Name: spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

저자는 원고의 중요한 검토를 제공하기 위해 박사 브렌트 해리스에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 연구는 NIH / NCI 부여 P30-CA051008에 의해 부분적으로 지원되는 롬바르디 종합 암 센터의 조직 병리학 및 조직의 공유 자원에서 수행되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 암 연구소 또는 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

SPOT 1. 건설 <ol><li> 1 분 또는 완전히 용해 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브 또는 2 mL의 미세 원심 분리 튜브와 소용돌이에 1 ml의 조직 마킹 염료에 소 혈청 알부민 (BSA)의 50 mg을 추가합니다. 참고 :이 프로토콜의 경우, 생화학 학년 BSA를 사용합니다. 다른 등급 및 순도가 테스트되지 않은 반면, 등급은 순도가 스폿의 성공에 큰 영향을 미치지 않을 것으로 예상된다. </li><li> 젤이 완전히 용해 될 때까지...

<ol>
	<li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray:+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool.">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li><li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+an+overview.">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li><li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+tissue+microarrays.">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li><li>Saxena, R., Bade, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+7+Tissue+Microarray+–+Construction+and+Quality+Assurance.">Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance.</a> Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).</li><li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+(TMAs)+for+high-throughput+molecular+pathology+research.">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li><li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tissue+microarray:+helpful+hints.">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li><li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology.">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li><li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+one+size+does+not+fit+all.">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li><li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast.">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li><li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer.">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li><li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis:+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+(TMA).">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li><li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment.">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li><li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing.">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li><li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).</li><li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bancroft&#8217;s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).</li></ol>

관광 명​​소의 성공적인 준비와 활용은 몇 가지 기술적 인 단계에주의 준수해야합니다. 히드 록시 에틸 아가로 오스의 녹는 천천히 낮은 열에서 수행해야합니다. 고온에서 빠르게 녹는 최적의 결과 미만의 아가로 오스의 일부 고장이 발생할 수 있습니다. 처리 조각으로 염료 함유 플러그를 절단 할 때, 각 부분의 두께가 4.5 mm 이상이고, 7 mm를 초과하지 않는 것을 보장한다. 그들은 두께가 균일?...

하나의 파라핀 블록에서 여러 개인에서 조직 샘플을 포함 할 수있는 능력은, 치료와 개인 사이에 쉽게 나란히 비교를 가능하게 슬라이드 사이의 변동성을 제거하고 절편과 표본을 염색의 비용과 작업 부하를 줄일 수 있습니다. 이러한 다중 조직 블록은 전형적으로 비 - 어레이 레이아웃 여러 개인의 조직을 포함하는 조직 마이크로 어레이를 하나 (TMA) 또는 파라핀 블록으로 제조된다. 샘플 정체성 유지는 여러 조직 분석의 성공에 매우 중요하다. 연구자들은 분석의 효율을 향상 슬라이드 사이의 변화를 줄이기 유용한 조직 자원을 절약하고, 시간과 실험 1의 비용을 줄이기 위해 자신의 개발 이후 TMAs 사용하고있다. TMAs의 올바른 방향 조직 코어 2-4 코어 기의 비대칭 배열 3,5- (예 contro 간의 공백, 행 또는 열을 포함하여 다양한 방법을 사용하여 달성 될 수있다치료 대 L), &quot;비콘&quot;코어 6, TMA 매트릭스 3 외부에 지정된 방향 코어. 이러한 방법 TMAs 잘 작동하지만, 대부분의 조직 코어가 시간이 지남에 소진 될 때 식별자가 혼동 될 수 있으므로 간격 및 공백 가치 TMA 코어 공간과 TMAs을 소비한다. 그들은 식별자로 균​​일 한 마이크로 어레이 코어 단단히 주문 패턴의 이상에 의존하기 때문에 또한 이러한 방법은 배열 형식없이 여러 조직 블록에서 사용하기에 적합하지 않다. 대부분의 비 배열 멀티 조직 블록이 수차의 랜드 마크로서 밖으로 서 만드는 구조적 배열 그리드를 표시하지 않습니다, 정의, 비 균일 한 조직을 수용해야합니다. TMA, 가장 큰 단점 중 하나를 사용하는 많은 장점이 있지만, 항상 크게 불균일 한 조직을 반영하지 않고 코어의 작은 크기이다. 비 배열 다중 조직 블록 t 많이 제공그는 TMA의 장점,하지만 더 큰 조직 샘플, 또는 동물 연구에서 전체 기관을 포함한다. 하나의 코어를 사용하여 조직 마이크로 어레이는 관심의 단백질을 기반으로 전체 조직 섹션과 일치를 변화하고 많은 사람들이 증가 일치 7-11 여러 코어를 필요로한다. 때문에 복잡성과 일부 바이오 마커 표현형의 이질적인 특성으로 TMAs는 여전히 불충분 할 수있는 코어도 많은 수의 (&gt; 10)을 사용하여 분석 8 마이크로 어레이 이외의 방법이 필요할 수 있습니다. 또한, TMA 건설은 기술적으로 까다로운 시간이 소요, 그리고 조직 Arrayer에 대한 초기 비용 및 투자 또는 액세스가 필요합니다. 비 배열 된 다중 조직 블록은 상당히 적은 시간과 노력으로 어떤 기본 실험실하여 이루어진 어레이 허용하거나 비용을 절감하고 분석을 단순화하기위한 수단으로 이상 조직을 요구하는 연구를 위해 유효한 대안이 될 수있다. 비 배열 멀티 조직 블록 마찬가지로 신뢰할가 필요하거나ientation 마커 샘플 ID를 추적하는, 그러나, 이들 마커의 개발이 제한되어왔다. 조직의 방향을 설명하는 문헌의 대부분은 잉크 (12) 조직을 문신 개별 조직 조각을 삽입에 대한 올바른 생리 학적 방향에 초점을 맞추고, 사전 처리 (13)에 한천 - 젤라틴의 조직을 미리 포함하고, 노치 (14) 또는 봉합사 (15)과 특정 조직을 표시 . 기능하지만, 이러한 방법은 그들의 한계에 다 조직 블록 마커로 적합하지 않습니다. 봉합 신속 통해 구분되며, 각 섹션에 표시되지 않을 수 있습니다. 처리 및 매립시 올바른 방향으로 조직을 유지 할 수 있습니다 한천, 젤라틴을 사용하여 기술을 사전 포함하지만, 파라핀 블록과 슬라이드에서 여러 샘플을 구별 할 수있는 시각적를 제공하지 않습니다. 조직에 노치 또는 염료 분석을 복잡하게하거나 중요한 형태 학적 정보를 폐색 수 있습니다. 또한, 조직의 정체성비 배열 다중 조직 블록 비대칭 배열로 조직 조각 매립 통해 유지하지만, 이것은 3 이상의 조직편 필요하고 조직 분석을위한 최적 배열에 대한 허용하지 않을 수있다. 표본 방향 태그 (SPOT)은 명확하게 멀티 조직 블록 조직을 식별 할 수있는 쉽고 저렴한 방법으로 개발하고 기존의 방향 방법에 비해 많은 혜택을 제공하고있다. 그 자리는 하이드 록시 에틸 아가로 오스 처리 젤 및 조직 마킹 염료, 구성 및 파라핀 (그림 2C) 침투 작은, 다채로운, 핵심입니다. 그 자리 코어는 멀티 조직 파라핀 블록에서 하나의 조직에 옆에 끝에 임베디드 블록에서 모든 섹션에 밝은 색깔의 점으로 나타납니다 - 명확 블록 및 섹션의 올바른 방향을 나타내는, (그림 1A D) 쉽게 조직을 식별합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HistogelTM Specimen Processing Gel</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Marking Dye</td>
			<td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td>
			<td>TMD-5</td>
			<td>Any tissue marking dye would most likely be sufficient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arraymold Kit A 2 mm (60 core)</td>
			<td>Arraymold</td>
			<td>20015A</td>
			<td>Any manual tissue arrayer would work similarly.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks

다중 조직 파라핀 블록 효율성 실험 균일 성 및 감소 된 비용과 시간과 높은 처리량 분석을 제공한다. 조직 마이크로 어레이는 다중 조직 파라핀 블록의 대부분을 구성하지만, 점점 연구자 기획 및 장비에 상당한 투자없이 조직 마이크로 어레이의 많은 장점을 제공 할 수있는 다수의 개인들로부터 더 큰 조직을 포함하는 비 - 배열 된 블록을 사용한다. 어떤 다중 조직 분석의 중요한 구성 요소는 각각의 조직을 식별하는 데 사용되는 배향 법이다. 방법은 적절한 방향 및 다중 조직 블록 조직의 식별을 유지하기 위해 존재하지만, 대부분은 배열 내의 유용한 공간을 소모 할 수 있고, 비 배열 블록에 적합하지 않은 및 / 또는 표준 조직학 실험실에서 제조하기가 어렵다. 표본 방향 태그 (스팟) 명확하게 파라핀 블록과 모든 조직 섹션 FO에서 볼 수있는 간단하고 저렴한 비용으로 방향 도구입니다배열 및 비 배열 레이아웃으로 R 신뢰성 시험편 식별. 그 자리는 조직에 대한 직접 수정을 필요로하지 않는 비 배열 블록에 대한 기존의 방향 방법에 비해 이점을 제공하고 조직 조각의 배치의 유연성을 허용한다.

그 자리는 모두 파라핀 섹션 라운드, 파라핀 블록에 밝은 색깔의 점 (그림 1A 및 2D)으로 표시하고 H &amp; E 또는 IHC 염색 과정을 통해 유리 슬라이드에 남아 있습니다 (그림의 1B - 1D 및 2D를). 이 명백한 시각적 보조 모두 각각의 조직 조각을 식별 histotechnician 및 연구원과 histotechnician으로 통신을 단순화는 현미경에서 슬라이드에서 데이?...

Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

시편 오리엔테이션 태그 (SPOT)의 목적은 다중 조직 파라핀 블록에서 개별 조직 식별에 도움이되도록 배향 수단으로서 기능하는 것이다. 이러한 프로토콜은 일반적인 저가의 조직 학적 물질에서 쉽게 구성 및 파라핀 블록 및 섹션에서 신뢰할 수있는 시각적 마커 역할을하는 방법을 보여줍니다.

올바른 조직에게 멀티 조직 블록마다 자리

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

굴지 공동 침강 분석, F - 굴지에 바인딩 단백질의 분석

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

연구

생물학

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

랫 중심에 엔지니어링된 조직의 주입

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

동력학 및 구조 기능 분석의 선호도 결정에 대한 올바른 단백질 농도의 중요성

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

조직 샘플에서 γH2AX Foci의 Quantitation

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

상순 Embryogenesis의 시간 경과 현미경 Caenorhabditis 엘레간스

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

쥐의 눈물샘을 조작

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

고해상도 시간 경과 이미징 및 생활 인간 제대 정맥 내피 세포의 미세 소관 역학의 자동 분석

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

출생 후의 쥐의 청각 수포의 해부 : 중이의 뼈와 조직 학적 분석의 분리

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-지우기: 조직 지방 조직의 3 차원 이미징 방법 삭제

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

초파리 애벌레 광택시 분석을 위한 빛 스팟 기반 분석

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...