Name: temporal tracking of cell cycle progression using flow cytometry without the need for synchronization
Uploaded: 2015-08-16T13:00:00
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The work was funded by the Leukemia and Lymphoma Society of the USA (6105-08), a Cancer Council NSW grant (13-02), an NHMRC Senior Research Fellowship (LJB) (1042305) and project grant (1041614).

यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल तीव्र लिम्फोब्लासटिक ल्यूकेमिया सेल लाइन NALM6 का उपयोग करता है, लेकिन अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए लागू किया जा सकता है। 1. समाधान और अभिकर्मकों <ol><li> पूरा RPMI <ol><li> 56 मिलीली?...

<ol>
	<li>Banfalvi, G., Banfalvi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods Mol Biol. 761, 1-23 (2011).</li><li>Sakaue-Sawano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+spatiotemporal+dynamics+of+multicellular+cell-cycle+progression.">Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression.</a> Cell. 132, 487-498 (2008).</li><li>Harper, J. W., Elledge, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DNA+damage+response:+ten+years+after.">The DNA damage response: ten years after.</a> Molecular Cell. 28, 739-745 (2007).</li><li>Latt, S. A., George, Y. S., Gray, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+analysis+of+bromodeoxyuridine-substituted+cells+stained+with+33258+Hoechst.">Flow cytometric analysis of bromodeoxyuridine-substituted cells stained with 33258 Hoechst.</a> The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 25, 927-934 (1977).</li><li>Gratzner, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+to+5-bromo-+and+5-iododeoxyuridine:+A+new+reagent+for+detection+of+DNA+replication.">Monoclonal antibody to 5-bromo- and 5-iododeoxyuridine: A new reagent for detection of DNA replication.</a> Science. 218, 474-475 (1982).</li><li>Carayon, P., Bord, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+DNA-replicating+lymphocyte+subsets+using+a+new+method+to+label+the+bromo-deoxyuridine+incorporated+into+the+DNA.">Identification of DNA-replicating lymphocyte subsets using a new method to label the bromo-deoxyuridine incorporated into the DNA.</a> Journal of Immunological Methods. 147, 225-230 (1992).</li><li>Gonchoroff, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S-phase+detection+with+an+antibody+to+bromodeoxyuridine.+Role+of+DNase+pretreatment.">S-phase detection with an antibody to bromodeoxyuridine. Role of DNase pretreatment.</a> Journal of Immunological Methods. 93, 97-101 (1986).</li><li>Rabinovitch, P. S., Torres, R. M., Engel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+cell+cycle+analysis+and+two-color+surface+immunofluorescence+using+7-amino-actinomycin+D+and+single+laser+excitation:+applications+to+study+of+cell+activation+and+the+cell+cycle+of+murine+Ly-1+B+cells.">Simultaneous cell cycle analysis and two-color surface immunofluorescence using 7-amino-actinomycin D and single laser excitation: applications to study of cell activation and the cell cycle of murine Ly-1 B cells.</a> Journal of Immunology. 136, 2769-2775 (1986).</li><li>Saunders, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAD001+(everolimus)+induces+dose-dependent+changes+to+cell+cycle+regulation+and+modifies+the+cell+cycle+response+to+vincristine.">RAD001 (everolimus) induces dose-dependent changes to cell cycle regulation and modifies the cell cycle response to vincristine.</a> Oncogene. 32, 4789-4797 (2013).</li><li>Hendzel, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis-specific+phosphorylation+of+histone+H3+initiates+primarily+within+pericentromeric+heterochromatin+during+G2+and+spreads+in+an+ordered+fashion+coincident+with+mitotic+chromosome+condensation.">Mitosis-specific phosphorylation of histone H3 initiates primarily within pericentromeric heterochromatin during G2 and spreads in an ordered fashion coincident with mitotic chromosome condensation.</a> Chromosoma. 106, 348-360 (1997).