Name: spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

Författarna vill tacka Dr Brent Harris för att ge kritisk granskning av manuskriptet. Dessa studier genomfördes på Lombardi Comprehensive Cancer Center Histopatologi &amp; Tissue Delad resurs som stöds delvis av NIH / NCI bevilja P30-CA051008. Innehållet är ensamt ansvar författarnas egna och inte nödvändigtvis representerar officiella ståndpunkter National Cancer Institute eller National Institutes of Health.

1. Konstruktion av fläcken <ol><li> Tillsätt 50 mg bovinserumalbumin (BSA) till 1 ml vävnadsmärkfärg i en 15 ml koniskt rör eller 2 ml mikrofugrör och skaka i 1 min eller tills den är helt upplöst. Obs! För detta protokoll, använda biokemiska Grade BSA. Medan andra kvaliteter och renhet inte har testats, förväntas det att lönegrad och renhet inte skulle ha en betydande inverkan på framgång plats. </li><li> Heat 9 ml hydroxietyl agaros bearbetning gel i en 15 ml koniska rör i en mikrovågsugn vi...

<ol>
	<li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray:+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool.">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li><li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+an+overview.">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li><li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+tissue+microarrays.">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li><li>Saxena, R., Bade, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+7+Tissue+Microarray+–+Construction+and+Quality+Assurance.">Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance.</a> Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).</li><li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+(TMAs)+for+high-throughput+molecular+pathology+research.">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li><li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tissue+microarray:+helpful+hints.">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li><li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology.">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li><li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+one+size+does+not+fit+all.">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li><li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast.">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li><li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer.">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li><li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis:+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+(TMA).">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li><li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment.">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li><li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing.">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li><li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).</li><li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bancroft&#8217;s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).</li></ol>

Framgångsrik framställning och användning av fläckarna kräver noggrann anslutning till några tekniska steg. Smältning av hydroxietyl agaros bör ske långsamt och på låg värme. Smältande snabbt på hög värme kan resultera i en viss uppdelning av agarosen för mindre än optimala resultat. När skära färgämnes lastat pluggar i bitar för bearbetning, se till att tjockleken på varje bit är större än 4,5 mm och inte överstiga 7 mm. De rundade ändarna avlägsnas som avfall som de inte likformigt 5 mm i...

Förmågan att bädda vävnadsprover från flera personer i en enda paraffinblocket möjliggör enkel sida-vid-sida jämförelse mellan behandlingar och individer, eliminerar variationen mellan diabilder, och minskar kostnaderna och arbetsbördan för sektionering och färgning exemplar. Dessa multi-vävnadsblock framställs typiskt som antingen vävnads microarrays (TMA) eller paraffinblock som innehåller vävnad från flera personer i en icke-array layout. Underhåll av prov identitet är avgörande för framgång för varje multi-vävnadsanalys. Forskare har använt TMA eftersom deras utveckling för att förbättra effektiviteten av analys, minska variationen mellan diabilder, bevara värdefulla resurser vävnad, och minska tiden och kostnaden för försök 1. Korrekt orientering av TMA kan åstadkommas med användning av en mängd olika metoder, inklusive tomma utrymmen, rader eller kolumner mellan vävnadskärnor 2-4, asymmetriska arrangemang av kärngrupper 3, 5 (t.ex., control kontra behandling), &quot;ledstjärna&quot; kärnor 6 och betecknade orienterings kärnor som ligger utanför TMA matrisen 3. Även om dessa metoder fungerar bra för TMA, de flesta konsumerar värdefullt TMA kärnutrymme och TMA med luckor och utrymmen som identifierare kan bli förvirrande eftersom vävnadskärnor är uttömda över tiden. Dessutom är dessa metoder inte är lämpliga att använda i flera vävnadsblock utan en rad format, eftersom de förlitar sig på brister i tätt ordnat mönster av enhetliga microarray kärnor som identifierare. De flesta icke-grupperade flera vävnadsblock måste rymma oenhetliga vävnader och per definition, inte visa det strukturerade array rutnät som gör dessa avvikelser framstår som landmärken. Även om det finns många fördelar med att använda en TMA, en av de största nackdelarna är den lilla storleken av kärnorna som inte alltid är representativa för i stort sett heterogena vävnad 1. Icke-grupperade flera vävnadsblock ger många av than fördelarna med en TMA, men innehåller större vävnadsprover, eller hela organ från djurstudier. Vävnads mikroarrayer, använder en kärnor har varierande överensstämmelse med hela vävnadssnitt baserat på proteinet av intresse och många kräver flera kärnor för ökad samstämmighet 7-11. På grund av komplexiteten och heterogena karaktären hos vissa biomarkörer fenotyper, TMA använder även ett stort antal kärnor (&gt; 10) kan fortfarande vara otillräcklig och kan kräva andra än mikroarrayer för analys 8 metoder. Dessutom är TMA byggtiden krävande, tekniskt krävande och kräver den initiala kostnaden och investeringar i eller tillträde till en vävnad arrayer. Icke-klädd multivävnadsblock kan göras i någon grundläggande laboratorium med betydligt mindre tid och ansträngning och är ett bra alternativ för studier som kräver mer vävnad än arrayer tillåta eller som ett sätt att sänka kostnaderna och förenkla analysen. Icke-klädd blockerar flera vävnads liknande kräver en pålitlig ellerientation markör för att spåra providentifikation emellertid utvecklingen av dessa markörer har varit begränsad. En stor del av litteraturen som beskriver vävnads orientering fokuserar på rätt fysiologisk orientering för att bädda in enskilda vävnadsbitar, såsom tatuering vävnaden med bläck 12, pre-inbäddning vävnader i agar-gelatin före bearbetningen 13, och märkning vissa vävnader med skåror 14 eller suturer 15 . Även om funktionell, är dessa metoder inte ideala som markörer på flervävnadsblock grund av deras begränsningar. En sutur kommer att sektioneras genom snabbt och kanske inte syns i varje avsnitt. Pre-inbäddning tekniker med agar-gelatin kan hålla vävnaden i rätt riktning under bearbetning och inbäddning, men inte ge en visuell kö för att skilja mellan flera prov i paraffinblock och diabilder. Skåror eller färgämne på vävnaden kan komplicera analys eller täppa viktiga morfologiska detaljer. Alternativt, vävnads identiteti ett icke-klädd flervävnadsblock kan upprätthållas genom inbäddning av vävnadsbitar på ett asymmetriskt arrangemang, men det kräver tre eller flera vävnadsbitar och kan omöjliggöra att optimala arrangemanget av vävnader för analys. Den preparatorientering Tag (spot) har utvecklats som ett enkelt och billigt metod för att tydligt identifiera vävnader i flera vävnadsblock och erbjuder många fördelar jämfört med befintliga orienteringsmetoder. Platsen är en liten, färgrik, kärna består av hydroxietyl agaros behandling gel och vävnadsmärkfärg, och infiltrerade med paraffin (Figur 2C). Spot kärna är inbäddad i slutet bredvid en enda vävnad i en multi-vävnadsparaffinblock och visas som en färgglad prick i blocket och i varje avsnitt (Figur 1A - D), som tydligt visar den korrekta orienteringen av blocket och sektioner för enkel vävnad identifiering.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>HistogelTM Specimen Processing Gel</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td><a href="http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html">http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Marking Dye</td>
			<td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td>
			<td>TMD-5</td>
			<td>Any tissue marking dye would most likely be sufficient.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arraymold Kit A 2 mm (60 core)</td>
			<td>Arraymold</td>
			<td>20015A</td>
			<td>Any manual tissue arrayer would work similarly.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks

