Name: chick heart invasion assay for testing the invasiveness of cancer cells and the activity of potentially anti-invasive compounds
Uploaded: 2015-06-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds at JoVE.com

We thank Marleen De Meulemeester for demonstrating the assay technique in the video film. B. I. R. is a Postdoctoral Research Fellow of the Research Foundation &#8211; Flanders (FWO &#8211; Vlaanderen). L.M.M. is a recipient of an Emmanuel van der Schueren grant from the Flemish League against Cancer (Vlaamse Liga tegen Kanker).

<img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52792/52792fig1.jpg" /> Figura 1. Visão esquemática das diferentes etapas do ensaio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52792/52792fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 1. Preparação de pré-cultivados coração Fragmentos (PHF) <ol><li> Incubar um ovo fertilizado pintainho a 37 ° C durante 9 dias. Complete esta ...

<ol>
	<li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P., JR, B. e. r. t. i. n. o. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+cancer+invasion.">Molecular mechanisms of cancer invasion.</a> Encyclopedia of Cancer. 2, 1072-1083 (1997).</li><li>Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+study+of+the+invasion+of+malignant+C3H+mouse+fibroblasts+into+embryonic+chick+heart+in+vitro.">Methods of study of the invasion of malignant C3H mouse fibroblasts into embryonic chick heart in vitro.</a> Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 30 (1), 95-111 (1979).</li><li>Albini, A., Noonan, D. 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Biol. 1070, 12-35 (2014).</li><li>Wolff, E., Schneider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=La+transplantation+prolong&#233;e+d&#8217;un+sarcome+de+souris+sur+des+organes+embryonnaires+de+poulet+cultiv&#233;s+in+vitro.">La transplantation prolong&#233;e d&#8217;un sarcome de souris sur des organes embryonnaires de poulet cultiv&#233;s in vitro.</a> C.R. Seances Soc. Biol. Fil. 151 (7), 1291-1292 (1957).</li><li>Easty, G. C., Easty, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+culture+system+for+the+examination+of+tumor+invasion.">An organ culture system for the examination of tumor invasion.</a> Nature. 199, 1104-1105 (1963).</li><li>Schleich, A. B., Frick, M., Mayer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+invasive+growth+in+vitro.+Human+decidua+graviditatis+confronted+with+established+human+cell+lines+and+primary+human+explants.">Patterns of invasive growth in vitro. Human decidua graviditatis confronted with established human cell lines and primary human explants.</a> J. Natl. Cancer Inst. 56 (2), 221-237 (1976).</li><li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+In+ovo+CAM-assay+as+a+Xenograftodel+for+Sarcoma.">The In ovo CAM-assay as a Xenograftodel for Sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522 (2013).</li><li>Bracke, M. E., Van Larebeke, N. A., Vyncke, B. M., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+modulates+both+invasion+and+plasma+membrane+ruffling+of+MCF-7+human+mammary+carcinoma+cells+in+vitro.">Retinoic acid modulates both invasion and plasma membrane ruffling of MCF-7 human mammary carcinoma cells in vitro.</a> Br. J. Cancer. 63 (6), 867-872 (1991).</li><li>Vermeulen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+from+the+noninvasive+to+the+invasive+phenotype+and+loss+of+alpha-catenin+in+human+colon+cancer+cells.">Transition from the noninvasive to the invasive phenotype and loss of alpha-catenin in human colon cancer cells.</a> Cancer Res. 55 (20), 4722-4728 (1995).</li><li>Parmar, V. 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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+of+spontaneous+mammary+carcinomas+in+mice.+V.+Acquired+tumor+resistance+and+enhancement+in+strain+A+mice+infected+with+mammary+tumor+virus.">Immunology of spontaneous mammary carcinomas in mice. V. Acquired tumor resistance and enhancement in strain A mice infected with mammary tumor virus.</a> Cancer Res. 26 (8), 1787-1800 (1966).