Name: spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Brent Харрис для обеспечения критический обзор рукописи. Эти исследования были проведены в Lombardi всеобъемлющем онкологический центр Гистопатология &amp; Tissue общей ресурс, который поддерживается частично NIH / NCI грант P30-CA051008. Содержание исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения Национального института рака, Национального института здравоохранения.

1. Строительство месте <ol><li> Добавьте 50 мг бычьего сывороточного альбумина (БСА) на 1 мл тканевого маркировки красителем в 15 мл коническую пробирку или 2 мл пробирке и вихря в течение 1 мин или до полного растворения. Примечание: Для этого протокола, использовать биохимический Grade BSA. В ...

<ol>
	<li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray:+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool.">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li><li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+an+overview.">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li><li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+tissue+microarrays.">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li><li>Saxena, R., Bade, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+7+Tissue+Microarray+–+Construction+and+Quality+Assurance.">Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance.</a> Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).</li><li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+(TMAs)+for+high-throughput+molecular+pathology+research.">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li><li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tissue+microarray:+helpful+hints.">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li><li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology.">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li><li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+one+size+does+not+fit+all.">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li><li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast.">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li><li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer.">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li><li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis:+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+(TMA).">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li><li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment.">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li><li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing.">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li><li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).</li><li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bancroft&#8217;s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).</li></ol>

Успешное подготовка и использование пятен требует тщательного соблюдения нескольких технических этапов. Таяние гидроксиэтил агарозы должно быть сделано медленно и на слабом огне. Быстро плавления при высокой температуре может привести к какой-либо аварии агарозы для менее оптималь?...

Возможность вставлять образцы тканей из нескольких лиц в одном парафинового блока позволяет легко бок о бок сравнение между лечения и физических лиц, устраняет вариабельность между слайдами, а также снижает стоимость и объем работы секционирования и окрашивания образцов. Эти многофункциональные блоки ткани обычно получают либо в виде тканевых микрочипов (TMA) или парафиновых блоков, содержащих ткани из нескольких индивидуумов в макете не-массива. Обслуживание идентичности образца имеет решающее значение для успеха любого анализа нескольких тканей. Исследователи использовали ТМА, так как их развитие с целью повышения эффективности анализа, снизить вариацию между слайдами, ценные ресурсы ткани, и сократить время и стоимость экспериментов 1. Правильное положение ТМА может быть достигнуто с помощью различных методов, в том числе пустых пространств, строк или столбцов между ядрами ткани 2-4, асимметричным расположением основных групп 3, 5 (например, Controл против лечения), &quot;маяка&quot; ядра 6, и назначенные ядра ориентации, находящиеся за пределами матрицы ТМА 3. Хотя эти методы хорошо работают для ТМА, наиболее отнимают основную ТМА пространство и TMAS с пробелов и пробелов в идентификаторы могут стать запутанным, как сердечники ткани исчерпаны в течение долгого времени. Кроме того, эти методы не подходят для использования в нескольких тканевых блоков без формате массива, потому что они полагаются на аномалии в плотно упорядоченной структуре единых микрочипов ядер, как идентификаторы. Большинство блоков не-облеченные нескольких тканей должны учитывать неоднородные ткани и, по определению, не отображать структурированную сетку массив, который делает эти аберрации выделяются в качестве ориентиров. Хотя существует много преимуществ в использовании ТМА, один из самых больших недостатков является небольшой размер сердечников, которые не всегда представитель в основном гетерогенной ткани 1. Номера выстроенные блоки мульти-ткани обеспечивают многие из тон приносит пользу из ТМА, но содержат большие образцы ткани или целые органы из исследований на животных. Тканевые микрочипы, использующие один сердечники имеют различные согласование с участками цельной ткани на основе белка, представляющего интерес, и многие требуют несколько ядер для повышения согласованности 7-11. Из-за сложности и гетерогенной природы некоторых биомаркеров фенотипов, ТМА, используя даже большое число ядер (&gt; 10) по-прежнему может быть недостаточно и может потребоваться другие, чем микрочипов для анализа 8 методов. Кроме того, ТМА строительство отнимает много времени, технически сложных, и требует первоначальных затрат и инвестиций в или доступ к ткани arrayer. Номера для упорядоченной блоки мульти-ткани могут быть сделаны в любой основной лаборатории со значительно меньшими затратами времени и усилий и реальной альтернативой для исследований, которые требуют больше ткани, чем массивы позволяют или в качестве средства, чтобы сократить расходы и упростить анализ. Номера выстроены несколько блоки ткани аналогично требует надежной иразориентации маркер для отслеживания идентификацию образца, однако, развитие этих маркеров был ограничен. Большая часть литературы, описывающей ориентацию ткани фокусируется на правильном физиологическом ориентации для встраивания отдельных частей ткани, такие как татуировки ткани с чернилами 12, предварительно вложение тканей в агар-желатин до обработки 13, и маркировка определенные ткани с вырезами 14 или 15 швов , Хотя функциональный, эти методы не являются идеальными в качестве маркеров в нескольких тканевых блоков из-за ограничений. Шов будет срезы через быстро и не может быть виден в каждой секции. Предварительно вложение методы с использованием агар-желатин может сохранить ткани в правильном положении во время обработки и вложения, но не обеспечивает визуальный сигнал, чтобы дифференцировать между несколькими образцами в парафиновый блок и слайдов. Пазы или краситель на ткани может осложнить анализ или закрывают важные морфологические детали. Кроме того, идентичность тканив блоке не объединенным в массивы нескольких тканей может осуществляться с помощью встраивания кусочки ткани в асимметричном расположении, но это требует 3 или более кусочки ткани и может не позволять для оптимального расположения тканей для анализа. Образец Ориентация тегов (SPOT) была разработана в качестве простого и недорогого способа четко определить тканей в нескольких тканевых блоков и предлагает множество преимуществ по сравнению с существующими методами ориентации. Пятно небольшое, красочные, ядро состоит из гидроксиэтил агарозном геле обработки и маркировки ткани красителя, и проникли с парафином (рис 2С). Ядро пятно встроен в конце рядом с одной ткани в парафин блока мульти-ткани и выглядит как яркие точки в блоке и в каждом разделе (рис 1А - D), четко указав правильную ориентацию блока и секций для облегчения идентификации ткани.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HistogelTM Specimen Processing Gel</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Marking Dye</td>
			<td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td>
			<td>TMD-5</td>
			<td>Any tissue marking dye would most likely be sufficient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arraymold Kit A 2 mm (60 core)</td>
			<td>Arraymold</td>
			<td>20015A</td>
			<td>Any manual tissue arrayer would work similarly.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks

