Name: analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice
Uploaded: 2015-05-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice at JoVE.com

Н.Г. является получателем стипендий от французской "Фонд за Recherche Medicale FRM" и Филипп фонда; R.S. поддерживается Фондом Люсиль Паккард по охране здоровья детей и Стэнфордским номером UL1 R025744; P.S. поддерживается стипендией Макса Кейд фонда Макса Кейд и Австрийской академии наук и стипендией Шрёдингера Австрийского научного фонда (FWF): J3399-B21; S.J.G. признает поддержку со стороны Национальных институтов здравоохранения грантов U19 AI104209, NS 080062 и от программы исследований заболеваний, связанных с табаком в Калифорнийском университете; Л.Л.Р. признает поддержку со стороны Национального исследовательского фонда артрита (ANRF) и Национального института здравоохранения грант K99AI110645.

Все операции по уходу за животными и эксперименты проводились в соответствии с руководящими принципами Национальных институтов здравоохранения и с конкретным одобрением Институционального комитета по уходу за животными и использованию Стэнфордского университета.
1. П?...

Почти 30 лет после его первоначальногоописания 38, 'мачты ячейки стук в' подход продолжает предоставлять ценную информацию о том, что MCs может сделать или не может сделать in vivo. Функции МС долгое время считалось ограниченным их ролью в аллергии. Данные, генерируемые с помощь...

Тучные клетки (MCs) гематопоэтические клетки, которые возникают из плюрипотентных прародителейкостного мозга 1-3. После регрессии костного мозга, прародители MCs мигрируют в различные ткани, где они развиваются в зрелые MCs под влияниемместных факторов роста 1-3. Ткань-резидентОВ MCs стратегически расположены на хост-среды интерфейсов, таких как кожа, дыхательные пути и желудочно-кишечного тракта, где они ведут себя как первая линия обороны от внешнихоскорблений 3-6. MCs часто субклассифицированы на основе их "базовых" фенотипических характеристик и их анатомические местоположения. У мышей были описаны два типа MCs: "соединительной ткани типа" MCs (CTMCs) и слизистых MCs (MMCs)1-3,7,8. КТК часто расположены вокруг венуле и вблизи нервных волокон, и проживают в серозных полостей, в то время как MMCs занимают внутрипителенные места в кишечнике и слизистой оболочкедыхания 1-3.
Многочисленные методологии были применены для изучения биологических функций MCs9-13. Многие группы сосредоточились на подходах in vitro, используя либо клеточные линии (такие как человеческие линии MC HMC114 или LAD215,16), в пробирке производных MCs (например, человека периферическойкрови, полученныхMCs 17 , или мыши костного мозга полученных культурные MCs (BMCMCs)18, фетальной кожи полученных культурных MCs (FSCMCs)19 и брюшной клетки полученных MCs (PCMCs)или ex vivo изолированных MCs из различных анатомических сайтов. Все эти модели широко используются для изучения молекулярных деталей биологии MC, таких как сигнальные пути, участвующие в активации MC. Однако важным аспектом биологии MCs является то, что их фенотипические и функциональные характеристики(например,содержание цитоплазмической гранулы или реакция на различные раздражители) могут быть модулированы анатомическим расположением и микроокнироницией2,7. Так как точная смесь таких факторов, которые встречаются in vivo может быть трудно воспроизвести in vitro, мы выступаем за использование in vivo подходов, чтобы получить представление о MCsфункции 9.
Существует несколько штаммов мыши с генетическим дефицитом MC, таких как широко используемые WBB6F1-Kit W/W-v или C57BL/6- Kit W-sh/W-sh мышей. Эти мыши отсутствие выражения и / или активности KIT (CD117), рецептор для основного фактора роста MC фактор стволовых клеток (SCF)21,22. В результате, эти мыши имеют глубокий дефицит MC, но и имеют дополнительные фенотипические аномалии,связанные с их c- комплект мутаций (в WBB6F1-Kit W / W-V мышей) или последствия большой хромосомной инверсии, что приводит к снижению C-комплект выражения (в C57BL/6-Kit W-sh/W-sh мышей) 9,10,23. Совсем недавно, несколько штаммовмышей с c-комплект-независимый составной дефицит MC былизарегистрированы 24-26. Все эти мыши и некоторые дополнительные новые типы неодобоваемых MC-дефицитных мышей были недавнорассмотрены в деталях 9,10,13.
Здесь мы описываем методы генерации полученных из костного мозга мышей культурных MCs (BMCMCs), их приемную передачу в MC-дефицитных мышей, а также анализ чисел и распределения приемных переданных MCs на различных анатомических участках. Этот так называемый метод стука "мачтовых клеток" может быть использован для оценки функций MCs и MC-производных продуктов in vivo. Мы обсуждаем преимущества и ограничения этого метода в свете альтернативных подходов, которые были разработаны в последние годы.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Antibiotic-Antimycotic Solution</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>30-004-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 ml Syringe</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm x 10 mm Dish</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>430588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Polystyrene Round Bottom Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid Glacial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A35-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue 8GX</td>
			<td>Rowley Biochemical Danver</td>
			<td>33864-99-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra 6R Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD16/32 (clone 93) Purified</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-0161-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 ml TB Syringe</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 22G x1 (0.7 mm x 25 mm) Needles</td>
			<td>BD Precision Glide Needle</td>
			<td>205155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 25G 5/8 Needles</td>
			<td>BD Syringe</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 30G x1/2 Needles</td>
			<td>BD Precision Glide</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue MAX Jr, 15 ml Polypropylene Conical Tube</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C298-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal 60 Mounting Medium</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin3</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DakoCytomation pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>15-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E 7023-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum Heat Inactivated</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F4135-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Conjugated IgG2b K Rat Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-4031-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Isotiocyanate (FITC) Conjugated Anti-mouse KIT (CD117; clone 2B8)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>11-1171-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>F79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giemsa Stain Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>GS-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia</td>
			<td>Henry Schein Animal Health</td>
			<td>29405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>May-Grunwald Stain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>MG-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiwell 6 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35 3046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus BX60 Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast Plus Tissue Embedding Medium</td>
			<td>Fisher Brand</td>
			<td>23-021-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Conjugated IgG Armenian Hamster Isotype Control</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-4888-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered-Saline (PBS) 1x</td>
			<td>Corning cellgro</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phycoerythrin (PE) Conjugated Anti-mouse FceRIa (clone MAR-1)</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-5898-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide Staining Solution</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-6990-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse IL-3</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>213-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranin-o Certified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T25 25 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flasks T75 75 cm2</td>
			<td>Beckton Dickinson</td>
			<td>353110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine Blue 1 % Aqueous</td>
			<td>LabChem-Inc</td>
			<td>LC26165-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse SCF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-03</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the functions of mast cells in vivo using 'mast cell knock-in' mice