</li><li>Katritzky, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=QSAR+modeling+of+anti-invasive+activity+of+organic+compounds+using+structural+descriptors.">QSAR modeling of anti-invasive activity of organic compounds using structural descriptors.</a> Bioorg. Med. Chem. 14 (20), 6933-6939 (2006).</li><li>McKinnell, R. G., Bruyneel, E. A., Mareel, M. M., Seppanen, E. D., Mekala, P. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+temperature+on+invasion+of+MO4+mouse+fibrosarcoma+cells+in+organ+culture.">Effect of temperature on invasion of MO4 mouse fibrosarcoma cells in organ culture.</a> Clin. Exp. Metastasis. 2 (2), 107-125 (1984).</li><li>Laerum, O. D., Steinsvag, S., Bjerkvig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+and+tissue+culture+of+the+central+nervous+system:+recent+developments+and+current+applications.">Cell and tissue culture of the central nervous system: recent developments and current applications.</a> Acta Neurol. Scand. 72 (6), 529-549 (1985).</li><li>Schroyens, W., Mareel, M. M., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+invasiveness+of+human+bladder+cancer+from+cell+lines+and+biopsy+specimens.">In vitro invasiveness of human bladder cancer from cell lines and biopsy specimens.</a> Clin. Exp. Metastasis. 1 (2), 153-162 (1983).</li><li>Mareel, M. M., De Bruyne, G. K., Vandesande, F., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+study+of+embryonic+chick+heart+invaded+by+malignant+cells+in+three+dimensional+culture.">Immunohistochemical study of embryonic chick heart invaded by malignant cells in three dimensional culture.</a> Invasion Metastasis. 1 (3), 195-204 (1981).</li><li>Bjerkvig, R., Laerum, O. D., Mella, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+cell+interactions+with+fetal+rat+brain+aggregates+in+vitro+and+with+brain+tissue+in+vivo.">Glioma cell interactions with fetal rat brain aggregates in vitro and with brain tissue in vivo.</a> Cancer Res. 46 (8), 4071-4079 (1986).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confrontation+of+an+invasive+(MO4)+and+a+non-invasive+(MDCK)+cell+line+with+embryonic+chick+heart+fragments+in+serum-free+culture+media.">Confrontation of an invasive (MO4) and a non-invasive (MDCK) cell line with embryonic chick heart fragments in serum-free culture media.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22 (9), 508-514 (1986).</li><li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Storme, G. A., Grundmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tumor+spread:+a+brief+overview.">Mechanisms of tumor spread: a brief overview.</a> Cancer Campaign. 9: The Cancer Patient. , 59-64 (1985).</li><li>De Neve, W. J., Storme, G. A., De Bruyne, G. K., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+image+analysis+system+for+the+quantification+of+invasion+in+vitro.">An image analysis system for the quantification of invasion in vitro.</a> Clin. Exp. Metast. 3 (2), 87-101 (1985).</li><li>Smolle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evaluation+of+melanoma+cell+invasion+in+three-dimensional+confrontation+cultures+in+vitro+using+automated+image+analysis.">Quantitative evaluation of melanoma cell invasion in three-dimensional confrontation cultures in vitro using automated image analysis.</a> J. Invest. Dermatol. 94 (1), 114-119 (1990).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=flavonoid+effect+on+tumor+invasion+and+metastasis.">flavonoid effect on tumor invasion and metastasis.</a> Food Technol. 48 (11), 121-124 (1994).</li><li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+tangeretin+on+tamoxifen&#8217;s+therapeutic+benefit+in+mammary+cancer.">The influence of tangeretin on tamoxifen&#8217;s therapeutic benefit in mammary cancer.</a> J. Natl. Cancer Inst. 91 (4), 354-359 (1999).</li></ol>

Durante a preparação de PHF, os fragmentos não pode ficar em suspensão, mas aderir à parede do vaso; isso pode ser superado através do aumento do volume do meio de cultura. Se o número de PHF é muito baixo e o seu tamanho é muito grande, diminuir o volume do meio de cultura. A falha das células de teste para agregar pode ser devido a flutuações na temperatura ou a infecção microbiana. Alternativamente, uma incapacidade de agregado pode ser uma característica intrínseca das células. Durante a fixação d...