</li><li>Draetta, G., Beach, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+cdc2+protein+kinase+during+mitosis+in+human+cells:+cell+cycle-dependent+phosphorylation+and+subunit+rearrangement.">Activation of cdc2 protein kinase during mitosis in human cells: cell cycle-dependent phosphorylation and subunit rearrangement.</a> Cell. 54, 17-26 (1988).</li><li>Saunders, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAD001+(everolimus)+induces+dose-dependent+changes+to+cell+cycle+regulation+and+modifies+the+cell+cycle+response+to+vincristine.">RAD001 (everolimus) induces dose-dependent changes to cell cycle regulation and modifies the cell cycle response to vincristine.</a> Oncogene. , (2012).</li><li>Knudsen, R. C., Ahmed, A. A., Sell, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+microassay+for+lymphotoxin+using+microculture+plates+and+the+multiple+automated+sample+harvester.">An in vitro microassay for lymphotoxin using microculture plates and the multiple automated sample harvester.</a> Journal of Immunological Methods. 5, 55-63 (1974).</li><li>Beck, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+kinetics+of+perturbed+cell+populations+determined+by+the+bromodeoxyuridine-33258+technique:+radiotoxic+effects+of+incorporated+[3H]thymidine.">Proliferation kinetics of perturbed cell populations determined by the bromodeoxyuridine-33258 technique: radiotoxic effects of incorporated [3H]thymidine.</a> Cytometry. 2, 170-174 (1981).</li><li>Miller, M. J., Wei, S. H., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+imaging+of+lymphocyte+motility+and+antigen+response+in+intact+lymph+node.">Two-photon imaging of lymphocyte motility and antigen response in intact lymph node.</a> Science. 296, 1869-1873 (2002).</li><li>Collins, J. M., Berry, D. E., Bagwell, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+rates+of+DNA+synthesis+during+the+S+phase+of+log+phase+HeLa+S3,+WI-38,+and+2RA+cells.">Different rates of DNA synthesis during the S phase of log phase HeLa S3, WI-38, and 2RA cells.</a> Journal of Biological Chemistry. 255, 3585-3590 (1980).</li><li>Schwarting, R., Gerdes, J., Niehus, J., Jaeschke, L., Stein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+growth+fraction+in+cell+suspensions+by+flow+cytometry+using+the+monoclonal+antibody+Ki-67.">Determination of the growth fraction in cell suspensions by flow cytometry using the monoclonal antibody Ki-67.</a> Journal of Immunological Methods. 90, 65-70 (1986).</li><li>Danova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle-related+proteins:+a+flow+cytofluorometric+study+in+human+tumors.">Cell cycle-related proteins: a flow cytofluorometric study in human tumors.</a> Biology of the Cell. 64, 23-28 (1988).</li><li>Juan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+H3+phosphorylation+and+expression+of+cyclins+A+and+B1+measured+in+individual+cells+during+their+progression+through+G2+and+mitosis.">Histone H3 phosphorylation and expression of cyclins A and B1 measured in individual cells during their progression through G2 and mitosis.</a> Cytometry. 32, 71-77 (1998).</li><li>Langan, T. J., Chou, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synchronization+of+mammalian+cell+cultures+by+serum+deprivation.">Synchronization of mammalian cell cultures by serum deprivation.</a> Methods in Molecular Biology. 761, 75-83 (2011).</li><li>Kues, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+cycle+synchronization+of+porcine+fetal+fibroblasts:+effects+of+serum+deprivation+and+reversible+cell+cycle+inhibitors.">Cell cycle synchronization of porcine fetal fibroblasts: effects of serum deprivation and reversible cell cycle inhibitors.</a> Biology of Reproduction. 62, 412-419 (2000).</li><li>Urbani, L., Sherwood, S. W., Schimke, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+nuclear+and+cytoplasmic+cell+cycle+progression+by+drugs+employed+in+cell+synchronization.">Dissociation of nuclear and cytoplasmic cell cycle progression by drugs employed in cell synchronization.</a> Experimental Cell Research. 219, 159-168 (1995).</li></ol>

कोशिका चक्र विश्लेषण करने की क्षमता कैंसर जीव विज्ञान की समझ और सेल प्रसार और विकास को प्रभावित है कि दोनों दवाओं और जीन की कार्रवाई की व्यवस्था के लिए महत्वपूर्ण है। कथित तौर पर सेल प्रसार उपाय है कि as...

