Name: spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

De auteurs willen graag Dr Brent Harris bedanken voor het verstrekken van kritische herziening van het manuscript. Deze studies werden uitgevoerd aan de Lombardi Comprehensive Cancer Center Histopathologie &amp; Tissue gedeelde bron die wordt mede ondersteund door NIH / NCI subsidie ​​P30-CA051008. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en niet noodzakelijkerwijs het officiële standpunt van het National Cancer Institute en de National Institutes of Health.

1. De bouw van The Spot <ol><li> Voeg 50 mg van runderserumalbumine (BSA) tot 1 ml weefsel markeerinrichting kleurstof in een 15 ml conische buis of 2 ml microcentrifugebuis en vortex gedurende 1 minuut of totdat het volledig opgelost. Opmerking: Voor dit protocol, gebruiken biochemische Grade BSA. Terwijl andere kwaliteiten en zuiverheid zijn niet getest, wordt verwacht dat de kwaliteit en zuiverheid van een significante invloed op het succes van de locatie, niet zou hebben. </li><li> Verwarm 9 ml hydroxyethyl...

<ol>
	<li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray:+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool.">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li><li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+an+overview.">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li><li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+tissue+microarrays.">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li><li>Saxena, R., Bade, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+7+Tissue+Microarray+–+Construction+and+Quality+Assurance.">Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance.</a> Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).</li><li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+(TMAs)+for+high-throughput+molecular+pathology+research.">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li><li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tissue+microarray:+helpful+hints.">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li><li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology.">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li><li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+one+size+does+not+fit+all.">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li><li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast.">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li><li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer.">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li><li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis:+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+(TMA).">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li><li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment.">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li><li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing.">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li><li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).</li><li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bancroft&#8217;s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).</li></ol>

Succesvolle voorbereiding en het gebruik van de vlekken vereist een zorgvuldige naleving van enkele technische stappen. Het smelten van de hydroxyethyl agarose moet langzaam en op een laag vuur worden gedaan. Snel smelten bij hoge temperatuur kan leiden tot enige afbraak van de agarose minder dan optimale resultaten. Bij het snijden van de kleurstof beladen pluggen in stukken verwerkt, opdat de dikte van elk stuk groter is dan 4,5 mm en niet meer dan 7 mm. De afgeronde einden verwijderd als afval zij niet uniform 5 mm d...

De mogelijkheid om weefselmonsters van verschillende individuen te bedden in een paraffineblok het eenvoudig side-by-side vergelijking tussen behandelingen en individuen, elimineert variabiliteit tussen dia en vermindert de kosten en de werkbelasting van snijden en vlekken specimens. Deze multi-weefselblokken worden typisch bereid als hetzij tissue microarray (TMA) of paraffineblokken die weefsel van meerdere personen in een niet array layout. Onderhoud monster identiteit is cruciaal voor het succes van een multi-weefselanalyse. De onderzoekers zijn met behulp van TMA&#39;s, omdat hun ontwikkeling om de efficiëntie van de analyse te verbeteren, variatie te verminderen tussen dia&#39;s, sparen waardevolle middelen weefsel, en het verminderen van de tijd en de kosten van de experimenten 1. Correcte oriëntatie van TMA kan worden uitgevoerd met verschillende methoden, zoals spaties, rijen of kolommen tussen weefselkernen 2-4, asymmetrische opstelling van kerngroepen 3, 5 (bijvoorbeeld control versus behandeling), &quot;baken&quot; kernen 6 en aangewezen oriëntatie kernen buiten de TMA matrix 3 gevestigd. Hoewel deze methoden goed werken voor TMA&#39;s, de meeste verbruikt waardevolle TMA kern ruimte en TMA&#39;s met lacunes en ruimten als identifiers verwarrend kan worden als weefsel kernen zijn uitgeput na verloop van tijd. Bovendien zijn deze werkwijzen niet geschikt voor gebruik in multi-weefselblokken zonder matrix format omdat ze vertrouwen op afwijkingen in de strak gelast patroon van uniforme microarray kernen als id. De meeste niet-array multi-weefsel blokken moeten geschikt niet-uniforme weefsels en, per definitie, niet de gestructureerde matrix raster dat maakt deze afwijkingen opvallen als oriëntatiepunten niet weergegeven. Hoewel er vele voordelen aan het gebruik van een TMA, een van de grootste nadelen is de geringe omvang van de kernen die niet altijd representatief mate heterogeen weefsel 1. Non-array multi-weefsel blokken bieden veel van tHij profiteert van een TMA, maar bevatten grotere weefselmonsters, of hele organen uit dierproeven. Tissue microarrays gebruikt enkele kernen variëren overeenstemming met hele weefselsecties basis van het eiwit van interesse en vele vereisen meerdere kernen voor extra concordantie 7-11. Vanwege de complexiteit en heterogeniteit van enkele biomarker fenotypes, TMA gebruikt zelfs grote aantallen geleiders (&gt; 10) nog onvoldoende zijn en kunnen andere dan microarrays for analysis 8 vereisen. Bovendien, TMA constructie is tijdrovend, technisch veeleisende en vereist de initiële kosten en investeringen in of toegang tot een tissue Arrayer. Non-array meerdere weefselblokken kan geschieden in basisch laboratorium met aanzienlijk minder tijd en moeite en is een alternatief voor studies die meer weefsel vereisen dan arrays toestaan ​​of als middel om kosten te besparen en te vereenvoudigen analyse. Non-array multi-weefsel blokken op dezelfde vereisen een betrouwbaar ofientation marker voor monsteridentificatie sporen echter de ontwikkeling van deze merkers is beperkt. In de literatuur beschreven weefseloriëntatiedetectoren gericht op juiste fysiologische richting voor het inbedden afzonderlijke stukken weefsel, zoals het weefsel tatoeage inkt 12, pre-inbedding weefsels in agar-gelatine voorafgaand aan de verwerking 13 en markering bepaalde weefsels van inkepingen 14 of 15 hechtingen . Hoewel functioneel zijn deze werkwijzen niet geschikt als markers in multi-weefselblokken vanwege hun beperkingen. Een hechting zal snel worden gesegmenteerd door en mogelijk niet zichtbaar in elk deel zijn. Pre-inbedding technieken met behulp agar-gelatine kan het weefsel in de juiste oriëntatie tijdens de verwerking inbedden houden, maar biedt geen visuele aanwijzing om onderscheid te maken tussen meerdere monsters in paraffine blokken en glijbanen. Inkepingen of kleurstof op het weefsel kan analyse bemoeilijken of af te sluiten belangrijke morfologische details. Als alternatief weefsel identiteitin een niet-array meerdere weefselblokje kan worden gehandhaafd door middel van het inbedden van weefselstukken in een asymmetrische rangschikking, maar dit vereist 3 of meer weefselstukken en wellicht niet toelaat optimale plaatsing van weefsels voor analyse. Het Specimen Orientation Tag (spot) is ontwikkeld als een gemakkelijke en goedkope methode om weefsels in multi-weefsel blokken duidelijk te identificeren en biedt vele voordelen ten opzichte van bestaande oriëntatie methoden. De plek is een kleine, kleurrijke, kern bestaat uit Hydroxyethyl agarose verwerking gel en weefsel markering kleurstof, en geïnfiltreerd met paraffine (figuur 2C). De plek kern is ingesloten op het einde naast een enkele weefsel in een multi-tissue paraffineblok en verschijnt als een helder gekleurde stip in het blok en in elke sectie (Figuur 1A - D), duidelijke vermelding van de juiste oriëntatie van het blok en secties voor eenvoudige weefsel identificatie.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HistogelTM Specimen Processing Gel</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Marking Dye</td>
			<td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td>
			<td>TMD-5</td>
			<td>Any tissue marking dye would most likely be sufficient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arraymold Kit A 2 mm (60 core)</td>
			<td>Arraymold</td>
			<td>20015A</td>
			<td>Any manual tissue arrayer would work similarly.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks

Multi-tissue paraffineblokken een hoge doorvoer analyse van doelmatigheid experimentele uniformiteit en verminderde tijd en kosten. Weefsel microarrays vormen de meerderheid van de multi-weefsel paraffine blokken, maar in toenemende mate, zijn de onderzoekers met behulp van niet-array blokken met grotere weefsels uit meerdere personen, die veel van de voordelen van het weefsel microarrays kan verschaffen zonder aanzienlijke investeringen in de planning en uitrusting. Een essentieel onderdeel van een multi-weefsel analyse is de oriëntatie methode voor elke afzonderlijke weefsel identificeren. Hoewel methoden bestaan ​​om de juiste oriëntatie en het identificeren van weefsels in multi-weefselblokken handhaven meeste zijn niet goed geschikt voor niet-array blokken, kan waardevolle ruimte consumeren in een matrix en / of moeilijk te produceren in de standaard histologische laboratoria. Het Specimen Orientation Tag (spot) is een eenvoudige, goedkope oriëntatie instrument dat is duidelijk zichtbaar in paraffine blokken en alle weefselcoupes for betrouwbaar specimen identificatie in arrayed en non-array layouts. De spot verschaft voordelen boven bestaande oriëntatiemethoden voor niet array blokken als er geen directe wijziging van het weefsel vereisen en maakt flexibiliteit in de regeling van stukken weefsel.

De plek verschijnt als een ronde, helder gekleurde stip in het paraffine blok (figuur 1A en 2D), in alle paraffine secties, en blijft op het glaasje door de H &amp; E en IHC kleuring procedure (figuren 1B - 1D en 2D). Deze duidelijke visuele hint hulpmiddelen zowel histotechnician en onderzoeker om elke afzonderlijke stuk weefsel en vergemakkelijkt de communicatie histotechnician kan deze visueel waarschuwingssignaal de opstelling van d...

Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Het doel van het Specimen Orientation Tag (spot) is gefunctioneerd als leidraad ter te helpen bij individuele identificatie weefsel in meerdere weefsels paraffineblokken. Deze protocollen laten zien hoe dit is opgebouwd uit zachte, low-cost histologie materiaal en dient als een betrouwbare visuele marker in paraffineblokken en secties.

Spot de juiste Tissue Every Time in Multi-weefsel Blocks

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Actine Co-Sedimentatie Assay, want de analyse van eiwit binding aan F-actine

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Implantatie van Engineered Tissue in het Rat Hart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

Het belang van correcte eiwitconcentratie voor Kinetics en affiniteit Bepaling in structuur-functie analyse

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

Kwantificatie van γH2AX Foci in weefselmonsters

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Het manipuleren van de muizen traanklier

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

Dissectie van de auditieve Bulla in postnatale muizen: Isolatie van het middenoor botten en histologische analyse

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-Clear: Een weefsel Clearing methode voor driedimensionale beeldvorming van vetweefsel

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Licht spot-gebaseerde assay voor analyse van Drosophila larval phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...