Invasão é a marca de tumores malignos. Esta actividade não só conduz à destruição dos tecidos circundantes, mas também está implicada na formação de metástases. Uma vez que doentes com cancro morrem de invasão e metástase, e tratamentos anti-invasivos eficientes são ainda escassos, ensaios de laboratório que simulam a invasão de células tumorais têm sido desenvolvidos. O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudar os efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. A lógica por trás da utilização do ensaio é o próprio conceito de que os tumores são ecossistemas em que as células neoplásicas interagem de forma contínua com o seu estroma (células hospedeiras e de matriz extracelular), e que por elas invasão interacções moleculares é uma sintonia fina. Assim, no ensaio de células de tumor são confrontados com livifragmentos ng embrionárias coração pintainho 2, que servem não só como substrato para a invasão de células tumorais, mas também como uma fonte de diferentes tipos de células do estroma e de elementos de matriz. O coração de galinha contém os miócitos, os fibroblastos e as células endoteliais, e a matriz extracelular é composta de laminina, fibronectina e diferentes tipos de colagénio. Desta forma, a técnica de cultura de órgãos tridimensional abrange muitas interacções celulares e moleculares envolvidas na invasão de tumores de doentes. A principal vantagem do ensaio de coração de galinha é a implementação de efeitos estromais. Este aspecto é mais completa do que em outros ensaios de invasão in vitro que se baseiam na invasão de células tumorais em géis não vivos compostos de membrana basal 3 ou 4 moléculas de matriz intersticial. O conceito de confronto entre as células tumorais eo tecido hospedeiro vivo normal, como encontrados em experiências de cultura de órgãos foi apresentado por váriosautores incluindo Wolff e Schneider em França 5, Easty e Easty no Reino Unido 6 e 7 Schleich na Alemanha. Duas vantagens técnicas do ensaio de invasão coração pintainho em relação aos métodos citados é que o volume dos fragmentos podem ser facilmente padronizados, e que eles permanecem contráctil, o que permite a monitorização da integridade funcional durante a cultura de órgãos. Além disso, são preferidos os embriões de aves, porque eles podem ser facilmente dissecado a partir do conteúdo do ovo esterilizada. O ensaio tem semelhança conceptual para o ensaio de membrana pintainho chorioallantois 8, oferecendo um complexo do estroma circundante para as células tumorais. O ensaio tem sido aplicado com sucesso para distinguir entre variantes de células invasivas e não invasivas dos mesmos tumores humanos, tais como na MCF-7 (mamária) 9 e HCT-8 (do cólon) 10 famílias de linhas celulares. A técnica é útil para testar compostos potencialmente anti-invasivas bem <sup&gt; 11,12. Como explicado mais adiante, que pode ser usado para o estabelecimento de relações de moléculas orgânicas pequenas estrutura-actividade. O ensaio, no entanto, não levam em conta a contribuição de células imunológicas a invasão câncer. Deve ser salientado que a técnica não pode ser considerada como um sistema de análise de alto rendimento, por causa do elevado número de manipulações, o número limitado de passos do ensaio (máximo de 30 culturas) e o tempo de rotação (cerca de 1 mês).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s salt solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>CEO123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-agar</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>214010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar</td>
			<td>VWR</td>
			<td>103157P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA : albumin from bovine serum, cohn V fract.</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM-Rega 3</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td>19993013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gyrotory shakers</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>G10 and G33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks 50 ml</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>92717</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Petri dishes</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>68516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iridectomy scissors</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>11-0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Macroscope with calibrated ocular grid</td>
			<td>Wild</td>
			<td>157702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin wax</td>
			<td>International Medical products</td>
			<td>8599956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>230251-25g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris&#39; hematoxylin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslipping resin (Tissue-Tek)</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin melting apparatus</td>
			<td>GFL</td>
			<td>1052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome for paraffin sectioning</td>
			<td>Reichert</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stppers for Erlemeyer flasks with gas in- and outlets</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>2602421 and 260243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminobenzidine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REAX rocking table</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>54131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well tissue dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>NUNC142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophtalmological enucleation spoon</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>16-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp forceps</td>
			<td>Rumex</td>
			<td>4-111T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>Nickel-Electro LTD</td>
			<td>7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erlenmeyer flasks 5 ml</td>
			<td>Novolab</td>
			<td>211901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides washed and degreased</td>
			<td>International Medical products</td>
			<td>8613908</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chick heart invasion assay for testing the invasiveness of cancer cells and the activity of potentially anti-invasive compounds