कोशिका चक्र प्रगति के दौरान सेल चक्र सुविधाओं और कोशिकाओं में होने वाले परिवर्तनों का आकलन जीव विज्ञान, विशेष रूप से कैंसर जीव विज्ञान के कई पहलुओं को समझने के लिए मौलिक है। कैंसर के उपचार के लिए विकास में कई एजेंटों कोशिका चक्र प्रगति पर गहरा प्रभाव पड़ता है या सेल चक्र निर्भर-तंत्र के माध्यम से कोशिका मृत्यु प्रेरित। सेल चक्र के एक विशेष चरण में सेल चक्र गतिशीलता या कोशिकाओं का अध्ययन करने के क्रम में, यह कोशिकाओं को सिंक्रनाइज़ करने के लिए सामान्य है। हालांकि तुल्यकालन तरीकों के संभावित परिणामों को प्राप्त confounding, अध्ययन किया जा रहा कोशिकाओं पर हानिकारक प्रभाव हो सकता है। 1 समय के साथ एकल कक्षों में कोशिका चक्र प्रगति की हाल ही में कोशिकाओं चक्र की विशेष चरणों में ही मौजूद हैं कि fluorescently टैग प्रोटीन के उपयोग की अनुमति दी है विश्लेषण 2, हालांकि कोशिकाओं आनुवंशिक रूप से इस पढ़ा जा सकता है, जहां सिस्टम के लिए उनके उपयोग को सीमित करने के लिए, निम्न टैग प्रोटीन व्यक्त करने के लिए चालाकी से किया जा करने की आवश्यकता के लिए अध्ययन किया जाily हासिल की। संश्लेषण (एस) चरण, डीएनए दोहराया और पिंजरे का बँटवारा (एम) जहां कोशिका विभाजन जगह लेता कहां है: सेल चक्र दो सक्रिय चरणों के होते हैं। इन चरणों तीन अंतराल के चरणों, जी 0, जी 1 और 2 जी से अलग हो रहे हैं। कोशिकाओं के आकार में पूर्व सेल के विकास के डीएनए प्रतिकृति के पूरा होने के बीच है, लेकिन कोशिका विभाजन से पहले जारी है जहां डीएनए प्रतिकृति और जी 2 को बढ़ाने के लिए जहां जी 0 या निष्क्रियता है, कोशिका चक्र छोड़ दिया है, जहां एक आराम चरण है, जी 1 है। सेल चक्र के माध्यम से प्रगति चौकियों की संख्या से नियंत्रित किया जाता है। पर्यावरण की स्थिति डीएनए संश्लेषण का समर्थन नहीं कर रहे हैं और एस चरण में प्रवेश को रोकता है जब जी 1 चौकी सक्रिय है। इंट्रा-एस चरण चौकी या देरी ठप प्रतिकृति कांटे में हो सकता है कि डीएनए की क्षति से चालू किया जा सकता है। क्षति जी 2 तब पता चला है कि अगर जी 2 के दौरान दोहराया डीएनए की निष्ठा की पुष्टि की और है </उप&gt; चौकी विभाजन सेल डीएनए की मरम्मत से पहले अनुमति देने सक्रिय है। पिंजरे का बँटवारा दौरान एक अंतिम जांच की चौकी है कि कोशिकाओं के विभाजन को सफलतापूर्वक पूरा किया जा सकता है ताकि क्रोमेटिडों सही ढंग से mitotic प्लेट पर गठबंधन किया गया है कि यह सुनिश्चित करता है। इन चौकियों के 3 एक्टिवेशन सामान्यतः सेल आबादी सिंक्रनाइज़ करने के लिए प्रयोग किया जाता है। सेल चक्र चौकियों कारकों में से एक नंबर के द्वारा लेकिन सबसे आम डीएनए की क्षति का पता लगाने है कैंसर जीव विज्ञान में सक्रिय किया जा सकता है। डीएनए की क्षति की प्रतिक्रिया (एटीआर) से संबंधित PI3-kinase की तरह kinases गतिभंग telangiectasia और Rad3 द्वारा शुरू की और गतिभंग telangiectasia (एटीएम) क्रमश: नीचे की ओर प्रेरक kinases Chk1 और Chk2 को सक्रिय कि उत्परिवर्तित है। 3 घटनाओं की एक श्रृंखला ठप सहित Chk1 सक्रिय हो जाता है प्रतिकृति कांटे, डीएनए crosslinks, और पराबैंगनी विकिरण क्षति Chk2 मुख्य रूप से डबल कतरा टूटता द्वारा सक्रिय किया जाता है। सेल चक्र मैं की लंबाई पर बदल स्थितियों के प्रभाव के अध्ययन के लिए सामान्य विधिसेल चक्र के एक विशेष चरण में कोशिकाओं को सिंक्रनाइज़ करने के लिए। 1 यह कई तरीके के माध्यम से हासिल किया जा सकता है। प्रकोष्ठों शारीरिक रूप से आकार, घनत्व, पक्ष तितर बितर (विघटन), और कोशिका की सतह अभिव्यक्ति मार्करों के आधार पर अलग किया जा सकता है। अधिक व्यावहारिक, कोशिकाओं रासायनिक तरीकों से सिंक्रनाइज़ किया जा सकता है। ऐसे thymidine, hydroxyurea और साइटोसिन arabinoside के रूप में कई एजेंटों एजेंटों को हटा रहे हैं के बाद साइकिल चलाना जारी रखने के लिए जो एस चरण में कोशिकाओं का एक संग्रह में जिसके परिणामस्वरूप सेल चक्र के एस चरण में डीएनए संश्लेषण को बाधित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। या एम चरण डीएनए सामग्री - प्रकोष्ठों एक जी 2 के साथ mitotic धुरी के गठन, गिरफ्तारी को रोकता है जो nocodazole, के साथ इलाज किया। जी 0 चरण में कोशिकाओं के संचय में संस्कृति के माध्यम परिणामों से सीरम का उन्मूलन। संस्कृति सीरम भीतर पोषक तत्वों की पुन: इसके अलावा कोशिकाओं के सामान्य साइकिल चलाना फिर से शुरू होता है। हालांकि, इन तुल्यकालन तरीकों के सभी कोशिकाओं के सामान्य साइकिल चलाना और विकास के साथ हस्तक्षेप और resul कर सकते हैंमहत्वपूर्ण कोशिका मृत्यु में टी। तीव्र लिम्फोब्लासटिक ल्यूकेमिया कोशिकाओं के तुल्यकालन विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है और इन कोशिकाओं आनुवंशिक हेरफेर करने के लिए उत्तरदायी नहीं हैं। यहाँ वर्णित विधि सेल चक्र की गतिशीलता के आकलन और पारंपरिक तुल्यकालन या आनुवंशिक संशोधन के बिना सेल चक्र की विशेष चरणों में कोशिकाओं के अध्ययन परमिट। इस पद्धति का भी आनुवंशिक संशोधन और पारंपरिक तुल्यकालन प्रक्रियाओं को आसानी से हासिल नहीं कर रहे हैं, जहां अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए उपयोगी हो सकता है। विधि कोशिकाओं की छोटी अवधि के विकास और प्रसार पर बहुत कम प्रभाव पड़ता है जो bromodeoxyuridine (BrdU) निगमन, की लंबे समय की स्थापना के उपयोग पर आधारित है। 