Тучные клетки (MCs) гематопоэтические клетки, которые находятся в различных тканях, и особенно обильные в местах, подверженных внешней среде, таких как кожа, дыхательные пути и желудочно-кишечного тракта. Наиболее известный за их вредную роль в IgE-зависимых аллергических реакций, MCs также стали важными игроками в принимающей обороны от яда и вторжения бактерий и паразитов. На фенотип и функцию MC могут влиять микрооконденциальные факторы, которые могут отличаться в зависимости от анатомиального расположения и/или в зависимости от типа или стадии развития иммунных реакций. По этой причине мы и другие люди отдают предпочтение подходам in vivo, а не методам in vitro, чтобы получить представление о функциях MC. Здесь мы описываем методы генерации мышей костного мозга, полученных культурных MCs (BMCMCs), их приемной передачи в генетически MC-дефицит мышей, а также анализ чисел и распределения приемных переданы MCs на различных анатомических участках. Этот метод, названныйподходом «в нокаута тучных клеток», широко используется в течение последних 30 лет для оценки функций MCs и MC-производных продуктов in vivo. Мы обсуждаем преимущества и ограничения этого метода в свете альтернативных подходов, которые были разработаны в последние годы.

Обзор ' мачтыячейки стук-в' подход показан на рисунке 1, и включает в себя генерацию BMCMCs, количество клеток, которые должны быть engrafted i.p., i.d. или i.v. в MC-дефицит мышей (число может быть разнообразным, если указано на основе экспериментальной конструкции) и интервал между engraftment ...

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice at JoVE.com

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Мы описываем метод генерации в пробирке производных тучных клеток, их привитие в мачтовых клеток дефицитных мышей, а также анализ фенотипа, номера и распределение привитых тучных клеток на различных анатомических участках. Этот протокол может быть использован для оценки функций тучных клеток in vivo.

Анализ функций тучных клеток In Vivo с использованием 'Mast Cell Knock-in'Mice

Mast cells (MCs) are hematopoietic cells which reside in various tissues, and are especially abundant at sites exposed to the external environment, such ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Analyzing the Functions of Mast Cells In Vivo Using 'Mast Cell Knock-in' Mice

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

После Cell-судьба<em&gt; E. палочки</em&gt; После заражения фагом лямбда

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Индукционная трансплантат против хозяина и<em&gt; В Vivo</em&gt; Т-клеток Мониторинг Использование MHC соответствием мышиной модели

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

Микропланшет анализа для оценки химического воздействия на RBL-2H3 дегрануляцию тучных клеток: Влияние триклозан без использования органического растворителя

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

Investigating Mast Cell Secretory Granules; from Biosynthesis to Exocytosis

Исследование тучных клеток секреторных гранул; от биосинтеза к экзоцитозу

Mast Cells (MC) are secretory cells of the immune system that accomplish their physiological and pathological functions by releasing pre-formed and newly ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Оценка сетчатке микроглии фагоцитарной функции<em&gt; В Vivo</em&gt; С использованием анализа проточной цитометрии на основе

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

Isolation of Peritoneum-derived Mast Cells and Their Functional Characterization with Ca2+-imaging and Degranulation Assays

Изоляция Брюшина производные тучных клеток и их функциональные характеристики с Ca2 +-изображений и дегрануляции анализов

Mast cells (MCs), as a part of the immune system, play a key role in defending the host against several pathogens and in the initiation of the allergic ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Характеристика тимус зависимых и тимус независимые иммуноглобулина изотипа ответов в мышей, используя энзим соединенный Assay иммуносорбента

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Generation of Knock-out Primary and Expanded Human NK Cells Using Cas9 Ribonucleoproteins

Поколение нокаут-основной и Расширенный человеческого НК-клеток с помощью Cas9 Ribonucleoproteins

CRISPR/Cas9 technology is accelerating genome engineering in many cell types, but so far, gene delivery and stable gene modification have been challenging ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Приемная иммунотерапия клеток iNKT в глюкозе-6-фосфатной исофазе (G6PI)-индуцированной РА мышей

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

Оценка T фолликулярных клеток-помощников и реакции гермального центра во время вирусной инфекции гриппа А у мышей

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...