O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudo dos efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. As células cancerosas - quer como agregados ou células individuais - são confrontados com fragmentos de coração de galinha embrionário. Após cultura de órgãos em suspensão durante alguns dias ou semanas que confrontam as culturas são fixadas e incluídas em parafina para análise histológica. A interacção tridimensional entre as células cancerosas e o tecido normal é então reconstruído a partir de cortes seriados corados com hematoxilina-eosina ou após coloração imuno-histoquímica para epitopos no tecido cardíaco ou as células cancerosas que confrontam. O ensaio é consistente com o conceito recente que a invasão do câncer é o resultado de interações moleculares entre as células cancerosas e seus elementos hospedeiros do estroma vizinho (miofibroblastos, endothElial células, componentes da matriz extracelular, etc.). Aqui, neste ambiente estromal é oferecido para as células cancerosas como um fragmento de tecido vivo. Aspectos de apoio para a relevância do ensaio são múltiplas. Invasão no ensaio está de acordo com os critérios de invasão do câncer: ocupação progressiva e substituição no tempo e no espaço do tecido hospedeiro, e capacidade de invasão e não-invasivo in vivo das células que confrontam geralmente se correlaciona com o resultado do ensaio. Além disso, o padrão de invasão de células in vivo, tal como definido por patologistas, reflecte-se nas imagens histológicas no ensaio. A análise quantitativa relação estrutura-actividade (QSAR) dos resultados obtidos com vários compostos orgânicos congéneres potencialmente anti-invasivos permitiu o estudo das relações estrutura-actividade de flavonóides e calconas, e conhecidas drogas anti-metastáticos utilizados na clínica (por exemplo, inibidores de microtúbulos ) inibir a invasão no ensaio bem. However, o ensaio não leva em conta as contribuições imunológicas a invasão câncer.

Os cortes histológicos tal como apresentado na Figura 5 mostra o resultado final de um número de ensaios bem sucedidos. A histologia de som das culturas indica as células viáveis ​​e permite interpretar a interacção entre as células de tumor e tecido normal. Além disso, qualquer reacção imunitária do tecido normal pode ser observado, o que confirma a idade correcta dos embriões de galinha utilizados, por exemplo, antes de o sistema de rejeição imunitária é desenvolvida. Não há bactérias v...

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Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a invasão das células tumorais em fragmentos de tecido normal vivendo em três dimensões. Esta técnica de cultura de órgãos é aplicada principalmente para testar drogas potencialmente anti-invasivos in vitro.

Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos

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Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Tridimensional (3D) Tumor Esferóide Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

Utilização do ensaio de formação de colónia agar mole para identificar inibidores de tumorigenicidade em células de cancro da mama

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Estudar o cancro do pâncreas Stem características celulares para desenvolver estratégias Novo tratamento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Isolamento e propagação de células tumorais circulantes de um cancro do modelo do rato

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

A desnervação cirúrgica cutânea: um método para testar o requisito para os nervos no mouse modelos de doença de pele

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...