4 स्थापित BrdU के प्रोटोकॉल एस चरण के दौरान नए संश्लेषित डीएनए में BrdU के समावेश का लाभ उठा । यह स्थायी रूप से BrdU के प्रदर्शन के दौरान एस चरण में होने के रूप में कोशिकाओं के निशान। इस आबादी BrdU के incorpor के लिए धुंधला द्वारा बाद में समय बिंदुओं पर पहचाना जा सकता हैसमझना और इस तरह पालन किया है और कोशिका चक्र पारगमन पर दवा प्रभाव के अध्ययन की अनुमति देने के समय के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है कि एक सिंक्रनाइज़ जनसंख्या के रूप में काम करते हैं। BrdU आमतौर पर DNase या एसिड इलाज के बाद हासिल की है, पूर्व एंटीबॉडी धुंधला को उजागर करने की जरूरत है। 6,7 शामिल किया BrdU के अतिरिक्त मार्करों के शामिल किए जाने के लिए सक्षम बनाता है पता लगाने के लिए प्रवाह cytometry का उपयोग। सबसे महत्वपूर्ण अध्ययन के शुरू में एस चरण में थे कि कोशिकाओं के कोशिका चक्र चरण वितरण के आकलन को सक्षम करने, डीएनए सामग्री को मापने के लिए रंगों का इस्तेमाल होता है। 8 इसके अलावा अतिरिक्त सतह या intracellular एंटीजन का भी अध्ययन किया जा सकता है। 9 इन ऐसे Ki67 के रूप में सेल चक्र की घटनाओं से संबंधित हैं या इस तरह के cleaved कस्पासे 3 की तरह एपोप्टोसिस मार्कर के रूप में करने के लिए असंबंधित प्रतीत होता है सेल सुविधाओं हो सकता है। संभावित अनुप्रयोगों अन्वेषक की कल्पना द्वारा सीमित हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APC BrdU Flow Kit</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552598</td>
			<td>Contains BrdU antibody, 7-AAD and BD Cytofix/Cytoperm 
			Buffer (referred to as Fixation Buffer)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytoperm Permeabilization Buffer Plus</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561651</td>
			<td>Referred to as Permeabilization buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Perm/Wash Buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554723</td>
			<td>Referred to as Wash buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D-4513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon 12 x 75-mm FACS tubes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Pharmingen Stain Buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR FORTESSA flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>FORTESSA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>P2, P20, P100, P1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 w/o L-Gln 500 ml</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-167F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-512F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>FisherBiotec</td>
			<td>FBS-7100113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7513-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-Bromo-2&#8242;-deoxyuridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B5002-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon TC 150cm2 vented Flasks</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>355001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 25mL</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>760180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aersol Pipettes 200&#181;L</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>24700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aersol Pipettes 1mL</td>
			<td>Interpath</td>
			<td>24800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Spintron</td>
			<td>GT-175R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>C 150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AF488 anti-Histone H3 Phospho (Ser10) Antibody</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td>9708S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td>2197S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td><a name="RANGE!C23">2348S</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NALM6&#160;</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>ACC-128</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