Мульти-ткани парафиновые блоки обеспечивают высокую пропускную способность анализ с повышенной эффективностью, экспериментальной единообразия и уменьшения времени и стоимости. Тканевые микрочипы составляют большинство мульти-ткани парафиновых блоков, но и все чаще исследователи с использованием не-облеченные блоки, содержащие большие тканей из нескольких лиц, которые могут обеспечить многие преимущества тканевых микрочипов без значительных инвестиций в планировании и оборудования. Важным компонентом любого анализа мульти-ткани является метод ориентации, используемый для идентификации каждого отдельного ткани. Хотя существуют методы для поддержания правильной ориентации и идентификации тканей в нескольких тканевых блоков, большинство не очень хорошо подходит для не-облеченные блоков, может потреблять драгоценное пространство в массиве и / или трудно производить в стандартной гистологии лаборатории. Образец Ориентация тегов (спот) простой, низкая стоимость ориентации инструмента, что отчетливо видно в парафиновые блоки и всех срезов FOг надежная идентификация образцов в выстроенных и не выстроились макеты. Месте обеспечивает преимущества по сравнению с существующими методами ориентации для не-выстроены блоков, как это не требует какого-либо прямого модификации ткани и обеспечивает гибкость в расположении тканевых частей.

Пятно появляется как раунд, яркие точка в парафиновый блок (рис 1А и 2D), во всех парафиновых срезах, и остается на стекле через процедуры Н &amp; Е или IHC окрашивания (рис 1B - 1D, 2D и). Это очевидные визуальные средства кий оба histotechnician и исследователь в иденти...

Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Цель образца ориентации Tag (SPOT), чтобы функционировать в качестве инструмента ориентации, чтобы помочь в идентификации личности ткани в нескольких парафиновых блоков тканей. Эти протоколы показывают, как легко построены из общих, недорогих материалов и гистологии служит надежным визуальным маркером, в парафиновых блоков и секций.

Spot исправить ткани Every Time в нескольких тканевых блоков

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Актина сотрудничества седиментации Пробирной; для анализа связывание белка с F-актин

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Имплантация Engineered ткани в сердце крысы

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

Важность правильной концентрации белка для кинетики и Affinity Определение в структурно-функционального анализа

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

Количественная оценка γH2AX Очаги в образцах тканей

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Покадровый Микроскопия раннего эмбриогенеза в Caenorhabditis Элеганс

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Манипулируя мышиной слезной железы

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Высокое разрешение Покадровый изображений и автоматизированный анализ динамики микротрубочек в живых человеческих эндотелиальных клеток пупочной вены

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

Рассечение Слуховые Буллы в постнатальном мышей: Выделение среднего уха Кости и гистологический анализ

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

ADIPO ясно: Ткани, очистка метод для трехмерных изображений жировой ткани

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Свет пятно основе анализа для анализа Drosophila Larval Фототаксис

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...