Multi-vävnad paraffinblock ger hög genomströmning analys med ökad effektivitet, experimentellt likformighet, och minskad tid och kostnad. Vävnads mikroarrayer utgör majoriteten av multi-vävnadsparaffinblock, men allt är forskare med hjälp av icke-klädd block som innehåller större vävnader från flera personer som kan ge många av fördelarna med vävnads mikroarrayer utan stora investeringar i planering och utrustning. En kritisk komponent i varje flervävnadsanalys är orienteringen metod som används för att identifiera varje enskild vävnad. Även om det finns metoder för att upprätthålla god orientering och identifiering av vävnader i flera vävnadsblock, de flesta är inte väl lämpade för icke-klädd block, kan förbruka värdefullt utrymme i en matris och / eller är svåra att producera i standard histologi laboratorium. Den preparatorientering Tag (spot) är en enkel, billig orientering verktyg som syns tydligt i paraffinblock och alla sektioner vävnads for pålitlig providentifiering i ordnade och icke-grupperade layouter. The Spot ger fördelar jämfört med befintliga orienterings metoder för icke-klädd block eftersom det inte kräver någon direkt ändring av vävnaden och möjliggör flexibilitet i arrangemanget av vävnadsbitar.

The Spot visas som en rund, färgglad prick i paraffinblocket (Figur 1A och 2D), i alla paraffinsnitt, och ligger kvar på objektglaset genom H &amp; E eller IHC färgningsproceduren (figurerna 1B - 1D och 2D). Denna uppenbara visuell hjälpmedel både den histotechnician och forskare att identifiera varje enskild vävnad bit och förenklar kommunikationen som histotechnician kan använda denna visuella kö för att indikera arrangemang...

Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Syftet med preparatorientering Tag (spot) är att fungera som ett orienteringsverktyg för att underlätta enskild vävnad identifiering i flera vävnadsparaffinblock. Dessa protokoll visar hur den är uppbyggd lätt från vanliga, billiga histologi material och fungerar som en tillförlitlig visuell markör i paraffinblock och sektioner.

Spot Rätt Tissue varje gång i flera vävnads Blocks

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Aktin Co-Sedimentering-analys, för analys av proteinbindning till F-Actin

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Implantation av vävnadstekniska i Rat hjärta

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

The Importance of Correct Protein Concentration for Kinetics and Affinity Determination in Structure-function Analysis 

Betydelsen av korrekt proteinkoncentration för kinetik och affinitet Bestämning i struktur och funktion Analys

In this study, we explore the interaction between the bovine cysteine protease inhibitor cystatin B and a catalytically inactive form of papain (Fig. 1), ...

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

Kvantifiering av γH2AX foci i vävnadsprover

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Mikroskopi av tidig embryogenesen i Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Manipulera Murin tårkörteln

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Högupplöst time-lapse avbildning och automatiserad analys av mikrotubuli Dynamics i Living Human navelsträngsvenendotelceller

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

Dissektion av Auditory Bulla i Postnatal Möss: Isolering av mellanörat Skelett och histologisk analys

In most mammals, auditory ossicles in the middle ear, including the malleus, incus and stapes, are the smallest bones. In mice, a bony structure called ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-Clear: En vävnad Clearing metod för tredimensionell avbildning av fettvävnad

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Ljusspot-baserat test för analys av Drosophila larval phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...