temporal tracking of cell cycle progression using flow cytometry without the need for synchronization

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell synchronization can be difficult for many cell systems. Standard practice is to block cell cycle progression at a specific stage and then release the accumulated cells producing a wave of cells progressing through the cycle in unison. However, some cell types find this block toxic resulting in abnormal cell cycling, or even mass death. Bromodeoxyuridine (BrdU) uptake can be used to track the cell cycle stage of individual cells. Cells incorporate this synthetic thymidine analog, while synthesizing new DNA during S phase. By providing BrdU for a brief period it is possible to mark a pool of cells that were in S phase while the BrdU was present. These cells can then be tracked through the remainder of the cell cycle and into the next round of replication, permitting the duration of the cell cycle phases to be determined without the need to induce a potentially toxic cell cycle block. It is also possible to determine and correlate the expression of both internal and external proteins during subsequent stages of the cell cycle. These can be used to further refine the assignment of cell cycle stage or assess effects on other cellular functions such as checkpoint activation or cell death.

इस पद्धति के बारे में जानकारी की एक सीमा प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। कुछ अनुप्रयोगों यहाँ रेखांकित कर रहे हैं। सेल चक्र की अवधि का आकलन सेल चक्र के माध्यम से पार?...

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Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

इस प्रोटोकॉल के समय में एक विशिष्ट बिंदु पर एस चरण में थे कि कोशिकाओं के अस्थायी नज़र रखने की अनुमति देने के लिए bromodeoxyuridine (BrdU) तेज के उपयोग का वर्णन। डीएनए रंगों और एंटीबॉडी लेबलिंग के अलावा बाद में समय पर एस चरण कोशिकाओं के भाग्य का विस्तृत विश्लेषण की सुविधा।

तुल्यकालन के लिए आवश्यकता के बिना फ्लो का प्रयोग कोशिका चक्र प्रगति के टेम्पोरल ट्रैकिंग

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

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Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Combining Mitotic Cell Synchronization and High Resolution Confocal Microscopy to Study the Role of Multifunctional Cell Cycle Proteins During Mitosis

बँटवारा के दौरान कार्यात्मक कोशिका चक्र प्रोटीन की भूमिका का अध्ययन करने के लिए Mitotic सेल तुल्यकालन और उच्च संकल्प फोकल माइक्रोस्कोप के संयोजन

Study of the various regulatory events of the cell cycle in a phase-dependent manner provides a clear understanding about cell growth and division. The ...