अनुदान के राष्ट्रीय संस्थानों K99AI110645 से समर्थन स्वीकार करते हैं ।

सभी पशु देखभाल और प्रयोग राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के दिशा निर्देशों के अनुपालन में और स्टैनफोर्ड विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति के विशिष्ट अनुमोदन के साथ आयोजित किए गए थे ?...

इसके आरंभिक विवरण38के लगभग 30 वर्ष बाद भी' मस्त सेल नॉक-इन' दृष्टिकोण इस बारे में बहुमूल्य जानकारी प्रदान करता रहता है कि वीसी वीवो मेंक्या कर सकते हैं या नहीं कर सकते । एमसी के कार्यों को लंबे स?...

मस्त कोशिकाएं (एमसी) हेमेटोपोइटिक कोशिकाएं हैं जो1-3प्लूइपोटेंट बोन मैरो प्रोजेनिटर से उत्पन्न होती हैं। बोन मैरो एग्रेशन के बाद, एमसी जनक विभिन्न ऊतकों में स्थानांतरित हो जाते हैं जहां वे स्थानीय विकास कारकों1-3के प्रभाव में परिपक्व एमसी में विकसित होते हैं। ऊतक-निवासी एमसी रणनीतिक रूप से मेजबान-पर्यावरण इंटरफेस पर स्थित हैं, जैसे त्वचा, वायुमार्ग और गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट, जहां वे बाहरी अपमान3-6के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति के रूप में व्यवहार करते हैं। एमसी अक्सर उनकी "बेसलाइन" फेनोटाइपिक विशेषताओं और उनके शारीरिक स्थानों के आधार पर उप-वर्गीकृत होते हैं। चूहों में, दो प्रकार के एमसी का वर्णन किया गया है: "कनेक्टिव टिश्यू-टाइप" एमसी (सीटीएमसी) और म्यूकोसल एमसी (एमएमएस)1-3,7,8। CTMCs अक्सर वेणुओं के आसपास और तंत्रिका फाइबर के पास स्थित होते हैं, और सेरोसल गुहाओं में रहते हैं, जबकि एमएमएस आंत और श्वसन म्यूकोसा1-3में इंट्रापिटेलियल स्थानों पर कब्जा करते हैं।
एमसी9-13के जैविक कार्यों का अध्ययन करने के लिए कई तरीके लागू किए गए हैं। कई समूहों ने सेल लाइनों (जैसे मानव एमसी लाइनों HMC1 14 या LAD215,16), इन विट्रो व्युत्पन्न एमसी (जैसे मानव परिधीय रक्त-व्युत्पन्न एमसी17,या माउस बोन मैरो) का उपयोगकरके इन विट्रो दृष्टिकोणों पर ध्यान केंद्रित किया है -व्युत्पन्न संस्कारी एमसी [बीएमसीएमसी]18,भ्रूण त्वचा से व्युत्पन्न सुसंस्कृत एमसी [एफएससीसी]19 और पेरिटोनियल सेल-व्युत्पन्न एमसी [पीसीसी]20)या पूर्व वीवो अलग एमसी विभिन्न शारीरिक स्थलों से । इन सभी मॉडलों का व्यापक रूप से एमसी जीव विज्ञान के आणविक विवरणों का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है, जैसे एमसी सक्रियण में शामिल सिग्नलिंग रास्ते। हालांकि, एमसी जीव विज्ञान का एक महत्वपूर्ण पहलू यह है कि उनकी फेनोटाइपिक और कार्यात्मक विशेषताएं(जैसे,साइटोप्लाज्मिक ग्रेन्यूल प्रोटीज सामग्री या विभिन्न उत्तेजनाओं की प्रतिक्रिया) को शारीरिक स्थान और माइक्रोएनवायरमेंट2,7द्वारा संग्राहक किया जा सकता है। चूंकि वीवो में सामने आने वाले ऐसे कारकों का सटीक मिश्रण विट्रो मेंपुन: उत्पन्न करना मुश्किल हो सकता है , इसलिए हम एमसी कार्यों में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए वीवो दृष्टिकोणों में उपयोग करने के पक्ष में हैं9.
आनुवंशिक एम सी की कमी के साथ कई माउस उपभेदों मौजूद हैं, जैसे व्यापक रूप से इस्तेमाल WBB6F1-किट W/W-v या C57BL/6-किट डब्ल्यू-श/डब्ल्यू-एसएच चूहों । इन चूहों में अभिव्यक्ति और/या किट (CD117), मुख्य एमसी विकास कारक स्टेम सेल फैक्टर (एससीएफ)२१,२२के लिए रिसेप्टर की गतिविधि की कमी है । नतीजतन, इन चूहों में एक गहरा एमसी की कमी है, लेकिन उनकेसी-किट म्यूटेशन (WBB6F1-किट डब्ल्यू/डब्ल्यू-वी चूहों में) या बड़े क्रोमोसोमल इनवर्स के प्रभाव के लिए जो कमसी-किट अभिव्यक्ति (C57BL/6-किट डब्ल्यू-एसएच/डब्ल्यू-एसएच चूहों)9,10,12,23 सेसंबंधित अतिरिक्त फेनोटाइपिक असामान्यताएं हैं । हाल ही में,सी-किट-स्वतंत्रसंविलियन एमसी की कमी वाले चूहों के कई उपभेदों की सूचना24-26दी गई है । इन सभी चूहों और कुछ अतिरिक्त नए प्रकार के अकांक्षित एमसी की कमी वाले चूहों की हाल ही में विस्तार से9,10,13समीक्षा की गई है।
यहां, हम माउस बोन मैरो-व्युत्पन्न सुसंस्कृत एमसी (बीएमसीएमसी) की पीढ़ी के लिए तरीकों का वर्णन करते हैं, एमसी की कमी वाले चूहों में उनका दत्तक हस्तांतरण, और विभिन्न शारीरिक स्थलों पर दत्तक रूप से स्थानांतरित एमसी की संख्या और वितरण का विश्लेषण। इस तथाकथित 'मस्त सेल नॉक-इन' विधि का उपयोग वीवो में एमसी और एमसी-व्युत्पन्न उत्पादों के कार्यों का आकलन करने के लिए किया जा सकताहै। हम हाल के वर्षों में विकसित किए गए वैकल्पिक दृष्टिकोणों के आलोक में इस विधि के फायदों और सीमाओं पर चर्चा करते हैं ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>30-004-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml Syringe</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm x 10 mm Dish</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene Round Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid Glacial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A35-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue 8GX</td>
			<td>Rowley Biochemical Danver</td>
			<td>33864-99-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD16/32 (clone 93) Purified</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-0161-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 ml TB Syringe</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 22G x1 (0.7 mm x 25 mm) Needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>205155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25G 5/8 Needles</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 30G x1/2 Needles</td>
			<td>BD Precision Glide</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue MAX Jr, 15 ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60 Mounting Medium</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin3</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DakoCytomation pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>15-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E 7023-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Heat Inactivated</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F4135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Conjugated IgG2b K Rat Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-4031-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isotiocyanate (FITC) Conjugated Anti-mouse KIT (CD117; clone 2B8)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-1171-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>F79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giemsa Stain Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>GS-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>May-Grunwald Stain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>MG-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell 6 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35 3046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX60 Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus Tissue Embedding Medium</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>23-021-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Conjugated IgG Armenian Hamster Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-4888-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered-Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phycoerythrin (PE) Conjugated Anti-mouse FceRIa (clone MAR-1)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-5898-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide Staining Solution</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-6990-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-3</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>213-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranin-o Certified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T25 25 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T75 75 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue 1 % Aqueous</td>
			<td>LabChem-Inc</td>
			<td>LC26165-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse SCF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice

मस्त कोशिकाएं (एमसी) हेमेटोपोइटिक कोशिकाएं हैं जो विभिन्न ऊतकों में रहती हैं, और बाहरी वातावरण के संपर्क में आने वाली साइटों पर विशेष रूप से प्रचुर मात्रा में होती हैं, जैसे त्वचा, वायुमार्ग और गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट। सबसे अच्छा IgE में अपनी हानिकारक भूमिका के लिए जाना जाता है पर निर्भर एलर्जी प्रतिक्रियाओं, एमसी भी विष और बैक्टीरिया और परजीवी पर हमला करने के खिलाफ मेजबान रक्षा में महत्वपूर्ण खिलाड़ियों के रूप में उभरा है । एमसी फेनोटाइप और फ़ंक्शन को माइक्रोएनवायरमेंटल कारकों से प्रभावित किया जा सकता है जो शारीरिक स्थान के अनुसार भिन्न हो सकते हैं और/या प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के विकास के प्रकार या चरण के आधार पर । इस कारण से, हम और अन्य लोगों ने एमसी कार्यों में अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए इन विट्रो तरीकों पर वीवो दृष्टिकोण में पक्षपात किया है। यहां, हम माउस बोन मैरो-व्युत्पन्न सुसंस्कृत एमसी (बीएमसीएमसी) की पीढ़ी के लिए तरीकों का वर्णन करते हैं, आनुवंशिक रूप से एमसी की कमी वाले चूहों में उनके दत्तक हस्तांतरण, और विभिन्न शारीरिक स्थलों पर दत्तक रूप से स्थानांतरित एमसी की संख्या और वितरण का विश्लेषण। 'मास्ट सेलनॉक-इन' दृष्टिकोण नाम के इस विधि का उपयोग पिछले 30 वर्षों में वीवो मेंएमसी और एमसी-व्युत्पन्न उत्पादों के कार्यों का आकलन करने के लिए बड़े पैमाने पर किया गया है। हम हाल के वर्षों में विकसित किए गए वैकल्पिक दृष्टिकोणों के आलोक में इस विधि के फायदों और सीमाओं पर चर्चा करते हैं ।

'मास्ट सेलनॉक-इन'दृष्टिकोण का अवलोकन चित्र 1में दिखाया गया है, और इसमें बीएमसीएमसी की पीढ़ी शामिल है, एमसी-कमी वाले चूहों में आईपी, आईसीडी या यानी को शामिल किया जाना चाहिए (यदि प्रायोगिक डिजाइन ...

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Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

हम इन विट्रो व्युत्पन्न मास्ट कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं, मस्तूल कोशिकाओं की कमी वाले चूहों में उनका engraftment, और विभिन्न शारीरिक साइटों पर एनग्रेंफ्ट मस्तूल कोशिकाओं के फेनोटाइप, संख्या और वितरण का विश्लेषण। इस प्रोटोकॉल का उपयोग वीवो में मस्त कोशिकाओं के कार्यों का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।

'मस्त सेलनॉक-इन'चूहों का उपयोग कर वीवो में मस्त कोशिकाओं के कार्यों का विश्लेषण

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

सेल भाग्य का पालन<em&gt; ई. कोलाई</em&gt; फेज Lambda द्वारा संक्रमण के बाद

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग के प्रेरण और<em&gt; Vivo में</em&gt; टी सेल निगरानी एक MHC-मिलान murine मॉडल का उपयोग

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

एक कार्बनिक विलायक के इस्तेमाल के बिना Triclosan का प्रभाव: आरबीएल-2H3 मस्त सेल degranulation पर रासायनिक प्रभाव का आकलन करने के लिए एक microplate परख

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Investigating Mast Cell Secretory Granules; from Biosynthesis to Exocytosis

मस्तूल सेल स्रावी Granules की जांच कर; जैवसंश्लेषण से exocytosis के लिए

Mast Cells (MC) are secretory cells of the immune system that accomplish their physiological and pathological functions by releasing pre-formed and newly ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

आकलन रेटिना microglial phagocytic समारोह<em&gt; Vivo</em&gt; एक से फ्लो आधारित परख का उपयोग

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

मूत्रमार्ग के अलगाव-प्राप्त मस्तूल कोशिकाओं और उनके 2 सीए के साथ कार्यात्मक लक्षण वर्णन+-इमेजिंग और दानेदार परख

Mast cells (MCs), as a part of the immune system, play a key role in defending the host against several pathogens and in the initiation of the allergic ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

थाइमस-निर्भर और थाइमस-स्वतंत्र Immunoglobulin Isotype प्रतिक्रियाओं का प्रयोग चूहों में एंजाइम से जुड़े Immunosorbent परख का लक्षण वर्णन

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Generation of Knock-out Primary and Expanded Human NK Cells Using Cas9 Ribonucleoproteins

Cas9 Ribonucleoproteins का उपयोग करके नॉक-आउट प्राथमिक और विस्तारित मानव NK कोशिकाओं का निर्माण

CRISPR/Cas9 technology is accelerating genome engineering in many cell types, but so far, gene delivery and stable gene modification have been challenging ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

ग्लूकोज में आईएनकेटी कोशिकाओं की दत्तक इम्यूनोथेरेपी-6-फॉस्फेट Isomerase (G6PI)-प्रेरित आरए चूहों

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

चूहों में इन्फ्लूएंजा ए वायरस संक्रमण के दौरान टी कूप सहायक कोशिकाओं और अंकुरित केंद्र प्रतिक्रिया का मूल्यांकन

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...